RAPD技术及其在微生物学方面的应用

198 0年 ,Ｂｏｔｓｅｉｎ提出ＤＮＡ限制性片段长度多态性 (ＲＦＬＰ)可以作为遗传标记 ,从此开创了直接应用ＤＮＡ多态的新阶段。 80年代后 ,ＤＮＡ多聚酶链式反应 (ＰＣＲ)的发展 ,使直接扩增ＤＮＡ的多态性成为可能 ,并在此基础上产生了许多种新型分子标记 ,诸如扩增片段多态性 (ＡＬＦＲ)、串联重复序列(ＶＮＴＲ)、单链构型多态性 (ＰＣＲ ＳＳＣＰ)、序列特异扩增区域 (ＳＣＡＲ)、随机扩增多态性ＤＮＡ(ＲＡＰＤ)等。而ＲＡＰＤ是较为突出的一种。ＲＡＰＤ是由Ｗｉｌｌｉａｍｓ和Ｗｅｌｓｈ在 1 990年各自独立发现的一种ＤＮＡ多态检…     

RAPD技术在水稻上的应用

ＲＡＰＤ技术在水稻上的应用李文海（浙江农业大学核农所,杭州３１００２９）１ＲＡＰＤ的原理及特点ＲＡＰＤ是随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲａｎｄｏｍＡｍｐｌｉｆｉｅｄＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ）的简写,系１９９０年由美国科学家Ｗｉｌｉａｍｓ和Ｗｅｌｓｈ几乎...     

大豆灰斑病菌生理小种的RAPD标记

运用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲａｎｄｏｍａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ,ＲＡＰＤ）技术对发生于中国东北的大豆灰斑病菌（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍｓｏｊｉｍｕｍ）的１０个生理小种进行基因组ＤＮＡ多态性分析,用１３个１０－核苷酸随机引物获得了１１１个ＲＡＰＤ标记,其中８６．５％具有多态性,通过聚类分析确定了供试小种间的亲缘关系,试验证明,ＲＡＰＤ技术分析大豆灰斑病菌遗传传变异可提供大量     

野大豆群体DNA随机扩增产物的限制性内切酶消化

为了提高ＲＡＰＤ方法检测野大豆群体ＤＮＡ多态性的能力,随机扩增产物用限制性内切酶消化,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后用银染法检测酶切产物。结果发现：１．有的限制性内切酶能够消化野大豆群体ＤＮＡ的随机扩增产物,有的却不能。２．有的限制性内切酶消化无ＲＡＰＤ个体的扩增产物后能够产生多太性ＤＮＡ片段,有 内切酶不能产生。３．有的引物的无ＲＡＰＤ个体的扩增产物经限制性内切酶消化后能够产生多态性的ＤＮＡ片会面     

鹅膏菌属真菌RAPD分析及亲缘关系的研究

本文对采自湖南莽山的２６种鹅膏菌属（Ａｍａｎｉｔａ）真菌进行了随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析,４０个随机引物中筛选出扩增效果较好的６个引物,每个引物能产生１～１０条ＤＮＡ条带,获得的ＲＡＰＤ谱带清晰并呈现多态性ＯＰＧ１５、ＯＰＨ０４两个引物扩增的ＲＡＰＤ谱带能将２６种鹅膏菌完全区分开来,通过６个引物的ＲＡＰＤ分析获得的平均相似性系数表明种与种之间的相关系数在２０－６０％之间,平均链锁聚类分析     

大鼠RAPD标记的观察

采用随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术,分析ＳＤ和Ｗｉｓｔａｒ二种大鼠的基因多态性,探讨用ＲＡＰＤ标记鉴别二种大鼠及其血标本实验中的认证,结果表明,二种大鼠表现出了各自不同的多态性ＲＡＰＤ标记,作为大鼠的分子标记,可在基因水平区别二种大鼠,故认为是一种大鼠研究的分子依据。     

关于植物随机引物扩增多态性DNA标记的可靠性问题

随机扩增多态性ＤＮＡ（ｒａｎｄｏｍａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ,ＲＡＰＤ）技术是由Ｗｉｌｌｉａｍｓ等［１］首先创立的一种ＤＮＡ分子标记技术。由于ＲＡＰＤ技术具有快速、简便、通用性好,对ＤＮＡ的需求量小,质量要求低等优点,一经问世,就受到了广泛的注意,并被成功地用于动物、植物、人和微生物的遗传多样性检测、基因定位、品系鉴定、医学诊断、遗传图谱构建和系统学研究等。在ＲＡＰＤ分子标记的应用研究过程中,人们得出了两种截然不同的结论：一部分人认为ＲＡＰＤ标记的遗传符合孟德尔分离规律,稳定…     

雌雄异株葡萄的性别鉴定研究

通过扫描电镜观察花粉的形态;分析叶片超氧化物歧化酶同工酶（ＳＯＤ）;ＲＡＰＤ分析基因组ＤＮＡ多态性,来鉴别葡萄的性别。结果表明：葡萄雌雄株的花粉形态存在着较大的差异;在本实验条件下葡萄雌雄株叶片ＳＯＤ同工酶谱带一致;一些引物的ＲＡＰＤ产物间存在着多态性,在葡萄雌雄株的基因组ＤＮＡ序列中存在着碱基排列顺序的差异。实验指出,花粉形态和基因组ＤＮＡ的多态性分析是进行性别鉴定的有效方法。     

烟草黑胫病菌株亲缘关系的RAPD分析

从２２０个ＲＡＰＤ（Ｒａｎｄｏｍ Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡｓ）随机引物中所选出的多态扩增性强的２１个引物对来源不同的３３个烟草黑胫病菌株进行全基因组ＤＮＡ遗传多样性分析和指纹构建。选用引物对受试菌株进行ＲＡＰＤ－ＰＣＲ扩增,共产生２４３条ＤＮＡ标记图带,其中１９１条为多态性图带,多态检测率为７８．６％。利用ＵＰＧＭＡ（Ｕｎｗｅｉｇｔｈｔｅｄ Ｐａｉｒ－ｇｒｏｕｐ Ｍｅｔｈ     

种质资源鉴定的一种分子遗传技术标准：随机扩增多态性DNA（RAPD）

ＲＡＰＤ（随机扩增多态性ＤＮＡ）变异越来越多地被用于种质样品的鉴定。由于在某些条件下,ＲＡＰＤ结果重性较差,限制这一技术的应用。本文综合了一些文献中引起片段变异的主要原因,分析了减少这些不需要变异的方法。由此提出了一个含有全部描述符的项目表,它包括ＲＡＰＤ必不可少的条件和再现植物材料ＲＡＰＤ结构的必须核对的程序。此标准程序和描述形式有促进类似材料在不同实验室所做结果进行比较,而且允许ＲＡＰＤ结果作     

RAPD技术及其在动物遗传育种中的应用

ＲＡＰＤ技术是在ＰＣＲ基础上发展起来的一种ＤＮＡ多态性检测技术,已广泛应用于基因组研究的种个领域。本文概述了ＲＡＰＤ反应的原理、特点,总结了其在遗传多样性检测、亲缘关系鉴定、遗传连锁分析和数量性状的辅助标记选择等方面的应用,并肯定了ＲＡＰＤ在动物遗传户种领域的应用前景。     

水稻的AFLP研究初报——反应条件的优化及对温敏核不育等位突变系的分析

通过对５４６０Ｓ和５４６０Ｆ这一对水稻等位突变系的ＡＦＬＰ分析,比较了ＡＦＬＰ与ＲＡＰＤ及ＲＦＬＰ检测ＤＮＡ多态性的相对效率。结果表明,这３种分子标记的ＤＮＡ多态性检出效率依次为ＡＦＬＰ＞ＲＡＰＤ＞ＲＦＬＰ;找出了水稻ＡＦＬＰ分析的最适反应条件;在这对等位突变系之间找到了一些多态性ＡＦＬＰ产物,已完成了对４个多态性ＡＦＬＰ产物的克隆,其中３个为单拷贝顺序;用这３个单拷贝克隆的混合物为探针,对作者自己构建的５４６０Ｓ水稻的ＢＡＣ库进行了筛选,获得了１２个阳性克隆,为今后ＢＡＣ库的筛选打下了基础。此外,对上述３种分子标记各自的优缺点及它们在ＤＮＡ多态性检测中的适用之处进行了分析探讨。     

日本血吸虫中国大陆株基因多态性研究

对日本血吸虫中国大陆株湖南、湖北、江西、安徽、四川、云南隔离群以及一个实验室传代品系从基因水平进行了多态性研究。首先,在用ＰＣＲ－ＳＳＷＣＰ技术分析了２８Ｓ ｒＤＮＡ－Ｄ２高变区基础上,测定了该区安徽和云南隔离群的ＤＮＡ序列;其次,用ＰＣＲ获得了含有ＩＴＳ的ｒＤＮＡ片段,并对其进行了酶切点重复序列的多态性分析;最后,用ＲＡＰＤ技术分析了全基因组ＤＮＡ的多态性。结果表明,安徽与云南隔离群的２８Ｓ ｒ     

鹅膏菌属真菌RAPD分析及亲缘关系的研究

本文对采自湖南莽山的２６种鹅膏菌属（Ａｍａｎｉｔａ）真菌进行了随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析,４０个随机引物中筛选出扩增效果较好的６个引物,每个引物能产生１～１０条ＤＮＡ条带,获得的ＲＡＰＤ谱带清晰并呈现多态性ＯＰＧ１５、ＯＰＨ０４两个引物扩增的ＲＡＰＤ谱带能将２６种鹅膏菌完全区分开来,通过６个引物的ＲＡＰＤ分析获得的平均相似性系数表明种与种之间的相关系数在２０－６０％之间,平均链锁聚类分析可将２６种鹅膏菌分为二大类,且一些具菌环和苞状菌托的种类聚在一起,与形态分类基本相吻合。     

RAPD在植物育种上的应用及其技术校正

ＲＡＰＤ(ＲａｎｄｏｍＡｍｐｌｉｆｉｅｄＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ) ,是在ＰＣＲ的基础上发展起来的一种ＤＮＡ多态性检测技术 ,由Ｗｉｌｌａｍｓ[1] 和Ｗｅｌｓｈ[2 ] 于 1990年建立 ,原理是以一系列不同的 ,少数碱基组成的随机核甘酸序列为引物 ,对样本基因组ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增 ,每个ＲＡＰＤ片段的产生要求在可增范围内存在与引物匹配的反向互补序列。引物结合位点ＤＮＡ序列的改变以及两扩增位点之间碱基的缺失插入或转换都能导致扩增片段的数目和长度的差异 ,经ＰＡＧＥ或琼脂糖凝胶电泳分离和ＥＢ染色来检测ＤＮＡ片段的多态…     

澳大利亚棉花黄萎病菌DNA多态性及其地理分布相关性研究(英文)

应用ＲＡＰＤ技术对澳大利亚东南部八个主要棉花种植区的９９个棉花黄萎病菌菌株进行了ＤＮＡ多态性分析。结果表明用１０个筛选的随机引物对供试菌株的全基因组ＤＮＡ扩增,共获得９２条ＲＡＰＤ谱带,其中５５．４％的谱带为多态带。经类聚分析,供试菌株类聚为１５个ＲＡＰＤ遗传指纹相似组,其中１０个指纹相似组的菌株与其采集区域有明显相关性,其余５个指纹相似组的菌株为普通分布的指纹类型。     

澳大利亚棉花黄萎病菌DNA多态性及其地理分布相关性研究

应用ＲＡＰＤ技术对澳大利亚东南部八个主要棉花种植区的９９个棉花黄萎病菌菌株进行了ＤＮＡ多态性分析。结果表明用１０个筛选的随机引物对供试菌株的全基因组ＤＮＡ扩增,共获得９２条ＲＡＰＤ谱带,其中５５．４％的谱带为多态带。经类聚分析,供试菌株类聚为１５个ＲＡＰＤ遗传指纹相似组,其中１０个指纹相似组的菌株与其采集区域有明显相关性,其余５个指纹相似组的菌株为普通分布的指纹类型。     

RAPD标记构建水稻分子连锁图

利用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）,在一个水稻（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ．）的双单倍体（ＤＨ）群体中发展分子标记,仅用５２ 个ＲＡＰＤ标记建成了一个水稻ＲＡＰＤ分子连锁图。该图覆盖基因组的总长度为８９８．４ ｃＭ （ｃｅｎｔｉｍ ｏｒｇａｎ）,标记间的平均间距为１７．３ ｃＭ,它能与用同一群体构成的ＲＦＬＰ图谱互相补充     

植物病原真菌中DNA分子鉴定技术

就基因组ＤＮＡ中Ｇ＋Ｃ含量、分子杂交、聚合酶链式反应（ＰＣＲ）、限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）、随机扩增多态性（ＲＡＰＤ）,以及扩增片段长度多态性（ＡＦＬＰ）等分子标记技术,在植物病原真菌鉴定工作中的应用情况和发展趋势作了介绍。     

利用RAPD—PCR检测三种白僵菌及球孢白僵菌种内变异

采用ＰＣＲ－ＲＡＰＤ技术研究了球孢白僵菌２株野生型多孢株及其各１株单孢分离株的ＲＡＰＤ扩增片段的多态性,比较了彼此间的相似率。结果显示,相似率在６３．６－９９．３％之间变化很大,表明各分离子间的基因组ＤＮＡ已发生变化。