降钙素基因相关肽对小鼠肠道集合淋巴结T细胞及腹腔巨噬细胞功能的影响

本工作观察了降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）对小鼠肠集合淋巴小结（ＰＰ结）Ｔ细胞和小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。结果表明：ＣＧＲＰ能明显抑制ＰＰ结Ｔ淋巴细胞的转化,并且这种作用与Ｔ细胞的分化增殖状态有明显关系。此外ＣＧＲＰ对腹腔巨噬细胞ＤＮＡ和蛋白质的合成也有明显的抑制作用。以上结果提示ＣＣＲＰ可能作为一种抑制型的神经内分泌免疫调节肽而对肠道免疫功能发挥着重要的调节作用。     

创伤后巨噬细胞对T细胞白介素2及白介素2受体α基因表达的直…

以２５μｇ／ｍｌ的丝裂霉素Ｃ处理巨噬细胞３０ｍｉｎ,可阻断巨噬细胞白介素１（ＩＬ－１）、白介素６（ＩＬ－６）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）及前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）的合成与分泌。创伤小鼠巨噬细胞经丝裂霉素Ｃ处理后,可明显抑制正常Ｔ细胞白介素２（ＩＬ－２）ｍＲＮＡ及ＩＬ－２受体（ＩＬ－２Ｒ）α ｍＲＮＡ水平,并增强Ｔｓ细胞的抑制活性。去除Ｔ细胞中Ｔｓ细胞可使巨噬细胞的抑制作用消失。表明创伤后巨噬细胞可通过     

人参茎叶皂甙对创伤小鼠活化T细胞内磷脂酰肌醇代谢的影响

研究了人参茎叶皂甙（ＧＳＬ）对创伤小鼠活化Ｔ细胞内磷脂酰肌醇代谢的影响。结果显示,ＧＳＬ体内应用（５０ｍｇ·ｋｇ￣（－１）·ｄ￣（－１）,伤后０─３ｄ）对创伤小鼠活化Ｔ细胞内三磷酸肌醇（ＩＰ＿３）、游离Ｃａ￣（２＋）、钙调素（ＣａＭ）、ＣａＭ依赖的蛋白激酶（ＣａＭ－Ｐｋ）、蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）水平的降低具有明显的逆转效应,并可明显降低创伤小鼠血清、巨噬细胞、Ｔｓ细胞对各指标的抑制活性。ＧＳＬ（１．０─１００ｍｇ／Ｌ）在体外也可明显提高创伤小鼠活化Ｔ细胞内ＩＰ＿３、Ｃａ￣（２＋）、ＣａＭ、ＣａＭ－ＰＫ及ＰＫＣ水平。上述结果表明,ＧＳＬ可逆转创伤小鼠活化Ｔ细胞内磷脂酰肌醇代谢的降低。     

恒河猴肺内CGRP及CGRP mRNA免疫组织化学和原位杂交的研究

本实验采用免疫组织化学ＡＢＣ－ＧＤＮ法和地高辛标记寡核苷酸探针原位杂交技术,研究了降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）及其ｍＲＮＡ在恒河猴内的表达。结果显示ＣＧＲＰ分布于恒河猴肺内各级支气管粘膜上皮的神经内分泌细胞（ＮＥＣ）和神经上皮样小体（ＮＥＢ）中。ＣＧＲＰ杂交阳性细胞的分布与免疫组织化学的结果相同。ＣＧＲＰ ｍＲＮＡ杂交信号均匀分布于整个细胞质,而ＣＧＲＰ免疫反应物仅在神经内分泌细胞的基部更明显,说     

降钙素基因相关肽肽段的抗原性和免疫原性

用固相合成法合成了有关降钙素基因相关肽ＣＧＲＰ五个肽段。它们的氨基酸顺序分别为：ＣＧＲＰ－１（２４－３７）;ＣＧＲＰ－２（１４－３７）;ＣＧＲＰ－３（９－２３）;ＣＧＲＰ－４（１－２３）和ＣＧＲＰ－５（１－１３）。用酶标方法测定了它们的抗原性,发现ＣＧＲＰ－２和ＣＧＲＰ－１能够很好地与抗ＣＧＲＰ抗血清结合。将ＣＧＲＰ－１;ＣＧＲＰ－３和ＣＧＲＰ－５分别免疫兔子,获得的抗血清分别与ＣＧＲＰ进行反应,     

小鼠颌下腺降钙素基因相关肽的免疫组织化学定位

本文用免疫组织化学ＡＢＣ法,对小鼠颌下腺中降钙素基因相关肽（ＣａｌｃｉｔｏｎｉｃＧｅｎｅ－ＲｅｌａｔｅｄＰｅｐｔｉｄｅ,ＣＧＲＰ）的分布进行了观察。结果表明：小鼠颌小腔内有降钙素基因相关肽免疫反应神经的分布,它们主要分布于小叶间结缔组织中。此外,颗粒由管细胞也呈降钙素基因相关肽免疫反应阳性。提示降钙素基因相关肽可能参与颌下腺的分泌活动及血液循环等生理调节。     

降钙素基因相关肽肽段的抗原性和免疫原性

用固相合成法合成了有关降钙素基因相关肽ＣＧＲＰ五个肽段。它们的氨基酸顺序分别为：ＣＧＲＰ－１（２４－３７）;ＣＧＲＰ－２（１４－３７）;ＣＧＲＰ－３（９－２３）;ＣＧＲＰ－４（１－２３）和ＣＧＲＰ－５（１－１３）。用酶标方法测定了它们的抗原性,发现ＣＧＲＰ－２和ＣＧＲＰ－１能够很好地与抗ＣＧＲＰ抗血清结合。将ＣＧＲＰ－１;ＣＧＲＰ－３和ＣＧＲＰ－５分别免疫兔子,获得的抗血清分别与ＣＧＲＰ进行反应,发现只有抗ＣＧＲＰ－１的抗血清能够与ＣＧＲＰ很好地结合。因此,可以推测ＣＧＲＰ的羧端部分是其免疫活性部位。     

海马培养细胞的缺氧损伤及降钙素基因相关肽的保护作用

采用新生大鼠海马细胞进行分离培养,观察缺氧对海马培养细胞的影响以及降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）的保护作用。结果表明：培养１２ｄ的细胞置于缺氧环境（９５％Ｎ２＋５％ＣＯ２）中４─２４ｈ后,随着缺氧时间延长,神经细胞由肿胀、胞膜受损乃至死亡,台盼蓝染色细胞数增多,乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）和Ｋ＋漏出增加。经ＣＧＲＰ孵育的细胞缺氧后形态变化轻微,细胞死亡率以及ＬＤＨ和Ｋ＋漏出量均明显低于对照组。本结果表明,体外培养的海马神经元对缺氧甚为敏感。缺氧造成海马细胞严重损伤,ＣＧＲＰ对此有明显的保护作用。     

降钙素基因相关肽和心房肽对犬冠脉的舒张作用

本实验利用冠脉内给药和离体血管灌流等方法观察比较了降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）和心房肽（ＡＮＰ）对犬冠脉循环的影响及其对犬大小冠状动脉的舒张作用。结果显示,ＣＧＲＰ和ＡＮＰ均能明显增加冠脉血流量、降低大小冠脉阻力,两者均呈剂量依赖性舒张大小脉冠脉血管。ＡＮＰ的作用显著小于ＣＧＲＰ,其中大冠脉对两者的反应性显著小于小冠脉,ＣＧＲＰ和ＡＮＰ对冠脉的舒张作用均无内皮依赖性。结果提示,ＣＧＲＰ和ＡＮＰ直接     

降钙素基因相关肽拮抗内皮素的致心律失常作用

本工作在麻醉大鼠冠状动脉口注射内皮素１（ＥＴ１）９００ｐｍｏｌ／ｋｇ能引起室性早搏（ＰＶＣ）、室速（ＶＴ）、室颤（ＶＦ）等严重心律失常,心律失常评分（ＡＳ）为５．６±１．０;冠状动脉口单独注射降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）３００－１２００ｐｍｏｌ／ｋｇ仅引起血压一过性下降,此后逐渐恢复,无心律失常发生,心律失常评分为０。用ＣＧＲＰ３００ｐｍｏｌ／ｋｇ预处理后再注射ＥＴ１９００ｐｍｏｌ／ｋｇ,心律失常发生率减少,严重程度降低,ＡＳ为１．６±１．６。ＣＧＲＰ１２００ｐｍｏｌ／ｋｇ＋ＥＴ１组心律失常评分显著低于ＥＴ１对照组（Ｐ＜０．０１）。本实验结果表明,ＣＧＲＰ的抗心律失常作用很可能有部分是通过拮抗内皮素的致心律失常作用来实现的。     

豚鼠胆囊内CGRP免疫反应阳性神经纤维的分布特点

应用免疫组织化学ＡＢＣ法，研究了降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）免疫反应阳性神经纤维在豚鼠胆囊内的分布及分布特点。结果表明：胆囊内有较丰富的ＣＧＲＰ免疫反应阳性神经纤维，它们多呈念珠状膨大，在血管壁内及血管周围区域数量较多。胆囊颈部和胆囊管ＣＧＲＰ免疫反应阳性神经纤维的分布多于胆囊底部和体部。提示ＣＧＲＰ对胆囊的功能有调节作用。     

大鼠内毒素血症不同时期血CGRP和背根神经节CGRP mRNA水平的变化

本文采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法测定大鼠内毒素血症不同时期胸腰段背根神经节降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）ｍＲＮＡ水平的改变,结合血浆ＣＧＲＰ水平的改变,以期全面了解大鼠内毒不血症不同时期ＣＧＲＰ释放与合成的变化。结果显示：注射内毒素（５ｍｇ／ｋｇ）后３０ｍｉｎ时,大鼠血浆ＣＧＲＰ开始增高,而背根神经节ＣＧＲＰ ｍＲＮＡ水平无明显变化;注射内毒素后３ｈ时,血浆ＣＧＲＰ及背根神经节ＣＧＲＰ     

降钙素基因相关肽对家兔离体窦房结电生理活动的影响

用常规微电极方法研究了降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）对家兔窦房结起搏细胞的电生理作用,并进一步探讨这种作用与钙电流的关系。结果：⑴低浓度ＣＧＲＰ（１ｎｍｏｌ／Ｌ）对窦房结动作电位各参数无显著影响;中等浓度ＣＧＲＰ（１０ｎｍｏｌ／Ｌ）可增加最大舒张期电位、动作电位幅度、０期最大除极化速率和４期自动除极速率,缩短窦性周期、动作电位复极化５０％和９０％时间,这些作用经２０ｍｉｎ达到高峰;高浓度ＣＧＲＰ（２     

降钙素基因相关肽对不同程度冠脉狭窄时的心脏功能的影响

本实验观察了冠脉内注射降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ０．３μｇ／ｋｇ）对正常及不同程度冠脉狭窄犬的心功能的影响。结果表明正常犬冠脉内注射ＣＧＲＰ后,平均动脉压（ＭＡＰ）下降１．２ｋＰａ（Ｐ＜０．０５）,同时,心率（ＨＲ）、心输出量（ＣＯ）、左室收缩压峰值（ＬＶＳＰ）均不同程度增加;左室舒张末压（ＬＶＥＤＰ）轻度降低。在中度狭窄３０ｍｉｎ后,冠脉内注射ＣＧＲＰ对ＨＲ、ＭＡＰ无明显影响;而重度狭窄后注射ＣＧＲＰ,ＭＡＰ由狭窄时降低逐渐增高,ＨＲ由增快而变慢。ＣＯ、ＬＶＳＰ均显著增高,ＬＶＥＤＰ降低,此作用较冠脉狭窄前更为明显。提示ＣＧＲＰ扩张冠脉动脉,增加冠脉血流量和心排血量,增强心肌收缩力,对缺血心脏功能有保护作用。     

降钙素基因相关肽(CGRP)mRNA在大鼠淋巴细胞中的表达

最近,我们研究发现大鼠胸腺和淋巴结淋巴细胞中存在降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）样免疫反应活性。应用人工合成的可特异扩增降钙素／降钙素基因相关肽基因部分片断的寡核苷酸引物,通过逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）,检测在大鼠脊髓背根神经节、胸腺细胞及肠系膜淋巴结淋巴细胞中是否存在ＣＧＲＰ ｍＲＮＡ,进一步研究大鼠淋巴细胞能否合成ＣＧＲＰ。结果显示,通过ＲＴ－ＰＣＲ从脊髓背根神经节（阳性对照）、胸腺和淋     

降钙素基因相关肽对大鼠分离的心肌细胞内游离Ca~（2＋）含量的影响

用荧光染色法观察了合成的大鼠降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）对大鼠心肌细胞内游离Ｃａ￣（２＋）含量的影响。结果证明,ＣＧＲＰ能明显增加心肌细胞内Ｃａ￣（２＋）含量,小、中和大剂量（１０￣（－９）、１０￣（－８）、１０￣（－７）ｍｏｌ／Ｌ）的ＣＧＲＰ使Ｃａ￣（２＋）含量分别增加至２７６．８８±６．３１、３６４．９９７±１２．７０、５７６．３９７±１５ｎｍｏｌ／Ｌ与对照组（１３６．２８±７．２４ｎｍｏｌ／Ｌ）相比差异非常显著（Ｐ＜０．０１）,且随着ＣＧＲＰ剂量的增加而作用明显加强,呈现剂量—效应关系。３０μｍｏｌ／Ｌ的维拉帕米对ＣＧＲＰ所致的细胞内Ｃａ￣（２＋）增加有抑制作用,对小、中、大剂量ＣＧＲＰ作用的抑制率分别为４８％、４４％和１８％。我们推测,ＣＧＲＰ可能直接作用于心肌细胞。低浓度ＣＧＲＰ的正性肌力作用主要是促进Ｃａ￣（２＋）经Ｃａ￣（２＋）通道内流,使心肌细胞内Ｃａ￣（２＋）含量增加的结果。在大剂量ＣＧＲＰ的正性肌力作用中Ｃａ￣（２＋）内流也起到一定作用。     

大鼠鼻粘膜肽能神经末梢分布的研究

用免疫组化技术（ＡＢＣ法）系统研究了大鼠鼻粘膜９种肽能神经末梢分布的特征,这９种神经肽分别是Ｐ物质（ｓｕｂｓｔａｎｃｅＰ,ＳＰ）,神经激肽Ａ（ｎｅｕｒｏｋｉｎｉｎＡ,ＮＫＡ）,神经激肽Ｂ（ｎｅｕｒｏｋｉｎｉｎＢ,ＮＫＢ）,降钙素基因相关肽（ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎｇｅｎｅ－ｒｅｌａｔｅｄｐｅｐｔｉｄｅ,ＣＧＲＰ）,血管活性肠多肽（ｖａｓｏａｃｔｉｖｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ,ＶＩＰ）,神经肽Ｙ（ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅＹ,ＮＰＹ）,甘丙肽（ｇａｌａｎｉｎ,ＧＡＬ）,生长抑素（ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ,ＳＯＭ）及神经降压素（ｎｅｕｒｏｔｅｎｓｉｎ,ＮＴ）,同时选择与鼻粘膜神经肽（ＮＰ）作用密切相关的三叉神经节（ＴＧ）细胞进行上述ＮＰ的定位。用重组ＰＳＰ６５质粒（４００ＳＯＭｃＤＮＡ）制备ＳＯＭｍＲＮＡ单链探针,以地高辛精标记,在鼻粘膜及ＴＧ细胞进行ＳＯＭｍＲＮＡ的原位杂交组化研究。结果提示大鼠鼻粘膜有丰富的肽能神经末梢;ＴＧ细胞含有多种ＮＰ并且可以合成ＳＯＭ。该研究结果对重新认识鼻粘膜神经分布规律有一定意义。     

降钙素基因相关肽对缺氧时海马细胞内游离Ca^2＋的影响

本实验用Ｆｕｒａ－２荧光测定技术直接监测了缺氧时大鼠海马细胞内游离Ｃａ２＋浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）的变化,并观察了降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）对这种变化的影响。结果发现,缺氧可使海马细胞［Ｃａ２＋］ｉ显著增高;４或８ｎｍｏｌ／ＬＣＧＲＰ能明显地降低缺氧引起的［Ｃａ２＋］ｉ增高,但在无胞外Ｃａ２＋的情况下,ＣＧＲＰ的作用消失。结果表明,ＣＧＲＰ的降钙作用是通过抑制缺氧时胞外Ｃａ２＋的内流来实现的。     

双歧杆菌和乳杆菌在诱发抗肿瘤免疫中的作用

双歧杆菌和乳杆菌给封闭群昆明小鼠腹腔注射,在体内激活后,胸腺细胞和脾细胞对ＣｏｎＡ刺激的增殖反应,脾贴附性细胞对ＹＡＣ－１,Ｌ９２９的细胞毒作用,以及脾贴附性细胞产生对上述二株瘤细胞的肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）的活性都比对照动物明显增强。结果提示短双歧杆菌和嗜酸性乳杆菌给小鼠腹腔注射后,通过激活脾脏淋巴细胞和贴附性细胞（巨噬细胞）所介导的免疫功能而明显地增强宿主的抗肿瘤活性。     

云芝多糖对巨噬细胞GPx基因表达的影响

细胞内存在两种谷胱甘肽过氧化物酶;硒谷胱甘肽过氧化物酶和非硒谷肽甘肽过氧化物酶,它们在保护细胞免受氧化损伤等过程中起重要作用。为揭示云芝多糖作用与细胞抗氧化酶的关系,采用酶活性测定,斑点杂交等方法,探讨云芝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞过氧化物酶表达的影响。结果显示,腹腔注射云芝多糖可以提高小鼠腹腔巨噬细胞的两种过氧化物酶活性,并使其ｍＲＮＡ含量增加,应用阻断剂的研究发现,云芝多糖对巨噬细胞ＳｅＧＰｘ及Ｇ