PSP下调miR-345-5p对雨蛙素诱导的AP腺泡细胞氧化应激和炎症因子表达

目的探讨黄精多糖（PSP）对雨蛙素诱导的急性胰腺炎（AP）腺泡细胞氧化应激和炎症因子表达的影响及分子机制。 方法取对数期大鼠胰腺腺泡细胞AR42J,采用100 nmol/L雨蛙素处理细胞6 h,建立AP腺泡细胞损伤模型,并采用不同浓度（1、2、4 mg/mL）PSP处理AP细胞（AP+PSP-L、AP+PSP-M、AP+PSP-H）。试剂盒检测细胞中丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）活性以及培养液中白细胞介素-6 （IL-6）、肿瘤坏死因子-α （TNF-α）和IL-1β水平,实时荧光定量PCR （RT-qPCR）检测miR-345-5p表达水平。将miR-345-5p抑制物转染AR42J细胞,检测下调miR-345-5p表达对AP细胞氧化应激和炎症因子表达的影响。将miR-345-5p模拟物转染AR42J细胞,检测上调miR-345-5p表达和PSP处理对AP细胞氧化应激和炎症因子表达的影响。两组比较采用t检验,多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。 结果与对照比较,AP细胞MDA含量、IL-6、TNF-α、IL-1β水平和miR-345-5p表达水平均升高,SOD和GPx活性降低（P < 0.05）。与AP细胞比较,不同浓度（1、2、4 mg/mL）PSP作用的AP细胞中MDA含量[（1.08± 0.07）比（0.88±0.06）,（0.73±0.06）,（0.60±0.05） nmol/mg]降低,SOD [（43.01±4.37）比（59.60±5.62）,（72.37±6.32）,（94.21±8.70） U/mg]和GPx活性[（29.03±2.51）比（44.11± 4.71）,（58.07±4.20）,（72.67± 6.56） U/mg]均升高,培养液中IL-6 [（310.72±22.27）比（257.01±20.85）,（192.28±17.70）,（146.93±11.90） pg/mL]、TNF-α [（223.82±21.87）比（175.57±15.85）,（137.00±11.31）,（89.26±7.05） pg/mL]、IL-1β表达水平[（41.66±3.85）比（33.82±3.20）,（26.15±2.56）,（20.14±1.71） pg/mL]和miR-345-5p表达水平（2.78±0.24比2.38±0.21,1.91±0.12,1.25±0.13）均降低,且呈浓度依赖性,差异有统计学意义（P均< 0.05）。下调miR-345-5p表达后,AP细胞中MDA含量[（1.13±0.08）比（0.72±0.06） nmol/mg]降低,SOD活性[（41.31±3.98）比（81.73±7.62） U/mg]和GPx [（28.82±2.97）比（61.41±5.81） U/mg]升高,培养液中IL-6 [（314.65±25.02）比159.76±11.93） pg/mL]、TNF-α [（235.18±23.13）比（100.41±8.09） pg/mL]和IL-1β水平[（48.67±4.50）比（27.73±2.54） pg/mL]降低（P均< 0.05）。上调miR-345-5p表达可逆转PSP对AP细胞的影响。其中MDA含量[（0.58±0.03）比（0.95±0.08） nmol/mg]升高、SOD活性[（96.52±9.54）比（54.24±4.15） U/mg]、GPx活性[（79.62±6.23）比（39.81±3.84） U/mg]降低、IL-6 [（145.38±12.49）比（275.38± 21.55） pg/mL]、TNF-α [（84.83±7.81）比（183.73±16.39） pg/mL]和IL-1β [（19.38±1.85）比（36.97±3.62） pg/mL]的表达水平升高（P均< 0.05）。 结论PSP以剂量依赖方式减轻雨蛙素诱导AP细胞炎症反应和氧化应激损伤,其机制与下调miR-345-5p表达有关。     

替米沙坦调控miR-495-3p/心肌细胞增强因子2A通路减轻缺氧诱导的神经细胞PC12损伤

目的探讨替米沙坦（TM）调控miR-495-3p/心肌细胞增强因子2A （MEF2A）通路对缺氧诱导PC12细胞损伤的影响和机制。 方法将PC12细胞进行正常培养（对照）,缺氧（缺氧24 h）,缺氧+ 0.1、1、10 μg/mL TM、缺氧+ miR-NC （转染miR-NC）,缺氧+miR-495-3p （转染miR-495-3p模拟物）,缺氧+TM+anti-miR-NC （转染anti-miR-NC,10 μg/mL TM）和缺氧+ TM+anti-miR-495-3p （转染anti-miR-495-3p,10 μg/mL TM）处理。酶联免疫吸附实验（ELISA）检测乳酸脱氢酶（LDH）漏出量和超氧化物歧化酶（SOD）的活性,流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量PCR （RT-qPCR）和Western blot检测miR-495-3p、心肌细胞增强因子2A （MEF2A）表达水平。两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。 结果与对照比较,缺氧处理的PC12细胞LDH漏出率[（9.46±0.97）﹪比（45.69±4.31）﹪]、细胞凋亡率[（5.36±0.54）﹪比（28.36±2.41）﹪]、MEF2A mRNA（1.00±0.08比2.74±0.26）和MEF2A蛋白表达水平（0.39±0.03比0.87±0.06）均升高;SOD活性[（12.24 ±1.13）比（5.13±0.52 ）U/mL）]和miR-495-3p表达水平（1.00±0.08比0.35±0.03）均降低,差异有统计学意义（P均< 0.05）。与缺氧处理比较,缺氧+0.1、1、10 μg/mL TM干预的PC12细胞LDH漏出率[（45.69±4.31）﹪比（32.14±3.84）﹪、（23.54±3.17）﹪、（16.87±1.46）﹪]、细胞凋亡率[（28.36±2.41）﹪比（22.46±2.31）﹪、（17.14±1.65）﹪、（10.23±1.12）﹪]、MEF2A mRNA（2.74±0.26比2.26±0.23、1.87±0.19、1.34±0.18）和MEF2A蛋白表达水平（0.87±0.06比0.75±0.05、0.63±0.04、0.46±0.03）均降低;SOD活性[（5.13±0.52）比（6.87±0.69 ）、（8.01±0.81）、（10.12±1.02）U/mL]、miR-495-3p表达水平（0.35±0.03比0.49±0.04、0.61±0.06、0.83±0.07）均升高,差异有统计学意义（P均< 0.05）。与缺氧+ miR-NC比较,缺氧+ miR-495-3p的PC12细胞LDH漏出率[（46.87±4.28）﹪比（19.65±1.87）﹪]和细胞凋亡率[（28.38±2.44）﹪比（12.36±1.25）﹪]均降低,SOD活性[（5.15±0.51）比（9.67±0.97）U/mL]升高,差异有统计学意义（P均< 0.05）。与缺氧+TM+anti-miR-NC比较,缺氧+TM+anti-miR-495-3p的PC12细胞LDH漏出率[（17.64±1.79）﹪比（32.69±3.57）﹪]和细胞凋亡率[（10.98±1.75）﹪比（22.64±2.13）﹪]均升高,SOD活性[（12.63±1.27）比（7.32±0.71）U/mL]降低,差异有统计学意义（P均< 0.05）。 结论TM通过上调miR-495-3p/MEF2A通路对缺氧诱导的PC12细胞损伤具有保护作用。     

ω-3 PUFAs对小鼠炎症性肠病调节性T细胞影响的研究

目的探究ω-3多不饱和脂肪酸（ω-3PUFAs）对小鼠炎症性肠病（IBD） CD4⁺ CD25⁺ Foxp3⁺调节性T细胞（Treg）的影响。 方法选取新疆医科大学第五附属医院实验动物中心提供健康雄性Balb/C小鼠120只,均采用三硝基苯磺酸诱导成IBD模型,根据腹腔注射药物随机分为空白对照组（生理盐水）、ω-3 PUFAs组[2.5g/（kg·d）浓度ω-3 PUFAs]、硬脂酸对照组（饱和脂肪酸硬脂酸）、二十二碳六烯酸（DHA）组。各组小鼠组织学评分,Treg细胞表型,胞内细胞因子mRNA表达水平,上清液中细胞因子水平比较采用单因素方差分析。 结果与空白对照组比较,硬脂酸空白对照组、DHA组与ω-3 PUFAs组小鼠组织学评分[（4.12±0.89）分比（3.82±0.51）分、（2.51±0.74）分、（1.04±0.36）分] 、干扰素（IFN）-γ水平[（203.51±10.29） pg/mL比（165.32± 11.67） pg/mL、（128.34±6.77）pg/mL、（105.29±6.81）pg/mL]均下降,CD4⁺ CD25⁺ Foxp3⁺ Treg细胞表型比例[（3.80±0.89）﹪比（7.22±1.13）﹪、（3.90±0.75）﹪、（10.10±1.29）﹪]、细胞Foxp3 mRNA表达水平[（96.74±6.65）比（107.33±6.82）、（122.67±8.53）、（165.22±10.43）]、白细胞介素10（IL-10） mRNA表达水平[（0.59±0.18）比（0.98±0.29）、（1.22±0.59）、（1.47±0.53）]、上清液中细胞因子IL-10水平[（83.51±4.67） pg/mL比（108.35±7.22）pg/mL、（122.29±15.33）pg/mL、（153.67±15.28） pg/mL]、Foxp3水平[（9.65±1.29）pg/mL比（13.73± 1.32）pg/mL、（15.67± 2.57）pg/mL、（19.53±2.18）pg/mL]均升高,差异具有统计学意义（P均< 0.05）;与硬脂酸对照组比较,ω-3 PUFAs组与DHA组细胞Foxp3、IL-10 mRNA表达水平、上清液中细胞因子IL-10、Foxp3水平均升高,IFN-γ水平降低,差异具有统计学意义（P均< 0.05）。 结论ω-3 PUFAs可以有效调节IBD小鼠免疫功能紊乱,减轻机体炎症水平,为IBD治疗提供新思路。     

HOXA-AS2靶向miR-17对人脐静脉内皮细胞生物学功能以及炎症因子的影响

目的探讨HOXA-AS2对动脉粥样硬化（AS）模型细胞生物学功能以及炎症因子的影响及分子机制。 方法本实验共分为4个实验;实验1：用100 μg/mL的ox-LDL处理EA.hy926细胞作为ox-LDL组,正常培养的细胞作为对照组;实验2：将pcDNA3.1、pcDNA3.1-HOXA-AS2转染至EA.hy926细胞中再用100 μg/mL的ox-LDL处理,记为ox-LDL+pcDNA3.1组、ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2组;实验3：将pcDNA3.1、pcDNA3.1-HOXA-AS2、si-NC、si-HOXA-AS2分别转染至EA.hy926细胞中,记为pcDNA3.1组、pcDNA3.1-HOXA-AS2组、si-NC组、si-HOXA-AS2组;实验4：将pcDNA3.1-HOXA-AS2与miR-NC、miR-17分别共转染至EA.hy926细胞中再用100 μg/mL的ox-LDL处理,记为ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2+miR-NC组、ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2+miR-17组。实时荧光定量PCR （RT-qPCR）检测HOXA-AS2和miR-17的表达水平;蛋白质印迹（Western blot）法检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A （P21）、cleaved caspase 3蛋白表达;MTT检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA法检测白细胞介素-1 （IL-1）、白细胞介素-6 （IL-6）水平;荧光素酶报告实验检测HOXA-AS2和miR-17的靶向关系。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。 结果与对照组比较,ox-LDL组EA.hy926细胞中HOXA-AS2表达水平（0.23±0.02比1.02±0.10）,细胞增殖率[（47.83±5.01）﹪比（100.06±10.20）﹪]均降低,细胞凋亡率[（26.81±2.47）﹪比（8.23±0.80）﹪]、P21 （0.82±0.08比0.20±0.02）、cleaved caspase 3 （0.67±0.06比0.14±0.01）、IL-1[（792.34±59.37）ng/L比（326.14±34.59） ng/ L]和IL-6表达水平[（53.67±4.65）ng/L比（19.25±2.11）ng/L]均升高,差异具有统计学意义（P均< 0.05）。与ox-LDL+pcDNA3.1组比较,ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2组EA.hy926细胞中HOXA-AS2表达水平（0.87±0.09比0.22±0.02）、细胞增殖率[（89.94±8.34）﹪比（48.21±4.86）﹪]均升高,细胞凋亡率[（12.33±1.18）﹪比（26.83±2.48）﹪]、P21 （0.33±0.03比0.81±0.08）、cleaved caspase 3 （0.24±0.02比0.69±0.06）、IL-1[ （446.25±46.84）ng/L比（802.21±60.18）ng/L]和IL-6表达水平[（25.64±2.65）ng/L比（55.21±5.10）ng/L]均降低,差异具有统计学意义（P均< 0.001）。与ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2+miR-NC组比较,ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2+miR-17组EA.hy926细胞中miR-17表达水平（2.14±0.21比1.05±0.10）、细胞凋亡率[（23.31±2.33）﹪比（13.75±1.44）﹪]、IL-1水平[（684.26±62.38）ng/L比（451.21±43.58）ng/L]、IL-6水平[（41.29±4.37）ng/L比（26.11±2.39）ng/L]均升高,细胞增殖率[（53.67±5.46）﹪比（90.21±9.16）﹪]降低,差异具有统计学意义（P均< 0.001）。HOXA-AS2与miR-17存在结合位点,荧光素酶报告实验显示,与miR-NC组比较,miR-17组中转染WT-HOXA-AS2的EA.hy926细胞荧光素酶活性降低（0.33±0.03比1.01±0.10,P < 0.05）,而转染MUT-HOXA-AS2的EA.hy926细胞荧光素酶活性差异无统计学意义（P > 0.05）;与anti-miR-NC组比较,anti-miR-17组中转染WT-HOXA-AS2的EA.hy926细胞荧光素酶活性升高（2.29±0.21比1.00±0.10,P < 0.05）,而转染MUT-HOXA-AS2的EA.hy926细胞荧光素酶活性差异无统计学意义（P > 0.05）。 结论过表达HOXA-AS2促进细胞增殖,抑制ox-LDL引起的细胞凋亡和炎症因子的释放,其机制可能与miR-17有关。     

miR-652-3p靶向同源异型核基因1对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞凋亡的影响

目的探讨miR-652-3p靶向同源异型核基因1（PRRX1）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌细胞凋亡的影响。 方法大鼠心肌细胞H9c2细胞采用正常培养基培养为对照组细胞，用含1 μmol/L AngⅡ的培养基培养为AngⅡ组细胞；分别转染miR-652-3p阳性对照序列（NC）和转染miR-652-3p mimics后用含1 μmol/L AngⅡ的培养基培养为AngⅡ+NC组和AngⅡ+miR-652-3p组细胞；将miR-652-3p mimics分别与PRRX1阳性对照质粒和PRRX1过表达质粒转染至H9c2细胞中用含1 μmol/L AngⅡ的培养基培养，分别为AngⅡ+miR-652-3p+ Vctor组和AngⅡ+miR-652-3p+PRRX1组细胞。实时荧光定量PCR （RT-qPCR）检测H9c2细胞中miR-652-3p表达水平，流式细胞术检测细胞凋亡，用Western blot检测细胞中PRRX1、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证H9c2细胞中miR-652-3p与PRRX1调控关系。两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK-q检验。 结果与对照组比较，AngⅡ组H9c2细胞中miR-652-3p水平（1.00±0.08比0.21±0.05）、Bcl-2蛋白水平（0.83±0.08比0.40±0.04）均较低，而PRRX1蛋白水平（0.06±0.01比0.41±0.04）、凋亡率（5.02﹪±1.41﹪比25.33﹪±3.75﹪）、Bax蛋白水平（0.46±0.05比0.96±0.10）均较高，差异具有统计学意义（P均< 0.05）。与AngⅡ+NC组比较，AngⅡ+miR-652-3p组H9c2细胞中miR-652-3p的表达水平（0.24±0.06比0.98±0.07）、Bcl-2蛋白水平（0.38±0.04比0.72±0.07）均较高，而PRRX1蛋白水平（0.39±0.04比0.13±0.01）、凋亡率（27.02﹪±4.11﹪比12.19﹪±1.63﹪）、Bax蛋白水平（0.95±0.09比0.53±0.05）均较低，差异具有统计学意义（P均< 0.05）。与AngⅡ+miR-652-3p+Vctor组比较，AngⅡ+miR-652-3p+PRRX1组H9c2细胞凋亡率（12.88﹪±1.84﹪比25.45﹪±3.58﹪）、PRRX1蛋白水平（0.13±0.01比0.35±0.04）和Bax蛋白水平（0.54±0.05比0.82±0.08）均较高，差异具有统计学意义（P均< 0.05），而Bcl-2蛋白表达水平（0.72±0.07比0.46±0.05）降低，差异具有统计学意义（P < 0.05）。 结论AngⅡ能够下调心肌细胞中miR-652-3p的表达，上调miR-652-3p可通过靶向抑制PRRX1的表达减少AngⅡ诱导的H9c2细胞凋亡。     

LncRNA AC130710通过miR-129-5P/WNT4轴促进子宫内膜癌细胞增殖和上皮间质转化

目的探讨LncRNA AC130710通过miR-129-5P/WNT4轴对子宫内膜癌细胞（HEC-1A细胞）增殖、凋亡及上皮间质转化（EMT）的影响及机制研究。 方法通过实时荧光定量PCR检测LncRNA AC130710、miR-129-5P和WNT4在子宫内膜癌细胞（HEC-1A细胞）和人子宫内膜上皮细胞（HEEC）中的表达。细胞分别转染（1）siRNA NC、AC130710 siRNA、WNT4 siRNA;（2）inhibitor NC、miR-129-5P inhibitor;（3）pcDNA-3.1 （+）+mimics NC、pcDNA-AC130710+mimics NC、pcDNA-3.1 （+）+miR-129-5P mimics、pcDNA-AC130710+miR-129-5P mimics。MTT实验检测LncRNA AC130710、miR-129-5P和WNT4的表达对HEC-1A细胞增殖能力的影响;Western blot检测LncRNA AC130710、miR-129-5P和WNT4的表达对HEC-1A细胞凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2基因相关蛋白X （Bax）、剪切的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3 （cleaved caspase-3）、cleaved caspase-9和B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）表达的影响;Western blot检测LncRNA AC130710、miR-129-5P和WNT4的表达对HEC-1A细胞EMT的影响。miRanda和双荧光素酶报告基因实验分析LncRNA AC130710和miR-129-5P之间的关系,TargetScan数据库分析miR-129-5P与WNT4的相关性,双荧光素酶报告基因检测miR-129-5P与WNT4的相互作用;RT-qPCR法检测LncRNA AC130710通过miR-129-5P对WNT4表达的影响。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验。 结果与HEEC细胞比较,HEC-1A细胞中AC130710表达水平（1.86±0.21比0.85±0.06）、WNT4表达水平（1.88±0.26比1.08±0.12）升高;HEC-1A细胞中miR-129-5P表达水平（0.89±0.16比1.76±0.08）降低。与转染siRNA NC比较,转染AC130710 siRNA细胞内Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、E-cadherin蛋白相对表达水平[（1.37±0.14比0.84±0.21）,（1.08±0.16比0.37±0.07）,（1.26±0.24比0.39±0.06）,（1.87±0.17比1.32±0.26）]上升,Bcl-2、N-cadherin、Snail和Vimentin蛋白相对表达水平[（0.38±0.08比1.18±0.14）,（0.36±0.04比0.85±0.24）,（0.35±0.09比1.12±0.18）,（0.42±0.10比1.26±0.27）]下降;与转染inhibitor NC比较,转染miR-129-5P inhibitor细胞的Bcl-2、N-cadherin、Snail和Vimentin蛋白相对表达水平[（0.98±0.07比0.65±0.08）,（1.39±0.15比0.68±0.09）,（0.95±0.08比0.42±0.06）,（1.16±0.16比0.54±0.02）]上升,Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、E-cadherin蛋白相对表达水平[（0.27±0.09比0.85±0.13）,（0.48±0.05比1.16±0.28）,（0.52±0.14比1.19±0.15）,（0.43±0.09比1.08±0.26）]下降;与转染siRNA NC比较,转染WNT4 siRNA细胞的Bcl-2、N-cadherin、Snail和Vimentin蛋白相对表达水平[（0.23±0.08比0.84±0.12）,（0.28±0.09比1.14±0.17）,（0.42±0.23比1.06±0.15）,（0.35±0.08比1.13±0.08）]降低,Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、E-cadherin蛋白相对表达水平[（0.96±0.12比0.42±0.08）,（1.13±0.25比0.45±0.06）,（1.54±0.23比0.72±0.12）,（1.87±0.24比1.26±0.18）]上升。 结论LncRNA AC130710可通过miR-129-5P/WNT4轴调控子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖、凋亡及EMT。     

下调血管生成素样蛋白7表达对血管紧张素Ⅱ介导的血管平滑肌细胞炎症反应的影响

目的探讨RNA干扰血管生成素样蛋白7 （Angptl7）基因对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的血管平滑肌细胞（VSMC）炎症因子的影响及其作用机制。 方法体外培养人VSMC,分为常规F12K培养基培养（对照）和1 μg/mL AngII培养24 h。VSMC用AngⅡ（1 μg/mL）处理24 h后,采用siRNA-Angptl7和阴性对照siRNA-NC在Lipofectamine 2000介导下转染VSMC。RT-qPCR检测mRNA表达水平;Griess反应测定一氧化氮（NO）含量;蛋白免疫印记法检测相关蛋白的改变;酶联免疫吸附法检测VSMC中炎症因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-1β （IL-1β）和IL-6水平。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验,两组间比较采用独立样本t检验。 结果与对照比较,1 μg/mL AngⅡ处理可促进VSMC中Angptl7 mRNA （0.97±0.06比3.05±0.21）和蛋白表达（1.01±0.12比1.61±0.14）,亦可促进VSMC中IL-1β[（45.21±8.10）比（126.17±11.77） pg/mL]、IL-6[（50.50±7.51）比（108.50±9.51）pg/mL]和TNF-α的表达[（60.77±9.58）比（185.67±17.35）pg/mL],差异有统计学意义（P均< 0.01）。与对照和转染siRNA-NC相比,转染siRNA-Angptl7下调Angptl7蛋白表达（0.99±0.12,0.98±0.12比0.44±0.14,P < 0.01）。与AngⅡ干预组相比,siRNA-Angptl7降低AngⅡ介导的VSMC炎症反应相关蛋白TNF-α、IL-6和IL-1β的表达,核因子κB （NF-κB）/诱导型一氧化氮合酶（iNOS）/环氧化酶2 （COX-2）信号通路相关蛋白NF-κB、iNOS和COX-2表达及NO含量亦降低,差异有统计学意义（P均< 0.01）。与siRNA-NC相比,siRNA-Angptl7组AngⅡ诱导的VSMC炎症反应相关蛋白TNF-α （0.99±0.13比0.51±0.12）、IL-6 （1.00±0.12比0.38±0.05）和IL-1β的表达（0.99±0.14比0.48±0.11）,NF-κB （1.00±0.10比0.42±0.08）、iNOS （1.02±0.12比0.42±0.10）和COX-2表达（1.00±0.11比0.52±0.12）均降低,NO含量[（54.78±2.76）比（18.08±3.61）μmol/L]亦降低,差异有统计学意义（P均< 0.01）。 结论AngⅡ可通过Angptl7促进VSMC炎症反应,下调Angptl7蛋白表达可以抑制VSMC的炎症反应,其作用机制可能与抑制NF-κB/iNOS-COX-2信号通路有关。     

miR-98-5p靶向PYGO2基因对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制研究

目的探讨miR-98-5p对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及其作用机制。 方法选取2016年1月至2019年1月郴州市第一人民医院收治的宫颈癌患者的癌组织和癌旁组织;予以miR-98-5p、si-PYGO2及anti-miR-98-5p单独或共培养Siha细胞,记为：miR-NC组、miR-98-5p组、si-NC组、si-PYGO2组、anti-miR-NC组、anti-miR-98-5p组、miR-98-5p+pcDNA组、miR-98-5p+pcDNA-PYGO2组。运用qRT-PCR检测宫颈癌组织和细胞中miR-98-5p和PYGO2 mRNA的表达水平;Western blot检测蛋白表达;MTT法检测细胞增殖活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;将WT-PYGO2、MUT-PYGO2分别与miR-NC、miR-98-5p共转染至Siha细胞中,双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。采用方差分析和t检验进行统计学分析。 结果与癌旁组织相比,宫颈癌组织中miR-98-5p表达水平降低（0.98±0.08比0.47±0.05）,PYGO2 mRNA （1.00±0.07比2.43±0.24）和蛋白表达水平（0.27±0.03比0.62±0.05）均升高（P均< 0.001）。与正常宫颈细胞Ect1/E6E7相比,宫颈癌细胞Siha、Hela、Caski中PYGO2 mRNA （0.98±0.09比2.76±0.23、2.46±0.24、2.55±0.21）和蛋白表达水平（0.21±0.03比0.62±0.06、0.51±0.05、0.57±0.06）升高;miR-98-5p的表达水平降低（1.00±0.08比0.34±0.04、0.56±0.05、0.46±0.04） （P均< 0.05）。与miR-NC组相比,miR-98-5p组宫颈癌Siha细胞活性（48 h：0.61±0.05比0.42±0.04,72 h：1.02±0.09比0.59±0.06）、迁移数量[ （112.46±10.27）个比（48.35±4.96）个]及侵袭数量[ （92.47±9.56）个比（39.46±3.52）个]均降低（P均< 0.05）。与si-NC组相比,si-PYGO2组宫颈癌Siha细胞活性（48 h：0.64±0.06比0.46±0.05,72 h：1.05±0.08比0.67±0.06）、Siha迁移数量[ （106.48±9.75）个比（42.16±4.25）个]和侵袭数量[ （87.63±8.11）个比（35.42±6.20）个]均降低（P均< 0.05）;Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、MMP-14表达水平降低,p21、p27表达水平升高,差异有统计学意义（P均< 0.05）。与miR-NC组比较,miR-98-5p组转染WT-PYGO2的Siha细胞荧光素酶活性（0.38±0.04比0.99±0.08）降低（P < 0.05）,转染MUT-PYGO2的Siha细胞荧光素酶活性（1.03±0.08比1.01±0.09）差异无统计学意义（P > 0.05）。PYGO2过表达逆转了miR-98-5p过表达对宫颈癌Siha细胞的增殖、迁移和侵袭的抑制作用。 结论miR-98-5p可抑制宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与其靶向调控PYGO2的表达有关,将可为宫颈癌的预防和治疗提供新靶点。     

miR-106a-5p调控 PTEN对鼻咽癌细胞SUNE2增殖和迁移的抑制作用研究

目的研究miR-106a-5p对鼻咽癌细胞SUNE2增殖和迁移的影响。 方法将体外培养的鼻咽癌细胞SUNE2分成对照组（细胞未做任何处理）、Anti-NC组（转染阴性对照抑制剂）、Anti-miR-106a-5p组（转染miR-106a-5p抑制剂）、后期实验另设Anti-miR-106a-5p-inhibitor+si-NC组（转染miR-106a-5p抑制剂、siRNA阴性对照）、Anti-miR-106a-5p-inhibitor+si-PTEN组（转染miR-106a-5p抑制剂、PTEN siRNA）,采用Realtime PCR测定miR-106a-5p表达,MTT法检测增殖,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力变化,用Western blot方法测定vimentin、E-cadherin蛋白表达。在线靶基因预测软件预测miR-106a-5p的靶基因可能为PTEN,双荧光素酶报告系统鉴定miR-106a-5p和PTEN的靶向关系。两组间比较用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。 结果与正常鼻咽上皮细胞NP69比较,鼻咽癌细胞CNE-2、HK1、SUNE2中miR-106a-5p水平（1.00±0.11比1.84±0.13、2.19±0.14、2.87±0.25）升高,差异具有统计学意义（P < 0.05）。与对照组、Anti-NC组比较,Anti-miR-106a-5p组鼻咽癌细胞miR-106a-5p水平（1.00±0.10、0.99±0.12比0.76±0.08）降低,OD值（0.56±0.05、0.57±0.04比0.32±0.02）,细胞侵袭数[（128.47±11.65）个、（129.84±10.93）个比（85.12±6.75）个],迁移数[（182.51±14.81）个、（180.68±17.64）个比（122.01±11.62）个],vimentin蛋白表达水平（0.84±0.09、0.82±0.07比0.30±0.05）降低,E-cadherin蛋白表达水平（0.29±0.04、0.28±0.05比0.76±0.08）升高,差异具有统计学意义（P均< 0.05）。与Anti-miR-106a-inhibitor+si-NC组比较,Anti-miR-106a-inhibitor+si-PTEN组细胞OD值（0.33±0.03比0.52±0.05）、侵袭数[（84.16±5.91）个比（105.79±8.63）个]、迁移数[（118.42±10.25）个比（164.28±12.05）个]、vimentin蛋白表达水平（0.34±0.06比0.68±0.05）均升高,E-cadherin蛋白表达水平（0.72±0.06比0.29±0.05）降低,差异具有统计学意义（P均< 0.05）。 结论miR-106a-5p可通过靶向调控PTEN抑制鼻咽癌细胞SUNE2增殖和迁移潜能。     

circ_0000267靶向miR-198对急性淋巴细胞白血病细胞KOCL44增殖和凋亡的影响

目的探讨circ_0000267对急性淋巴细胞白血病（ALL）KOCL44细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。 方法选择ALL细胞株KOCL44为研究对象,分别将小干扰RNA （siRNA）阴性对照（si-NC）、circ_0000267 siRNA （si-circ_0000267）、微小RNA （miRNA）阴性对照（miR-NC）、miR-198模拟物（miR-198）、circ_0000267 siRNA+miRNA抑制剂阴性对照（si-circ_0000267+anti-miR-NC）和circ_0000267 siRNA+miR-198抑制剂（si-circ_0000267+anti-miR-198）转染细胞,48 h后通过RT-qPCR检测细胞circ_0000267和miR-198相对表达水平,采用CCK-8法检测KOCL44细胞的增殖水平,流式细胞术实验检测KOCL44细胞的凋亡水平,Western blot检测KOCL44细胞Ki-67、Bcl-2和Bax蛋白表达水平,通过双荧光素酶报告实验验证circ_0000267和miR-198靶向关系。两组间比较采用独立样本t检验。 结果与健康志愿者比较,ALL患者circ_0000267表达水平（1.00±0.06比3.19±0.21）上调,miR-198表达水平（1.00±0.07比0.41±0.03）下调,差异有统计学意义（P < 0.05）。敲低circ_0000267或者过表达miR-198可抑制KOCL44细胞增殖（0.68±0.05比0.32±0.02、0.69±0.06比0.39±0.03）、Ki-67 （0.84±0.06比0.37±0.03、0.85±0.06比0.45±0.04）和Bcl-2蛋白表达（0.63±0.05比0.22±0.02、0.65±0.04比0.29±0.02）,促进细胞凋亡[（6.53±0.51）﹪比（24.29±2.06）﹪、（7.38±0.57）﹪比（20.03±1.66）﹪]和Bax蛋白表达（0.31±0.03比0.77±0.04、0.30±0.02比0.71±0.04）,差异有统计学意义（P < 0.05）。双荧光素酶报告实验验证circ_0000267可以靶向miR-198表达,干扰miR-198表达可以逆转抑制circ_0000267表达对KOCL44细胞的增殖和凋亡的作用,差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论circ_0000267通过调控miR-198抑制ALL细胞增殖,并促进凋亡,为临床治疗ALL提供新的依据。     

miR-27a-3p通过靶向Sema7A调控病毒性心肌炎心肌细胞损伤的机制研究

目的 探讨微小RNA-27a-3p(miR-27a-3p)过表达对病毒性心肌炎(VMC)细胞损伤的影响及其可能的作用机制.方法 原代培养大鼠心肌细胞,柯萨奇B3病毒(CVB3)感染心肌细胞建立VMC模型(CVB3组).正常心肌细胞作为对照组,分别将miR-NC、miR-27a-3pmimics、si-NC、si-Sem...     

血毒清联合杂合肾脏替代治疗对重症脓毒症的疗效、血流动力学和预后干预作用的研究

目的探讨血毒清联合杂合肾脏替代治疗（HRRT）重症脓毒症的效果及对血流动力学、预后的影响。 方法选取2017年3月至2019年8月十堰市太和医院重症脓毒症患者135例,在常规治疗基础上,按简单随机化法分为血毒清组、HHRT组和血毒清联合HRRT组（联合组）,每组45例,治疗5 d。治疗前和治疗5 d后序贯器官衰竭评分（SOFA）、急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ评分（APACHEⅡ）、炎症因子指标[白细胞介素-10（IL-10）、IL-6、降钙素原（PCT）、C反应蛋白（CRP）]水平、血流动力学指标[全身血管阻力指数（SVRI）、血管外肺水指数（EVLWI）、胸腔内血容积指数（ITBVI）、心指数（CI）]及重症监护室（ICU）住院时间比较采用配对t检验,多组间差异采用方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验,3组28 d病死率采用c²检验。 结果治疗5 d后,与联合组比较,HHRT组和血毒清组SOFA评分[（4.29±1.17）分比（6.15±1.39）分、（7.03±1.52）分]、APACHEⅡ评分[（11.68±2.12）分比（14.26±3.04）分、（15.17±2.85）分]、血清IL-10 [（36.61±6.50）μg/L比（42.75±7.42） μg/ L、（45.06±8.37） μg / L]、IL-6 [（130.26±41.04） pg/ mL比（169.84±46.75） pg/ mL、（178.36±50.91） pg/ mL]、PCT [（0.87±0.29） ng/mL比（1.96±0.47） ng/mL、（2.24±0.53）ng/mL]、CRP [（34.93±9.71） mg/ L比（51.67±10.32）mg/L、（56.79±11.82）mg/L] 、EVLWI [（4.12±1.38）mL/kg比（5.38±1.69） mL/ kg、（6.04±1.85）mL/kg]降低,而SVRI [（2079.54±124.75） dyn·s·cm^{- 5}·m²比（1865.37±109.38） dyn·s·cm^-5·m²、（1796.28±131.75）dyn·s·cm^-5·m²]、ITBVI [（1189.40±92.36） mL/ m²比（986.97±75.32）mL/m²、（902.37±68.64） mL/ m²]、CI [（4.26±0.65） L·min^-1·m^-2比（3.83±0.58）L·min^-1·m^-2、（3.67±0.53）L·min^-1·m^-2]均升高,差异均有统计学意义（P < 0.05）。与联合组比较,HHRT组和血毒清组ICU住院时间[（14.82±4.40）d比（17.20±3.47）d、（18.46±4.25）d]缩短（P < 0.05）。 结论血毒清联合HRRT治疗重症脓毒症,对减少炎性因子水平,调节血流动力学具有一定作用,能够缩短ICU住院时间。     

Ghrelin-GHSR通路在急性低氧暴露大鼠胃炎症反应中的调节作用

由胃合成分泌的食欲刺激激素（ghrelin）可通过结合并激活生长激素促分泌激素受体,（growth hormone secretagogue receptor,GHSR）在调节胃功能方面发挥重要作用。急性低氧暴露导致的消化系统营养吸收障碍和胃肠道炎症反应是否通过Ghrelin-GHSR通路调控尚无研究。本研究采用Wistar大鼠为研究对象,随机分为4组：低氧暴露0 h组、12 h组、24 h组和48 h组,低氧干预在10.2%氧浓度的低氧房中进行。干预前后记录体重;通过分子生物学检测指标评价胃组织炎症因子含量、食欲刺激激素和下丘脑GHSR mRNA相对含量和蛋白质表达水平。本研究证实,随着低氧暴露时间的延长,大鼠体重减少量逐渐增加（12 h：3.73±3.08 g、24 h：8.77±5.04 g、48 h：12.53±6.16 g）;胃组织炎症因子IL-2、IL-4、IL-10、TNFα和MCP-1蛋白含量在低氧12 h后增加（4816.9±983.7 / 9074.5±1107.8 / 18895.1±2967.5 / 37.1±9.8 / 143.5±12.5 pg/mL vs. 166.1±34.6 / 38.3±4.2 / 1429.6±123.9 / 1.7±0.3 / 13.5±2.1 pg/mL）,随着低氧时间延长,炎症因子水平逐渐下降至正常水平（24 h：846.4±94.8 / 1269.8±167.9 / 5769.7±892.6 / 7.5±2.1 / 39.3±8.5 pg/mL;48 h：546.5±97.3 / 374.9±84.9 / 1889.7±982.3 / 2.1±0.8 / 24.6±6.4 pg/mL）;低氧12 h后胃组织食欲刺激激素 mRNA水平较0 h组下降（0.49±0.06 vs. 1, P < 0.05）,48 h后上升（3.79±0.54 vs. 1, P < 0.01）,胃组织的食欲刺激激素蛋白含量在低氧24 h和48 h后均出现上升（1.23±0.15 / 1.16±0.12 vs. 1, P < 0.05）;下丘脑GHSR mRNA在低氧48 h后上升（1.99±0.29 vs. 1, P < 0.01）,蛋白质水平在低氧24 h和48 h后均出现下降（0.35±0.06 / 0.48±0.04 vs. 1, P < 0.05）。表明急性低氧暴露会导致Ghrelin-GHSR通路下调,进而促进胃组织炎症反应,而随着低氧暴露时长的延续,Ghrelin-GHSR通路可通过下调胃中炎症因子水平而避免消化系统的进一步损伤。     

间充质干细胞外泌体对海马星形胶质细胞活化的抑制作用研究

目的 探讨间充质干细胞外泌体(MSC-Exo)对海马星形胶质细胞活化的抑制作用.方法 实验通过超速离心法提取脐带MSC-Exo,并使用PKH-26染料标记;MSC-Exo预处理原代海马星形胶质细胞后使用脂多糖(LPS)诱导细胞活化,并分为对照组、LPS组和LPS+MSC-Exo组,进而行免疫细胞化学检测胶质纤维酸性蛋白...     

Sonic Hedgehog通过上调Timp-3促进小鼠退行性膝关节炎的修复

刺猬因子（Hedgehog, Hh）信号通路广泛参与脊椎动物的胚胎发育和组织稳态的调控。已有报道认为，Hh参与骨性关节炎的发生和发展，但是其机制尚未详细阐述。本研究通过小鼠右后肢膝关节前交叉韧带切断手术，建立退行性膝骨关节炎小鼠模型，探索sonic hedgehog（Shh）因子在退行性膝关节炎中的作用及其机制。小鼠成功建模4周后，在模型组和假手术组小鼠膝关节腔中注射小鼠Shh-N蛋白因子，通过ELISA检测关节液中炎性因子IL-1β、TNF-α和解聚素金属4（a disintegrin and metalloprotease with thrombospondin motifs4，ADAMTS-4）蛋白酶的水平，以及通过qRT-PCR检测软骨组织中金属蛋白酶组织抑制剂-3（metalloproteinase inhibitor 3，Timp-3）基因的表达。结果显示，与假手术组相比，退行性膝骨关节炎模型小鼠骨关节腔内，IL-1β和TNF-α水平显著增高（24.5±5 vs 251.0±17.5 pg/mL，P < 0.001；16.5±3.4 vs 197.0±15.6 pg/mL, P < 0.001）；与PBS对照组相比， Shh-N组小鼠关节液中炎性因子的IL-1β和TNF-α水平明显降低（116.0±8.7 vs 251.0±17.5 pg/mL，P < 0.001； 89.0±7.8 vs 197.0±15.6 pg/mL, P < 0.001）。其中，小鼠的攀爬时间（1 700.0±185.6 vs 116±8.7 s，P < 0.001）和长距离运动能力均有显著改善（174.0±162.3 vs 132.0±34.5 m，P < 0.001）；qRT-PCR结果显示，软骨组织中Timp-3基因表达明显增高（5.0±0.3 vs 2.4±0.6 fold，P < 0.001）。同时，伴随着ADAMTS-4的水平显著降低（P < 0.001）。本研究提示，Shh因子显著改善小鼠退行性膝关节炎的恢复，其机制可能是通过上调Timp-3基因的表达，降解内源性聚蛋白多糖酶而实现的。