衰老大鼠心脏与主动脉G蛋白α亚基的变化

随着年龄的增长,心血管系统鸟苷酸结合蛋白耦联受体介导的反应性也发生了改变。本文用Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ和核酸杂交技术分别观察了６,２４月龄的Ｆｉｓｃｈｅｒ ３４４大鼠主动脉,心房,心室及脑组织中Ｇｓａ,Ｇｏａ,Ｇｉａ及相应的ｍＲＮＡ的变化。     

家蚕G蛋白α亚基基因BmGα73B的克隆与表达

异三元G蛋白是真核细胞感知外界信号后将信号传递到胞内的重要分子,在生物中参与了广泛的信号转导途径,如光、神经递质和激素等。为了研究G蛋白在家蚕Bombyx mori中的生理功能及其作用机理,我们运用生物信息学方法在已有的家蚕基因组数据库中找到了一段与G蛋白alpha亚基（Gα）同源性很高的序列。通过设计特异性引物,运用PCR和RACE技术,成功地克隆了一个家蚕Gα基因的全长cDNA序列。该基因全长1 509 bp (GenBank登录号：EU914850),开放阅读框（ORF）为1 158 bp,编码385个氨基酸。Blast和DNAstar等软件分析发现该基因编编码的蛋白质与其他物种已知的Gα具有一定的保守性,将它命名为BmGα73B。RT-PCR扩增检测该基因在家蚕不同组织器官和不同发育时期的转录表达活性,结果表明它在不同发育时期的家蚕各组织器官中都有表达。从组织水平上看,BmGα73B在中肠中表达量最高,在马氏管、头部和神经索等组织中也有适量表达。在家蚕的不同发育时期中,转录水平峰值出现在幼虫期,在蛹早期也有适量的表达,而在预蛹期、蛹后期和成虫期几乎没有表达。结果说明BmGα73B可能参与了家蚕生长前期的中肠发育过程,为进一步研究G蛋白在家蚕发育过程的作用奠定了一定的基础。     

糖皮质激素对大鼠下丘脑薄片室旁核神经元放电的影响

自60年代以来,许多整体电生理实验结果表明,糖皮质激素能对下丘脑、中脑、海马和脊髓等部位的神经元电活动产生快速而且短暂的影响。这类反应的潜伏期只有数秒到数分钟,因此糖皮质激素不可能通过基因机制起作用,它可能还存在着其他的作用方式。目前已有生化实验的资料证实,两栖类和哺乳类某些细胞的质膜上存在糖皮质激素的膜结合位点。本室以往的研究结果亦提示在豚鼠腹腔神经     

青霉素G酰化酶α亚基Ser177的突变对酶活性的影响

The technique of cassette and site-specific mutagenesis were used to study the role of residue No. 177 in penicillin G acylase (PGA, EC 3.5.1.11). Ser is conserved at residue No. 177 in all penicillin binding proteins. We got a series of mutants in which the amino acid at residue No. 177 was replaced by other amino acids through the site-specific and cassette mutagenesis, and we characterized the mutants by colony hybridization, NIPAB paper test and DNA sequence analysis. These mutants all show no activity of enzyme, even if the Ser residue was replaced by Thr, Gly and Ala respectively. The results show that Ser residue may be essential for substrate-binding or catalysis of PGA.     

糖皮质激素及其他甾体激素对大鼠下丘脑薄片释放精氨酸加压素的影响

本工作采用离体孵育技术,观察大鼠下丘脑薄片（含有室旁核和视上核）释放精氨酸加压素（ＡＶＰ）和糖皮质激素（ＧＣ）及其他甾体激素对ＡＶＰ释放的快速影响。结果如下：（１）大鼠下丘脑薄片经过９０ｍｉｎ的恢复之后,在长达６ｈ的孵育过程中能够相当稳定地释放ＡＶＰ,释放量为９．０６±１．２３ｐｇ／ｍｉｎ;（２）皮质酮（Ｂ）在２０ｍｉｎ内可明显地抑制ＡＶＰ的释放,在１０－７—１０－４ｍｏｌ／Ｌ范围内呈剂量－效应关系;（３）在同一剂量（１０－６ｍｏｌ／Ｌ）,皮质醇、１７β－雌二醇和睾丸酮也可快速地抑制ＡＶＰ的释放,而相同剂量的地塞米松、醛固酮、孕酮、ＲＵ４８６和胆固醇却无此效应;（４）ＲＵ４８６（１０－７—１０－３ｍｏｌ／Ｌ）对ＡＶＰ的释放没有影响,但却能（１０－５—１０－３ｍｏｌ／Ｌ）部分地阻断Ｂ的快速抑制效应。这些结果表明,ＧＣ对大鼠下丘脑ＡＶＰ的释放具有不通过传统的基因组机制的快速抑制效应,此种抑制效应可能与ＧＣ的负反馈调节作用有关。     

烟夜蛾G蛋白αq亚基（HassGαq）的抗血清制备及在触角中的免疫定位

为了明确烟夜蛾Helicoverpa assulta G蛋白αq亚基（HassGαq）在雄性触角中的定位,进而探索该亚基在烟夜蛾嗅觉信号传导过程中的作用,本实验首先以原核表达的HassGαq蛋白作为抗原免疫Balb/c小鼠,制备了抗血清。SDS-PAGE分离雄性烟夜蛾触角匀浆上清液后,Western blot检测结果表明,所制备的抗血清可识别HassGαq蛋白,同时也与非目的蛋白发生反应,说明在雄性烟夜蛾触角中HassGαq基因可能有多个转录本,或者可能有多种G蛋白α亚基表达。此外,商品化的anti-G_q/11α抗血清可特异地识别HassGαq蛋白。因此,利用anti-G_q/11α抗血清和免疫组化方法对HassGαq蛋白在雄性烟夜蛾触角中进行定位,结果显示HassGαq在雄性烟夜蛾触角毛形感器和锥形感器的基部以及感器腔中皆有表达。据此推测HassGαq可能参与烟夜蛾的嗅觉信号传导。     

RT－PCR联合一步法扩增G蛋白α亚基基因的开放阅读框

报道逆转录－多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）联合一步程序,扩增大于１ｋｂ的拟南芥菜Ｇ蛋白α亚基基因的开放阅读框,该程序中,当ＲＮＡ模板和引物变性,并在同一管中加入ＰＣＲ缓冲液,４种ｄＮＴＰ底物,逆转录酶和ＴａｑＤＮＡ聚合酶之后,就不需其它手工操作步骤,因而可同时进行大批量样品的操作,实验结果证明ＡＭＶ（鸟类骨髓性白血病病毒）逆转录酶对ＴａｑＤＮＡ聚合酶的活性没有抑制作用,这种ＲＴ－ＰＣＲ联合一步法可     

RT－PCR联合一步法扩增G蛋白α亚基基因的开放阅读框

报道逆转录－多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）联合一步程序,扩增大于１ｋｂ的拟南芥菜Ｇ蛋白α亚基基因的开放阅读框。该程序中,当ＲＮＡ模板和引物变性,并在同一管中加入ＰＣＲ缓冲液、４种ｄＮＴＰ底物、逆转录酶和ＴａｑＤＮＡ聚合酶之后,就不需其它手工操作步骤,因而可同时进行大批量样品的操作。实验结果证明ＡＭＶ（鸟类骨髓性白血病病毒）逆转录酶对ＴａｑＤＮＡ聚合酶的活性没有抑制作用。这种ＲＴ－ＰＣＲ联合一步法可从０．５μｇ的总ＲＮＡ中快速地扩增长于１．０ｋｂ的ｃＤＮＡ片段。     

缺血-再灌注时大鼠心脏Gi蛋白α亚基的变化

本工作研究了心肌缺血－再灌注时,受体－腺苷酸环化酶细胞膜信号转导系统中Ｇ蛋白含量及功能的变化。采用免疫印迹法和放射免疫法分别测定大鼠心脏Ｇｉα２,Ｇｉα３和Ｇｓα的含量及腺苷酸环化酶的活性。结果显示缺血－再灌注时心功能明显损伤;心脏Ｇｓα无明显变化;心肌细胞膜Ｃｉα２和Ｇｉα３含量分别升高３７．４％（Ｐ〈０．０１）和４２．４％（Ｐ〈０．０１）;胞浆内Ｇｉα２和Ｇｉα３含量无明显变化;缺血心肌腺苷酸     

单耳气传导阻滞对下丘脑NMDA受体各亚基mRNA基因表达的影响

Ｎ 甲基 Ｄ 门冬氨酸 (Ｎ ｍｅｔｈｙｌ Ｄ ａｓｐａｒｔａｔｅ,ＮＭＤＡ)受体是中枢兴奋性氨基酸中兴奋性极强的一种。它与神经系统的一些最重要功能如突触可塑性、学习记忆、再生修复等有密切关系。本研究采用研究者本人设计的大鼠单侧气传导持续阻滞模型 (单侧外耳道皮下缝合术 ) ,应用ＲＴ ＰＣＲ技术 ,研究环境变化对生后发育过程中听觉中枢神经系统下丘ＮＭＤＡ受体ＮＲ1、ＮＲ2Ａ、ＮＲ2Ｂ和ＮＲ2ＣｍＲＮＡ基因表达的影响 ,以期为在分子水平上揭示神经系统功能发育可塑性的本质提供依据。1　方法(1)样本制备　怀孕ＳＤ大鼠取自上海…     

RGS与G蛋白信号转导的调节

ＲＧＳｓ（ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｏｆ Ｇ－ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）是最近发现的Ｇ－蛋白信号转导的负调节子,大部分ＲＧＳｓ通过ＧＡＰｓ（ＧＴＰａｓｅ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ）方式发挥作用,ＲＧＳ的作用具有高度特异性,在体内受到严密的调节。对ＲＧＳ的深入研究有利于对信号转导调节的了解。     

青霉素G酰化酶α亚基Ser177的突变对酶活性的影响

用盒式突变和定点突变对大肠杆菌青霉素G酰化酶α亚基177位ser进行了突变研究,结果发现所挑选的突变体均无酶的活力,这一结果可能可以用来解释Ser 177附近肽段和一些青霉素结合蛋白青霉素结合区在一级结构上保持同源性的原因。     

G蛋白对离子通道的调控

Ｇ蛋白对离子通道的调控鲍国斌濮璐裴钢（中国科学院上海细胞生物学研究所,上海２０００３１关键词Ｇ蛋白Ｇ蛋白偶联受体离子通道Ｇ蛋白（Ｇｐｒｏｔｅｉｎ）由α、β、γ三个亚基组成,位于细胞膜的胞液侧。Ｇα亚基具有ＧＴＰ酶活性,使Ｇ蛋白偶联受体和效应分子发生可...     

G—蛋白及其在植物信号转导中的作用

ＧＴＰ结合蛋白（ＧＴＰ－ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ）在生物体内有数种类型,包括转录因子、微管蛋白和信号转导蛋白,最后一种已成为当今研究的热点。结合ＧＴＰ的调节蛋白（ＧＴＰ－ｂｉｎｄｉｎｇｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｐｒｏｔｅｉｎｓ,简称Ｇ－蛋白）于７０年代...     

拟南芥细胞异三聚体G蛋白的分离纯化

以拟南芥哥伦比亚Columbia(Col-0)野生型悬浮培养细胞为材料,采用超声波破碎、匀浆、离心、40%~60%饱和度硫酸铵分步沉淀、Sephadex G-25脱盐、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换、Sephadex G-200凝胶过滤,最后经过Sepharose CL-6B得到纯化的目的蛋白,蛋白收率为0.097%。纯化的蛋白质经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定显示为一条带,经Western blotting证实为G蛋白。把经Native-PAGE鉴定的蛋白质的条带回收,进行SDS-PAGE显示有3条带。一条是Gα亚基,其分子量为60kDa左右;另外2条带分子量为45kDa和35kDa,可能是β、γ亚基,初步证实拟南芥中存在异三聚体G蛋白。G蛋白提取方法的建立为在基因突变型拟南芥中G蛋白功能的研究奠定基础。     

糖皮质激素对胎儿下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴的印迹效应

现已发现,糖皮质激素（glucocorticoids,GC)参与神经细胞的发生、分化、成熟及死亡。在胎儿脑发育的关键时期,接触过高浓度的GC将会影响其出生后的下丘脑－垂体－肾上腺轴（HPA轴）的功能。HPA轴与应激反应密切相关,对孕期暴露于高浓度的GC非常敏感。GC主要是通过以下三点来编程成年HPA轴功能的：（1）脑干神经系统的发育和功能;（2）海马皮质类固醇受体发育状态;（3）室旁核神经元的发育和功能。孕期接触高浓度的GC还可以直接影响脑结构的发育。GC对HPA轴功能及脑结构的影响则导致了成年行为的改变及一系列疾病的发生。     

植物激素作用中的G蛋白调节

Guanine nucleotide-binding proteins known as G proteins or GTPases are universal molecular switches that play a pivotal role in signal transduction. Signal transducing GTPases include heterotrimeric G proteins composed of Gα, Gβ and Gγ and monomeric small GTPases. Small GTPases are related to the α subunit of heterotrimeric G proteins but differ from heterotrimeric G proteins in the mechanisms by which they are regulated by upstream factors as well as those by which they activate downstream targets (Yang,2002).     

中科院上海生命科学研究院揭示端粒酶蛋白亚基与RNA亚基的相互作用

<正>2014年5月4日,Nature Structural and Molecular Biology在线发表中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所/国家蛋白质科学中心·上海(筹)雷鸣研究组的研究成果,揭示了端粒酶催化蛋白亚基与RNA亚基识别机制在进化上的保守性。这是目前相关研究领域关于端粒酶中蛋白-RNA复合物的首次晶体结构报道,其在分子水平上所提供的信息解决了长期困扰人们的端粒酶蛋白亚基与RNA亚基之间是如何相互作用的难题,为治疗端粒相关疾病的新型药物的研发开辟     

胰岛素对糖皮质激素受体的调节作用

在人体白细胞培养基质中加入不同浓度的胰岛素,3h 和24h 后以[~3H]标记的地塞米松([~3H] Dex)特异结合力为指标,研究了胰岛素对糖皮质激素受体(GR)的抑制作用。在基质中分别加入 20mU/L(生理浓度),200mU/L(生理调节时最高血浓度)及2000mU/L(药理浓度),3h 后和不含胰岛素的对照值比,[~3H] Dex 的特异结合力分别减少23.3±10.0,32.2±13.2及54.3±9.2%(P>0.05,P>0.05及P<0.01;24h 后,和对照值相比,特异结合力分别减少43.5±19.0,56.1±20.7和80.2±15.5(P<0.05,P7<0.01,P<0.01)。胰岛素对 GR 特异结合力的抑制效应呈剂量和时间依赖性,它提示了胰岛素浓度在生理条件下对 GR 有紧张性调控作用。