胆囊收缩素对IL－1β损伤的胰岛β细胞功能的保护作用及其机制分析

本实验在分离培养的新生大鼠胰岛上,观察了胆囊收缩素（ＣＣＫ－８）对白细胞介素－１β（ＩＬ—１β）损伤的胰岛β细胞功能的影响。并就其机制进行初步分析。结果表明：（１）ＩＬ—１β（５,１０,２０Ｕ／ｍｌ）能抑制葡萄糖（２０ｍｍｏｌ／Ｌ）刺激的胰岛素分泌,其抑制作用具有量效关系,抑制率分别为５３．４％,６０．５％和７０．７％。（２）ＣＣＫ－８对ＩＬ－１损伤的胰岛β细胞的功能具有保护作用。预防性地给予ＣＣＫ－８（１０￣（－１０）,１０￣（－９）,１０￣（－８）,１０￣（－７）ｍｏｌ／Ｌ）能防止ＩＬ－１β对葡萄糖刺激的胰岛素分泌的抑制作用。治疗性地给予ＣＣＫ－８也能恢复胰岛对葡萄糖刺激的胰岛素分泌的能力。（３）ＣＣＫ　Ａ型受体阻断剂Ｌ３６４７１８（１０ｎｍｏｌ／Ｌ）能阻断ＣＣＫ－８的保护作用,表明这一作用可能是通过ＣＣＫ受体实现的。（４）ＩＬ－１β抑制胰岛素分泌的同时,能升高胰岛组织内ｃＧＭＰ水平,而ＣＣＫ－８能阻止ＩＬ－１引起的ｃＧＭＰ水平的升高。     

白细胞介素－1β对新生大鼠胰岛素分泌的作用及其机制分析

本实验采用分离培养的新生大鼠胰岛，观察了白细胞介素１β（ＩＬ－１β）和Ｎ￣Ｇ－甲基－Ｌ－精氨酸（ＮＭＭＡ，ＮＯ合成酶的竞争性阻断剂）对胰岛素分泌及对胰岛中ｃＧＭＰ水平和亚硝酸盐浓度的影响。结果如下：（１）ＩＬ－１β（５、１０、２０Ｕ／ｍｌ）能抑制基础的和由葡萄糖（２０ｍｍｏｌ／Ｌ）刺激的胰岛素分泌。ＩＬ－１β对葡萄糖刺激的胰岛素分泌的抑制作用呈明显的量效关系，抑制率分别为５３．％，６０．５％和７０．７％。（２）ＮＭＭＡ（０．５ｍｍｏｌ／Ｌ）能阻断ＩＬ－１β对葡萄糖刺激的胰岛素分泌的抑制作用。（３）ＩＬ－１β能增加胰岛内ｃＧＭＰ水平和亚硝酸盐浓度，而ＮＭＭＡ能阻断这一效应。以上结果表明，ＩＬ－１β能抑制新生大鼠胰岛β细胞的功能，这一作用可能是通过ＮＯ实现的。     

白细胞介素—1β对胰岛素分泌的抑制及睾酮的反转作用

离体培养新生大鼠胰岛细胞ＩＬ－１β（５－２０Ｕ／ｍｌ）处理２０ｈ后,可使胰岛细胞在高糖（２０ｍｍｏｌ／Ｌ）刺激下的胰岛素释放量明显降低。对ＩＬ－１β处理后的胰岛给予睾酮（１０＾－１０ｍｏｌ／Ｌ）,则能反转ＩＬ－１β的抑制效应,并且睾酮不仅增加胰岛素分泌,而且还可促进胰岛细胞内胰岛素含量的增加。     

白细胞介素－1β对胰岛素分泌的抑制及睾酮的反转作用

离体培养新生大鼠胰岛细胞用ＩＬ－１β（５—２０Ｕ／ｍｌ）处理２０ｈ后，可使胰岛细胞在高糖（２０ｍｍｏｌ／Ｌ）刺激下的胰岛素释放量明显降低。对ＩＬ－１β处理后的胰岛给予睾酮（１０－１０ｍｏｌ／Ｌ），则能反转ＩＬ－１β的抑制效应，并且睾酮不仅增加胰岛素分泌，而且还可促进胰岛细胞内胰岛素含量的增加。     

白细胞介素—1β对新生大鼠胰岛素分泌的作用及其机制分析

本实验采用分离培养的新生大鼠胰岛,观察了白细胞介素１β（ＩＬ－１β）和Ｎ＾Ｇ－甲基－Ｌ－精氨酸（ＮＭＭＡ,ＮＯ合成酶的竞争性阻断剂）对胰岛素分泌及对胰岛中ｃＧＭＰ水平和亚硝酸盐浓度的影响。结果如下：（１）ＩＬ－１β（５、１０、２０Ｕ／ｍｌ）能抑制基础的和由葡萄糖（２０ｍｍｏｌ／Ｌ）刺激的胰岛素分泌。ＩＬ－１β对葡萄糖刺激的胰岛素分泌的抑制作用呈明显的量效关系,抑制率分别为５３．４％,６０．５％和７     

特异性血清中白介素1β放射免疫分析的建立及初步应用

人工重组的白细胞介素１β（ＩＬ－１β）多次免疫兔和逐鼠,获取高效价的兔抗ＩＬ－１β抗体。用氯氨Ｔ法制备＾１２５Ｉ标记ＩＬ１β,经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５纯化。该法测定范围０．０６－４ｎｇ／ｍｌ,批内和批间误差分别小于５％和１０％。正常人血清含量为０．２４±０．０８ｎｇ／ｍｌ（ｎ＝１３８）,人粒细胞系ＨＬ６０（１０＾６）细胞体外培养２４小时,不能检出上清液中ＩＬ－１β,钙离子载体Ａ２３１８７和磷脂酶     

肿瘤坏死因子－α（TNF－α）及白细胞介素1β（IL1－β）对胶质增生的影响及机理

本文利用小鼠大脑机械损伤模型及体外培养的胶质细胞,采用同位素渗入法观察了细胞介素及其抗体对胶质细胞增生的影响。结果表明：体外培养时ＴＮＦ－α在浓度为１０～２００ｕ／ｍｌ培养液时均能促进胶质细胞增生（Ｐ＜０．０５）,ＩＬ１－β在浓度为５～２００ｕ／ｍｌ培养液时能促进胶质细胞增生,ＴＮＦ－α＋ＩＬ１－β其促进胶质细胞增生作用更强烈,ＴＮＦ－α抗体能完全阻断ＴＮＦ－α的促增生作用,部分阻断ＴＮＦ－α＋ＩＬ１－β的促增生作用。在体实验时,ＩＬ１－β及ＴＮＦ－α的作用与离体时相似,ＩＬ１－β及ＴＮＦ－α亦能促进胶质细胞增生,二者共同作用时促细胞增生作用更强。以上结果提示,外源性ＴＮＦ－α及ＩＬ１－β能促进中枢神经损伤后胶质细胞增生且具有协同作用。     

低氧预处理对大鼠海巴神经元缺氧耐受性和IL—1β表达 …

目的：观察低氧预处理对大鼠海巴神经元缺氧耐受性和白细胞介素－１β（ＩＬ－１β）表达的影响。方法：取培养１２ｄ的两组（对照组和低氧预处理组）培养神经元,同时置于缺氧环境（０．９Ｌ／ＬＮ２,０．１Ｌ／ＬＣＯ２）中培养２、４、８和１２ｈ。分别观察它们的形态变化和神经元存活数,并用抗ｒｈＩＬ－１β单克隆抗体进行免疫组织化学染色,观察缺氧对大鼠海马培养神经元ＩＬ－１β表达的影响。结果：经低氧预处理的海马神经     

大鼠iNOS基因上游调控区在转录激活中的作用

为了探讨大鼠ｉＮＯＳ基因上游调控区不同部位在对细胞因子诱导应答中所起的作用,将调控区不同部位插入ｐＳＶ０－ＣＡＴ报告基因载体,转染体外培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）,经ＩＬ－１β诱导后,采用氯霉素乙酰转移酶（ＣＡＴ）活性测定和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交,检查了调控区各部位在ＩＬ－１β诱导ｃａｔ表达中所起的作用．结果表明,被转染的细胞在未经ＩＬ－１β刺激时,各种调控区序列启动ｃａｔ表达的活性均很低．在ＩＬ－１β作用下,调控区远端序列（－１０３７～－４３８）、近端序列（－４３７～＋４６）和全长序列（－１０３７～＋４６）均能独立激活ｃａｔ表达,其中以全长序列的作用最强,表明ｉＮＯＳ基因表达调控区远端和近端序列均具有启动子和增强子样功能．同时证实,远端序列和近端序列单独启动ｃａｔ表达的活性分别为全长序列的９１．３％和６７．１％,揭示大鼠ｉＮＯＳ基因调控区远端序列在介导ＩＬ－１β的应答反应中发挥更重要作用．     

重组人蛋白激酶CK2β亚基cDNA的克隆与测序

蛋白激酶ＣＫ２是一种存在的信使非依赖性丝／苏氨酸蛋白激酶．它是由两个催化亚基（α或α′）和两个调节亚基（β）组成的不均一四聚体．用反转录ＰＣＲ从ＨＬ－６０细胞中获得了人蛋白激酶ＣＫ２β亚基编码区ｃＤＮＡ,将ＮｄｅⅠ／ＨｉｎｄⅢ双酶切ＰＣＲ产物连接到表达载体ｐＴ７－７的ＮｄｅⅠ／ＨｉｎｄⅢ双酶切位点中．转化感受态细菌ＤＨ５α获得转化子,阳性筛选率为７２％．限制性酶切分析结果表明,插入片段和重组质粒的大小与理论推测值相符．随机挑选４个阳性质粒测定其插入片段ＤＮＡ序列,结果显示有２个含有正确插入的人蛋白激酶ＣＫ２βｃＤＮＡ,命名为ｐＴＣＫＢ．其余２个克隆分别存在１个和２个点突变,即在其编码区ｃｏｎｄｏｎ１４８的ＴＣＡ→ＴＴＡ,结果Ｓｅｒ→Ｌｅｕ;另一个则在Ｃｏｎｄｏｎ１４３ＧＴＧ→ＡＴＧ,Ｖａｌ→Ｍｅｔ;Ｃｏｎｄｏｎ１７０ＧＴＧ→ＧＣＧ,Ｖａｌ→Ａｌａ．重组质粒（ｐＴＣＫＢ）克隆的成功,将为在原核细胞中表达蛋白激酶ＣＫ２β亚基以及利用ＣＫ２βｃＤＮＡ作为探针进行深入研究打下基础．并为利用ｐＴ７－７表达载体构建其他重组质粒建立了一套成功的方法     

大鼠杏仁核内注射八肽胆囊收缩素（CCK—8）拮抗吗啡镇痛的研究

大鼠双侧杏仁核内注射ＣＣＫ－８１ｎｇ（１μｌ）,能明显降低皮下注射４ｍｇ／ｋｇ吗啡产生的镇痛作用,并在０．１－１ｎｇ范围内呈量效关系。分别向双侧仁核注射ＣＣＫ－Ａ受体拮抗剂Ｄｅｖａｚｅｐｉｄｅ５０ｎｇ能部分翻转,２００ｎｇ则完全翻转ＣＣＫ－８的抗吗啡镇痛作用,１０ｎｇ无效;而ＣＣＫ－Ｂ受体拮抗剂Ｌ－３６５,２６０在５－８ｎｇ时即可完全番转ＣＣＫ－８的抗吗啡镇痛作用。杏仁核注射２００ｎｇ的Ｄｅｖａｚ     

琥珀酰－CCK_7对大鼠胰腺腺泡细胞分泌α淀粉酶和蛋白酶的影响

琥珀酰－ＣＣＫ_７为新合成的ＣＣＫ８的一种类似物［１］。当琥珀酰－ＣＣＫ７的浓度为１×１０（－１１）ｍｏｌ／Ｌ－１×１０［－７］ｍｏｌ／Ｌ时,能促使大鼠胰腺离体腺泡细胞分泌α淀粉酶和蛋白酶,其最有效浓度为１×１０－９ｍｏｌ／Ｌ。在相同摩尔条件下,琥珀酰－ＣＣＫ７的促分泌效应明显大于ＣＣＫ８,且这种效应在３小时内随着作用时间的延长而增加。这为开发高活性ＣＣＫ８的类似物提供了依据。     

CCK—8和NDAP对大鼠脑和脊髓组织c—fos表达的影响

为探讨八肽胆囊收缩素（ＣＣＫ－８）和阿片肽相互作用的分子机理,利用抗体免疫沉淀技术研究了ＣＣＫ－８与ＮＤＡＰ（κ阿片受体激动剂）对大鼠脑（去皮层和小脑）和脊髓背柱组织Ｆｏｓ蛋白的影响。结果表明,０．１μｍｏｌ／Ｌ ＣＣＫ－８可显著刺激脑和脊髓组织中Ｆｏｓ蛋白增加（分别是对照组的３．８倍和３．６倍）。相同浓度的ＮＤＡＰ对Ｆｏｓ蛋白的生成亦有一定的诱导作用,分别是对照组的２．７倍和２．６倍。ＣＣＫ－８     

白介素－1β对大鼠应激性胃粘膜损伤的保护作用

本工作观察了人重组白介素１β（ＩＬ－１β）对大鼠束缚冷冻应激造成的胃粘膜损伤的影响。外周给予ＩＬ－１β后能防止胃粘膜损伤的形成,呈剂量依从关系。ＩＬ－１片段１６３－１７１对应激性胃粘膜损伤无明显影响。但巯基物质耗竭剂Ｎ－乙烯顺丁烯二酰亚胺（Ｎ－ｅｔｈｙｌｍａｌｅｉｍｉｄｅ）能部分阻断ＩＬ－１β的作用。应激３ｈ后胃粘膜蛋白质和非蛋白质巯基含量明显降低,而ＩＬ－１β能防止巯基含量的下降。ＩＬ－１β也能减少应激造成的胃粘膜脂质过氧化产物丙二醛（ｍｏｌｏｎｄｉａｙｌｄｅｈｙｄｅ）的含量。提示ＩＬ－１β能明显减轻大鼠应激性胃粘膜损伤程度,其机制可能与胃粘膜内源性巯基物质有关。     

汉防己甲素对四氧嘧啶引致大鼠胰岛β细胞损伤的保护作用

本实验采用四氧嘧啶损伤大鼠胰岛β细胞,复制糖尿病动物模型。若预先腹腔注射汉防己甲素（１００ｍｇ／ｋｇ）则可完全预防引发的糖尿病。预防组血糖（７．６３±０．４４ｍｍｏｌ／Ｌ）明显低于对照组（２５．４６±１．２１ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｐ＜０．００１）;血清胰岛素水平（１１．３３±１．９７μＵ／ｍｌ）高于对照组（７．１３±０．４５μＵ／ｍｌ,Ｐ＜０．０５）;血浆胰高血糖素（６６．８５±５．０７ｐｇ／ｍｌ）明显低于对照组（９０．３５±３．１５ｐｇ／ｍｌ,Ｐ＜０．０１）．口服葡萄糖耐量实验显示预防组耐糖功能较对照组明显改善,糖耐量曲线下血糖面积预防组（２９．４５±１．６３ｍｌ·ｈ／Ｌ）低于对照组（１１３．２８±５．０２ｍｍｏｌ·ｈ／Ｌ,ｐ＜０．００１）。胰岛β细胞免疫组织化学染色结果显示,预防组胰岛β细胞数目及胰岛素分泌颗粒的含量均与正常大鼠胰岛相同,无形态学改变,而对照组胰岛内β细胞免疫反应阳性产物减少甚至消失。结果表明,汉防己甲素对四氧嘧啶引起的胰岛β细胞急性损伤有保护作用。     

CCK－8和NDAP对大鼠脑和脊髓组织c－fos表达的影响

为探讨八肽胆囊收缩素（ＣＣｋ－８）和阿片肽相互作用的分子机理,利用抗体免疫沉淀技术研究了ＣＣＫ－８与ＮＤＡＰ（ｋ阿片受体激动剂）对大鼠脑（去皮层和小脑）和脊髓背柱组织Ｆｏｓ蛋白的影响。结果表明,０．１μｍｏｌ／ＬＣＣＫ－８可显著刺激脑和脊髓组织中Ｆｏｓ蛋白增加（分别是对照组的３．８倍和３．６倍）。相同浓度的ＮＤＡＰ对Ｆｏｓ蛋白的生成亦有一定的诱导作用,分别是对照组的２．７倍和２．６倍。ＣＣＫ－８和ＮＤＡＰ共同处理组织,Ｆｏｓ蛋白生成水平相似（脑）或高于（脊髓）ＣＣＫ~－８单独诱导的水平。结果表明,ＣＣＫ－８和ＮＤＡＰ均可直接诱导大鼠脑和脊髓组织ｃ－ｆｏｓ的表达,它们对ｃ－ｆｏｓ表达的相互作用在脑和脊髓中呈现不同的模式。     

IL-1β对正常和自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞iNOS基因转录调控因子的影响

用ＩＬ－１β处理体外培养的ＳＨＲ和ＷＫＹ大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）,比较两种大鼠ｉＮＯＳ基因表达活性的变化,Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ结果表明,ＶＳＭＣ受ＩＬ－１β刺激后,两种细胞的ｉＮＯＳ基因均表现出极高的转录活性,并且ＳＨＲ的ｉＮＯＳｍＲＮＡ水平高于ＷＫＹ大鼠．以大鼠ｉＮＯＳ基因转录调控区上游６００ｂｐ（－１０３７～－４３８）和下游５００ｂｐ（－４３７～４６）ＤＮＡ片段为探针,与ＶＳＭＣ核蛋白孵育后,进行凝胶电泳迁移率改变分析（ＥＭＳＡ）,结果显示,两种大鼠的ＶＳＭＣ被ＩＬ－１β处理后,其核蛋白可分别与转录调控区上游或下游序列结合形成一条电泳滞后带．但是,转录调控区上游序列和下游序列与核蛋白形成的复合物具有明显不同的电泳迁移率．与ＷＫＹ大鼠相比,ＳＨＲ的ＶＳＭＣ核蛋白与ＤＮＡ结合活性较高．提示ＳＨＲ的ＶＳＭＣｉＮＯＳ基因及其转录调控因子对ＩＬ－１β的反应与ＷＫＹ大鼠明显不同．     

人绒毛膜促性腺激素β－亚基在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

本文以哺乳动物细胞表达载体ｐＳＶ２－ｄｈｆｒ为运载体，构建了受控于ＳＶ４０早期启动子β－ｈＣＧ基因的表达载体，转染ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－细胞后，挑选ＣＨＯ（ｄｈｆｒ－）细胞，结果表明β－ｈＣＧ不仅在细胞中表达，还分泌到培养液中。通过氨甲喋呤（ＭＴＸ）加压后，表达量逐渐提高，０．１μｍｏｌ／ＬＭＴＸ条件下培养液中β－ｈＣＧ最高表达量可达到１．５μｇ／１０６细胞·２４小时。经亲和层析获得纯的重组β－ｈＣＧ，其分子量与天然制品一致，放射免疫测定的免疫原性为天然制品的８４．９％。     

TNF-α、IL-1β及LPS对血管平滑肌细胞一氧化氮合酶基因表达的影响及作用机制研究

通过ＲＮＡ印迹分析和亚硝酸盐含量测定检查ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β和ＬＰＳ对大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）基因表达及ＮＯ生成的影响．结果表明,ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β和ＬＰＳ均能显著诱导ＶＳＭＣｉＮＯＳ基因表达和促进ＮＯ生成,其作用强度与浓度和作用时间有关;双因素（ＴＮＦ－α＋ＬＰＳ,ＬＰＳ＋ＩＬ－１β）对诱导ｉＮＯＳ基因表达及ＮＯ生成产生协同作用．ＰｏｌｙｍｙｘｉｎＢ和地塞米松可部分抑制ＴＮＦ－α对ｉＮＯＳ基因表达的诱导作用及ＮＯ生成     

八肽胆囊收缩素对吗啡抑制大鼠离体空肠电与收缩活动的对抗作用

本研究探讨了八肽胆囊收缩素（ＣＣＫ－８）对抗吗啡对大鼠离体空肠电与收缩活动的作用。结果表明,吗啡能抑制ＡＣｈ对空肠峰波发放和收缩的加强作用;ＣＣＫ－８可对抗吗啡的作用;在此基础上,ＣＣＫ－Ａ受体拮抗剂ｄｅｖａｚｅｐｉｄｅ（１０ｎｍｏｌ／Ｌ）能完全翻转ＣＣＫ－８的抗吗啡作用,但是ＣＣＫ－Ｂ受体拮抗剂Ｌ－３６５,２６０在１０ｎｍｏｌ／Ｌ时可部分翻转、在３０ｎｍｏｌ／Ｌ时能完全翻转ＣＣＫ－８的作用。上述