柄袋沙蠋体壁和消化系统甲硫氨酸脑啡肽免疫组织化学定位

采用免疫组织化学SABC法,对甲硫氨酸脑啡肽(M-ENK)在柄袋沙蠋体壁及其附属物鳃、疣足和消化系统各器官中的分布进行了研究.结果 表明,柄袋沙蠋体壁、鳃、疣足以及各消化器官的上皮细胞中均有不同程度的M-ENK阳性反应,且体壁、消化道的食管、肠、直肠中阳性反应多集中在上皮细胞的游离端;体壁肌肉中环肌层M-ENK阳性反应比纵肌层强;食道侧囊上皮细胞和结缔组织中也有M-ENK分布.M-ENK在柄袋沙蠋的体壁、鳃、疣足及消化系统各器官中均有分布,且分布密度不同,可能与各部位的功能有关.     

ERK1/2和p-ERK1/2在肺癌组织中的表达及意义

目的研究细胞外信号调节激酶1/2（extracellular regulated kinase 1/2,ERK1/2）及其磷酸化状态（p-ERK1/2）在不同分化程度肺癌中的表达情况,探讨二者与肺癌侵袭、转移的关系。方法采用免疫组化（Envision）法,检测79例肺癌组织及l2例癌旁正常肺组织中ERK1/2和p-ERK1/2的表达。结果ERK1/2在高、中、低分化组表达率分别为13.6%,39.4%,66.7%,p-ERK1/2在高、中、低分化组表达率分别14.3%,27.3%,79.2%（P〈0.05）;无淋巴结转移者阳性率为20%,有淋巴结转移者阳性率为50.1%（P〈0.05）。ERK1/2和p-ERK1/2的表达在不同年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤病理类型无显著性差异,而与分化程度有关,其中p-ERK1/2的表达还与有无淋巴结转移有关。结论ERK1/2和p-ERK1/2在肺癌组织中高表达且与分化程度有关。     

P物质与受体nk-1在结肠癌中的表达及定位

目的:了解P物质及其受体神经激肤1(NK-1)在结肠癌中的表达及定位,探讨其在结肠癌发病及临床诊断的意义.方法:应用免疫组化方法检测正常结肠、结肠癌组织及癌旁组织中SP及NK-1的表达.采用jmtjfx10[1].31 统计学软件处理数据,所得数据进行Q检验,结果:①在结肠癌组织中P物质阳性着色于胞浆,呈巢状或弥漫分布.②NK-1受体主要着色于细胞浆内,呈巢状或弥漫分布;少数为于细胞膜.③p物质与其受体NK-1在正常结肠粘膜组织及癌旁组织也有表达,位于细胞浆内,形态多呈圆形、椭圆形或不规则形.④二者在绝大多数结肠组织中呈强阳性表达,显著高于正常结肠粘膜组织和癌旁组织(p<0.01).结论:p物质与其受体NK-1在结肠癌组织中高度表达,提示神经内分泌参与了结肠癌的发生有关,说明P物质及NK-1受体可能参与了结肠癌的发病过程.     

TGF-β1和IGF-1 mRNA在早期胚胎停育绒毛组织中的表达及意义

目的:通过检测胚胎停育患者绒毛组织中TGF-β1和IGF-1 mRNA的表达,探讨其在胚胎停育发病机制中的作用。方法:用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测正常人流(20例),胚胎停育(25例)绒毛组织中TGF-β1和IGF-1基因在转录水平的表达。结果:(1)与对照组相比,实验组绒毛组织中TGF-β1mRNA表达量降低(P0.05),(2)胚胎停育患者绒毛中IGF-1mRNA表达量升高(P0.05)。(3)绒毛组织中TGF-β1与IGF-1的表达呈负相关(r=-0.793,P0.05)。结论:TGF-β1、IGF-1的表达在基因转录水平发生改变,TGF-β1表达的降低可能上调了IGF-1的表达,提示两者可能共同参与了胚胎停育的发生。     

趋化因子及趋化因子受体在急性胰腺炎中的研究进展

普遍认为,急性胰腺炎起始于腺泡细胞内的胰蛋白酶原激活,随后引起的炎症反应加剧病情,也是多器官功能衰竭的主要原因。然而,最新的研究表明,急性胰腺炎引起的炎症反应是不依赖于胰蛋白酶原激活的独立病理过程。趋化因子作为能引起细胞趋化的细胞因子,通过与趋化因子受体作用,不但能调控淋巴细胞的生长、成熟和迁移,也参与多种炎症疾病与癌症的病理过程。近年来,多项研究已经阐述趋化因子及趋化因子受体在急性胰腺炎的发病发展过程中起到至关重要的作用。本文总结了CC,CXC和CX3C趋化因子家族成员在参与急性胰腺炎的炎症反应及对胰腺损伤的修复的研究进展,这将为AP临床治疗方案的设计提供新思路。     

TGF-β1和IGF-1mRNA在早期胚胎停育绒毛组织中的表达及意义

目的：通过检测胚胎停育患者绒毛组织中TGF-β1和IGF-1mRNA的表达,探讨其在胚胎停育发病机制中的作用。方法：用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测正常人流（20例）,胚胎停育（25例）绒毛组织中TGF-β1和IGF-1基因在转录水平的表达。结果：（1）与对照组相比,实验组绒毛组织中TGF-βmRNA表达量降低（P〈0．05）,（2）胚胎停育患者绒毛中IGF—1mRNA表达量升高（P〈0．05）。（3）绒毛组织中TGF-β1与IGF-1的表达呈负相关（F=-0．793,P〈0．05）。结论：TGF-β1、IGF-1的表达在基因转录水平发生改变,TGF-β1表达的降低可能上调了IGF-1的表达,提示两者可能共同参与了胚胎停育的发生。     

TGFβ1及其受体在大鼠整胚及软骨雏形发育过程中的表达

目的 观察TGFβ1及TβRI、TβRII在大鼠整胚及软骨雏形中的表达,初步探讨它们与大鼠整胚及软骨雏形发育间可能的相互关系和作用机制.方法 半定量RT-PCR分析3种因子在13～17 d全胚中的变化情况;免疫组化法观察3种因子在13～17d软骨雏形中的表达及该组织发育结构特点.结果 半定量RT-PCR显示,3种因子在发育13～15 d表达呈递增趋势,16～17 d出现下降.免疫组化显示,TGFβ1主要位于软骨雏形内的软骨骨祖细胞,TβRI、TβRII即可位于软骨骨祖细胞内,也可位于软骨外周的膜上及软骨雏形周围的间质内.结论 TGFβ1及TβRI、TβRII在大鼠整胚及软骨雏形发育过程中可能起着重要的调控作用,尤其是对组织器官形态的发生.     

NFE2L1在食管鳞癌中的表达及临床意义

目的:通过检测食管鳞癌标本中核因子E2相关因子1(NFE2L1)的表达情况,探究NFE2L1在食管鳞癌发生发展中的作用,为食管鳞癌的诊治以及预后评估提供新的思路。方法:收集我校附院2016-2017年经病理组织学检查诊断为食管鳞癌的手术标本40例及其对应的癌旁组织并从NCBI数据库下载GEO测序数据,应用定量PCR、免疫组化和生物信息分析等方法检测分析NFE2L1基因的表达情况。结果:在食管鳞癌组织中,NFE2L1表达阳性31例(77.5%),癌旁组织阳性表达17例(42.5%),两组比较差异显著有统计学意义(P0.001);进一步发现NFE2L1的阳性表达与肿瘤分化程度和淋巴转移相关(P0.05)。但在不同年龄、性别、浸润深度及不同部位之间差异无统计学意义。GEO数据分析结果显示NFE2L1在食管鳞癌组织显著高表达(P0.01),只是未达到显著差异表达的阈值标准(即变化倍数小于2倍)。结论:NFE2L1在食管鳞癌中高表达,表达的高低与食管鳞癌的发生进展密切相关。     

MACC1和C-Met在口腔白斑和口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

目的:探讨分析MACC1和C-Met在正常口腔黏膜、口腔白斑及口腔鳞状细胞癌中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化SP法检测20例口腔黏膜、20例上皮异常增生白斑、50例口腔鳞癌组织中的MACC1、C-Met蛋白的表达情况,采用X2和spearman等级相关分析对结果进行判定。结果:MACC1、C-Met蛋白在异常增生型白斑和口腔鳞癌中的阳性表达率分别为50%、76%,35%、66%,均明显高于正常口腔黏膜(17.6%,5.0%),差异均有统计学意义(P0.05)。MACC1和C-Met蛋白表达与口腔鳞癌的分期、淋巴结转移及分化程度密切相关(P0.05)。Spearman等级相关分析显示口腔白斑及口腔鳞癌中MACC1和C-Met的表达呈现正相关(P0.05)。结论:MACC1和C-Met在上皮不典型增生性白斑和口腔鳞癌中高表达,二者在口腔黏膜白斑的癌变和口腔鳞癌的发生发展中可能起重要作用。     

PD-L1和CD147在口腔鳞癌中的表达与临床意义

目的:探讨口腔鳞癌组织中免疫共刺激分子PD-L1与细胞外基质蛋白酶诱导因子CD147的表达、两者的相关性及临床意义。方法:应用免疫组化技术检测66例口腔鳞癌组织及36例正常口腔黏膜组织中PD-L1和CD147的表达,分析PD-L1、CD147表达的相关性及二者与口腔鳞癌临床病理参数的关系。结果:PD-L1在口腔鳞癌组织中表达阳性率为68.18%(45/66),正常口腔黏膜组织中表达阳性率仅为16.67%(6/36);CD147在口腔鳞癌组织中表达阳性率为74.24%(49/66),明显高于其在正常口腔黏膜组织中的表达13.88%(5/36)。PD-L1和CD147两者在口腔鳞癌组织中阳性表达率与口腔黏膜组织相比均明显升高(P0.01)。统计学分析显示,PD-L1和CD147在口腔鳞癌组织中的高表达与患者的性别年龄、吸烟史及肿瘤的体积等因素无明显相关,但与TNM分期及鳞癌的组织分化程度紧密相关。口腔鳞癌组织中PD-L1与CD147两者相关性分析r=0.342,P值小于0.01,说明二者的表达呈显著正相关。结论:口腔鳞癌组织中PD-L1与CD147均呈高表达,并且二者的过度表达可能与口腔鳞癌的发生、发展关系密切,合并检测二者可能为OSCC的诊疗及预后指明新的方向,为口腔鳞癌的靶向治疗提供新的靶点。     

Importance of complement 3 and mannose receptors in phagocytosis of Paracoccidioides brasiliensis conidia by Nramp1 congenic macrophages lines

Genetic factors influence susceptibility to Paracoccidioidomycosis, a Latin American endemic mycosis. The pattern of susceptibility of congenic mouse strains infected with Paracoccidioides brasiliensis resembles the pattern of the Nramp1 gene. Thus, congenic murine bone-marrow-derived macrophage lines B10R (Nramp1rGly169) and B10S (null Nramp1 protein expression, Nramp1sAsp169) were infected with P. brasiliensis conidia and compared, under opsonic and nonopsonic conditions. Opsonization increased the percentage of phagocytosis by both cell lines. B10R macrophages exhibited a higher percentage of cells with associated conidia and higher number of conidia per macrophage than B10S. Heat-inactivation and EDTA treatment of serum used for opsonization, and treatment of macrophages with anti-complement receptor 3 (CR3) decreased phagocytosis by both cell lines. alpha-methyl-d-mannoside reduced phagocytosis by B10R macrophages, suggesting that the mannose receptor participates in phagocytosis by these cells. The CR3 expression was similar on both cell lines and B10R expressed more mannose receptors, but neither cell line expressed CR1. IFNgamma decreased the conversion of conidia to the yeast form of P. brasiliensis in B10R, but not in B10S macrophages.     

Immunohistochemical detection of sphingosine-1-phosphate receptor 1 in vascular and lymphatic endothelial cells

Sphingosine-1-phosphate receptor 1 (S1P₁), a receptor for sphingosine-1-phosphate, has been shown to play an important role in the migration, proliferation, and survival of several types of cell including endothelial cells. Given that S1P₁ signaling could serve as a therapeutic target, we evaluate the expression of S1P₁ in formalin-fixed and paraffin-embedded sections from human tissues, using automated immunostainers (Ventana). The specificity of the polyclonal rabbit anti-human S1P₁ antibody used in this study was defined by immunostaining of the vasculature in S1P ₁ ^−/− and S1P ₁ ^+/− mouse embryos. The antibody stained the newly formed vasculatures ex vivo in a serum-free matrix culture model using rat aortic rings. In human specimens, S1P₁ was strongly expressed on the cell surface membrane of endothelial cells of blood and lymphatic vessels in all tissues examined. The expression of S1P₁ was confirmed by the flow cytometric analysis and real time RT-PCR of an angiosarcoma cell line. This study indicates that S1P₁ can be used as an immunohistochemical marker for human tissue endothelial cells.     

Stereoselectivity of (R)- and (S)-hexahydro-difenidol binding to neuroblastoma M1, cardiac M2, pancreatic M3, and striatum M4 muscarinic receptors

(R)-Hexahydro-difenidol has a higher affinity for M1 receptors in NB-OK 1 cells, pancreas M3 and striatum M4 receptors (pKi 7.9 to 8.3) than for cardiac M2 receptors (pKi 7.0). (S)-Hexahydro-difenidol, by contrast, is nonselective (pKi 5.8 to 6.1). Our goal in the present study was to evaluate the importance of the hydrophobic phenyl, and cyclohexyl rings of hexahydro-difenidol for the stereoselectivity and receptor selectivity of hexahydro-difenidol binding to the four muscarinic receptors. Our results indicated that replacement of the phenyl ring of hexahydro-difenidol by a cyclohexyl group (----dicyclidol) and of the cyclohexyl ring by a phenyl moiety (----difenidol) induced a large (4- to 80-fold) decrease in binding affinity for all muscarinic receptors. Difenidol had a significant preference for M1, M3, and M4 over M2 receptors; dicyclidol, by contrast, had a greater affinity for M1 and M4 than for M2 and M3 receptors. The binding free energy decrease due to replacement of the phenyl and the cyclohexyl groups of (R)-hexahydro-difenidol by, respectively, a cyclohexyl and a phenyl moiety was almost additive in the case of M4 (striatum) binding sites. In the case of the cardiac M2, pancreatic M3, or NB-OK 1 M1 receptors the respective binding free energies were not completely additive. These results suggest that the four (R)-hexahydro-difenidol "binding moieties" (phenyl, cyclohexyl, hydroxy, and protonated amino group) cannot simultaneously form optimal interactions with the M1, M2, and M3 muscarinic receptors.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)     

雅砻江短须裂腹鱼胚胎和卵黄囊仔鱼的形态发育

当前短须裂腹鱼(Schizothorax wangchiachii)已被列为雅砻江和金沙江的增殖放流保护鱼类,为探讨两水系的环境差异对其早期发育产生的影响,本文以雅砻江短须裂腹鱼为研究对象,通过人工授精获得受精卵,对胚胎和早期仔鱼的形态发育特征进行了观察,并与已有报道的金沙江短须裂腹鱼胚胎与仔鱼早期发育研究进行比较。研究结果显示,雅砻江短须裂腹鱼卵径(2.70±0.02)mm,较金沙江短须裂腹鱼大0.34 mm;初孵仔鱼全长(11.36±0.22)mm,比金沙江短须裂腹鱼长2.7 mm;在水温(14±1)℃时,两水系的短须裂腹鱼胚胎发育时序基本一致,但听囊等部分功能器官的发育时序存在差异;胚胎发育历时181 h,积温2 539.98 h℃,分别比金沙江短须裂腹鱼早73 h和低1 025 h℃;出膜后1~9 d,仔鱼的鳃、口、胸鳍、尾鳍、鳔、肠道等功能器官先后形成,第9天卵黄囊吸收基本完全,与金沙江短须裂腹鱼一致。比较表明,两水系短须裂腹鱼早期发育特征基本相同,但卵径大小、孵化历时、部分器官发育时序存在一定差异,可能是二者为适应环境而做出不同的选择。     

水螅AChE和NPY类似物的定位

乙酰胆碱脂酶(AChE)组织化学定位方法常用于研究动物的神经系统,但迄今未见水螅AChE分布定位的相关报道。本文使用免疫细胞化学、组织化学和亚甲基蓝活染方法,探索AChE、NPY类似物在水螅上的连续分布状态,对阳性标本进行内胚层、外胚层人工分离手术,并与亚甲基蓝染色结果进行比较。本文首次成功地在水螅上定位出AChE,展示了AChE、NPY类似物在水螅上的分布特点。AChE定位在水螅体柱和触手基部外胚层的近外表,呈网状结构,正常水螅上没有发现明显的阳性神经细胞,外胚层表面受损部位内有阳性神经细胞,我们认为是一种临时的生理现象。成熟刺丝囊的刺针内有AChE 产物。NPY免疫组织化学反应(NPYIR)在水螅外胚层近外表处上均有分布,呈网状结构。垂唇和近基盘处NPYIR最强,NPYIR神经细胞仅存在于垂唇和近基盘处的外胚层基部。刺丝囊分化、发育初期NPYIR较强。随刺丝囊发育成熟而逐渐减弱。最后,进行了分析和比较,认为NPY、AChE来源于上皮细胞。水螅刺丝囊的分化和发育与NPY的作用密切相关;刺丝囊发射刺丝的机理与胆碱能的作用可能有联系     

M1乙酰胆碱受体对AMPA受体GluA1-Ser831 位点的调控作用

目的:从海马神经元谷氨酸离子型受体--AMPA受体亚基GluA1的831位丝氨酸(GluA1Ser831)磷酸化角度,探讨M1乙酰胆碱受体对AMPA受体GluA1亚基的调控作用及作用机制。方法:本研究以成熟的原代海马神经元为实验对象,用不易被降解的卡巴胆碱(Carbachol,CCh)作为胆碱受体激动剂,以免疫印迹法作为蛋白和磷酸化蛋白的主要检测手段,结合不同蛋白抑制剂研究M1受体调控AMPA受体GluA1亚基的关键信号分子及其机制。结果:1与对照组相比,CCh组Ser831的磷酸化水平显著升高。2CCh促进Ser831磷酸化的现象在M1受体选择性拮抗剂哌仑西平(Pirenzepine)+CCh组消失,CCh升高GluA1-Ser831磷酸化水平的作用由M1受体介导。3蛋白激酶C(ProteinkinaseC,PKC)抑制剂白屈菜红碱(Chelerythrinechloride,CHCL)能对抗CCh促进GluA1-Ser831位点磷酸化的作用,而钙/钙调素依赖性蛋白激酶II(Calcium/calmodulin-dependentkinaseII,CaMKII)抑制剂KN62不能对抗CCh的作用。4为检测体内GluA1-Ser831的磷酸化情况,用小鼠海马组织定位注射CCh和CHCL,CCh组小鼠海马组织GluA1-Ser831位点的磷酸化水平升高,CHCL能对抗这种作用,PKC介导了M1受体激活所导致的GluA1-Ser831磷酸化水平的升高。结论:M1受体通过激活PKC促进GluA1-Ser831的磷酸化。     

前列腺素E1对大鼠胃窦肌电活动的影响

用慢性实验方法,在３０只Ｗｉｓｔａｒ大鼠胃窦部浆膜面埋置Ａｇ／ＡｇＣｌ双极电极,观察腹腔注射前列腺素Ｅ１（ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎＥ１,ＰＧＥ１）对胃窦肌电活动的影响。