血小板来源的生长因子通过ERK/p38/PI3K促进人视网膜色素上皮细胞的增殖、迁移

目的:探讨血小板来源的生长因子(PDGF)对体外培养的人视网膜色素上皮细胞(RPE)增殖和迁移的影响,并对参与其中的信号通路做初步研究.方法:体外培养的人视网膜色素上皮细胞与含有重组人血小板来源的生长因子的培养基(含有或不含2％(v/v)胎牛血清)共培养,用MTT法检测PDGF对RPE细胞增殖的影响,利用细胞爬片和免疫荧光技术检测PDGF对RPE细胞迁移等影响;另外分别向细胞培养物中添加PD98059,SB203580和PI3K等不同的信号通路分子抑制剂,判断参与PDGF激活的细胞活动相关的信号通路.结果:外源性PDGF能促进体外培养的人RPE的增殖和迁移.ERK1/2选择性抑制剂PD98059和PI3K抑制剂LY294002能显著的降低PDGF-BB诱导的人RPE细胞的增殖(P＜0.05),p38抑制剂SB203580没有明显的抑制作用.而对PDGF-BB诱导的RPE细胞的迁移,SB203580和LY294002有显著的抑制作用(P＜0.05),PD98059抑制作用不显著.结论:PDGF对RPE细胞的影响提示其在增生性玻璃体视网膜病变(PVR)的发展中有重要的作用,其可能为PVR提供一种新的毒副作用小的治疗手段.     

再生胰腺提取物诱导人羊膜间充质干细胞定向分化为胰岛素分泌细胞

利用天然生物诱导剂大鼠再生胰腺提取物(Rgenerating pancreatic extract,RPE)定向诱导人羊膜间充质干细胞(Human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)向胰岛素分泌细胞分化。切除大鼠60%胰腺刺激胰腺再生,而后制备RPE,以终浓度为20 mg/L的RPE诱导hAMSCs。实验通过形态学鉴定、双硫腙染色、免疫荧光分析、RT-PCR基因检测和高糖刺激胰岛素分泌等实验鉴定细胞诱导结果。实验结果显示P3代hAMSCs经RPE诱导后形态变化明显,诱导15 d后细胞呈簇状生长,经双硫腙染色可见棕红色细胞团;免疫荧光染色结果显示诱导细胞呈胰岛素阳性表达;RT-PCR实验证明诱导细胞阳性表达人胰岛相关基因Pdx1和insulin;高糖刺激实验证明培养液中有胰岛素成分产生,且分泌量随刺激时间的延长先增加而后趋于稳定。实验结果表明hAMSCs在体外经RPE诱导可以分化为胰岛素分泌细胞。     

大鼠视网膜色素上皮细胞分离的改良及其MMP表达

目的探索和优化大鼠视网膜色素上皮(RPE)细胞分离培养的方法,评价RPE细胞的存活状态及细胞基质金属蛋白酶(MMP)的表达,为相关眼底疾病的研究提供细胞来源。方法采用改良的三步酶消化法分离大鼠RPE细胞,并进行细胞体外培养。倒置显微镜观察细胞形态,细胞生长曲线评价不同培养代数的RPE细胞的增殖活力。免疫荧光检测CRALBP和角蛋白表达鉴定RPE细胞,并观察不同培养代数RPE细胞中多种基质金属蛋白酶的表达。结果分离培养的RPE细胞可呈梭形、六角形,并维持RPE细胞特征性蛋白CRALBP和角蛋白表达,但细胞内色素成分随着细胞分裂和传代次数的增多逐渐减少。基质金属蛋白酶MMP2、MMP3、MMP9和MMP10在第1代和第3代RPE细胞中均表达阳性,且表达强度未见明显改变。结论应用改良的三步酶消化法可以成功的分离培养大鼠RPE细胞,并在第1代和第3代RPE细胞维持基质金属蛋白酶MMP2、MMP3、MMP9和MMP10的阳性表达。体外培养的大鼠RPE细胞为研究视网膜相关疾病提供了细胞模型。     

绿色荧光蛋白基因修饰的人视网膜色素上皮细胞异种移植的长期观察

探讨利用视网膜色素上皮 (retinalpigmentepithelium ,RPE)细胞移植介导目的基因转移至视网膜的可行性。人的RPE细胞在体外经携带绿色荧光蛋白 (greenfluorescentprotein ,GFP)基因的逆转录病毒感染及G4 1 8筛选后 ,手术显微镜直视下经睫状体平坦部注射到兔眼视网膜下间隙。术后通过活体荧光眼底照相 ,荧光显微镜、共聚焦显微镜及透射电镜等观察眼球铺片及切片 ,发现经 gfp基因修饰的人RPE细胞在兔眼视网膜下间隙可存活一年以上。移植的RPE gfp细胞不仅仅局限于移植部位 ,大多扩散到超过 2～ 3个象限的眼底 ,镶嵌于宿主RPE细胞之间或呈单层排列在宿主色素上皮与神经视网膜之间 ,并持续高水平表达GFP。移植后早期玻璃体内每周注射免疫抑制剂普乐可复 (FK5 0 6 )可明显改善移植细胞的存活状态     

体外培养恶性滋养细胞P53蛋白表达与细胞生物学特性的研究

本文对23例恶性滋养细胞和19例正常早孕绒毛滋养细胞进行了原代培养。分别采用免疫组化、反转录PCR、放免法和酶联免疫吸附法,检测了体外培养滋养细胞P53蛋白和β-hCGmRNA的表达、β-hCG、hPL和IL-6含量的变化。体外培养的恶性滋养细胞中,细胞滋养细胞增生异常活跃,细胞核呈明显异型。恶性滋养细胞P53蛋白阳性表达,且阳性强度与正常早孕绒毛滋养细胞比较均有显著差异(P<0．01)。体外分泌β-hCG和IL-6的含量均显著高于正常滋养细胞(P<0．05)。P53蛋白的表达以及IL-6的分泌可能与恶性滋养细胞的异常增殖和低分化有关。     

人胎胰巢蛋白阳性细胞的异种体内移植研究

人胎胰巢蛋白阳性(nestin^ )细胞在体外培养中可自发形成类胰岛细胞团(islet-like cell cluster,ICC),有多向分化潜能,并可产生分泌胰岛素的类β细胞。为了验证其体内生物学特性和生理功能,我们进行了诱导后ICC的NOD—Scid糖尿病模型小鼠和正常小鼠肾膜下移植,通过免疫细胞化学检测,超微结构观察以及血糖水平监测等手段考察移植后细胞的形态与功能变化情况,结果表明：(1)移植处有明显的血管增生。(2)ICC可使糖尿病模型小鼠血糖明显降低。(3)ICC在正常小鼠体内分化为多种结构,同时继续增殖侵入肾实质。     

人胎胰巢蛋白阳性细胞的异种体内移植研究

人胎胰巢蛋白阳性(nestin~+)细胞在体外培养中可自发形成类胰岛细胞团(islet-1ike cell cluster,ICC),有多向分化潜能,并可产生分泌胰岛素的类β细胞。为了验证其体内生物学特性和生理功能,我们进行了诱导后ICC的NOD-Scid糖尿病模型小鼠和正常小鼠肾膜下移植,通过免疫细胞化学检测,超微结构观察以及血糖水平监测等手段考察移植后细胞的形态与功能变化情况,结果表明:(1)移植处有明显的血管增生。(2)ICC可使糖尿病模型小鼠血糖明显降低。(3)ICC在正常小鼠体内分化为多种结构,同时继续增殖侵入肾实质。     

胎儿视网膜色素上皮细胞的原代培养和体外增殖能力的测定

目的：建立胎儿视网膜色素上皮细胞（fRPE）的原代培养方法。方法分离流产胎儿RPE,并进行体外原代培养、传代,免疫荧光检测培养RPE细胞分子标志物。以β细胞增殖诱导剂（二芳基脲衍生物WS3）刺激RPE细胞增殖,并测量其生长曲线。3组细胞比较采用单因素F检验。结果源自不同胎儿的fRPE细胞在原代及体外增殖中并未表现出明显不同。在体外扩增的4代fRPE中,100﹪的细胞表现出了良好的细胞形态。免疫荧光染色证实了体外扩增的fRPE细胞可很好的表达RPE细胞标记物。WS3未见有刺激RPE细胞体外增殖的作用。培养后不同时间三组细胞差异均有统计学意义（F=119.437~234.368,P均=0.000）。结论 fRPE细胞可在非复杂的培养环境中实现体外大量增殖,这些体外增殖的fRPE细胞可以为RPE移植细胞治疗视网膜黄斑病变提供丰富的细胞来源。     

CD154在活动期SLE的改变

目的探讨CD154在系统性红斑狼疮(SLE)中的异常表达及其在狼疮发病中的作用机制。方法31例活动期SLE及20例正常健康人,分离外周血CD19阳性B细胞,以流式细胞仪荧光抗体标记检测其CD154的表达,并体外观察抗CD154抗体对外周血B细胞的增生及IgG分泌的影响。结果(1)活动期SLE外周血B淋巴细胞中CD154阳性率(35±14)%及表达强度(312±108)均显著高于正常健康人,后者分别为(9±7)%、(98±41)(P均<0.001);(2)体外单独培养,活动期SLE外周血B淋巴细胞自身即可异常增生并分泌IgG,[3H]-TdR掺入及体外培养上清液IgG浓度与正常人相比,差异有显著性(P值分别<0.0001和0.001)。抗CD154抗体可显著抑制活动期SLE外周血B淋巴细胞的异常增生及IgG的异常分泌,[3H]-TdR掺入及体外培养上清液IgG浓度与对照抗体组相比,差异有显著性(P值分别为0.01和0.05)。结论CD154在活动期SLE的B淋巴细胞中有异常表达,其异常调控可能是导致分泌自身抗体B细胞克隆增生的主要原因。     

正常和冷冻保存复苏后的卵裂期胚胎的体外囊胚形成能力的观察

由囊胚中获得ICM是胚胎干细胞研究的基础,本文对体外授精/胚胎移植（IVF-ET）中移植后剩余的胚胎和冷冻复苏后胚胎的囊胚形成能力进行了观察。结果表明：冷冻复苏胚胎,培养3d移植后剩余胚胎,连续培养4-6d的胚胎及培养6d后的剩余胚胎的囊胚形成率分别为11.8%(6/51),28.3%(36/127),42.0%(74/176)和9.5%(2/21)。各组结果均显示卵裂细胞的正常卵裂时相的发育状态直接决定其囊胚形成能力。认为由剩余胚胎和冷冻保存复苏后的胚胎中获得囊胚是可行的。     

氧离子辐射对体外人精子自发化学发光、运动性、顶体反应和存活率的影响(英文)

我们研究了不同剂量(0,0.25,0.5,1,2,4,8,16,32,64Gy)3.17MeV/u氧离子对体外人精子自发化学发光(SCL)、运动性,顶体反应(AR)和存活率的影响。结果表明,精子SCL随辐射剂量明显增强,最低有效剂量为0.5Gy;精子运动性在0.5—2Gy,AR在0.5—4Gy辐射组均明显高于其对照组,但均随辐射剂量的进一步增加而明显降低;在0.25—8Gy剂量之间,精子存活率与其对照组相比无明显变化,但当剂量进一步增加至16—64Gy时,存活率急剧下降。这些结果提示,低剂量重离子辐射能对精子运动性及AR等功能产生兴奋效应。而大剂量则明显抑制这些功能,甚至造成精子死亡。其作用机制可能与重离子辐射诱导的自由基反应有关。     

Role of poly(ADP-ribose) glycohydrolase silencing in DNA hypomethylation induced by benzo(a)pyrene

Benzo(a)pyrene (BaP) is a known carcinogen cytotoxic which can trigger extensive cellular responses. Many evidences suggest that inhibitors of poly(ADP-ribose) glycohydrolase (PARG) are potent anticancer drug candidates. However, the role of PARG in BaP carcinogenesis is less understood. Here we used PARG-deficient human bronchial epithelial cell line (shPARG cell) as an in vitro model, and investigated the role of PARG silencing in DNA methylation pattern changed by BaP. Our study shows, BaP treatment decreased global DNA methylation levels in 16HBE cells in a dose-dependent manner, but no dramatic changes were observed in shPARG cells. Further investigation revealed PARG silencing protected DNA methyltransferases (DNMTs) activity from change by BaP exposure. Interestingly, Dnmt1 is PARylated in PARG-null cells after BaP exposure. The results show a role for PARG silencing in DNA hypomethylation induced by BaP that may provide new clue for cancer therapy.     

正常人各年龄组染色体着丝粒点(Cd)研究

本文运用本室改良的Cd-NOR银染技术对80例4个年龄组的正常中国人的Cd变化进行了较系统的研究, 结果表明:(1)正常人随年龄增加,Cd消失的频率、Cd变异及Cd-NOR融合频率也相应增加,特别是Ⅲ、Ⅳ组(中、老年组)增加的频率尤为显著;(2)首次对Cd消失的过程提出了独特的观点,即Cd消失首先表现为Cd变小, 随着变小程度的加大,最终导致Cd消失;(3)在本研究中首次观察到单个Cd的现象,作者认为是细胞分裂中期染色体着丝一分为二的延迟现象。各年龄组间单Cd出现频率无统计学差异,同一年龄组中,2号染色体和1号染色体上单Cd出现频率显著高于理论值;(4)随年龄增高,Cd各项观察值的增高在男性与女性间未见明显的差异。 Abstract:The Cd variation of human chromosome in four groups of different age has been investigated.The result shows that the frequencies of Cd disappearing,size variation and Cd-NOR fusion increased with the age rising,especially in the group of aged people.We suggest that the variation of Cd shows the size changes first,and then disappears completely.We also observed some cells in which a few chromosomes shows only a single Cd in centromeric region.Cd variation in different age groups has no significant difference between the male and the female.     

我国现有的金鱼品种的分类及其系统发育的探讨1)

一、引言 金鱼是我国广大人民乐于饲养的一种家养观赏鱼类。它是由野生红黄色鲫鱼演变而来的。明朝李时珍在《本草纲目》中记载:金鱼“述异记载晋桓冲游庐山,见湖中有赤鳞鱼,即此也。”他还写道:“自宋始有畜者,今则处处家养玩矣。”因此可以认为金鱼起源于我国晋朝(公元265—420年间)。至今已有一千多年的历史了。 李璞(1959)报道了我国的金鱼品种已有二十余个。徐金声等(1980)报道有143个之多。耶么迄今为止我国的金鱼品种究竟有多少呢?为了弄清我国的金鱼品种资源,作者曾在北京等十七个省市的各大公园和花木公司所属鱼场作了调查。在调查过程中,我们     

平阳霉素对鸡胚绒毛尿囊膜血管内皮细胞生长的影响

利用鸡胚绒毛尿囊膜研究平阳霉素对血管内皮细胞移动和增殖的影响.(1)内皮细胞移动采用组织学切片、常规H-E染色,通过观察不同胚龄鸡胚CAM的组织学结构即可判定毛细血管EC移动.发现鸡胚在第8、10、12天胚龄时CAM EC都位于外胚层绒毛膜上皮之下,随胚龄增大,EC逐渐由中胚层移向外胚层.而孵育至第14天后(16、18天)CAM毛细血管EC大都移至外胚层上皮之上,紧贴壳膜.PY可明显抑制EC移动,使第18天胚龄时早已该移至外胚层之上的毛细血管EC仍停留在外胚层上皮之下.(2)内皮细胞增殖用放射自显影技术对第10天胚龄的鸡胚CAM EC进行3H-TdR标记,标记率即反映EC增殖的程度.同时用血管生长抑制剂PY对比研究对EC增殖的影响.对照组和实验组EC 3H-TdR标记率分别为41.5±3.4%和20.3±1.5%,PY可使CAM EC的DNA合成减少,即抑制EC增殖.鸡胚CAM可作为研究EC移动和增殖的体内模型,用于血管生成刺激因子和抑制因子的筛选和研究.     

从抗体阳性的甲型肝炎接触者粪便中分离出一株甲型肝炎病毒

几年来,国内外已相继用组织培养法分离多株甲型肝炎病毒(HAV),并已证实了甲型肝炎患者及亚临床型感染在传染本病中的重要性。但HAV在流行点的正常人群中存在短期携带的问题还尚未见报道。本文采用人胚肺二倍体细胞(2BS)从甲型肝炎接触者粪便中分离出一株HAV,并经免疫电镜、免疫荧光及参比血清鉴定等证实。现将结果报告如下。     

C6神经酰胺能诱导人血管内皮细胞(HUVECs)迅速出现衰老样变化(简报)

神经酰胺是一种神经鞘磷脂类代谢的关键分子,也是一种第二信使分子。它能抑制磷脂酶D的活性,从而抑制细胞周期的进行。神经酰胺参与细胞的分化、凋亡和衰老等多种生理代谢反应。许多细胞因子如:TNF、IL-1、Fas ligands等都能引起神经酰胺水平的升高;神经酰胺作为第二信使执     

介质Ca~(2 )和La~(3 )对酿酒酵母生长的影响

采用正交实验研究了外加Ｃａ~(２＋)和Ｌａ~(３＋)对酿酒酵母生长的影响。结果表明：外加Ｃａ~(２＋)和Ｌａ~(３＋)对酿酒酵母的生长均有显著的影响,都呈现出低浓度时正效应和高浓度时负效应,当Ｃａ~(２＋)浓度为１ｍｍｏｌ／Ｌ及Ｌａ~(３＋)浓度为１５μｍｏｌ／Ｌ时酿酒酵母生长最好。     

Comparative serum albumin interactions and antitumor effects of Au(III) and Ga(III) ions

In the present study, interactions of Au(III) and Ga(III) ions on human serum albumin (HSA) were studied comparatively via spectroscopic and thermal analysis methods: UV–vis absorbance spectroscopy, fluorescence spectroscopy, Fourier transform infrared (FT-IR) spectroscopy and isothermal titration calorimetry (ITC). The potential antitumor effects of these ions were studied on MCF-7 cells via Alamar blue assay. It was found that both Au(III) and Ga(III) ions can interact with HSA, however; Au(III) ions interact with HSA more favorably and with a higher affinity. FT-IR second derivative analysis results demonstrated that, high concentrations of both metal ions led to a considerable decrease in the α-helix content of HSA; while Au(III) led to around 5% of decrease in the α-helix content at 200 μM, it was around 1% for Ga(III) at the same concentration. Calorimetric analysis gave the binding kinetics of metal–HSA interactions; while the binding affinity (K_a) of Au(III)–HSA binding was around 3.87 × 10⁵ M⁻¹, it was around 9.68 × 10³ M⁻¹ for Ga(III)–HSA binding. Spectroscopy studies overall suggest that both metal ions have significant effects on the chemical structure of HSA, including the secondary structure alterations. Antitumor activity studies on MCF7 tumor cell line with both metal ions revealed that, Au(III) ions have a higher antiproliferative activity compared to Ga(III) ions.     

l-DOPA (l-3,4-dihydroxyphenylalanine) uptake by human red blood cells

The uptake of l-DOPA (l-3,4-dihydroxyphenylalanine) was studied in normal human red blood cells in vitro using l-[3-¹⁴C]DOPA. Uptake was slow, tending towards a distribution ratio close to unity with a half-time to equilibrium of one hour. Uptake was not Na⁺-dependent. Concentration dependence studies showed both saturable and non-saturable components of uptake, and inhibition studies using l-leucine and l-tryptophan suggest that the L and T systems of red cell amino acid uptake are involved. A powerful inhibitor of both systems, 3,4-dihydroxy-2-methylpropriophenone (U-0521), is described. It is concluded that uptake is by carrier-mediated facilitated diffusion via the L and T systems for which l-DOPA has low affinity.