Notch1信号通路激活在低氧诱导人脐静脉内皮细胞血管形成中的作用

目的观察低氧条件下HIF-1α/VEGF/Notch信号通路在人脐静脉内皮细胞（HUVEC）血管生成中的作用。 方法将HUVEC进行常氧和低氧[二氯化钴（CoCl2）,200 μmol/L]诱导,再将常氧和低氧处理的HUVEC应用Notch1信号通路的抑制剂DAPT （30 μmol/L,24 h）和激活剂JAG-1 （30 μmol/L,24 h）干预。通过体外小管形成实验观察低氧对HUVEC血管生成能力的影响。应用RT-PCR和Western blot检测HUVEC中低氧诱导因子-1α （HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶-9 （MMP-9）和Notch1信号分子（Notch1、Dell4和JAG-1）的mRNA和蛋白表达。通过Transwell迁移实验和伤口愈合实验观察低氧、DAPT、JAG-1对HUVEC迁移能力的影响。应用MTT法检测低氧及Notch1对HUVEC增殖的影响。两组间比较采用t检验,采用析因设计方差分析低氧和DAPT以及低氧和JAG-1对HUVEC迁移能力、距离、小管形成能力和细胞增殖的交互作用。 结果与常氧组比较,低氧组小管总长[（8.18±0.62）mm比（15.43±1.32）mm]增高,差异具有统计学意义（P < 0.05）。与常氧组比较,低氧组的HIF-1α、VEGF、MMP-9、Notch1、Dell4和JAG-1的mRNA相对表达量和蛋白相对表达量（1.01±0.03比4.43±0.35,1.02±0.03比3.55±0.28,0.98±0.04比3.24±0.25,1.01±0.03比3.22±0.25,0.99±0.02比2.89±0.22,1.02±0.04比2.43±0.19,0.98±0.01比3.13±0.24,0.98±0.02比2.67±0.21,0.97±0.03比2.45±0.19,1.01±0.03比2.44±0.19,1.00±0.04比2.30±0.18,1.03±0.05比2.27±0.18）均升高,差异有统计学意义（P均< 0.05）。Transwell迁移实验和伤口愈合实验显示,低氧条件下,DAPT干预使HUVEC的迁移能力降低,JAG-1干预使HUVEC的迁移能力升高（P均< 0.05）。小管形成和MTT法测定显示,低氧条件下,DAPT干预使HUVEC的小管形成能力和细胞增殖能力降低,JAG-1干预使HUVEC的小管形成能力和细胞增殖能力升高（P均< 0.05）。析因设计的方差分析结果显示,低氧和JAG-1对迁移细胞数、小管形成和细胞增殖能力交互作用具有协同作用（P < 0.05）。 结论低氧可通过激活HIF-1α/VEGF/Notch1信号通路提高HUVEC的血管生成能力、迁移能力和细胞增殖能力。     

miR-106a-5p调控 PTEN对鼻咽癌细胞SUNE2增殖和迁移的抑制作用研究

目的研究miR-106a-5p对鼻咽癌细胞SUNE2增殖和迁移的影响。 方法将体外培养的鼻咽癌细胞SUNE2分成对照组（细胞未做任何处理）、Anti-NC组（转染阴性对照抑制剂）、Anti-miR-106a-5p组（转染miR-106a-5p抑制剂）、后期实验另设Anti-miR-106a-5p-inhibitor+si-NC组（转染miR-106a-5p抑制剂、siRNA阴性对照）、Anti-miR-106a-5p-inhibitor+si-PTEN组（转染miR-106a-5p抑制剂、PTEN siRNA）,采用Realtime PCR测定miR-106a-5p表达,MTT法检测增殖,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力变化,用Western blot方法测定vimentin、E-cadherin蛋白表达。在线靶基因预测软件预测miR-106a-5p的靶基因可能为PTEN,双荧光素酶报告系统鉴定miR-106a-5p和PTEN的靶向关系。两组间比较用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。 结果与正常鼻咽上皮细胞NP69比较,鼻咽癌细胞CNE-2、HK1、SUNE2中miR-106a-5p水平（1.00±0.11比1.84±0.13、2.19±0.14、2.87±0.25）升高,差异具有统计学意义（P < 0.05）。与对照组、Anti-NC组比较,Anti-miR-106a-5p组鼻咽癌细胞miR-106a-5p水平（1.00±0.10、0.99±0.12比0.76±0.08）降低,OD值（0.56±0.05、0.57±0.04比0.32±0.02）,细胞侵袭数[（128.47±11.65）个、（129.84±10.93）个比（85.12±6.75）个],迁移数[（182.51±14.81）个、（180.68±17.64）个比（122.01±11.62）个],vimentin蛋白表达水平（0.84±0.09、0.82±0.07比0.30±0.05）降低,E-cadherin蛋白表达水平（0.29±0.04、0.28±0.05比0.76±0.08）升高,差异具有统计学意义（P均< 0.05）。与Anti-miR-106a-inhibitor+si-NC组比较,Anti-miR-106a-inhibitor+si-PTEN组细胞OD值（0.33±0.03比0.52±0.05）、侵袭数[（84.16±5.91）个比（105.79±8.63）个]、迁移数[（118.42±10.25）个比（164.28±12.05）个]、vimentin蛋白表达水平（0.34±0.06比0.68±0.05）均升高,E-cadherin蛋白表达水平（0.72±0.06比0.29±0.05）降低,差异具有统计学意义（P均< 0.05）。 结论miR-106a-5p可通过靶向调控PTEN抑制鼻咽癌细胞SUNE2增殖和迁移潜能。     

FBXO6介导的ERO1L泛素化降解对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用研究

目的探究F盒蛋白6 （FBXO6）对膀胱癌细胞的作用及其作用机制。 方法体外培养人正常膀胱上皮细胞株（SV-HUC-1）和人膀胱癌细胞株（T24）。用过表达载体阴性对照（oe-NC）、过表达FBXO6 （oe-FBXO6）、过表达内质网氧化还原蛋白-1样蛋白（oe-ERO1L）及oe-FBXO6和oe-ERO1L慢病毒液（MOI = 20）感染T24细胞。RT-qPCR检测细胞FBXO6和ERO1L mRNA表达;放线菌酮（CHX）蛋白合成抑制实验检测T24细胞ERO1L蛋白稳定性;免疫共沉淀（Co-IP）实验检测FBXO6对ERO1L泛素化调控;Western blot检测细胞FBXO6和ERO1L蛋白表达;CCK-8检测细胞活力;克隆形成实验检测细胞增殖;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。 结果与SV-HUC-1相比,T24细胞中FBXO6 mRNA （1.00±0.05比0.33±0.02）和蛋白表达（1.00±0.11比0.31±0.03）均降低（P均< 0.05）,而ERO1L mRNA （1.00±0.05比2.70±0.12）和蛋白表达（1.00±0.16比3.27±0.09）均升高（P均< 0.05）。FBXO6可降低ERO1L蛋白稳定性并促进ERO1L泛素化。与空白对照和oe-NC相比,oe-FBXO6细胞中FBXO6 mRNA （1.00±0.06比3.74±0.18）和蛋白表达（1.00±0.10比2.25±0.06）均升高,ERO1L蛋白表达（0.99±0.08比0.21±0.03）,细胞活力、克隆形成数[（78.00±3.00）比（41.67±2.52）个]、迁移[（150.67±5.03）比（91.67±5.51）个]和侵袭细胞数[（122.00±7.00）比（74.67±5.51）个]均降低（P均< 0.05）;与oe-NC相比,oe-ERO1L细胞中ERO1L蛋白表达（1.01±0.06比2.58±0.02）、细胞活力、克隆形成数[ （78.00±3.00）比（121.67±7.64）个]、迁移[（150.67±5.03）比（230.33±12.01）个]和侵袭细胞数[（122.00±7.00）比（203.00± 11.53）个]均升高（P均< 0.05）;与oe-FBXO6相比,oe-FBXO6+oe-ERO1L细胞中ERO1L蛋白表达（0.54±0.02比1.02±0.06）,细胞活力、克隆形成数[（41.67±2.52）比（62.00±3.61）个]、迁移[（91.67±5.51）比（131.67±6.03）个]和侵袭细胞数[（74.67±5.51）比（102.67±7.51）个]均升高（P均< 0.05）。 结论FBXO6通过介导ERO1L泛素化降解抑制膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

RPA1低表达对辐射抵抗人鼻咽癌CNE-2R细胞侵袭迁移及细胞周期的影响*

目的: 探讨复制蛋白A1(RPA1)沉默对人鼻咽癌CNE-2R细胞侵袭、迁移及细胞周期的影响。方法: 采用shRNA技术构建RPA1低表达的CNE-2R细胞模型并通过RT-PCR和Western blot实验验证。选用空白对照组(CNE-2R)、阴性对照组(NC-shRNA)、RPA1低表达组(RPA1-shRNA)3组细胞完成后续实验,通过CCK8和克隆形成实验检测细胞增殖能力、Transwell实验检测侵袭能力、划痕实验检测迁移能力,流式细胞术检测细胞周期;Western blot实验检测Chk2、p-Chk2、Cdc25c和p-cdc25c蛋白的表达。结果: 与CNE-2R和NC-shRNA组比较,RPA1-shRNA组细胞的RPA1mRNA和蛋白质均显著降低(P＜0.01和＜0.05);RPA1-shRNA组组细胞的增殖、侵袭、迁移能力显著下降(P均＜ 0.05),细胞周期被阻滞在G2/M期(P＜0.01);RPA1-shRNA组细胞Chk2、Cdc25c的表达低于CNE-2R和NC-shRNA组细胞(P＜0.05), 而p-Chk2、p-cdc25c的表达高于其它两组(P ＜0.05)。结论: RPA1低表达抑制辐射抵抗人鼻咽癌CNE-2R细胞的增殖、迁移以及使细胞周期阻滞于G2/M期。     

沉默DEPDC1抑制鼻咽癌细胞HNE-1和CNE-1侵袭迁移

DEPDC1(DEP domain containing 1)是一个新的肿瘤相关基因,在多种恶性肿瘤的发生发展进程中起着重要作用。我们前期工作中在鼻咽癌细胞内沉默了DEPDC1的表达,发现抑制细胞增殖并诱发细胞凋亡。本研究旨在探讨沉默DEPDC1表达后,对鼻咽癌细胞HNE-1和CNE-1侵袭迁移能力的影响及其分子机制。结果显示,siRNA介导DEPDC1表达沉默后,细胞侧向运动能力、侵袭及迁移能力显著降低。qRT-PCR及Western印迹检测发现DEPDC1沉默导致EMT上游关键转录因子Twist1及间质细胞标志分子Vimentin表达显著下调。这些研究表明,鼻咽癌细胞中DEPDC1通过调节Twist1等EMT关键分子的表达在细胞侵袭转移过程中起关键作用。推测DEPDC1在鼻咽癌中高表达可能对于促进其侵袭转移具有重要作用,进而促进肿瘤发生发展,但具体分子机制仍有待更深入研究。     

miR-363-3p靶向 TWIST1调控上皮间质转化抑制非小细胞肺癌A549细胞迁移和侵袭

目的探讨miR-363-3p靶向TWIST1调控非小细胞肺癌A549细胞迁移和侵袭的分子机制。 方法将体外培养的A549细胞分为空白对照组（细胞未做任何处理）;模拟物对照组（转染miR-363-3p模拟物阴性对照）;模拟物组（转染miR-363-3p模拟物）;后期实验另设：模拟物+ pcDNA组（转染miR-363-3p模拟物和pcDNA3.1空载体质粒）;模拟物+ TWIST1组（转染miR-363-3p模拟物和pcDNA3.1-TWIST1过表达质粒）。采用RT-PCR检测细胞中miR-363-3p的表达,Western blot检测细胞中TWIST1蛋白和上皮间质转化（EMT）相关蛋白Vimentin、E-cadherin的表达,Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭。双荧光素酶报告基因实验检测miR-363-3p和TWIST1的靶向关系。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。 结果与空白对照组和模拟物对照组比较,模拟物组A549细胞中miR-363-3p表达水平（1.00±0.08、0.97±0.05比3.82±0.45）升高,TWIST1 mRNA （1.00±0.06、0.98±0.06比0.39±0.02）和蛋白的表达水平（0.81±0.05、0.78±0.06比0.42±0.02）降低,差异具有统计学意义（P均< 0.05）。与空白对照组和模拟物对照组比较,模拟物组A549细胞Vimentin蛋白表达水平（0.58±0.04、0.55±0.05比0.36±0.03）降低,E-cadherin蛋白的表达水平（0.22±0.02、0.25±0.03比0.47±0.03）增高,迁移细胞数（85.75±5.45、83.52±6.85比53.05±4.50）和侵袭细胞数（128.26±6.15、125.95±8.05比71.64±5.75）降低,差异有统计学意义（P均< 0.05）。与模拟物对照组比较,模拟物组细胞中Vimentin蛋白的表达水平（0.55±0.05比0.36±0.03）降低,而E-cadherin蛋白表达水平（0.25±0.03比0.47±0.03）升高,迁移细胞数（83.52±6.85比53.05±4.50）和侵袭细胞数（125.95±8.05比71.64±5.75）均减少（P均< 0.05）。TWIST1是miR-363-3p潜在的靶基因。与模拟物+ pcDNA3.1组比较,模拟物+ TWIST1组A549细胞中Vimentin蛋白的表达水平（0.32±0.02比0.42±0.03）升高,而E-cadherin蛋白表达水平（0.56±0.04比0.38±0.03）降低,A549细胞的迁移数（49.45±4.22比67.52±5.05）和侵袭数（72.45±5.73比108.35±6.56）增加（P均< 0.05）。 结论miR-363-3p可通过靶向TWIST1调控EMT抑制A549细胞迁移和侵袭。     

lncRNA RPL34-AS1通过靶向调控miR-575表达对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响

目的探究RPL34-AS1对卵巢癌细胞增殖、迁移的影响及其作用机制。 方法取对数生长期SKOV3细胞用无血清培养基同步化12 h,将pcDNA、pcDNA-RPL34-AS1、si-NC、si-RPL34-AS1、anti-miR-NC、anti-miR-575转染至SKOV3细胞中,分别记为pcDNA组、pcDNA-RPL34-AS1组、si-NC组、si-RPL34-AS1组、anti-miR-NC组、anti-miR-575组;将pcDNA-RPL34-AS1与miR-NC、miR-575分别共转染至SKOV3细胞中,记为pcDNA-RPL34-AS1+miR-NC组、pcDNA-RPL34-AS1+miR-575组。实时荧光定量PCR （RT-qPCR）检测临床组织标本及转染后各组细胞中RPL34-AS1和miR-575的表达水平;双荧光素酶报告实验检测RPL34-AS1和miR-575的靶向关系;四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹（Western blot）法检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A （p21）、B细胞淋巴瘤/白血病-2 （Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。 结果与癌旁组织相比,卵巢癌组织中RPL34-AS1表达水平降低（1.00±0.08比0.47±0.05）,miR-575表达水平升高（1.01±0.07比3.12±0.28）（P < 0.05）。转染si-RPL34-AS1后,细胞活性升高（48 h：0.68±0.06比0.55±0.05;72 h：0.99±0.08比0.71±0.06）,G1期细胞所占比例降低（13.42±1.38比32.15±2.11）,S期细胞所占比例升高（53.75±5.22比34.69±3.41）,细胞凋亡率降低（4.31±0.42比9.25±0.91）,CyclinD1、Bcl-2表达水平升高（0.92±0.08比0.71±0.07;0.86±0.07比0.61±0.06）,p21、Bax表达水平降低（0.13±0.02比0.29±0.03;0.19±0.02比0.31±0.03） （P均< 0.05）。RPL34-AS1靶向调控miR-575,过表达RPL34-AS1或抑制miR-575后可抑制细胞活性,阻滞细胞周期和促进细胞凋亡。miR-575过表达逆转了RPL34-AS1过表达对卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制和凋亡促进的作用。 结论过表达RPL34-AS1可抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与下调miR-575有关。     

miR-98-5p靶向PYGO2基因对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制研究

目的探讨miR-98-5p对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及其作用机制。 方法选取2016年1月至2019年1月郴州市第一人民医院收治的宫颈癌患者的癌组织和癌旁组织;予以miR-98-5p、si-PYGO2及anti-miR-98-5p单独或共培养Siha细胞,记为：miR-NC组、miR-98-5p组、si-NC组、si-PYGO2组、anti-miR-NC组、anti-miR-98-5p组、miR-98-5p+pcDNA组、miR-98-5p+pcDNA-PYGO2组。运用qRT-PCR检测宫颈癌组织和细胞中miR-98-5p和PYGO2 mRNA的表达水平;Western blot检测蛋白表达;MTT法检测细胞增殖活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;将WT-PYGO2、MUT-PYGO2分别与miR-NC、miR-98-5p共转染至Siha细胞中,双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。采用方差分析和t检验进行统计学分析。 结果与癌旁组织相比,宫颈癌组织中miR-98-5p表达水平降低（0.98±0.08比0.47±0.05）,PYGO2 mRNA （1.00±0.07比2.43±0.24）和蛋白表达水平（0.27±0.03比0.62±0.05）均升高（P均< 0.001）。与正常宫颈细胞Ect1/E6E7相比,宫颈癌细胞Siha、Hela、Caski中PYGO2 mRNA （0.98±0.09比2.76±0.23、2.46±0.24、2.55±0.21）和蛋白表达水平（0.21±0.03比0.62±0.06、0.51±0.05、0.57±0.06）升高;miR-98-5p的表达水平降低（1.00±0.08比0.34±0.04、0.56±0.05、0.46±0.04） （P均< 0.05）。与miR-NC组相比,miR-98-5p组宫颈癌Siha细胞活性（48 h：0.61±0.05比0.42±0.04,72 h：1.02±0.09比0.59±0.06）、迁移数量[ （112.46±10.27）个比（48.35±4.96）个]及侵袭数量[ （92.47±9.56）个比（39.46±3.52）个]均降低（P均< 0.05）。与si-NC组相比,si-PYGO2组宫颈癌Siha细胞活性（48 h：0.64±0.06比0.46±0.05,72 h：1.05±0.08比0.67±0.06）、Siha迁移数量[ （106.48±9.75）个比（42.16±4.25）个]和侵袭数量[ （87.63±8.11）个比（35.42±6.20）个]均降低（P均< 0.05）;Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、MMP-14表达水平降低,p21、p27表达水平升高,差异有统计学意义（P均< 0.05）。与miR-NC组比较,miR-98-5p组转染WT-PYGO2的Siha细胞荧光素酶活性（0.38±0.04比0.99±0.08）降低（P < 0.05）,转染MUT-PYGO2的Siha细胞荧光素酶活性（1.03±0.08比1.01±0.09）差异无统计学意义（P > 0.05）。PYGO2过表达逆转了miR-98-5p过表达对宫颈癌Siha细胞的增殖、迁移和侵袭的抑制作用。 结论miR-98-5p可抑制宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与其靶向调控PYGO2的表达有关,将可为宫颈癌的预防和治疗提供新靶点。     

KGF联合HIF-1α对BECN1敲除IEC-6细胞缺氧的保护作用及机制

摘要 目的：探讨KGF联合HIF-1α对BECN1敲除后的IEC-6细胞在缺氧应激状态下的保护作用及相关机制。方法：构建敲除BECN1基因的稳定细胞系IEC-6B-细胞,分为空白对照组（BC）、阴性对照组（NC）、HIF-1α组、KGF联合HIF-1α组（KH）。观察细胞形态学改变。检测细胞存活率、ATP含量、细胞周期和细胞凋亡率。检测自噬相关基因表达水平和凋亡、自噬相关蛋白的表达。结果：低氧处理24 h后,各组细胞可见梭形、星形及其它异常形态变化;NC组细胞胞质内可见大量大小不一的吞噬溶酶体泡;其他各组细胞呈现细胞早期凋亡形态变化,BC组和KH组细胞胞质中可见自噬泡。与BC组相比较,各敲除组细胞存活率均显著降低（P<0.01）,其中KH组细胞存活率高于NC组、KGF组及HIF-1α组（P<0.05）。BC组细胞内ATP含量均显著高于其他各组（P<0.05）。与BC组和KH组比较,其他三组细胞G0/G1期百分比显著增加,细胞凋亡率均显著增加（P<0.05）。与BC组相比较,其余各组细胞自噬基因BECN1、SQSTM1及LC3基因mRNA表达均显著降低（P<0.05）;Beclin 1蛋白及LC3 II/LC3 I的比值均显著降低（P<0.05）,且p62蛋白表达显著增加（P<0.05）。KH组的Bax/Bcl-2的比值、Caspase3蛋白表达低于NC组（P<0.05）。结论：KGF联合HIF-1α能促进细胞增殖、增强细胞能量代谢、减少G₀/G₁期阻滞细胞率、抑制细胞凋亡作用,对低氧应激的IEC-6B-细胞具有保护作用。     

miR-491-5p靶向调控SHOC2对食管鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-491-5p对食管鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及作用机制。 方法培养永生化食管上皮细胞株HET-1A和人食管癌细胞株EC109,EC9706,KYSE510,qRT-PCR检测细胞中miR-491-5p和富含亮氨酸重复蛋白SHOC2 （SHOC2） mRNA水平。EC109细胞分为空白对照组、miR- 491-5p组、miR-NC组、miR-491-5p+pcDNA-SHOC2组和miR-491-5p+pcDNA组,MTT检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western Blot法检测CyclinD1、Vimentin、E-cadherin以及MAPK/ERK信号通路相关蛋白水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR- 491- 5p与SHOC2之间调控关系。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK-q检验。 结果食管鳞癌细胞EC109、EC9706和KYSE510中miR-491-5p表达水平低于HET-1A细胞（0.32±0.06、0.62±0.10、0.61±0.08比1.00±0.08）,差异具有统计学意义（F = 106.340,P < 0.001）;SHOC2 mRNA表达水平高于HET- 1A细胞（2.85±0.16、1.73±0.10、1.45±0.06比1.02±0.09）,差异具有统计学意义（F = 464.949,P < 0.001）。miR-491-5p组EC109细胞培养72 h后的OD值、细胞迁移数、侵袭数及CyclinD1、Vimentin、p-MEK和p-ERK蛋白水平均低于miR-NC组（0.70±0.06比1.42±0.08,65.01±10.36比150.01±12.48,70.03±10.26比140.02±11.85,0.30±0.03比0.93±0.16,0.41±0.05比0.86±0.08,0.32±0.06比0.95±0.11,0.40±0.06比0.92±0.13）,差异具有统计学意义（F = 236.565、159.440、120.706、101.071、98.619、130.766、77.046,P均< 0.001）,E-cadherin蛋白水平高于miR-NC组（0.89±0.13比0.48±0.08）,差异具有统计学意义（F = 816.432,P < 0.001）。miR-491-5p在EC109细胞中负调控SHOC2表达,SHOC2过表达逆转了miR-491-5p过表达对EC109细胞增殖、迁移和侵袭及MAPK/ERK信号通路的影响。 结论miR-491-5p可抑制食管鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与下调SHOC2表达抑制MAPK/ERK信号通路活性有关。     

lncRNA MAGI2-AS3下调miR-31-5p抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭并促进凋亡

目的研究lncRNA MAGI2-AS3对肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响和潜在的分子机制。方法根据转染载体不同将A549细胞分为pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1)、pcDNA3.1-MAGI2-AS3组(转染pcDNA3.1-MAGI2-AS3)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-31-5p组(转染anti-miR-31-5p)、pcDNA3.1-MAGI2-AS3+miR-NC组(共转染pcDNA3.1-MAGI2-AS3和miR-NC)、pcDNA3.1-MAGI2-AS3+miR-31-5p组(共转染pcDNA3.1-MAGI2-AS3和miR-31-5p mimics)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-31-5p和MAGI2-AS3 RNA的表达,四氮唑蓝(MTT)法测定A549细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告系统验证MAGI2-AS3与miR-31-5p的调控关系,流式细胞术检测细胞凋亡与周期。两组间比较采用独立样本t检验进行分析;多组间比较采用单因素方差分析,组内多重比较采用SNK-q检验。结果与人正常肺细胞HBE相比,肺癌细胞A549中的MAGI2-AS3表达量(0.48±0.03比1.29±0.06)降低,miR-31-5p表达量(1.01±0.05比0.25±0.02)升高;与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-MAGI2-AS3组A549细胞活力(0.48±0.04比0.77±0.06)、迁移[(81.33±2.87)个比(124.33±3.09)个]和侵袭[(32.00±2.83)个比(53.00±3.27)个]细胞数、S期细胞所占比例(23.01﹪±1.00﹪比32.95﹪±1.06﹪)均降低,凋亡率(19.95﹪±1.25﹪比7.23﹪±0.51﹪)、G0-G1期细胞所占比例(43.58﹪±2.15﹪比33.56﹪±1.23﹪)均升高;与anti-miR-NC组比较,anti-miR-31-5p组A549细胞活力(0.53±0.04比0.78±0.06)、迁移[(76.00±3.74)个比(108.33±2.87)个]和侵袭[(30.00±1.63)个比(42.33±2.05)个]细胞数、S期细胞所占比例(24.43﹪±1.13﹪比32.91﹪±1.08﹪)降低,凋亡率(18.21﹪±1.24﹪比7.29﹪±0.51﹪)、G0-G1期细胞所占比例(41.56﹪±2.19﹪比33.53﹪±1.27﹪)升高,差异有统计学意义(P均<0.05);双荧光素酶报告系统结果显示,MAGI2-AS3靶向负调控miR-31-5p的表达。与pcDNA3.1-MAGI2-AS3+miR-NC组比较,pcDNA3.1-MAGI2-AS3+miR-31-5p组A549细胞活力(0.68±0.06比0.50±0.04)、迁移[(91.00±1.63)个比(52.67±2.62)个]和侵袭[(62.67±2.49)个比(31.67±4.03个)]细胞数升高,凋亡率(10.59﹪±1.0﹪比21.11﹪±1.14﹪)降低,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论lncRNA MAGI2-AS3通过靶向miR-31-5p抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。lncRNA MAGI2-AS3是肺癌潜在分子治疗靶点。     

Long intergenic noncoding RNA 00641 inhibits breast cancer cell proliferation,migration, and invasion by sponging miR-194-5p

Long noncoding RNAs have an essential role in the tumorigenesis of breast cancer (BC). Nonetheless, the consequences of long intergenic noncoding RNA 00641 (LINC00641) in BC remain unidentified. This study shows that LINC00641 expression level was decreased in BC tissues. LINC00641 expression level was negatively related to tumor size, lymph-node metastasis, as well as clinical stage. LINC00641 overexpression inhibited cell proliferation, migration, and invasion but stimulated apoptosis in BC cells. LINC00641 overexpression also remarkably reduced BC growth and metastasis in vivo. LINC00641 acts as a competitive endogenous RNA to sponge miR-194-5p. miR-194-5p level was higher in BC tissues and cells compared with normal-adjacent tissues and normal breast epithelial cell. miR-194-5p expression was negatively correlated with LINC00641 expression in BC tissues. miR-194-5p overexpression reversed the effects of LINC00641 on cell proliferation, cycle, apoptosis, migration, as well as invasion. In conclusion, LINC00641 inhibits BC cell proliferation, migration, as well as invasion by sponging miR-194-5p.     

鼻咽癌联合基因治疗的体外研究

目的:探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT),癌基因蛋白(C-myc),存活素(Survivin),血管内皮生长因子(VEGF)基因对人类鼻咽癌细胞生长的影响,以及同时编码四个基因的短发夹重组质粒对人鼻咽癌细胞生长抑制作用及机制。方法:利用基因重组技术构建一个同时靶向作用四个基因的短发夹双链RNA(shRNA)真核表达载体和靶向单独作用hTERTmRNA的shRNA真核表达载体,脂质体法转染人CNE-2Z细胞;试验分组:空白对照组BC组(不进行干扰),阴性对照组NC组(加入阴性质粒),A组(hTERT单基因质粒组),B组(多基因联合质粒组)。激光共聚焦显微镜观察转染情况;MTT法检测细胞增殖活性;RT-PCR和Western blot法分别检测转染后细胞内各基因mRNA和蛋白表达情况。结果:MTT法检测,与BC相,NC组相比,A组和B组的细胞增殖活性均降低,与A组相比,B组的增殖活性降低更显著;RT-PCR,Western blot法,A组和B组mRNA和蛋白表达水平均降低,B组降低更显著。结论:四个基因共同参与了鼻咽癌细胞的发生和发展。多个基因的联合干扰与单基因干扰相比,能更高效下调各基因蛋白在鼻咽癌细胞的表达水平,更好抑制鼻咽癌细胞的增殖。     

骨髓间充质干细胞对重症急性胰腺炎胰腺组织修复的促进作用研究

目的观察骨髓间充质干细胞（BMSCs）抑制坏死性凋亡促进修复重症急性胰腺炎（SAP）的可能机理。 方法（1）分离、培养和鉴定大鼠BMSCs;（2）构建牛磺胆酸钠（NaT）诱导的SAP大鼠模型,并分成正常组（NC）、假手术组（Sham）、SAP模型组（SAP）、PBS治疗组（PBS）、BMSCs治疗组和Necrostain-1 （Nec-1）治疗组,并检测胰腺病理评分和血淀粉酶水平;（3）运用Western Blot和qRT-PCR方法检测各组受损胰腺组织内RIPK1、RIPK3、Caspase-8、MLKL蛋白及mRNA表达,各组均数间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验。 结果BMSCs可以被诱导分化成骨、软骨、脂肪,并高表达CD44 （99.82﹪）、CD73 （99.87﹪）、CD90 （99.99﹪）、CD105 （99.78﹪）,低表达CD11b （0.65﹪）、CD19 （0.85﹪）、CD34 （0.70﹪）和CD45 （1.20﹪）。SAP组胰腺病理评分（12.90±1.79）及血淀粉酶水平（1052.41±183.12） mU/ ml均高于NC组[评分：0.40±0.52,淀粉酶水平：（236.62±33.21） mU/ ml]和Sham组[评分：0.50±0.53,淀粉酶水平：（242.31±27.94） mU/ ml]（F = 200.275,F = 143.245,P均< 0.001）,且SAP组受损胰腺组织内RIPK1、RIPK3、MLKL表达升高、Caspase-8表达降低（F = 179.905,P < 0.001）;BMSCs组和Nec-1治疗组胰腺病理评分及血淀粉酶水平均低于PBS治疗组[评分：7.20±1.23、7.00±1.05比12.60±1.65,F = 200.275,P < 0.001;淀粉酶水平：（452.21±101.68）mU/ml、（570.18±148.47） mU/ml比（972.77±204.29） mU/ml,F = 143.245,P < 0.001],同时受损胰腺组织内RIPK1、RIPK3、MLKL表达下调、Caspase-8表达升高（F = 179.905,P < 0.001）。 结论BMSCs可能通过抑制坏死性凋亡通路活化来修复SAP。     

低强度超声对HeLa肿瘤细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的探讨低强度超声在诱导HeLa肿瘤细胞凋亡中的作用及其机制。 方法将体外培养的HeLa肿瘤细胞根据超声干预强度分为阴性对照组（切断电源后给予假的超声干预）和0.5、1.3、2.0 W/cm²超声干预组,分别通过MTT实验测定细胞活力、存活率,HE染色检测细胞形态,细胞凋亡实验检测细胞凋亡率,流式细胞术测定ROS含量及Western blot实验检测caspase-12、survivin和内参蛋白β-actin的表达情况。多组间比较采用单因素方差分析,各个实验组与对照组比较采用Dunnet-t检验。 结果与阴性对照组比较,0.5、1.3、2.0 W/ cm²超声干预组的HeLa肿瘤细胞活力[（99.23±1.56）﹪比（80.52±1.72）﹪、（54.31±1.69）﹪（27.75±1.26）﹪]、细胞存活率[（99.91±1.51）﹪比（76.69±1.92）﹪、（52.57±1.63）﹪、（29.81±1.22）﹪]、survivin蛋白表达（51.19±0.21比43.46±0.34、25.28±0.29、18.32±0.3）均降低,ROS含量（11.21±0.45比24.34±1.23、38.26±2.47、52.18±1.56）,细胞凋亡率[（4.23±1.21）﹪比（24.16±1.91）﹪、（48.34±1.66）﹪、（70.27±0.98）﹪]、caspase-12蛋白表达（13.05±0.21比20.23±0.19、33.17±0.32、41.52±0.21）均升高,差异具有统计学意义（P均< 0.05）。 结论低强度超声可能通过诱导HeLa肿瘤细胞中caspase-12蛋白表达增加和survivin蛋白表达的减少而使HeLa肿瘤细胞发生凋亡。     

Effect of IL-17A on the Migration and Invasion of NPC Cells and Related Mechanisms

In carcinogenesis, inflammasomes may play contradictory roles through facilitating anti-tumor immunity or inducing oncogenic factors. Their function in cancer remains poorly characterized. In this study, we explored the effect of interleukin-17A (IL-17A) on the migration and invasion activity of nasopharyngeal carcinoma (NPC) cell lines and account for related mechanisms. Our results revealed that exogenous IL-17A promoted cell migration and invasion significantly in both NPC-039 and CNE-2Z cell lines. In addition, the expression of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2)/-9 and Vimentin could be elevated by IL-17A stimulation; meanwhile the expression of E-cadherin was decreased. The results also show that IL-17A could activate the p38 signaling pathway in IL-17A-stimulated NPC-039 and CNE-2Z cell lines. Combining treatment with a p38 inhibitor (SB203580) resulted in decreased invasion capabilities of NPC-039 and CNE-2Z cell lines. SB203580 also inhibited the expression of MMP-2/-9 and increased the expression of E-cadherin in IL-17A-stimulated NPC-039 and CNE-2Z cell lines. IL-17A also could activate NF-κB in NPC-039 and CNE-2Z cell lines. In summary, our data show that IL-17A promote the cell migration and invasion of NPC cells. The effect of IL-17A on cell migration and invasion may be mediated via regulation of the expression of MMP-2/-9 and epithelial-mesenchymal transition (EMT) via p38-NF-κB signaling pathway. Thus, IL-17A or its related signaling pathways may be a promising target for preventing and inhibiting NPC metastasis.