ISAAA信息

BT棉花保护近邻作物免受害虫危害 中国农业科学院的科学家发现,表达了Bt蛋白的转基因棉花不仅能降低自身害虫的种群数量,同时还能减少附近非转Bt作物的害虫数量。他们的研究成果刊登在近期的Science杂志上。     

Ecogen试验非重组体细菌杀虫剂

通过使用改良杀虫剂细菌的非重组体方法,Ecogen正避免与管理当局的争论。该公司已获得美国环境保护局(EPA)的准许,在南部八个州进行遗传性质变异的Bacillus thurin-giensis(BT)的大田试验以消灭棉花和蔬菜的害虫。通过野生 BT 品系之间的自然接合获得了新品系。细菌混合时,一些细菌互相接合,含有 BT 毒素基因的质粒可从一个细菌细胞转     

用基因重组方法生产微生物杀虫剂

<正> 据《生命工学》1986年第1期报道,日本住友化学工业株式会社建立了一种用基因重组方法生产苏云金杆菌制剂(BT剂)的新技术。该社试制了对甘蓝夜蛾有效的BT剂第1号,在此之前生产的BT剂对这种蔬菜害虫是没有杀虫效果的。BT剂原来的生产周期将近为1星期,而现在的新生产方法培养时间缩短为半天,而且,杀虫性蛋白质的活性也提高了将近两倍。通过使用大肠杆菌进行基因重组的方法,获得超过10万的高分子物质,这在世界上也是罕见的。     

BT基因棉与常规棉主要害虫及天敌生态位的比较研究

本研究了BT基因棉与常规棉主要害虫及天敌的生态位。结果表明：主要害虫及天敌的种类一致,但棉铃虫幼虫的数量差异显;33B棉田各昆虫种群的生态位宽度指数偏高;棉铃虫、棉蚜对主要天敌的生态位重叠指数偏高。应用生态位概念分析了造成区别的原因。     

向水稻导入BT毒素基因,开发抗虫性强的品种

三菱商事和三菱化成的合并公司、植物研究所的研究小组向水稻导入BT毒素基因,并表达成功。美国正在尝试向棉花和番茄中导入,开发了抗虫品种。BT毒素有很多类型。还不清楚导入了哪种类型。但是导入二化螟等水稻害虫的毒素的可能性很大。据农林水产省的统计,89年二化螟的为害面积为7,4600。相当于全年度耕种面积的3.5％。美国The     

用甘蓝螟确认导入BT毒素基因的水稻耐虫性

植物工程研究所培育导入并表达苏云金芽孢杆菌(BT)杀虫蛋白δ内毒素转基因水稻获得成功,用导入基因的第二代水稻叶确认了对水稻害虫甘蓝螟的耐虫性。摄食了重组水稻叶的甘蓝螟阻碍生长或死亡。δ内毒素可作为微生物农药BT 剂的杀虫成分。含有该编码基因的耐虫性植物,在日本开发还是首次。详细情况在10月18～20日名古屋召开的日本育种学会上发表。     

大肠杆菌合成1,2,4-丁三醇的途径优化

1,2,4-丁三醇(BT)是一种在工业中有多种用途的重要的非天然化合物。文中通过将外源基因xdh和mdlC导入大肠杆菌BW25113表达,并敲除了xylA、xylB、yagE、yjhH、yiaE和ycdW等木糖和中间产物代谢旁路基因,构建了能够将D-木糖转化为BT的重组菌株。为优化BT合成途径,针对BT合成途径中的限速步骤——3-脱氧-D-甘油-戊酮糖酸的脱羧反应,进行了新酶的筛选和评价,获得了可显著提高反应效率的新的2-酮酸脱羧酶——KivD,并构建了表达该酶的重组菌株BW-025。在此基础上,通过初步条件优化,将BT产量提高至2.38g/L;进一步调节途径中各个酶的表达量,探究了它们对BW-025合成BT的影响,最终获得了BT产量较BW-025提高了48.62%的重组菌株BW-074。     

副产物途径的缺失对大肠杆菌合成D-1,2,4-丁三醇的影响

【目的】敲除副产物途径,提高重组大肠杆菌D-1,2,4-丁三醇(D-1,2,4-Butanetriol,BT)产量。【方法】利用Red重组技术敲除木糖途径xyl AB基因及2-酮-3-脱氧木糖酸代谢途径的yag E及yjh H基因,考察其对重组菌生长、BT生产及副产物积累的影响。【结果】敲除xyl AB基因后,重组菌生物量降低57%,BT产量降低20%,单位菌体产量提高84%,木糖酸积累量提高52%。yag E或yjh H基因单独缺失重组菌生物量分别提高10%和5%,BT产量提高36%和14%。基因共同缺失后重组菌生物量降低了21%,BT产量提高184%,达到2.44 g/L,单位菌体产量提高258%。而共同敲除两途径,生物量降低了72%,虽然单位菌体产量提高了约4倍,但BT产量仅提高43%。p H调控下,重组菌木糖酸积累量下降,BT产量进一步提高,最高达3.11 g/L。【结论】xyl AB基因缺失后,虽有利于提高BT途径的效率,但由于木糖无法进入PPP途径及木糖酸积累,造成生物量降低,不利于BT合成。单独敲除yag E或yjh H后BT产量略有提高,而共同敲除这两基因更为有效地调整碳流向BT合成偏转。两途径共同敲除利于BT的合成,但由于菌体量的减少,无法大量获得BT。     

Daxx与ΦBT1相互作用并抑制其重组活性

噬菌体整合酶ΦBT1因其具有可介导转基因位点特异性整合的能力而成为了基因治疗中一种有效的工具,它丰富了转基因载体的选择,并使得多位点特异性整合成为可能.为了能够更加安全有效地利用ΦBT1整合酶作为基因治疗载体,有必要了解ΦBT1整合酶与宿主细胞内蛋白质相互作用的情况.酵母配对实验与免疫共沉淀实验揭示了ΦBT1整合酶中4个氨基酸433RFAL436对整合酶与PML-NBs蛋白Daxx的结合起到了关键作用.通过进一步构建并利用ΦBT1整合酶哺乳动物细胞报告系统,证实过表达Daxx会抑制ΦBT1整合酶在293T细胞中的重组效率.以上结果表明,细胞内的蛋白质可以与ΦBT1整合酶发生相互作用并抑制其重组活性,对于改善ΦBT1整合酶介导的转基因操作以及选择ΦBT1整合酶靶细胞方面具有重要的参考意义.     

杀虫领域新发现

多年来,似乎苏云金杆菌(BT)的短效毒素才是能进行抗虫植物基因工程的唯一蛋白。现在,情况已有所改变。英国的农业遗传学公司(AGC)相信,以前已知能杀死咀嚼害虫(如毛毛虫等)的毒性蛋白,用在防治吸汁昆虫上一样有效。吸汁型害虫每年使水稻、玉米、大麦和蔬菜的种植者损失数百万美元。 AGC与Durham大学合作,发现雪花莲属的一种植物的一种凝集素蛋白能高效防治水稻害虫“稻褐飞虱”(一种吸汁型昆虫)。 AGC发言人Tina Rogers说,这很可能破例证明吸汁型昆虫可以用蛋自来防治,从而为开发抗上述虫类的基因工程植物打开大门。吸汁型昆虫包括蚜虫、椰粉虱、飞虱以及其它侵食经济作物、传布病毒病的害虫。AGC在改造植物     

代谢改造克雷伯氏菌合成D-1,2,4-丁三醇

【背景】D-1,2,4-丁三醇(D-1,2,4-butanetriol,BT)是一种重要的四碳多元醇,应用范围广,以木糖为底物的四步生化反应是目前最高效的BT生物合成路线。但大肠杆菌宿主存在严重的碳代谢抑制,限制了工程菌在木糖葡萄糖混合糖下的生长和BT合成。然而克雷伯氏菌具有生长速度更快、葡萄糖木糖混合糖利用效果好等优点。【目的】在碳代谢抑制效应较弱的克雷伯氏菌中构建以木糖为底物的BT合成途径,以提高混合糖下BT合成能力。【方法】将来源于Clostridium crescenti的木糖脱氢酶基因xdh和来源于Lactococcus lactis的2-酮异戊酸脱羧酶基因kivD及来源于Escherichia coli W3110的木糖酸脱水酶基因yjhG克隆至KlebsiellapneumoniaeZG25,得到重组菌K.pneumoniae ZG25-BT,对重组菌进行培养条件和培养基优化,进一步敲除xylA以提高BT产量。【结果】在37°C、200 r/min、接种量1%、诱导时间2 h、添加10.0 g/L CaCO3控制pH条件下,敲除xylA的重组菌在1.5倍LB培养基中以30.0 g/L木糖和10.0 g/L葡萄糖为底物,BT的产量达到4.52 g/L,摩尔转化率为0.21mol/mol,收率为15%,较优化前分别提高150%、62%和67%。【结论】实现了BT在K.pneumoniaeZG25中的发酵生产,同时通过培养条件和培养基的优化及xylA的敲除提高了BT合成能力,为进一步实验奠定了基础。     

水稻两种细胞质雄性不育“三系”及其F1杂交种线粒体DNA的RFLP分析

对水稻BT型和WA型细胞质的雄性不育系,相应保持系和恢复系以及杂种的mtDNA用12个线粒体探针进行了RFLP分析,结果如下(1)BT型和WA型不育系的mtDNA在组织结构上存在差异;(2)不育系的mtDNA与其保持系间存在显著差异,推测mtDNA与水稻的cms有关;(3)atp9探针检测到WA型不育系与F1之间的多态性,Frag36探针检测到BT型不育系与F1之间的多态性,Frag9探针检测到WA型和BT型不育系与其F1之间的多态性,证明核恢复基因影响mtDNA的结构;(4)对mtDNA的结构变异与细胞质雄性不育的关系进行了分析与探讨.     

Rohm与Haas公司进行昆虫植物的田间试验

目前,遗传工程植物获得批准进行田间试验的情形比遗传工程细菌稍好一些。Ro hm 与Haas 公司研究出的遗传工程烟草是第一个获得美国农业部批准的抗昆虫植物。它是继最近批准的 Ciba-Geigy 的抗除草剂烟草和 Agracetus 的带有编码酵母乙醇脱氢酶基因的烟草之后,又一项进展。这种抗昆虫烟草中带有一个取自苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis 简写为 BT)的杀虫蛋白基因,是比利时的 Plant Genetic System 的研究人员根据与 Rohm 与 Haas 公司所签定的协议,负责研究开发的。BT 多年来一直被用于防治鳞翅目幼虫。一般常见的鳞翅目害虫有:舞毒蛾、棉夜蛾幼虫、棉铃虫、切根虫、粘虫、玉米穗蛾、甘蓝尺蛾、烟草天蛾、烟草夜蛾、     

水稻两种细胞质雄性不育“三系”及其F1杂交种线粒体DNA的RFLP分析

对水稻BT型和WA型细胞质的雄性不育系,相应保持系和恢复系以及杂种的mtD-NA用12个线粒探针进行了RFLP分析,结果如下：（1）BT型和WA型不育系的mtDNA在组织结构上存在差异;（2）不育系的mtDNA与其保持系间存在显著差异,推测mtDNA与水稻的cms有关;（3）atp9探针检测到WA型不育系与F1之间的多态性,Frag36探针检测到BT型不育系与F1之间的多态性,Frag9探针检测到WA型和BT型不育系与其F1之间的多态性,证明核恢复基因影响mtDNA的结构;（4）对mtDNA的结构变异与细胞质雄性不育的关系进行了分析与探讨。     

外源甜菜碱对低温胁迫下香蕉内源甜菜碱合成的影响

以巴西香蕉(MusaAAA Giant Cavendish cv.Brazil)幼苗为试验材料,用不同浓度外源甜菜碱(BT)预处理香蕉幼苗后,置于人工气候箱中模拟低温(7℃)胁迫,分别测定香蕉叶片和根系内源甜菜碱的含量和甜菜碱合成关键酶甜菜碱醛脱氢酶(BADH)活性,以探讨外源甜菜碱对香蕉叶片和根系内源甜菜碱合成的影响.结果显示:7℃低温胁迫16 h后,10 mg/L外源甜菜碱即可极显著提高香蕉幼苗叶片BADH活性,叶片内源BT含量也同步极显著增加,低温胁迫24h后根系内源甜菜碱的含量虽显著高于常温对照,其BADH活性却无显著提升.同时,香蕉幼苗叶片内源BT含量的积累与叶片BADH活性的提高具有显著正相关关系,与根系内源BT含量的增加呈极显著正相关关系,与外源BT浓度无显著相关性.研究表明,外源甜菜碱可促进低温胁迫下香蕉内源甜菜碱的合成和积累,叶片和根系均具有合成内源BT的能力.     

具有抗性发展的综合害虫治理模型的研究

本文假设害虫种群分为易感害虫和染病害虫,并且仅易感害虫对杀虫剂产生抗药性,运用分段连续的负指数函数模拟杀虫剂的作用方式,将易感害虫对杀虫剂的抗性发展引入具有不同频率喷洒杀虫剂与投放染病害虫和天敌的综合害虫治理模型,得到了易感害虫灭绝的临界条件,并依据临界条件给出了杀虫剂的切换策略.     

马铃薯Y病毒P3N-PIPO酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定

P3N-PIPO是马铃薯Y病毒属(Potyvirus)病毒基因组中近年来新鉴定的编码蛋白。为研究P3N-PIPO在病毒与宿主互作过程中的功能,本研究以马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)和马铃薯作为研究系统,用融合PCR技术扩增得到PVY编码蛋白P3N-PIPO的DNA序列,用于构建酵母双杂交诱饵质粒。为钓取马铃薯组织细胞内不同位置的互作蛋白,本研究构建了p BT3-N-P3N-PIPO、p BT3-C-P3N-PIPO、p BT3-STE-P3N-PIPO、p BT3-SUC-P3N-PIPO和p DHB1-P3N-PIPO 5个诱饵质粒,并进行自激活或毒性检测,最终获得p BT3-STE-P3N-PIPO、p BT3-SUC-P3N-PIPO和p DHB1-P3N-PIPO 3个可用于筛选马铃薯c DNA文库的诱饵质粒。     

利用重组技术开发新一代BT剂

美国Ecogen公司年内向美国环境保护局申请重组BT剂的专利。Ecogen公司已销售3种BT剂。但是这是利用自然接合提高杀虫效果的产品。使用基因重组技术开发并申请BT剂这还是第一次。 Ecogen公司现在库存有9500种不同的BT株。提高了杀虫能力,扩大目标昆虫的范围,另外为增加产     

复合Ⅱ型生物杀虫剂通过技术鉴定

“复合Ⅱ型生物杀虫剂的研究”是由黑龙江省科学院应用微生物所承担的院基金项目。该杀虫剂是由苏云金杆菌(BT)和柞蚕核多角体病毒混合而制成的生物复合剂。该制剂和单一(BT)制剂相比较毒力有明显的提高,小试虫体毒力测定试验结果比纯BT制剂提高10％以上,防治玉米螟田间试验结果,幼虫减退率比单一BT制剂提高10％以上,玉米增产     

条索状透明质酸在乳腺肿瘤细胞BT549化疗耐药中的作用

目的观察透明质酸的新存在形式——条索状透明质酸在乳腺肿瘤细胞BT549表面的表达情况,探索该结构在BT549细胞耐受紫杉醇杀伤中的作用。方法采用免疫细胞荧光技术观察BT549细胞表面条索状透明质酸的分布情况;分别用流式细胞术和RT—PCR检测透明质酸的条索状结构被破坏前后,紫杉醇诱导的肿瘤细胞凋亡、坏死率的改变以及凋亡相关基因c-junmRNA表达的改变。结果BT549细胞天然表达大量的条索状透明质酸,条索状结构被破坏后,紫杉醇诱导BT549细胞的凋亡和坏死率显著增高（P〈0．05）,凋亡基因c扣n的表达水平也显著增高（P〈0．05）。结论乳腺肿瘤细胞BT-549高表达条索状结构的透明质酸,这种透明质酸的新存在形式可能在BT549细胞耐受紫杉醇的杀伤过程中起到一定的保护作用。