固相多肽片段缩合方法的研究——两种表层型树脂的制备及接肽效能

本文较详细地介绍了表层代交联度聚苯乙烯树脂及接枝聚苯乙烯树脂的制备过程及它们的一些物理性质。作者通过对固相片段缩合法合成姨高血糖素过程的分析,对这两种树脂的接肽性能进行了比较,结果表明表层树脂对大肽片段缩合更为有利。     

两种树脂固相合成机体保护肽的比较

目的:比较Wang树脂和二氯三苯甲基树脂(以下简称二氯树脂)在固相合成机体保护肽中的表现,为工业化生产提供理论依据。方法:通用的Fmoc固相合成法制备机体保护肽,通过比色法对两种树脂与氨基酸的偶联率进行比较,用质谱(MALDI-TOFMS)对粗肽进行鉴定分析,用反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行粗肽的分析和纯化。结果:显示以二氯树脂作载体,第一个氨基酸的连接率,以及机体保护肽的纯度和产率都要明显高于Wang树脂。结论:二氯树脂作载体合成机体保护肽更适合大规模工业化生产的要求。     

肽自动合成中有关问题探讨

讨论了肽自动合成中的方法选择、偶联技术、故障排除、肽－树脂裂解及肽的纯化等主要问题及策略。     

用片段固相缩合法全合成结晶胰高血糖素

遵照毛主席关于“要认真总结经验”的教导,作者在回顾十年来多肽合成发展过程的基础上,运用一分为二的唯物辩证观点分析了目前已有的两类合成方法都难以合成含100个氨基酸残基以上的大蛋白质的内在矛盾,指出了可能解决矛盾的途径之一,一个新的合成方案——片段固相缩合法。在“独立自主、自力更生”方针的指引下,通过反复实践,我们合成了初步满足新方法所需要的新材料——表层树脂。本文报导合成胰高血糖素(29肽)的结果,目的是对新方法进行一次考验:先将用经典法合成的四个肽片段(5,6,9,6)在三肽树脂上依次进行缩合,每次缩合率皆达95%以上,全合成以后经过氟化氢处理,两次柱分离纯化,便可获得氨基酸组成、层析及碟状电泳等物化行为与天然品相同的,具有高效增血糖活力的胰高血糖素结晶——正交十二面体。全过程总得率可达17%。根据在胰高血糖素的组成中含有侧链功能团氨基酸较多的特点,在虽然给人工合成过程带来不利影响的情况下仍能获得较高缩合率及通过简单分离即能纯化结晶的结果,说明这一方法有可能为人工合成具有严格结构的较大蛋白质提供一条发展途径。     

聚苯乙烯树脂固定化D-海因酶的初步研究

D-海因酶广泛用于D-氨基酸的制备研究和生产中,目前已有许多固定化D-海因酶及含D-海因酶细胞的研究报道。尝试了不同功能基团的聚苯乙烯树脂进行D-海因酶的固定化,结果表明功能基为伯氨基和仲氨基效果较好,并选取聚苯乙烯树脂D92进行了固定化D-海因酶的研究。采用该树脂制备固定化酶的最优条件是：酶质量浓度6mg／mL、温度25℃、固化时间12h。所得固定化酶的最适作用温度45℃,最适作用pH为8.5,且作用温度及适宜pH较广,Km为游离酶的1,8倍,且储存稳定性、操作稳定性较好。45℃下半衰期为11d。     

两种树脂对固相法合成丙型肝炎疫苗多肽的影响

本实验采用固相法合成丙型肝炎疫苗多肽,比较Wang树脂和二氯三苯甲基树脂（以下简称二氯树脂）作为载体时的连接率以及目标肽的产率和纯度。通过质谱鉴定分析所得目标多肽的分子量,用茚三酮法对两种树脂与氨基酸的连接率进行比较,用反相高效液相色谱（RP-HPLC）进行粗肽的分析和纯化。结果显示以二氯树脂作载体,第一个氨基酸的连接率,以及目标肽的纯度和产率都要明显高于Wang树脂,因此二氯树脂作载体合成丙型肝炎疫苗多肽更适合大规模工业化生产的要求。     

人胰岛素原C肽固相合成的改进

利用谷氨酸的γ羧基与 4 甲基二苯甲基胺 (MBHA)树脂的氨基偶联固相 ,合成经HF切割去保护基后形成C端是谷氨酰胺的人胰岛素原C肽。MBHA树脂相对价格便宜 ,此方法是制备人胰岛素原C肽的另一种尝试。同时 ,也用PAM树脂合成了人胰岛素原C肽类似物。     

多微孔胺基树脂的制备及其对胆红素的吸附性能

采用悬浮聚合法制备了一定尺寸的多微孔聚苯乙烯(PS)微球,然后通过Friedel-Crafts反应(用氯乙酰氯替代了有致癌性的氯甲醚)和胺化反应得到新型的胺基树脂,并对反应条件进行了优化。结果表明,利用最优化条件制备的胺基树脂,其离子交换容量为4.1587mmol/g。考察了新型树脂对胆红素的吸附性能,其吸附量最大可达30.85mg/g,吸附率可达80%。     

虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ的化学合成及其结构与生理活性分析

应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相方法化学合成了虎纹捕鸟蛛毒素-I,合成采用Fmoc氨基酸五氟苯酯,各侧链保护措施如下:羧基和酚羟基用叔丁基(tBu)保护,赖氨酸和组氨酸侧链用叔丁氧羰基(Boc)保护,精氨酸胍基用4-甲氧-2,3,6-三甲基苯磺酰基(Mtr)保护,半胱氨酸巯基用三苯甲基(Trt)保护.固相载体为需活化的乙二胺-聚乙二醇-聚苯乙烯(EDA-PEG-PS)树脂.合成产物(肽树脂)用苯甲硫醚-乙二硫醇-苯甲醚-三氟乙酸系统一步裂解以及去除侧链保护基,然后用二硫苏糖醇(DTT)还原,再通过氧化型和还原型谷胱甘肽系统促使其形成正确的二硫键配对.对HPLC分离纯化得到的合成产物,进行了氨基酸组成、肽谱、氨基酸顺序以及一维核磁共振谱分析.分析结果表明合成毒素具有与天然毒素相同的化学结构和空间构象.生理实验结果表明,其生物学活性与天然Huwentoxin-I也相同.     

ω—芋螺毒素线性肽合成方法比较

比较了不同偶合方法及裂解条件对ω－芋螺毒素及其衍生物线性肽合成效率的影响。结果表明,Ｂｏｃ／Ｂｚｌ策略、Ｆｍｏｃ／Ｂｕｔ策略、手工及仪器对总偶合率影响较小,但裂解条件及保护策略对肽－树脂裂解影响很大,氟化氢体系裂解Ｂｏｃ／Ｂｚｌ法合成树脂副产物较多,且主链易发生断裂,以低高法裂解效率最高。三氟乙酸体系裂解Ｆｍｏｃ法合成树脂效率高,主要副产物是含Ｔｒｔ基的线性肽,增加１,２－二巯基乙醇可提高肽纯度。     

多肽固相序列分析载体的合成及应用

用合成的聚合物作载体,与模型15肽(纯品)偶联,使用Edman降解法进行多肽序列分析。比较了各种类型载体对肽的偶联效果。实验结果表明合成的大孔型四次乙基五胺类树脂载体已经达到国外同类产品水平。     

Bacillus amyloliquefaciens ES-2发酵产抗菌脂肽消泡剂的筛选及脂肽的提取和纯化

将大豆油、有机硅消泡剂和聚醚类消泡剂3种消泡剂分别用于Bacillus amyloliquefaciens ES-2抗菌脂肽发酵,研究表明大豆油既可以实现消泡,又有利于抗菌脂肽的发酵,使其产量达到了2497.67mg/L。经过提取得到纯度为55.68%的产品,提取率达到88.72%。此外还比较了不同大孔树脂对抗菌脂肽吸附和解吸附效果,发现大孔树脂X-5最适合抗菌脂肽的纯化。纯化的工艺参数为:上样浓度14.4mg/ml、上样速率1ml/min,洗脱速率2ml/min、洗脱剂用量2.5BV,产品的回收率达90.01%,纯度达74.4%。     

Cd2+结合肽的筛选及与重金属离子的亲和作用

利用噬菌体随机十二肽库和亲和层析技术对重金属Cd进行亲和筛选,共获得两条Cd结合肽序列。将展示有Cd2 结合肽的噬菌体单克隆扩增物对不同重金属离子(Cd2 、Cr2 、Cu2 、Co2 、Zn2 、Ni2 )螯合的树脂进行亲和测定,结果表明Cu2 、Co2 、Zn2 、Ni2 对结合肽的亲和力高于Cd2 和Cr2 。抑菌解毒试验进一步确认了Cd2 结合肽对大肠杆菌重金属的解毒作用。显微观察可见金属结合肽与金属螯合树脂混合后分散度发生改变。     

共价连接的多肽酶联免疫测定法的研究

采用紫外线照射及戊二醛活化处理聚苯乙烯酶标板后再包被八肽胆囊收缩素（CCK-8）,以此为基础进行酶联免疫吸附试验（ELISA）,通过不同的洗涤过程对CCK-8与酶标板相互作用的性质进行研究.结果表明,该包被方法可使CCK-8通过共价交联的方式稳定地结合于固相载体上,该方法适用于不同来源的酶标板,处理后的酶标板性质稳定,可储存使用,测定的批内及批间变异系数分别为4.75%和7.80%,方法稳定可靠,重复性好,便于推广应用.     

猪喉软骨营养保健成分及清除自由基功能分析

详细分析了猪喉软骨氨基酸和矿物元素组分及含量,并用木瓜蛋白酶水解软骨,732阳离子树脂纯化粗多糖,首次分别探讨水解物肽和硫酸软骨素的体外自由基清除活性。结果发现软骨呈味氨基酸、钙、镁和铁元素丰富,水解物肽和硫酸软骨素多糖的自由基清除机理不同,水解物肽的羟基自由基和超氧自由基清除活性强于硫酸软骨素,DPPH自由基清除活性相反。     

醇溶性丝胶肽的提纯及对酪氨酸酶抑制作用的研究

经过A8 1.398中性蛋白酶水解,75%乙醇低温提取得到的醇溶性丝胶肽是相对分子量小于500 Da的寡肽混合物,采用非极性的DA201-C大孔吸附树脂同时进行脱盐处理和初步分离,得到3个提纯的组分.它们均有抑制酪氨酸酶的活性,并且经过DA201-C大孔吸附树脂提纯后的组分随着分子疏水性的增加,抑制作用更加明显,说明丝胶肽抑制酪氨酸酶的活性与其疏水性有关.以多巴(L-DOPA)为底物,用Lineweaver-Burk双倒数曲线推断醇溶性丝胶肽对酪氨酸酶的抑制效应属于反竞争性抑制类型.     

人脑利钠肽的Fmoc固相合成

探讨生物活性肽人脑利钠肽(BNP)的固相合成工艺,并为工业化合成提供理论依据.本文以二氯三甲基树脂(以下简称为二氯树脂)为载体,采用9-芴甲氧羰基(Fmoc)保护的氨基酸,以1-氧-3-双二甲胺羰基苯骈三氮唑四氟化硼盐(TBTU)/1-羟基苯并三氮唑(HOBT)/二异丙基乙胺(DIEA)缩合,以碘作为环化试剂,用切割试剂将BNP粗品从树脂上切割下来.通过MALDI-MS质谱仪检测,所合成环肽的分子量与理论分子量一致,使用RP-HPLC液相色谱仪对合成的环肽进行纯化,得到的BNP纯度达到97%以上.本合成工艺具有快捷、简便、高效的特点,适合于大批量的生产目的肽.     

液相色谱-串联质谱分析化学合成多肽及其主要副产物(英文)

用与反相高效液相色谱偶联的串联质谱 (RPHPLC MS MS)分析一个固相化学合成的九肽H2 N Tyr Val Asn Val Asn Met Gly Leu Lys CONH2 及其 2个主要的副产物 .根据Fmoc化学 ,在Fmoc PAL PEG·PS树脂上从C端至N端手工操作逐步偶联合成九肽 .偶联完成后 ,用试剂R(90 %TFA ,5 %苯甲硫醚 ,3%二巯基乙烷 ,2 %苯甲醚 )室温 (2 0～ 2 5℃ )处理 2 5h ,进行多肽的去保护和切除树脂 .RP HPLC分析结果表明 ,合成粗品中含有 1个主要成分、2个次要成分及多个微量成分 .用RPHPLC MS MS分别对主要成分和 2个次要成分进行了鉴定 .结果证明 ,主要成分即为目标九肽 ;先于目标肽洗脱的副产物分子量比目标肽的分子量多 16 .MS MS证明 ,该副产物包括 2种九肽衍生物 :1种为其Tyr1氧化生成 ,另 1种为Met6氧化生成 ;后于目标肽洗脱的副产物为九肽的Tyr1残基增加 12所致 ,这种现象尚未见报道 .对副产物形成的可能机制进行了讨论     

核受体PPARγ结合小肽的筛选及其功能

为筛选与核受体过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)结合的功能短肽,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达PPARγ配体结合域(LBD)的融合蛋白,并利用Ni2+-NTA离子交换树脂对表达蛋白进行纯化.以此纯化蛋白为靶,采用固体包被法对噬菌体展示随机十二肽库及环七肽库进行亲和筛选.经ELISA法鉴定特异结合的高亲和力阳性噬菌体单克隆并测序.同时利用PPARγ的配体rosiglitazone与噬菌体小肽进行竞争性结合抑制实验.最终获得与PPARγ-LBD高亲和力的十二肽3个,环七肽5个,分别含LXXLL和DXXRW(其中X为非特异氨基酸残基)保守序列.Rosiglitazone不影响噬菌体小肽与靶蛋白的结合,说明获得与配体rosiglitazone结合位点不同的目的肽.     

菊米中黄酮类化合物的提取讨论

简介了黄酮类化合物的分类和生物学活性及大孔吸附树脂纯化黄酮类化合物的原理、特点和一般的纯化过程,概述了大孔吸附树脂纯化菊米中黄酮类化合物的研究进展,并对大孔树脂在纯化黄酮类化合物中的应用前景进行了展望。