人肝细胞生长因子cDNA克隆在CHO细胞中的表达

肝细胞生长因子是一种由α、β链组成的杂合二聚体糖蛋白,能促进肝细胞、多种上皮细胞、内皮细胞和神经胶质细胞的有丝分裂,并对多种肿瘤细胞具有细胞毒性作用或者抑制其生长［１～４］,其作用无种属特异性,如人肝细胞生长因子能促进大鼠肝细胞增殖［５］。由于天然Ｈ...     

肝细胞生长因子对主要器官/组织损伤的修复作用

肝细胞生长因子(HGF)是一种多功能的生长因子,它参与多种细胞的增殖、迁移和形态发生。HGF对多种成熟的器官／组织有营养修复作用,促进肝、肾、肺等损伤器官的再生,同时也是神经系统新的营养因子之一。本综合近年来有关献对HGF在主要器官或组织损伤中的修复作用作一概括性介绍。     

人肝细胞生长因子(hdHGF)基因在毕赤酵母中的分泌表达

研究了hdHGF基因在毕赤酵母中的表达 .以人胎盘mRNA为模板 ,经逆转录、重叠PCR获得hdHGF全长和成熟基因片段 .将该基因片段克隆到pPIC9载体上 ,将重组表达质粒转化巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)GS115,筛选mut+ 表型 ,经甲醇诱导可实现rhdHGF的分泌表达 .经摇瓶培养筛选出 4株表达水平较高的酵母工程菌株 ,SDS PAGE分析和Western印迹试验表明 ,产物分子量约为80kD ,5L发酵罐高密度培养已使生物量达 13 5g L(干重 ) ,发酵液上清总蛋白量为 8 0g L ,电泳结果表明rhdHGF表达水平为总蛋白的 12 3 % .     

肝细胞生长因子的分子生物学研究

肝细胞生长因子 (HGF)是一种多功能细胞因子 ,其分子为异二聚体糖蛋白 ,有NK1,NK2 ,NK4三个变种。HGF启动子的结构很复杂 ,其表达受多种因素和调控元件的调节。因HGF在体内有重要作用 ,HGF的基因工程表达和基因治疗正在研究中     

肝细胞生长因子和其受体c-Met在鼻咽癌组织中的表达及其意义

目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)和其受体c-Met在鼻咽癌(NPC)中的表达及其意义.方法:采用免疫组织化学S-P法检测55例NPC,15例慢性鼻咽炎症中HGF/c-Met蛋白的表达,并结合临床病理进行分析.结果:HGF、c-Met在慢性鼻咽粘膜炎症中,主要表达于柱状上皮细胞胞膜或细胞浆;在NPC中HGF主要表达于肿瘤间质、癌细胞有少量表达;c-Met表迭于癌细胞,间质不表达.HGF、c-Met蛋白在NPC中的阳性表达率分别为90.9%(39/55)、70.9%(50/55),与对照组相比,差异有显著性(P＜0.05);HGF,c-Met的阳性表达与临床分期呈正相关(P＜0.05),而与年龄、性别、组织分型无相关性;有淋巴结转移的c-Met蛋白阳性表达率分别显著高于无淋巴结转移,差异有显著性(P＜0.01).结论:HGF/c-Met过度表达可能在鼻咽癌癌细胞的侵袭转移过程中起调节作用,c-Met基因的异常表达与NPC侵袭转移生物学行为密切相关,c-Met对于判断NPC预后具有一定价值.     

肝细胞生长因子促进非肝组织再生

肝细胞生长因子除能刺激肝细胞分裂增殖外,还可作用于其它多种细胞,在组织器官的损伤修复中发挥重要作用。     

我国促肝细胞生长因子的研究和应用

促肝细胞生长因子具有促进细胞增殖和生长的作用,国内外研究较多。我国对肝细胞生 长因子的研究和应用主要集中在肝源性促肝细胞生长因子上。在总结国内学者历年研究成果的 基础上,结合我国生产和应用的实际情况,对促肝细胞生长因子的来源、结构、理化性质、生产及 应用情况进行了综述,有助于更深入研究。     

肝细胞生长因子结构和功能研究进展

肝细胞生长因子是一种能够促进肝细胞分裂增殖的多效性细胞因子．它是由一条重链和一条轻链组成的异二聚体,其中重链由N端和4个Kring1e区组成。目前,NKl的晶体结构已经解出,在N端有肝素糖蛋白结合区,HGF分子与肝素糖蛋白的相互作用对HGF分子二聚化和内吞清除都有重要意义。Kring1e区的空间取向对HGF分子与受体结合非常重要．其中K1、K2发挥重要作用,而K3、K4发挥辅助作用。轻链有促进受体酪氨酸磷酸化的作用。     

重组人肝细胞生长因子抗四氯化碳染毒小鼠肝的保护效应

为检测重组人肝细胞生长因子（ｒ－ｈＨＧＦ）的保肝作用,本工作观察到ｒ－ｈＨＧＦ降低ＣＣｌ４染毒小鼠血清ＡＬＴ和ＡＳＴ升高的幅度,减轻肝组织受损的程度和防止肝细胞器的破坏,而且,ｒ－ｈＨＧＦ的这种保肝效应所需剂量极小,为ｎｇ级。根据上述资料推测,ｒ－ｈＨＧＦ为一极有效的保护小鼠肝抗ＣＣｌ４损伤的生长因子     

肝细胞生长因子在神经系统的研究进展

肝细胞生长因子是一多效性细胞因子。在神经系统发育和再生过程中,肝细胞生长因子作为神经营养因子发挥作用。本文就肝细胞生长因子的分子生物学特性以及在神经系统中的分布和生物学作用进行综述。     

人胎肝中肝细胞生长因子生物活性的研究

人胎肝细胞裂解液经膜超滤,在分子量10～30kD组分中可检测出人肝细胞生长因子(hHGF)活性。hHGF为一热稳定的蛋白质或多肽类物质。它可特异地刺激肝来源细胞~3H-TdR掺入的增加,并且存在量效依赖关系,而对非肝来源细胞的DNA合成无刺激作用。hHGF的生物活性及理化性质与某些已知因子,如胰岛素、胰高血糖素、血小板来源的生长因子、表皮生长因子及增殖刺激因子等有所不同。     

冷冻对视网膜色素上皮细胞分泌肝细胞生长因子的影响

本研究观察冷冻处理后的人视网膜色素上皮细胞(human retinal pigment epithelium cells,hRPE)在体外培养和体内玻璃体环境中分泌肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)水平的变化,调查变化后的玻璃体对正常RPE细胞的促增生作用。体外培养的RPE细胞在-80℃下进行冷冻,冷冻时间分为0s、15s和60s,随后继续体外培养和注入正常兔眼玻璃体,冷冻后的第3d和6d收集细胞培养液和玻璃体样本,ELISA法测定hHGF含量;进一步,用MTT法测定正常RPE细胞加入玻璃体样本后的生长状态。结果显示冷冻刺激RPE细胞hHGF的分泌增多,并可促进RPE细胞增生。     

INDUCTION OF HEPATOCYTE GROWTH FACTOR IN THE LIVER, KIDNEY AND LUNG FOLLOWING TOTAL BODY IRRADIATION IN RAT

Hepatocyte factor (HGF) has been shown to have a pleiotropic function to act as a potent organotropic factor in the regeneration of injury in various organs, including the liver, kidney and lung. To examine the involvement of HGF in radiation injury, the authors analysed the changes in HGF mRNA and HGF protein levels in the rat organs (liver, lung, kidney) and plasma following 6 Gy of total body irradiation. Expression of HGF mRNA in the liver and kidney increased 6–48 h after total body irradiation and returned to previous values 1 week later. HGF protein levels in lung and liver showed 1.3-2 fold elevations 1–2 weeks after irradiation (P< 0.05). HGF levels in plasma stayed at undetectable levels up to 1 month after total body irradiation. The labelling index determined 2 weeks and 1 month after total body irradiation indicated no enhancement of regeneration. Thus, total body irradiation induced transient HGF elevation in these organs without enhancement of regeneration     

肝细胞生长因子对四氯化碳损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用

本工作采用无血清原代培养大鼠肝细胞法,观察了重组人肝细胞生长因子（ｒ－ｈＨＧＦ）对四氯化碳（ＣＣｌ４）致大鼠肝细胞损伤的保护作用。结果表明,ｒ－ｈＨＧＦ对ＣＣｌ４染毒肝细胞有明显的保护作用。ｒ－ｈＨＧＦ保护组较ＣＣｌ４染毒组细胞存活率显著升高,细胞内丙氨酸转氨酶、钾离子漏出明显降低。结果提示,ｒ－ｈＨＧＦ可减轻ＣＣｌ４对肝细胞膜的损伤,提高细胞膜的结构完整性     

晚期糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞的肝细胞生长因子表达的影响

目的探讨晚期糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞的肝细胞生长因子(HGF)mRNA及蛋白表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,予不同浓度(100mg/L、200mg/L、400mg/L)的AGEs刺激24h及400mg/LAGEs作用6h、12h、24h及48h,采用RT-PCR及免疫细胞化学法检测内皮细胞HGFmRNA及蛋白的表达水平。结果在一定范围内随着AGEs浓度增加,内皮细胞HGF表达逐渐增高;AGEs早期作用内皮细胞,促进HGFmR-NA及蛋白的表达,随着AGEs的持续作用,HGF表达减弱。结论随着AGEs作用时间的延长,HGF对受损内皮细胞的修复作用先增强后减弱。     

PTTG和b-FGF在宫颈病变组织中的表达及意义

目的探讨人垂体肿瘤转化基因(human pituitary tumor transforming gene,PTTG)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b-FGF)在不同程度宫颈病变组织中的表达情况,以及两者的相关性。方法通过免疫组织化学SP法,检测PTTG和b-FGF在慢性宫颈炎(15例)、宫颈上皮内瘤变(43例,其中CINⅠ级17例、CINⅡ级14例、CINⅢ级12例)及宫颈鳞癌(30例)组织中的表达。结果PTTG和b-FGF在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达呈增高趋势。尤其在宫颈癌中的表达明显高于在慢性宫颈炎中的表达(P<0.05)。但两者在CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ级中的表达均无统计学意义(P>0.05)。PTTG和b-FGF在宫颈癌中的表达呈正相关(r=0.923,P<0.05)。结论PTTG在宫颈癌组织中高表达,可能是宫颈癌的一个分子标志。由PTTG和b-FGF的相关性推测PTTG可能通过上调b-FGF而参与了肿瘤的发生、发展过程。     

重组人碱性成纤维细胞生长因子在大肠杆菌中的高效表达*

利用基因改造的方法可以优化外源基因在大肠杆菌中的表达。利用逆转录PCR技术从原代培养的人成纤维细胞中克隆出人碱性成纤维细胞生长因子基因,在不改变氨基酸序列的前提下对该基因的上游部分序列进行改造,并将其插入表达载体pET-3c,转入大肠杆菌阳BL21（DE3）,IPTG诱导表达,表达蛋白占菌体总蛋白的30％以上,并具有良好的生物活性。     

前列腺组织中神经生长因子(NGF)表达的研究

研究前列腺组织中神经生长因子（ＮＧＦ） 的生理学意义。采用原位杂交和免疫组化法, 检测４３ 例前列腺增生组织, ８ 例腺癌组织和８ 例正常组织中β－ＮＧＦｍ ＲＮＡ及其蛋白的表达及分布。结果显示β－ＮＧＦｍ ＲＮＡ 在正常组织及增生组织中定位于间质细胞, 偶见于上皮细胞中; 而在癌组织中, 上皮细胞和间质细胞有同样强度的β－ＮＧＦｍ ＲＮＡ染色。其蛋白在良性组织中表达主要着色在间质细胞中,上皮细胞呈弱表达,而癌组织中上皮细胞见着色明显增强（Ｐ＜ ０．０５）。ＮＧＦ的自分泌异常可见是前列腺组织由良性向恶性转变的原因之一。     

表皮生长因子受体在涎腺腺样囊性癌不同细胞系中的表达

目的通过检测在涎腺腺样囊性癌两个细胞系中受体型酪氨酸蛋白激酶EGFR的表达,探讨其与腺样囊性癌发生发展的关系.方法采用Western Blot技术并利用电泳凝胶成像分析软件对结果进行量化分析;采用SPSS11.5统计软件对结果进行统计学分析.结果在SACC-83和SACC-LM细胞中,前者胞膜中EGFR的表达明显高于后者,而胞浆中的表达却明显低于后者(均为P<0.01);在SACC-83细胞系中,EGFR在细胞膜中呈现高表达(P<0.01),而在SACC-LM细胞系, EGFR在胞浆中呈现高表达(P<0.01).结论 EGFR基因在胞浆中的高水平积累可能在侵袭癌的进展中发挥重要作用,对其深入研究,有望为腺样囊性癌治疗带来新的策略.