酵母以杂合系统的改进和发展

酵母双杂合系统是在１９８９年由ＳｔａｎｌｅｙＦｉｅｌｄｓ和Ｏｋ－ｋｙｕ Ｓｏｎｇ等提出并初步建立的＾［１］,该系统是在酿酒酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）中研究蛋白质间相互作用的一种非常有效的分子生物学方法。近几年来随着人们对该系统的广泛应用,这一系统得到了不断常有的效的分子生物方法。近几年业随着人们对该系统的广泛应用,这一系统得到了不断的完善及改进,同时也衍生出单杂合系统     

酵母双杂合系统在丙型肝炎病毒NS5A研究中的应用

母双杂合系统是在酵母细胞中研究蛋白－蛋白相互作用的新技术。应用该技术,以丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）非结构蛋白５Ａ（ＮＳ５Ａ）为“诱饵”,筛检了人中细胞ＨｅｐＧ２来源的ｃＤＮＡ文库,获得了７个ＮＳ５Ａ结合蛋白的基因克隆。报道了其中两个阳性克隆（＃２、＃１６）的结果,并对“人核小体组装蛋白相关蛋白”（Ｈｕｍａｎ ｎｕｃｌｅｏｓｏｍｅ ａｓｓｅｍｂｌｙ ｐｒｏｔｅｉｎ－ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ,ｈＮＲ     

双杂合系统及其应用

蛋白质与蛋白质的相互作用是生物体内包括复制、转录、分泌、信号传导、代谢等生命活动得以进行的物质基础．以基因工程技术为基础的双杂合系统可以在体内检测蛋白质与蛋白质的相互作用,并推广应用到寻找同某已知蛋白质相互作用的未知蛋白质,直接克隆未知蛋白质的基因,鉴别同已知蛋白质相互作用的关键氨基酸残基,绘制蛋白质联系图谱等．双杂合系统在药物设计中的应用使其具有更重大的实用价值．     

生物传感芯片质谱及其在蛋白质组研究中的应用

目前蛋白质组研究技术在已有的研究基础上取得了长足进展 ,包括固相 ｐＨ梯度双向凝胶电泳、生物质谱技术、蛋白质双向电泳图谱的数字化和各种分析技术、蛋白质间相互作用分析的方法如酵母双杂交系统、噬菌体展示、表面等离子共振等。但均各有其利弊。目前质谱是进行蛋白质组成分鉴定的支撑技术 ,但是它在蛋白质间相互作用分析及结构与功能的关系分析方面显得无能为力 ,而生物分子相互作用分析技术 (Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓ ,ＢＩＡ)是进行蛋白质相互作用分析的较好技术 ,将两者结合起来在蛋白质组…     

逆向酵母双杂交系统的应用

198 9年Ｆｉｅｌｄｓ等提出了酵母双杂交系统来研究真核细胞的蛋白质之间的相互作用。这一崭新手段迅速发展成为一种常规的分子生物学技术 ,并得到了广泛的应用。近来 ,国外学者为拓宽传统的双杂交系统的应用范围 ,在原有的酵母双杂交的基础上发展了大量衍生系统 ,包括用于研究蛋白质与ＤＮＡ之间相互作用的单杂交系统 (ｏｎｅ ｈｙｂｒｉｄｓｙｓ ｔｅｍ) [1] ;研究两个蛋白质与第三个成分间相互作用的三杂交系统 (ｔｈｒｅｅ ｈｙｂｒｉｄｓｙｓｔｅｍ) [2 ] ,第三个成分可以是蛋白质、ＲＮＡ或小分子药物等[3 ] 。另外 ,在通过双杂交体系…     

人血小板生成素受体c—MPL膜内部分的聚合作用

血小板生成素（ＴＰＯ）是调节血小板生成最主要的细胞因子,其生物学效应由其受体ｃ－ＭＰＬ介导。利用酵母双杂合系统研究ｃ－ＭＰＬ膜内部分在ＴＰＯ信号转导途径中的功能。首先用反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）方法从人红白血病ＨＥＬ细胞系总ＲＮＡ中扩增并克隆Ｐ型ｃ－ＭＰＬ（ＭＰＬＰ）膜内部分ｃＤＮＡ,经测序验证后克隆至双杂合载体ｐＡＳ２和ｐＧＡＤ４２４中,重组质粒命名为ｐＡＳＭＭ和ｐＧＡＤＭＭ。将ｐＡＳＭＭ与ｐ     

噬菌体展示肽库在细胞信号转导研究中的应用

细胞信号转导是一个由信号分子相互作用介导的生物信息传递的过程 ,蛋白质之间以及蛋白质与其他分子间的相互作用是信号转导的基础。近年来 ,利用噬菌体展示肽库技术研究细胞信号转导 ,取得了很多有意义的结果。1.鉴定信号蛋白识别结合位点信号蛋白之间特异性的识别结合主要通过一小段保守区实现 ,如ＳＨ2区 (Ｓｒｃ ｈｏｍｏｌｏｇｙｄｏｍａｉｎ)、ＳＨ3区、ＰＴＢ区 (ｐｈｏｓｐｈｏｔｙｒｏｓｉｎｅ ｂｉｎｄｉｎｇｄｏｍａｉｎ)等。用噬菌体展示肽库技术可以快速获得与这些保守区结合的配体的结构信息。用Ｓｒｃ酪氨酸激酶的ＳＨ3区筛…     

蛋白质间相互作用技术的研究近况

蛋白质间相互作用技术的研究近况黄翠芬叶棋浓（军事医学科学院生物工程研究所,北京１００８５０关键词：蛋白质,相互作用,技术ＲｅｃｅｎｔＡｄｖａｎｃｅｓｉｎｔｈｅＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎ┐ＰｒｏｔｅｉｎＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓＨｕａｎｇＣｕ...     

酵母双杂合系统

常规研究蛋白质相互作用的生化方法包括化学交联、免疫共沉淀等,这些方法反映的是体外的情况而非体内情况,而且这些方法无法让我们直接克隆与某已知蛋白质作用的未知蛋白质的基因。最近一种新的技术逐渐成熟并得到广泛应用,它就是“Yeast two-hybrid sys-tem”,我们姑且将其译为“酵母双杂合系统”。该技术     

酵母杂交系统的改进与研究进展

蛋白-蛋白相互作用在细胞生命活动中起着关键的作用。后基因组时代主要是研究蛋白的功能,通过研究蛋白的相互作用及其图谱的构建来了解蛋白的功能。研究蛋白-蛋白相互作用的方法很多,酵母杂交是最常用的检测体内蛋白-蛋白相互作用的敏感系统。随着人们对该系统的广泛应用。这一系统得到了不断的完善及改进,并广泛应用于蛋白-蛋白、蛋白质-RNA、蛋白质-DNA以及其他的小分子间相互作用的研究。拟就酵母杂交系统的原理、改进、发展及应用做一综述。     

体外翻译系统在分子生物学研究中的应用

体外翻译系统又称无细胞蛋白质合成系统,是分子生物学中一种常规的表达系统,该系统可用于蛋白质快速分析鉴定,基因转录和翻译的调控机理的研究以及分子间的相互作用的研究,如蛋白质和蛋白质的相互作用,蛋白质与DNA的相互作用,蛋白质与RNA的相互作用等。     

新书介绍

《ＤＮＡ 蛋白质相互作用》(ＤＮＡ ＰｒｏｔｅｉｎＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ)ＡｎｄｒｅｗＴｒａｖｅｒｓ和ｍａｌｃｏｌｍＢｕｃｋｌｅ编著 ,2 0 0 0年ＯｘｆｏｒｄＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＰｒｅｓｓ出版 ,375页。蛋白质与ＤＮＡ的相互作用在分子生物学领域占有重要地位。例如 ,在确定和调节染色体结构、ＤＮＡ复制、重组和修复、基因转录、病毒感染等方面具有很大作用。本书是研究蛋白质与ＤＮＡ相互之间特异作用及许多研究方法的概述。描述了目前适用的许多主要的技术方法 ,尤其是分析转录及它与染色质结构关系的生物物理方法。每一种方法…     

大数据时代杂合酶的设计及其新趋势

酶分子的高效性和稳定性是工业广泛应用的物质基础。利用分子生物学技术可以将不同酶分子通过串联、插入、翻译后融合等方式构建成符合工业需求的杂合酶,但应用中多结构域杂合酶在表达量与酶活等方面仍存在弊端,而基于特定蛋白质结构域的多功能设计成为新趋势。高通量测序技术的发展,使得生物学家正面临着爆炸式增长的大数据集。近年来"蛋白质功能区"概念的提出,拓宽了人们对蛋白质结构与功能组织层次的认知,功能区残基聚簇的协同演化可导致同一家族不同蛋白质功能的差异。基于海量大数据分析可以快速定位特定功能区以及协同进化的关键位点,再利用合成生物学技术就可实现多种功能残基在同一蛋白质中的精准嫁接,完成天然酶分子的再设计。这将是杂合酶技术发展的新阶段,也会成为生物大数据时代下蛋白质设计的新趋势。     

用酵母双杂合系统筛选与人血小板生成素受体c-Mpl相互作用的蛋白质

血小板生成素(thrombopoietin,TPO)是调节血小板生成最主要的细胞因子,其生物学效应由其受体c-Mpl介导.利用酵母双杂合系统(two-hybrid system)筛选与c-Mpl相互作用的蛋白质因子.首先将c-Mpl膜内部分cDNA克隆至pAS2双杂合载体中,重组质粒命名为pASMM;然后以pASMM为靶蛋白质粒,筛选了人胎盘cDNA文库.在1.5×106个转化子中筛选到7个阳性克隆.序列测定表明,分离到编码人波形纤维蛋白(vimentin)的第611 bp至C末端的cDNA顺序(包括3'非翻译区),从而发现波形纤维蛋白可与TPO受体相互作用,这提示细胞骨架蛋白在TPO的信号转导过程中可能起着重要的作用.     

酵母双杂交及其衍生系统

蛋白质是基因的表达产物,由于蛋白质间的相互作用可以表现出基因的关联性,随着基因组序列的破译,研究蛋白质间的相互作用关系显得日益重要。详细介绍了目前在研究蛋白质间相互作用中十分重要的酵母双杂交系统及其多种衍生系统的原理及其理论与实践意义。     

封面说明

色氨酰ｔＲＮＡ合成酶 (ＴｒｐＲＳ)在蛋白质合成系统中具有非常重要的地位。通过蛋白质同源模建得到了枯草杆菌 (Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ)色氨酰ｔＲＮＡ合成酶的三维结构。模建结果对色氨酰ｔＲＮＡ合成酶可能与ｔＲＮＡＴｒｐ结合的方式给出了预测。ｔＲＮＡＴｒｐ是跨亚基与ＴｒｐＲＳ相互作用的。一个ｔＲＮＡＴｒｐ分子的反密码环和氨基酸接受茎分别与一个ＴｒｐＲＳ的两个亚基相互作用。图中所示 ,红色和黄色分别代表两个ｔＲＮＡＴｒｐ分子 ,绿色和蓝色分别代表ＴｒｐＲＳ的两个亚基。　　ＴｈｅＦｒｏｎｔＣｏｖｅｒＳｈ…     

SMAD3与细胞周期蛋折CyclinB的相互作用

ＳＡＭＤｓ是ＴＧＦβ家族的细胞内信号介导。为了研究ＳＭＡＤ３的信号传递过程,我们以ＳＡＭＤ３为诱饵蛋白用酵母双杂交系统筛选与ＳＡＭＤ３相互作用的蛋白,发现Ｃｙｃｌｉｎ Ｂ可以与ＳＭＡＤ３发生相互作用,并在ＣＯＳ７细胞中证实了该相互作用。提示ＴＧＦβ可能通过ＳＭＡＤｓ与细胞周期素的相互作用来调节细胞周期的变化。     

酵母双杂交系统及其应用

酵母双杂交系统（yeast two-hybrid system)是直接于细胞内研究蛋白质间相互作用的一种灵敏度很高,且非常有效的遗传学方法,在不同研究领域中广泛应用,并不断完善及改进,发展出单杂交系统（one-hybid system)和三杂交系统（three-hybrid system)等一系列相关的技术,克服了原系统的局限,本文对双杂交系统的原理,发展概况,应用,存在问题和前景等进行了综述。     

甲醇酵母表达系统

甲醇酵母基因表达系统是一种最近发展迅速的外源蛋白质生产系统。甲醇酵母是可利用甲醇作为唯一碳源的酵母 ,主要有Ｈ .Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ、ＣａｎｄｉｄａＢｏｄｉｎｉｉ、ＰｉｃｈｉａＰａｓ ｔｏｒｉｓ三种 ,其中ＰｉｃｈｉａＰａｓｔｏｒｉｓ作为基因表达系统使用得最多、最广泛[1] 。与以往的基因表达系统相比 ,它具有无可匹敌的高表达特性 ,已被认为是最具有发展前景的生产蛋白质的工具之一。1 .外源蛋白质的基因在甲醇酵母中的高效表达目前已有多种蛋白质的基因在该表达系统中克隆成功 ,包括蛋白酶、酶抑制剂、受体、单链抗体等 (…     

结核分枝杆菌的真核生物样信号转导元件

细菌中蛋白质磷酸与脱磷酸过程主要是由二成分系统 (ｔｗｏ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｙｓｔｅｍ)完成 ,组成该系统的主要是组氨酸激酶传感器 (ｈｉｓｔｉ ｄｉｎｅｋｉｎａｓｅｓｅｎｓｏｒ)和与其相联系的反应调节子 (ｒｅｓｐｏｎｓｅｒｅｇｕｌａｔｏｒ)。真核生物中 ,蛋白质磷酸化主要是导致蛋白的Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ残基磷酸化 ,信号转导的主要成员是蛋白激酶、蛋白磷酸酶。以前认为这个系统是真核生物特有的 ,最近基因组序列测定和单克隆抗体研究提示 :这个系统在有些细菌中也存在[1] 。Ｓｅｒ/Ｔｈｒ蛋白激酶 (Ｓｅｒ/Ｔｈｒｐｒｏ…