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T7噬菌体RNA聚合酶显著的特点是只识别其自身DNA序列中特定的启动子[1] ;而T7噬菌体启动子属于组成型的启动子 ,又只能被相应的T7噬菌体的RNA聚合酶 (约 10 0kD的单链蛋白质 )所识别 ,并且被T7RNA聚合酶所启始的转录非常活跃[2 ,3] ,宿主细胞的RNA聚合酶所进行的转录根本无法同其竞争 ,这样宿主细胞中几乎所有的转录都被T7RNA聚合酶所操纵。另外 ,T7RNA聚合酶几乎能完整地转录在T7启动子下游的所有DNA序列。基于这些优点 ,1986年Studier和Moffat建立了一套新的原核表达系统———T7RNA聚… 相似文献
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大肠杆菌中的小分子RNA 总被引:1,自引:0,他引:1
迄今为止,已知由大肠杆菌基因组编码的小分子RNA(sRNA)除了5SrRNA和tR-NA外,共有10种,其中大多数是调控RNA,可调控细菌的某些代谢过程。1.sRNA的发现用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析32P标记的大肠杆菌总RNA,发现除5SrRNA和tR... 相似文献
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河西走廊不同生态型芦苇核酸代谢季节动态研究 总被引:4,自引:0,他引:4
分布在甘肃河西走廊的4 种生态型芦苇(Phragm itescom m unisTrin.)的核酸代谢季节变化有差异。盐化草甸芦苇RNA 含量持续增加,DNA 含量相对稳定,其它3 种生态型芦苇的RNA 和DNA 含量以5月份为最高。过渡带芦苇的RNA 含量、沼泽芦苇及沙丘芦苇的DNA含量9 月份略有增高。盐化草甸芦苇与过渡带芦苇的DNase和RNase的活性7 月份最高,沼泽芦苇与沙丘芦苇的DNase和RNase活性5—9 月份呈增高趋势。盐化草甸芦苇的DNA 和RNA 合成活性不断升高,过渡带芦苇和沼泽芦苇的DNA 和RNA 合成活性及沙丘芦苇的RNA 合成活性5—9月份均降低,仅沙丘芦苇的DNA合成活性增强。RNA 聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳分析结果表明,4 种生态型芦苇均含有25S、23S、18S、16S大分子量rRNA 和小分子量5.8S、5S、4.5SrRNA 及4StRNA。大分子量RNA 的含量高于小分子量RNA 含量。不同生态型及同一生态型芦苇的不同发育时期,相同的RNA 组分含量各不相同。且发育过程中23S、18S、16SrRNA 在不同月份发生不同程度的降解。由此,我们认为,核酸代谢的差异性是4 种生态型由生长转入衰 相似文献
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中国大麦黄花叶病毒分离物的分子变异 总被引:4,自引:0,他引:4
13个供试的中国和英国大麦黄花叶病毒(BaYMV)分离物,经RNA1和RNA2全基因组不同区域DNA片段背地里单构象多态分析(SSCP),外壳蛋白基因和RNA2 70kD基因5端705碱基序列分析,以及此7-5碱基DNA片段限制性内切酶图谱分析结果,它们的RNA1和RNA2彼此无一相同,其中RNA2变异比RNA1更大。由于变异十分复杂,且没有规律性,因而当前通用的分子生物学技术尚不能简单地BaYM 相似文献
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爱滋病的反义抑制治疗黄建生,王昌才,任大明(广州第一军医大学生物化学教研室,广州510515)(复旦大学遗传所国家重点实验室,上海200433)关键词反义RNA,爱滋病(AIDS)反义RNA是一种与mRNA互补的RNA分子,是反义基因的转录产物,它能... 相似文献
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利用PCR技术行反义寡核苷酸体外抗丁型肝炎病毒基因组RNA中核酶的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
设计一对PCR引物,其中上游引物的5’端除目的基因外,还加T7RNA聚合酶启动子序列,以质粒(pSVLD3)为模板,通过PCR扩增出带有T7RNA聚合酶启动子序列的139bp的cDNA片段,它含有丁型肝炎病毒(HDV)基因组RNA中核酶(Ribozyme)区的cDNA该核酶具有自身裂解功能,经测序发现该cDNA有2个碱基变异,以此PCR产物为模板,通过T7RNA聚合酶,转录出核酶的前体,并观察到其 相似文献
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为研究tRNATrp 与色氨酰tRNA合成酶(TrpRS) 的相互识别及其结构、功能关系, 纯化了枯草杆菌TrpRS并用溴化氰活化的Sepharose 4B 将TrpRS固定化, 固定化TrpRS的蛋白质回收率为95 .5 % , 活力回收率为31.3% 。研究了固定化TrpRS的酶学性质, 其热稳定性和贮存稳定性方面均比液相TrpRS有了较大的提高, 最适温度、最适pH 均有一定程度的增大, 工作稳定性良好。以固定化TrpRS为亲和层析介质, 对含有20 个核苷酸随机序列、长度为56 个核苷酸的单链RNA 随机库进行了3 轮筛选,RNA 群体亲和固定化TrpRS的比例从4 .3 % 上升至14 .7 % 。筛选得到了与tRNATrp 氨基酸接受茎类似的RNA二级结构。实验结果表明固定化TrpRS可以作为SELEX 亲和层析介质, 进行模拟tRNATrp 分子的RNA 随机库的SELEX 筛选。 相似文献
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沈炳福 《植物生理与分子生物学学报》1994,(2)
苜蓿根瘤菌(Rhizobiummeliloti)nodC蛋白是结瘤基因nodC编码的43kD多肽(NodC)。应用噬菌体T7RNA聚合酶/启动子表达系统.pT7-5作为载体质粒.构建了带有nodC基因的PBF6克隆.经诱导在大肠杆菌JAKE中获得表达,过量生成NodC,占细胞总蛋白量的5%。经细胞膜蛋白组份的分离,Bio-gel柱层析,SDS-PAGE电泳等获得了比较纯化的NodC。 相似文献
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AGPC法是一种快速、简便、有效的RNA提取方法。参照该法自新生大鼠脑组织中提取出总RNA,进一步通过oligo(dT)-纤维素亲和层析分离获得poly(A) ̄+RNA。当poly(A) ̄+RNA或总RNA经显微注射法进入非洲爪蟾卵母细胞后,其翻译系统能够利用外源mRNA合成具有催化活性的胆碱酯酶。表达的胆碱酯酶大部分分泌到卵母细胞培养液中。在一定范围内,mRNA的注射量与胆碱酯酶的表达量成正比。所合成的胆碱酯酶活性可被毒扁豆碱和S-(2-二异丙基氨乙基)甲基硫赶膦酸乙酯(VX)抑制。 相似文献
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花椰菜花叶病毒是一种具有重要经济价值和生物学意义的植物双链DNA病毒,它有7个开放阅读框(ORF),其中6个可各自编码一种蛋白产物。35S启动子区域含有3个转录因子专一的结合位点;RNA多腺苷化位点具有AAUAAA特征序列,它和其上游序列对35S RNA的加工和翻译有影响作用,下游ORF I在转录激活因子存在时可被翻译。由此表明,CaMV的表达调控表现在不同调控机制互作的基础之上。 相似文献
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小麦条锈菌毒性小种及其无毒性突变型侵染初期,是不亲和反应的小麦叶片内可翻译mRNA水平迅速增加,而呈亲和反应叶片的增加幅度小且滞后。同时前者的Poly(A+)-RNA水平高于未接种对照,后者低于对照。32P标记实验证实不亲和反应叶片Poly(A+)-RNA的合成增加早于亲和反应叶片。Poly(A+)-RNA体外翻译产物经SDS-PAGE分离后,放射自显影图谱显示一些多肽条带的35S-Met相对掺入量有定量差异。 相似文献
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RT—nested PCR检测肾综合征出血热患者血清病毒核酸 总被引:3,自引:0,他引:3
采用异硫氰酸胍-酚-氯仿(AGPC)一步法提取病毒RNA,并依据肾综合征出血热病毒(HFRSV)核蛋白(NP)编码基因保守区核苷酸序列合成两对巢式引物,建立了逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nestedPCR)检测HFRSVRNA方法,应用此法对HFRSV感染的VeroE6细胞培养液及HFRS患者血清中的病毒RNA进行检测。结果显示,感染细胞培养液及35例HFRS患者血清均为阳性,正常的VeroE6 相似文献
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RNA病毒的复制途径聂剑初(北京师范大学生物学系100875)DNA病毒在其基因组复制和表达过程中利用许多的宿主蛋白质。RNA病毒的复制则面临一个特殊的问题,即未受侵染的宿主细胞没有按照RNA模板的指令合成RNA的酶。因此,RNA病毒必须含有合成这类... 相似文献
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以采自河南的真菌传小麦花叶病毒(FWMV-C)为材料,抽提病毒RNA,合成互补DNA(cDNA)。对杂交筛选所得cDNA克隆进行亚克隆及序列分析,结果表明,亚克隆pGSI含有一个长度为891个核苷酸的不完整开放阅读框架(ORF)和长度为258个核苷酸的3'末端非编码区(NTR),并带有Poly(A)尾序。此段序列与大麦黄花叶病毒(BaYMV)及法国报道的一种小麦梭条花叶病毒(WSSMV-F)的RNA-13'末端分别具有67.6%和69.9%的同源性。由所测序列编码区(1-891nt)可推导产生296个氢基酸,并与WSSMV-F及BaYMV外壳蛋白氨基酸序列分别具有75.9%和71%的同源性。此结果表明,FWMV-C为另外一种不同于WSSMV-F的大麦黄花叶病毒组(Baymovirus)病毒,所测基因组片段应为RNA-13'末端序列,其中可能包括了病毒全长外壳蛋白编码区域。 相似文献
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采用PEG沉淀和差速离心的方法提纯雀麦花叶病毒的G和T分离物。利用蛋白酶K和两相酚法制备雀麦花叶病毒的总RNAs。将G和T分离物RNAs进行琼脂糖凝胶电泳,结果发现Br-MV-G除含有正常的RNA组分外,还出现了另一新的RNA_(3b)组分,其分子量为0.50×10 ̄6。RNA_(3b)只出现在大麦寄主中,而在昆诺基上缺失。RNA_(3b)仅依靠于其来源的G分离物的RNAs进行复制。以RNA_(3b)为模板合成 ̄(32)P-cDNA探针,和BrMV-G分离物的RNAs进行分子杂交试验表明:RNA_(3b)属RNA_3的缺陷型组分,它依赖于BrMV-G-RNA_3的帮助才能在大麦寄主中复制。RNA_(3b)的出现和缺失对BrMV的症状表现没有影响。 相似文献
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植物病毒卫星研究进展 总被引:3,自引:0,他引:3
植物病毒卫星研究进展周雪平,李德葆(浙江农业大学生物技术研究所,杭州310029)自60年代Kassanis发现有些烟草坏死病毒(TNV)分离物中含有17nm的病毒颗粒,并将其称谓卫星烟草坏死病毒(STNV)以来,已发现多种植物RNA病毒含有卫星(S... 相似文献
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以赤霉素(GA)处理后的G2豌豆为材料,构建了一个2.0×106的cDNA文库,用随机筛选法从该cDNA文库中得到一个完整的cDNA.其中1115bp全序列分析表明,它编码了豌豆5S核糖体RNA(5SribosomalRNA,5SrRNA),基因内部存在着与核糖体蛋白L5及5SrRNA结合蛋白(5SrRNABindingProtein)同源的区段,这些同源区段是蛋白与RNA结合的位点.基因内部还存在着大量的重复序列. 相似文献
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蓖麻蚕核糖体RNA基因(rDNA)5'-非转录间隔区有长约1kb的核骨架结合区SAR。本文对该SAR元件的酵母自主复制功能进一步研究,证明该SAR 5'端688bp含有12个ACS(ARS的核心序列)同源序列,但无ARS活性,而其3'端仅3个ACS同源序列,但对酵母的转化率比全片段还高40 ̄50倍。体外结合实验证明,蓖麻蚕rRNA基因的SAR能专一地同酵母核骨架结合,提示ARS的功能体现与核骨架结 相似文献