LIN28基因对人胰腺癌细胞PANC1和SW1990增殖和迁移的影响

该文目的为研究LIN28基因对人胰腺癌细胞增殖和迁移的影响,揭示其在胰腺癌发生发展中的作用。实验发现,胰腺癌细胞中LIN28的表达模式与细胞增殖和迁移能力有关,将干扰质粒LIN28 sh RNA转染入LIN28高表达的PANC1细胞,将过表达载体3×Flag-LIN28转染入低表达的SW1990细胞中,采用RT-PCR和Western blot实验验证基因沉默或过表达的效果,并运用CCK-8法分析细胞的增殖能力并绘制细胞生长曲线,Transwell实验检测细胞迁移率。结果显示,下调LIN28后,PANC1细胞中LIN28基因的表达量明显降低,细胞增殖减慢,迁移减少;而上调LIN28后,SW1990细胞中LIN28基因的表达量明显增高,细胞增殖加快,迁移增加。由此说明,沉默LIN28基因可以抑制PANC1细胞增殖和迁移,过表达LIN28基因可以促进SW1990细胞增殖和迁移,这为阐明LIN28在胰腺癌演化过程中的机制奠定了实验基础。     

沉默DEPDC1抑制鼻咽癌细胞HNE-1和CNE-1侵袭迁移

DEPDC1(DEP domain containing 1)是一个新的肿瘤相关基因,在多种恶性肿瘤的发生发展进程中起着重要作用。我们前期工作中在鼻咽癌细胞内沉默了DEPDC1的表达,发现抑制细胞增殖并诱发细胞凋亡。本研究旨在探讨沉默DEPDC1表达后,对鼻咽癌细胞HNE-1和CNE-1侵袭迁移能力的影响及其分子机制。结果显示,siRNA介导DEPDC1表达沉默后,细胞侧向运动能力、侵袭及迁移能力显著降低。qRT-PCR及Western印迹检测发现DEPDC1沉默导致EMT上游关键转录因子Twist1及间质细胞标志分子Vimentin表达显著下调。这些研究表明,鼻咽癌细胞中DEPDC1通过调节Twist1等EMT关键分子的表达在细胞侵袭转移过程中起关键作用。推测DEPDC1在鼻咽癌中高表达可能对于促进其侵袭转移具有重要作用,进而促进肿瘤发生发展,但具体分子机制仍有待更深入研究。     

Caveolin-1真核表达载体的构建及其Hepa1-6细胞中的表达

Caveolin-1在不同肿瘤中发挥作用不同,既发挥抑癌基因样作用又发挥癌基因样作用.旨在分析caveolin-1 在小鼠肝癌细胞系中的表达情况及建立稳定表达外源caveolin-1的Hepa1-6细胞.利用RT-PCR和Western-blot方法检测caveolin-1在小鼠肝癌H22、Hea-F和Hepa1-6细胞中的表达;通过分子克隆构建小鼠caveolin-1 cDNA真核表达栽体,利用脂质体转染等方法建立稳定表达外源caveolin-1的Hepa1-6细胞株;通过RT-PCR、Western-blot、免疫细胞化学等方法鉴定其稳定表达细胞株.结果显示,caveolin-1在Hepa1-6细胞中表达呈阴性,在H22和Hca-F 中高表达;成功获得小鼠caveolin-1 cDNA真核表达载体pEGFP-N2/Cav-1,筛选并鉴定出高表达外源caveolin-1的Hepa1-6稳定细胞株C1和C4,为进一步分析caveolin-1在肝癌中所发挥的作用奠定了一定的研究基础.     

SIK1作为miR-93新的靶基因抑制前列腺癌细胞增殖、侵袭和迁移

该文探讨了SIK1作为miR-93新的靶基因对前列腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用.采用重组质粒pcDNA3.1-SIK1上调前列腺癌细胞中SIK1的表达后,利用CCK8和克隆形成实验检测细胞增殖;利用细胞划痕和Transwell实验检测细胞侵袭和迁移;利用West-ern blot检测E-cadherin和Vime...     

Galectin-1的4T1乳腺癌过表达细胞的构建及其对增殖和转移的影响

探查galectin-1促癌作用的广泛性,并为进一步研究该基因在三阴性乳腺癌中促癌转移的分子作用机制提供必要的实验工具和依据。采用生物信息学方法去分析多种癌症病人样本中该基因的表达情况,及其与乳腺癌病人总体生存率的关系;通过慢病毒转染去构建galectin-1过表达的4T1细胞株,并检测该基因对细胞增殖(CCK8检测法)、迁移和侵袭(Transwell检测法)的影响。研究结果显示,galectin-1在乳腺癌和淋巴癌等多种癌症中呈现高表达状态,且与乳腺癌病人的总体生存率呈负相关。同时,galectin-1过表达三阴性乳腺癌4T1细胞株被成功构建。Galectin-1的过表达能够显著促进4T1肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。这些都显示了galectin-1是一个对乳腺癌等多种癌症具有促癌作用,并能促进三阴性乳腺癌细胞体外增殖和转移的因子。     

miR-490-3p通过靶向调控TGFBR1抑制非小细胞肺癌细胞的增殖和侵袭

目的:以非小细胞肺癌A549细胞为模型,探讨miR-490-3p在肺癌发生发展过程中的作用及其调控机制。方法:通过miRBase数据库获得miR-490-3p序列,设计miR-490-3pmimics并转染A549细胞,CCK8、细胞划痕及Transwell实验分别检测miR-490-3p过表达对A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;使用miRwalk在线工具预测miR-490-3p可能的调控基因,通过实时荧光定量PCR及Western印迹对候选调控基因进行筛选,最后通过双萤光素酶报告基因实验验证miR-490-3p与调控基因之间的靶向关系。结果:过表达miR-490-3p可显著抑制A549细胞的增殖、侵袭和迁移能力;在预测的miR-490-3p候选靶基因中,选择与细胞增殖、迁移等表型相关的RASAL2、TGFBR1、PAPPA、HMGA2、TGFA靶基因进行实时荧光定量PCR及Western印迹筛选,结果仅TGFBR1基因在mRNA和蛋白水平的表达与miR-490-3p水平呈负相关,且双萤光素酶报告实验证实miR-490-3p可直接与TGFBR1的3'-UTR结合并抑制其表达。结论:miR-490-3p通过靶向调控TGFBR1的表达抑制非小细胞肺癌A549细胞的增殖和侵袭。     

TGF-β1对卵巢癌细胞A2780增殖及迁移侵袭的影响

目的:探讨TGF-β1对卵巢癌细胞A2780增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法:以体外培养的卵巢癌细胞A2780为研究对象,给予不同浓度(0、2、4…20 ng/m L)TGF-β1处理不同时间(12、24…72 h)。采用CCK-8法检测不同的浓度TGF-β1处理不同时间对卵巢癌细胞A2780增殖的影响。根据增殖实验结果选择合适的TGF-β1作用浓度及处理时间,采用细胞划痕实验测定细胞的迁移能力,Transwell实验检测细胞的侵袭及迁移能力。结果:相较于空白对照组,TGF-β1可以剂量和时间依赖性显著促进卵巢癌细胞A2780的增殖(P0.05)。细胞划痕实验结果显示TGF-β1处理组ΔS%/h明显高于空白对照组(P0.05);Transwell迁移实验结果显示:TGF-β1处理组OD570明显高于空白对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。Transwell细胞侵袭实验结果显示:与空白对照组相比,TGF-β1处理组OD570明显升高(P0.05)。结论:TGF-β1可以明显促进卵巢癌细胞系A2780的增殖、迁移及侵袭能力,其促增殖效应呈剂量/时间依赖效应。     

布比卡因调控HAND2-AS1抑制胰腺癌细胞增殖、迁移侵袭

[目的]探讨布比卡因是否通过调控HAND2-AS1影响胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭.[方法]将SW1990、SUIT-2细胞随机分为对照组、布比卡因100 μmol/L、布比卡因500 μmol/L、布比卡因1 mmol/L组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-HAND2-AS1组、布比卡因1 mmol/L+si-...     

Caveolin-1对乳腺癌细胞系MCF-7增殖和存活的影响

该文研究窖蛋白(Caveolin-1)对乳腺癌细胞系MCF-7细胞增殖与存活的影响。运用蛋白质印迹方法(Western blot)检测发现,caveolin-1在5株不同细胞系均只有低表达。运用电穿孔转染方法在乳腺癌细胞系中高表达Caveolin-1,运用Western blot检测转染后Caveolin-1表达情况发现,转染后细胞内Caveolin-1表达上升,并具有生物活性。运用单核细胞直接细胞毒性测定法(MTT)检测发现,转染后乳腺癌细胞系MCF-7增殖速度降低。运用Western blot方法和免疫荧光(immunofluorescence)方法检测转染后细胞凋亡途径的变化,磷酸化的P38蛋白含量上升,Bax表达量明显上升。据此推测Caveolin-1抑制MCF-7细胞的增殖和存活,并诱导基于Bax途径的细胞凋亡。     

RPA1低表达对辐射抵抗人鼻咽癌CNE-2R细胞侵袭迁移及细胞周期的影响*

目的: 探讨复制蛋白A1(RPA1)沉默对人鼻咽癌CNE-2R细胞侵袭、迁移及细胞周期的影响。方法: 采用shRNA技术构建RPA1低表达的CNE-2R细胞模型并通过RT-PCR和Western blot实验验证。选用空白对照组(CNE-2R)、阴性对照组(NC-shRNA)、RPA1低表达组(RPA1-shRNA)3组细胞完成后续实验,通过CCK8和克隆形成实验检测细胞增殖能力、Transwell实验检测侵袭能力、划痕实验检测迁移能力,流式细胞术检测细胞周期;Western blot实验检测Chk2、p-Chk2、Cdc25c和p-cdc25c蛋白的表达。结果: 与CNE-2R和NC-shRNA组比较,RPA1-shRNA组细胞的RPA1mRNA和蛋白质均显著降低(P＜0.01和＜0.05);RPA1-shRNA组组细胞的增殖、侵袭、迁移能力显著下降(P均＜ 0.05),细胞周期被阻滞在G2/M期(P＜0.01);RPA1-shRNA组细胞Chk2、Cdc25c的表达低于CNE-2R和NC-shRNA组细胞(P＜0.05), 而p-Chk2、p-cdc25c的表达高于其它两组(P ＜0.05)。结论: RPA1低表达抑制辐射抵抗人鼻咽癌CNE-2R细胞的增殖、迁移以及使细胞周期阻滞于G2/M期。     

以转录因子AP-1为靶的decoy核酸体内外抗肿瘤研究

合成了双链寡聚核苷酸——decoy核酸,其与靶转录因子AP-1有高亲和性,可进入细胞作为decoy顺式元件,通过抑制特异的转录因子和调控区域的结合,调控基因转录而改变基因的表达.在体内外抗肿瘤试验中, decoy核酸有显著抑制肿瘤细胞增殖的作用,可以成为潜在性的肿瘤基因治疗药物.     

糖鞘脂GM1调控生长密度相关的乳腺细胞体外增殖抑制

细胞在体内增殖受到制约,以确保器官的正常大小和组织稳态的维持,体外培养的细胞也存在接触抑制生长现象.分布于细胞膜上的糖鞘脂具有调控细胞增殖的作用.本研究探讨了糖鞘脂GM1对人乳腺细胞MCF-10A、人乳腺癌细胞BT-549和SK-BR3增殖的影响.通过对细胞不同接种量研究细胞增殖的变化;利用流式细胞术检测细胞在不同密度生长时GM1的表达差异;探索细胞在不同密度生长时外源添加GM1对细胞增殖的影响;构建GM1干扰和过表达细胞并检测转染细胞株的增殖差异.结果显示,相较于常规密度,在低密度和高密度生长时,细胞增殖受到抑制,GM1表达量提高;GM1处理抑制低密度和高密度生长时细胞增殖,对常规密度生长细胞没有显著影响.在低密度和高密度生长时,GM1干扰细胞增殖能力提高,而GM1过表达细胞增殖能力下降.综上,本实验研究证实GM1抑制乳腺细胞MCF-10A、乳腺癌细胞BT-549和SKBR-3在体外低密度和高密度生长时的细胞增殖,为研究GM1抑制细胞增殖分子机理提供了工作基础.     

pNEgr-mIL-12真核表达载体的体外和体内生物学活性检测

肿瘤的基因-放射治疗是近年来发展起来的新技术.分别于体外和体内检测含辐射敏感启动子和mIL-12基因的真核表达载体（pNEgr-mIL-12）的生物学活性.体外经酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)法检测转染pNEgr-mIL-12重组质粒的COS-7和B16细胞可经辐射诱导mIL-12 p70表达,于1.5～2.0 Gy照射后表达增高最明显,COS-7细胞于照后4 h 达峰值,B16细胞的表达水平随照射后时间延长而逐渐增高;pNEgr-mIL-12重组质粒联合电离辐射治疗小鼠移植肿瘤,单次或多次注射pNEgr-mIL-12重组质粒,联合局部照射能够抑制小鼠移植肿瘤生长,与单纯照射组比较肿瘤生长速度减慢,瘤重降低,尤以多次给予质粒治疗组效果明显.为进一步探讨最佳治疗方案及临床肿瘤病人的基因放射治疗提供了初步依据.     

Caveolin-1促进乳癌Hs578T耐药细胞株侵袭和转移

通过基因转染技术培育caveolin-1过表达乳癌HS578T耐药细胞株Hs578T/Dox cav-1和空载体细胞株Hs578T/Dox vector,探讨caveolin-1蛋白对耐药肿瘤细胞体内和体外侵袭转移能力的影响.由于caveolin-1表达的增加,Hs578T/Dox cav-1细胞形态变为长梭形,伪足更长而伸展,其粘附能力高于空载体Hs578T/Dox vector细胞株((0.897±0.163)vs(0.633±0.053),P<0.01).侵袭小室试验发现,Hs578T/Dox cav-1侵袭转移能力增强,培养6h迁徙进入微孔膜的细胞数比Hs578T/Dox vector细胞株明显增多((107.8±10.9)vs(80.8±8.07),P<0.01),侵袭破坏matrigel基质蛋白胶进入膜内的细胞数也明显增多((68.8±9.88)vs(25.6±5.41),P<0.01).悬浮培养的Hs578T/Dox cav-1细胞比Hs578T/Dox vector细胞更容易聚集,形成相对较致密的细胞团块,24h检测流式细胞凋亡指数下降((8.79±1.54)%vs(16.42±1.42)%,P<0.01).这表明其具有更强的抗失巢凋亡和继续生存的能力,为循环转移的肿瘤细胞定植前取了更多时间.Hs578T/Dox vector细胞在裸鼠皮下种植成瘤试验中不能成瘤,而Hs578T/Dox cav-1细胞接种15只裸鼠,全部形成肿瘤,平均直径(0.8±0.45)cm.发现一只成瘤裸鼠双肺可见瘤样肿块转移.HE病理组织染色见肿瘤细胞弥漫性分布,细胞核异型性明显.上述结果表明,caveolin-1对Hs578T耐药肿瘤细胞侵袭、转移和成瘤性具有明显的促进作用.     

In vivo andin vitro methylation of lysine residues ofEuglena gracilis histone H1

We have earlier identified and purified two protein-lysine N-methyltransferases (Protein methylase III) fromEuglena gracilis [J. Biol. Chem.,260, 7114 (1985)]. The enzymes were highly specific toward histone H1 (lysine-rich), and the enzymatic products were identified as -N-mono-, di- and trimethyllysines. These earlier studies, however, were carried out with rat liver histone H1 as thein vitro substrate. Presently, histone H1 has been purified fromEuglena gracilis through Bio-Rex 70 and Bio-Gel P-100 column chromatography. TheEuglena histone H1 showed a single band on SDS-polyacrylamide gel electrophoresis and behaved like other histone H1 of higher animals, whereas it had a much higherR _f value than the other histones H1 in acid/urea gel electrophoresis. When theEuglena histone H1 was [methyl-³H]-labeledin vitro by a homologous enzyme (one of the twoEuglena protein methylase III) and analyzed on two-dimensional gel electrophoresis, three distinctive subtypes of histone H1 were shown to be radiolabeled, whereas five subtypes of rat liver histone H1 were found to be labeled. Finally, by the combined use of a strong cation exchange and reversed-phase Resolve C₁₈ columns on HPLC, we demonstrated thatEuglena histone H1 contains approximately 9 mol% of -N-methyllysines (1.40, 1.66, and 5.62 mol% for -N-mono-, di- and trimethyllysines, respectively). This is the first demonstration of the natural occurrence of -N-methyllysines in histone H1.     

以胰岛素样生长因子受体1基因为靶的反义寡核苷酸体内外抗肿瘤研究

以胰岛素样生长因子受体－1基因为靶筛选抗肿瘤药物.根据IGF1RmRNA的二级结构设计了9条反义寡核苷酸药物,以脂质体介导进行转染,MTT染色计算细胞生长抑制率,从中筛选出一条序列并对之进行优化,最后以最佳序列进行体外作用持续时间及体内细胞生长抑制率分析.结果表明该序列在体内外具有良好的抗肿瘤活性,具有剂量依赖性关系,且对荷瘤裸鼠无明显的毒性.IGF1R可作为肿瘤治疗的新靶点.     

大鼠BTCe对体外培养胰岛保护作用及对糖尿病大鼠降糖作用的研究

β细胞素(betacellulin,BTC)是目前较受关注的胰岛再生因子,但其促胰腺、胰岛再生的机制不清.BTCe是betacellulin的功能片段,促细胞增殖能力与BTC相同.实验通过原核表达方法获得BTCe蛋白,MTT法证实其促3T3-L1细胞增殖能力.将BTC或BTCe作用于原代培养的大鼠胰岛,观察其对胰岛分泌的急性及长期影响作用,实时定量PCR及免疫荧光检测胰岛内关键基因的表达.将质粒pcDNA3.1-BTCe注射入链脲霉素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肌肉中,观察对大鼠血糖的影响作用.加入BTC或BTCe可明显提高体外培养大鼠胰岛的GSIS水平,但实时定量PCR及免疫荧光显示胰岛内4种关键基因的表达并无明显变化;pcDNA3.1-BTCe转染糖尿病大鼠15～20天后血糖出现下降,糖耐量明显改善;免疫荧光显示:胰腺内有大量PDX-1 的导管细胞及胰岛素阳性细胞出现.推测BTC及BTCe对体外长期培养的大鼠胰岛具有一定的保护作用,可能通过促进胰腺内PDX-1 的导管细胞及胰岛素阳性细胞的增殖、诱导对STZ诱导的糖尿病大鼠的高血糖具有一定缓解作用.     

金属硫蛋白与红细胞的相互作用

根据金属硫蛋白(MT)对标记在膜上的马来酰亚胺自旋标记物的ESR波谱的影响,研究了MT与红细胞膜的相互作用,发现不同种属的MT对膜构象的影响不同.体外实验表明,MT可以吸附在红细胞的表面,用CdCl₂诱导家兔,对血浆和红细胞溶血液中的MT组分进行色谱分离,发现血液中的MT主要存在于血细胞中.进而对血液MT的来源、分布及其重要的生物学意义进行了讨论.