DDAH/ADMA通路在HDL促进内皮细胞NO生成中的作用

目的:观察高密度脂蛋白(HDL)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)抑制内皮细胞一氧化氮(NO)生成的保护作用,并探讨其与二甲基精氨酸二甲胺水解酶(DDAH)/非对称性二甲基精氨酸(ADMA)通路的关系.方法:Ox-LDL(1000 g/ml)孵育人脐静脉内皮细胞(HUVECs)24小时或不同浓度的HDL(10、50、100μ g/ml)预处理HUVECs细胞1小时,再与ox-LDL(100μ g/ml)共孵育细胞24小时,收集细胞培养上清液检测NO、ADMA的浓度,收集内皮细胞检测DDAH-Ⅱ的mRNA和蛋白表达以及DDAH的活性.结果:Ox-LDL(100μ g/ml)孵育HUVECs24小时后,细胞培养上清液中NO的浓度显著降低,ADMA水平显著增高,细胞内DDAH-Ⅱ的mRNA和蛋白表达以及DDAH的活性均显著降低.HDL(10、50、100μ g/ml)可以拮抗ox-LDL(100μ g/ml)的上述作用.结论:HDL能显著抑制ox-LDL诱导的内皮细胞NO产生减少,其保护作用与其调节DDAH/ADMA通路有关.     

一氧化氮合酶的作用机制

一氧化氮合酶的作用机制赵慧卿（安徽医科大学化学教研室,合肥２３００３２）关键词一氧化氮一氧化氮合酶８０年代以来,人们发现一氧化氮在许多生理过程中起着十分重要的作用［１］。在血管内皮细胞中,一氧化氮可激活可溶性鸟苷酸环化酶（ｓＧＣ）,通过升高环鸟苷酸水...     

白细胞介素—10对血管一氧化氮／一氧化氮合酶系统的影响

为探讨抗炎因子－－白细胞介素－10（IL－10）对大鼠主动脉一氧化氮（NO）／一氧化氮合酶（NOS）系统的影响,应用Griess试剂、^3H－瓜氨酸生成及蛋白免疫印迹杂交等方法,测定IL－10孵育对血管NO释放、NOS活性及表达的影响。结果发现细菌脂多糖（LPS）呈浓度领带性地激活诱导型NOS（iNOS）,促进NO生成。IL－10（10^-10-10^-8g/ml）呈浓度依赖性地上调内皮型NOS（eNOS）蛋白表达及其活性,但对iNOS活性及表达无明显影响,IL－10（10^-9-10^-8g/ml）显著抑制10μg/ml LPS诱导的NO生成和iNOS激活;而高浓度IL－10（10^-7g/ml）则上调iNOS的活性,对eNOS蛋白的表达知活性无明显影响。因此IL－10对NO／NOS系统具有双重影响,一方面可抑制炎症介质诱发的作为炎性物质的iNOS的表达及激活,另一方面可上调内皮源扩血管物质NO的释放。     

同型半胱氨酸对心肌细胞的损伤作用及其信号转导机制探讨

目的：观察同型半胱氨酸（homocysteine,HCY)对心肌细胞的损伤作用,探讨该作用发生的信号转导机制及其关键调控环节。方法：分离培养Wistar乳鼠心肌细胞,经HCY作用后,以台盼蓝排斥实验测定细胞存活率,TUNEL法和流式细胞仪测定细胞凋亡率,免疫印迹法测定心肌细胞ERK2蛋白磷酸化水平,阻滞电泳法测定细胞NF－κB活化水平。结果：作用后,心肌细胞存活率显著降低,存活率降低程度与HCY的作用浓度、作用时间具有明确的剂量－效应关系及时间－效应关系;在10^-3mol/L HCY作用下,心肌细胞凋亡率升高,于4h达峰值,为7．56％;10^-3,10^-4、10^-5mol/L HCY均可抑制心肌细胞ERK2磷酸化,其中10^-3mol/L HCY作用于心肌细胞后,ERYK2蛋白磷酸化水平呈现迅速而明显的降低,4h降至对照组的3．04％（P＜0．01）;不同浓度HCY均明显阻抑NF－κB的活化。结论：HCY具有明显心肌细胞损伤作用,对心肌细胞凋亡的诱导是HCY心肌细胞损伤作用的形式之一;HCY可影响心肌细胞信号转导通路ERK,通过对转录因子NF－κB的活化抑制,导致心肌细胞损伤。     

叶酸联合维生素B12对儿童癫痫患者同型半胱氨酸水平的影响

目的：观察叶酸联合维生素B12对儿童癫痫患者同型半胱氨酸（Hcy）水平的影响。方法：选取我院2017年1月—2020年12月就诊,接受治疗的98例儿童癫痫患者为研究对象。按照随机数字表,将98例患者随机分为干预组和对照组各49例,两组患者性别、年龄、病程、发病频率间均无差异（P>0.05）,具有可比性。对照组患者选择临床一线治疗药物进行抗癫痫治疗,干预组患者在对照组用药基础上,添加0.4 mg叶酸+100 μg维生素B12进行辅助治疗,对患者进行为期3个月的跟踪随访。测定两组患者干预前、干预1个月、干预3个月后血清Hcy、叶酸和维生素B12水平,比较两者患者干预前后血清Hcy、叶酸和维生素B12水平变化,同时记录患者癫痫发作次数和每次发作持续时间,比较两者患者发作次数和持续时间的差异。结果：治疗前,两组患者血清Hcy、叶酸和维生素B12水平比较均无统计学差异。经叶酸联合维生素B12干预1个月、3个月后,干预组患者血清Hcy水平均显著降低（P<0.05）,叶酸及维生素B12水平均显著增高（P<0.05）,而对照组患者血清Hcy水平出现增高现象（P<0.05）,叶酸及维生素B12水平未观察到差异（P>0.05）,干预组与对照组相比,血清Hcy、叶酸和维生素B12水平均有差异（P<0.05）;干预组患者癫痫发作频率显著低于对照组患者,发作持续时间显著短于对照组患者（P<0.001）。结论：叶酸联合维生素B12对儿童癫痫患者进行辅助治疗,可显著降低血清Hcy水平,降低癫痫发作频率,缩短癫痫发作时间,值得在临床推广应用。     

组胺对肺动脉内皮细胞一氧化氮合酶基因表达的影响

本实验研究了组胺对原代培养的肺动脉内皮细胞一氧化氮合酶(nitric oxidCsynthase,NOS)基因表达的影响及分子机制。采用RT-PCR和免疫印迹技术分别检测mRNA和蛋白质的表达水平,用荧光素酶报告基因实验检测eNOS基因转录起始点上游长1.6-kb的启动子活性,用硝酸还原酶法检测NO的产量。结果发现,组胺增强eNOS表达,呈浓度和时间依赖性,10μmol/L组胺处理肺动脉内皮细胞24h可使eNOS mRNA和蛋白质的表达达到高峰,eNOS mRNA水平为正常对照组的160.8±12.2%(P<0.05),蛋白质水平为正常对照组的136.2±11.2%(P<0.05)。特异性CaMK Ⅱ抑制剂KN-93可抑制组胺的这一效应,表明组胺可通过激活CaMK Ⅱ增强肺动脉内皮细胞eNOS基因的表达。报告基因实验表明,10μmol/L组胺处理24h后肺动脉内皮细胞eNOS基因启动子的活性增强,为正常对照组的148.2±33.7%(P<0.05)。组胺可使肺动脉内皮细胞产生NO增加。这些结果表明组胺在转录水平增强肺动脉内皮细胞eNOS基因的表达,并使细胞产生NO增加,这可能是组胺调节肺血管张力的机制之一。CaMK Ⅱ可能是组胺增强肺动脉内皮细胞eNOS基因表达的途径之一。     

金黄色葡萄球菌对小鼠产生一氧化氮及一氧化氮合酶的影响

目的 :探讨金黄色葡萄球菌对小鼠产生一氧化氮 (NO)及一氧化氮合酶 (NOS)的影响 ,以进一步研究 NO及 NOS在抗感染免疫中的作用。方法 :将不同剂量的金黄色葡萄球菌注入小鼠腹腔 ,10 d后取小鼠血清和腹腔巨噬细胞培养上清 ,用硝酸还原酶法检测其 NO的含量 ,同时测定血清中 NOS的水平及抗金黄色葡萄球菌抗体的效价。结果 :金黄色葡萄球菌注射小鼠后 ,血清中 NO及 NOS的水平明显高于对照组 (P<0 .0 1) ,各组间两两比较亦差异有显著性 (P<0 .0 1)。腹腔巨噬细胞培养上清 NO的水平明显高于对照组 (P<0 .0 1) ,但不同剂量实验组之间差异无显著性 (P>0 .0 5)。结论 :金黄色葡萄球菌可引起小鼠血清中 NO、NOS升高 ,NO及 NOS可能在抗微生物感染免疫中起着重要的作用     

S-炔丙基半胱氨酸延缓动脉粥样硬化进展并上调内皮细胞中内皮型一氧化氮合酶磷酸化（英文）

本研究旨在探究炔丙基半胱氨酸(S-propargyl-cysteine, SPRC)对延缓小鼠动脉粥样硬化进展的保护作用。用ApoE-/-小鼠通过右侧颈动脉串联双狭窄(tandem stenosis, TS)联合西方饮食构建动脉粥样硬化易损斑块小鼠模型,测定血管损伤面积、血脂和炎症水平来评估SPRC的抗动脉粥样硬化作用,组织病理学分析以评估斑块稳定性。为探究SPRC的保护机制,体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)并用氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)刺激,用细胞活力测定试剂盒测定细胞活力,用Western blot和RT-qPCR分别检测磷酸化内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)蛋白和mRNA表达。结果表明,每天80 mg/kg SPRC组小鼠主动脉弓和颈动脉病变面积显著减少,血浆胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平显著降低,斑块中的胶原水平增加,且斑块中基质金属蛋白9(matri...     

叶酸、甲钴胺对脑血管病患者同型半胱氨酸水平及认知障碍疗效观察

目的:探讨叶酸、甲钴胺对脑血管病患者血清同型半胱氨酸水平、以及认知障碍的疗效。方法:112例脑血管病患者,用随机表法,将患者分为三个叶酸组、甲钴胺组和联合治疗(叶酸+甲钴胺)组。叶酸组口服叶酸5 mg(1次/天)。甲钴胺组予以甲钴胺口服500μg(3次/天)。联合治疗组联合用药,连续口服6个月。评价治疗前后的血清同型半胱氨酸及认知障碍评分。结果:治疗后,三组间血清同型半胱氨酸水平差异有统计学意义(P0.05)。联合治疗组血清同型半胱氨酸水平明显低于叶酸组和甲钴胺组(P0.05)。三组间认知障碍MMSE评分差异有统计学意义(P0.05)。甲钴胺组和联合治疗组治疗前后MMSE评分差异有统计意义(P0.05),但叶酸组治疗前后MMSE评分差异无统计学意义(P0.05)。联合治疗组认知障碍MMSE评分水平水平明显高于叶酸组和甲钴胺组(P0.05)。结论:叶酸联合甲钴胺能够改善脑血管病患者认知障碍评分,降低血清同型半胱氨酸水平,但叶酸对认知障碍无明显疗效。     

常用抗癫痫药对癫痫患者血同型半胱氨酸的影响

目的:观察常用抗癫痫药对癫痫患者血同型半胱氨酸、叶酸、维生素B12浓度的影响。方法:比较45例服用单药治疗的癫痫患者(服用卡马西平11例,服用拉莫三嗪12例,服用奥卡西平9例,服用丙戊酸13例)血同型半胱氨酸、叶酸、维生素B12浓度的差异。结果:癫痫患者血同型半胱氨酸均高于正常,而叶酸和维生素B12均在正常范围内;服用拉莫三嗪的患者其血中同型半胱氨酸低于服用丙戊酸、卡马西平和奥卡西平的患者;服用卡马西平的患者血中叶酸高于服用拉莫三嗪、丙戊酸的患者(P<0.05);维生素B12在各用药组间无统计学差异。结论:长期服用抗癫痫药物可引起血中同型半胱氨酸的升高,而高同型半胱氨酸血症可增加心脑血管疾病的危险,故癫痫患者应常规给予补充叶酸、维生素B12,以使血同型半胱氨酸水平恢复正常。     

内皮型一氧化氮合酶在胚胎小鼠肾脏发育中的表达

目的观察妊娠不同时期胚胎小鼠肾脏发育不同阶段内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的表达,探讨eNOS在胚胎小鼠肾脏早期发育中的意义。方法分别取胚龄13d（E13）、14d（E14）、15d（E15）、16d（E16）、18d（E18）组及新生组（P0）小鼠各10只,共6组。分别用免疫组化及免疫印迹方法对小鼠肾脏内eNOS表达进行定性、定量分析。结果（1）免疫组化结果显示：E14、E15组eNOS在生肾区呈阳性表达;E16组生肾区表达减弱,肾近端小管呈强阳性表达,同时远端小管及肾脏小动脉内皮也有阳性表达;E18组、P0组近端小管呈强阳性表达,远端小管呈阳性表达,髓质中的集合管eNOS表达弱阳性,而致密斑呈阴性表达。（2）免疫印迹结果显示：E14组肾脏eNOS含量较少,随后逐渐增多,PD0组eNOS含量最多。结论（1）eNOS在小鼠肾脏第14d开始呈阳性表达,以后含量逐渐升高,出生时含量最高。（2）eNOS表达部位从生肾区开始,以后其表达逐渐减弱甚至消失,而肾近端小管、远端小管的表达晚于生肾区,且呈逐渐增强趋势,至出生时达到最强。这一结果表明eNOS在胚胎小鼠肾脏发育的早期阶段起重要调节作用。     

急性低氧时Wistar大鼠与高原鼠兔肺组织内皮型一氧化氮合酶基因表达的变化

目的探讨内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)在高原动物适应高原低氧环境中的作用.方法通过模拟4000m、6000m高原低氧,运用免疫组织化学技术,分别检测Wistar大鼠和高原鼠兔肺血管内皮和肺内气道上皮内皮型一氧化氮合酶蛋白表达水平的变化.结果无论是在肺血管内皮,还是肺内气道上皮,Wistar 大鼠eNOS蛋白表达在模拟4000m与6000m高原低氧处理2h后,均显著升高,而高原鼠兔基本保持不变,但高原鼠兔气道上皮eNOS的基础表达水平显著高于Wistar大鼠.结论相比Wistar大鼠,高原鼠兔eNOS基因表达在模拟高原低氧时增加较少甚或无明显增加,eNOS是急性高原低氧耐受过程中的一个重要机制.     

神经型一氧化氮合酶在生后小鼠肾脏发育中的表达

目的观察生后小鼠肾脏发育不同阶段神经型一氧化氮合酶(nNOS)的表达,以及新生小鼠与成年小鼠肾脏nNOS表达差异,探讨nNOS在小鼠生后肾脏发育中的意义。方法分别取新生(出生小于2h)、生后3、5、7、14、40d昆明小鼠各8只,共6组。用免疫组织化学及免疫印迹方法对小鼠肾脏内nNOS表达进行定性、定量分析。结果新生小鼠生肾区nNOS呈强阳性表达,肾小管也有表达;成年小鼠肾远端小管,特别是致密斑,nNOS呈强阳性表达,集合管及肾小管均有阳性表达;新生小鼠肾脏nNOS含量最多,随后逐渐减少,成年小鼠nNOS含量最低。结论新生小鼠与成年小鼠肾脏nNOS表达部位不同,且表达含量由新生时最高到成年时降至最低。     

一氧化氮合成酶（NOS）基因表达的半定量检测及其运用

本工作参照Ｍａｒｔｉｎ（１９９３）定量ＲＴ－ＰＣＲ方法,建立了一种灵敏,简捷,特异的定量ＮＯＳ ｍＲＮＡ测定方法;证明了ＮＯＳ ｍＲＮＡ不仅存在于脑组织,亦广泛分布于心,肾,肺和肝组织中,其中以脑组织含量最高,肾,心次之。除内皮细胞以外,平滑肌细胞中ＮＯＳ ｍＲＮＡ水平下降,提示ＮＯＳ基因表达受抑,可能与高血压的病因密切相关。     

双歧杆菌对实验性大肠癌诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的:用免疫组化法观察大肠癌移植瘤诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达。方法:以大肠癌裸鼠移植瘤为动物模型,将青春型双歧杆菌注射于裸鼠腹腔。结果:显示双歧杆菌注射组大肠癌移植瘤iNOS的表达率、表达强度和阳性细胞数量均显著高于肿瘤对照组(P<0.01)。结论:青春型双歧杆菌能增强大肠癌移植瘤iNOS的蛋白表达水平。它的表达可能介导了双歧杆菌诱导大肠癌移植瘤细胞的凋亡。     

人参皂甙Rg1抗OxLDL诱导内皮细胞凋亡及分子机制

目的 探讨人参皂甙Rg1抑制氧化低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein,OxLDL)诱导血管内皮细胞凋亡的作用及其相关分子机制。方法 以体外培养的牛主动脉内皮细胞为模型。分别加入OxLDL200μg/ml(OxLDL组）和OxLDL200μg/ml Rg140μg/ml（Rg1组）;对照组不加任何诱导物,培养24小时后观察细胞形态变化,DNA电泳,TUNEL染色检测细胞有无凋亡及凋亡的程度,Western blot分析各组内皮细胞型一氧化氮合酶（endothelial Nitric Oxide Synthase,eNOS)的表达水平。结果 （1）对照组和OxLDL组血管内皮细胞凋亡比例分别为8%和41.35%;(2)Rg1组血管内皮细胞凋亡比例为13.29%;(3)OxLDL抑制牛主动脉内皮细胞的eNOS表达水平,此抑制作用具有剂量依赖性。人参皂甙Rg1可使被OxLDL抑制的eNOS表达水平回升。结论 （1）OxLDL能诱导血管内皮细胞凋亡。（2）人参皂甙Rg1能抑制OxLDL诱导的血管内皮细胞凋亡。（3）此作用可能与上调内皮细胞的eNOS水平,减轻细胞的脂质过氧化损伤有关。     

牛磺酸及微量营养素对大鼠视网膜NOS表达及cGMP含量影响的研究

目的：探讨大鼠补充一定剂量牛磺酸及微量营养素后,能否通过影响视感受器或视中枢ＮＯ合成酶（ＮＯＳ）表达及第二信使（ｃＧＭＰ）合成,影响视觉信号传导。方法：Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为三组,即对照组（正常饲料组）、实验１组（５倍需要量组）和实验２组（１０倍需要量组）,喂养３周后,每组动物再随机分为光照组和暗适应组（平均照度为３．０３ＬＸ）,以正常饲料喂养７２ｈ,大鼠活杀取样,以放射免疫方法分析ｃＧＭＰ含量     

NO在实验性大鼠颈动脉瘤发展中的作用

目的建立一种新的颈动脉动脉瘤模型,观察iNOS在实验性动脉瘤组织局部的表达情况和选择性iNOS抑制剂氨基胍对动脉瘤增大和对血清NO水平的影响。方法50只SD大鼠随机分为3组,应用弹性蛋白酶灌注颈总动脉建立颈动脉梭形动脉瘤模型。A组给予氨基胍干预;B组给予生理盐水;C组为阴性对照。测量颈总动脉直径和血清硝酸盐含量。应用HE、免疫组化和原位杂交评价动脉瘤的病理特征和iNOS的局部表达特点。结果选择性iNOS抑制剂可以明显抑制动脉瘤增大的程度和血清硝酸盐水平。诱导的动脉瘤病理特征和外形与人动脉瘤组织相似,主要表现为动脉瘤壁明显增厚,内弹力膜和弹性膜全部消失,平滑肌细胞层变薄和消失。中膜和外膜管壁大量的炎症细胞浸润,氨基胍明显抑制iNOS的表达。结论应用弹性蛋白酶灌注颈动脉可以在大鼠诱导出梭形动脉瘤。动脉瘤的增大与局部升高的NO有关。     

内源性一氧化碳与一氧化氮在高血压发病中的相互作用 …

目的和方法：采用ＨＯ活性抑制剂诱导大鼠高血压模型,观察血压变化、主动脉ＨＯ和ＮＯＳ活性、ＣＯ和ＮＯ产生释放,并测定血浆和主动脉平滑肌组织中ｃＧＭＰ含量,以探讨内源性ＮＯ和ＣＯ在高血压发生机制中的作用及其相互关系。结果：大鼠应用ＨＯ抑制剂ＺｎＤＰＢＧ腹腔注射２周后,继续饲养到第４周出现持续而稳定的高血压,同时总ＮＯＳ（ｔＮＯＳ）和诱导型ＮＯＳ（ｉＮＯＳ）的活性分别增加４５．４％和７３．３％（均为Ｐ〉