蝉拟青霉代谢产物清除DPPH自由基和抗真菌活性的研究

用二苯代苦味肼基自由基(DPPH)-TLC法和酶标仪法对一株蝉拟青霉P3菌丝体和发酵液甲醇提取物的清除自由基活性进行了定性和定量测定,发现两种提取物具有较强的清除自由基活性,在浓度为5.0mg/mL,于37℃下保温10min时,两种样品对0.4mg/mL的DPPH自由基的清除率分别可达55.52%和74.86%.以一种黑曲霉菌为指示菌,采用薄层色谱法对蝉拟青霉菌丝体和发酵液甲醇提取物进行抑菌活性试验,实验中根据抑菌圈大小判定代谢物抑菌活性的大小.同时,以致病菌白色假丝酵母菌为指示菌,采用牛津杯法对提取物进行进一步抑菌活性验证,结果表明,菌丝体和发酵液提取物样品浓度为5.0mg/mL时,其抑菌圈直径分别可达11.23mm和21.42mm.     

链霉菌HNS2-2生物活性物质理化性质的初步研究

目的:初步研究链霉菌HNS2-2(Streptomycete HNS2-2)生物活性物质的理化性质.方 法:以金黄色葡萄球菌(Staphlococcus)为指示菌,以抑菌圈直径为指标,测定链霉菌HNS 2-2发酵液经不同理化因子处理后的抑菌效果.结果:该菌株发酵液中生物活性物质对80℃以 下处理20min不敏感,40～80℃时抑菌圈直径平均为14.6mm,而100～120℃为10.2mm;pH 4 ～6 时抑菌圈直径最大为15.2mm;阳光光照影响较大,照射2h其抑菌圈直径比日光灯照组减小31 %;可用乙酸乙酯等极性较大的溶剂萃取,能溶于水;Doskochilov八溶剂系统纸层析属于 多烯类抗菌活性物质.结论:该菌株发酵液中生物活性物质具有良好的热稳定性、耐酸碱性、水溶性和强极性,经纸层析初步鉴定为多烯类抗菌活性物质.     

灵芝液体发酵清除自由基活性产物发酵条件的优化

以红灵芝(Ganoderma.lucidum)为实验菌株,对其液体发酵活性产物清除自由基的发酵条件进行了研究。实验考察了培养基成分对灵芝液体发酵所产生的有效产物清除自由基能力的影响。结果表明,葡萄糖、酵母粉分别为灵芝发酵活性产物清除自由基效果较合适的碳源、氮源,最佳质量浓度分别为40 g.L-1和3 g.L-1,清除自由基的能力分别为55.7%、40.8%和66.5%、50.6%;铁离子对灵芝发酵产物清除超氧阴离子具有明显的效果,适宜质量分数为70×10-6;清除超氧阴离子的能力为54.6%,而硒离子对灵芝发酵产物抑制羟自由基有明显的促进作用,最适的质量分数为90×10-6清除羟自由基的能力为67.7%。油酸能促进灵芝发酵产物的清除超氧阴离子和羟自由基的能力,适宜的质量分数为0.1%,清除两种自由基的能力分别为:73.7%,53%。     

黄瓜枯萎病生防菌HD-087产抗菌物质条件的 优化及抑菌作用初探

【目的】优化比基尼链霉菌HD-087摇瓶发酵条件,提高菌株发酵液对黄瓜枯萎病菌HU-M的抑制率,并通过拮抗试验初步评价发酵液的抑菌作用效果。【方法】采用单因素筛选及正交试验对HD-087的发酵培养基和发酵条件进行优化。经发酵液处理后,光学显微镜观察HU-M菌丝形态和孢子萌发抑制率,测定HU-M菌丝电导率。【结果】改进的发酵培养基配方为:淀粉1.00%、黄豆粉0.80%、酵母粉0.12%、CaCO30.40%。对发酵条件的研究表明:pH为6.8,180 r/min、28°C条件下,250 mL三角瓶装液量为40 mL,接种1 mL种龄为2 d的种子,发酵5 d为最佳培养条件。抑菌结果表明,HD-087产抗菌物质能造成病原菌HU-M菌丝细胞质渗漏,菌丝畸形,分生孢子萌发受抑制,5倍发酵稀释液孢子抑制率达72.1%;除此之外还能引起菌丝电解质渗漏,造成菌丝细胞膜受损。【结论】优化后的摇瓶发酵条件能提高生防菌HD-087发酵液抑菌效果,并且发酵液可破坏细胞膜明显抑制病原菌HU-M生长,具有较大开发应用潜力。     

不同产区川芎提取物抗氧化及抑菌活性研究

为研究道地产区敖平镇川芎与非道地产区中江县川芎醇提物、石油醚提取物抗氧化活性、抗菌活性的大小,采用自由基清除能力(DPPH自由基和羟基自由基清除能力)和还原能力测定法评价提取物的抗氧化活性,采用滤纸片扩散法测定抑菌圈直径考察川芎提取物的抑菌活性。研究结果表明:两产区川芎醇提物和醚提物在测定浓度范围内均具有抗氧化活性和抑菌活性。但与中江县川芎提取物相比,道地产区敖平镇川芎提取物具有更强的抑菌活性,而对于中江县是否适合大面积推广种植川芎,还需要结合多种环境因素具体分析。     

蒺藜内生真菌发酵液抗菌及抗肿瘤活性初步研究

【目的】筛选出具有抗菌和抗肿瘤活性的蒺藜内生真菌。【方法】采用牛津杯法、稻瘟菌模型及肿瘤细胞模型评价蒺藜内生真菌PDB和察氏培养基发酵产物的抗菌活性和肿瘤细胞毒性。【结果】PDB培养基发酵液和察氏培养基发酵液抑菌圈直径大于10 mm的菌株分别占总菌株数的19.05%和23.81%。PDB培养基发酵液和察氏培养基发酵液对稻瘟菌的最小抑制浓度(MIC)低于10%的菌株分别占总菌株数的19.05%和47.61%。对肿瘤细胞抑制率高于50%的PDB发酵产物占PDB发酵产物总数的52.38%, 而对肿瘤细胞抑制率高于50%的察氏发酵产物占察氏发酵产物总数的28.57%。【结论】部分蒺藜内生真菌的发酵产物具有抗菌和抗肿瘤活性。     

不同发酵条件对乳杆菌O-2菌株代谢产物的影响

目的:研究乳杆菌(Lactobacillus acidophilus sp.)O-2菌株生长和积累类细菌素所需的营养和温度条件.方法:采用分段控温发酵法,即在发酵后期,改变温度继续发酵;以发酵液抑菌圈直径为指标对发酵的营养和温度条件进行筛选.结果:后期32 ℃控温发酵有利于类细菌素积累,优化后的4号配方,发酵液菌数高达8.2×1010个/ml(细菌计数器法),抑菌圈直径最大,达到8.8 mm.结论:利用4号配方进行分段控温发酵能有效地促进O-2菌株的生长繁殖和积累类细菌素.     

金缕半枫荷多酚提取及其抗氧化抗菌活性研究

为进一步开发和利用金缕半枫荷,该研究以超声时间、液料比、乙醇体积分数和超声温度为考察因素,用金缕半枫荷总多酚提取率作为评价指标,采用单因素和正交试验优化提取工艺确定最佳工艺,并以最佳工艺制备金缕半枫荷多酚;进一步采用DPPH·和羟自由基清除法评价金缕半枫荷多酚的抗氧化能力,以抑菌圈和最小抑菌浓度(MIC)为指标,采用牛津杯和肉汤稀释法考察其抗菌活性。结果表明:最佳提取工艺为乙醇浓度70%,料液比为1∶16,提取时间为60 min,提取温度为60℃。金缕半枫荷多酚清除DPPH·自由基的IC_(50)为5.22μg·mL~(-1),与阳性对照维生素C的IC_(50)值4.31μg·mL~(-1)无显著差异,羟自由基清除率IC_(50)为105μg·mL~(-1),显著低于维生素C的IC_(50)值(180μg·mL~(-1))。对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有抑制作用,抑菌圈直径分别为(13.7±1.2) mm和(10.0±1.3) mm,MIC分别为0.393和0.785 mg·mL~(-1)。这表明金缕半枫荷多酚具有抗菌和显著抗氧化能力,为开发利用金缕半枫荷资源提供了理论依据。     

火龙果酵素在发酵过程中功能成分变化规律及其与抗氧化相关性

对火龙果酵素发酵487 d过程中总酸、有机酸、总多酚等功能成分的变化及其与抗氧化的相关性进行研究,其中抗氧化能力通过ABTS自由基清除能力和还原力来检测;此外,利用主成分分析法、因子分析法对不同发酵时间的火龙果酵素总酸含量、pH、总多酚含量、ABTS自由基清除能力和还原力5个评价指标进行分析.结果表明:随着发酵时间的延长,火龙果酵素发酵液中总酸、总多酚含量总体上呈逐步增加的趋势,发酵液的pH呈缓慢降低的趋势,从3.75降到3.40;利用高效液相色谱(HPLC)法检测有机酸,从火龙果原料和火龙果酵素发酵液中分别检测到9种和8种有机酸,原料中苹果酸的含量较多,发酵液中乳酸和醋酸的含量较多.与原料相比,酵素发酵液中新检测到了莽草酸;富马酸和抗坏血酸在原料中含量极少,酵素发酵液中则未检测到;火龙果经发酵后,检测到的8种有机酸的含量均有所增加.抗氧化分析结果表明:火龙果酵素发酵过程中ABTS自由基清除能力、还原力总体上呈逐步增加趋势;火龙果酵素发酵过程中总多酚含量、总酸含量、莽草酸和醋酸与ABTS自由基清除能力之间呈中度相关,总多酚含量还原力之间呈中度相关.主成分分析和因子分析结果显示:从检测指标中提取出2个因子,代表了抗氧化因子和环境因子;发酵至359d时,综合评价指标达到最高值且趋于稳定.     

解淀粉芽胞杆菌PC2产抑菌物质培养基及发酵条件优化

【目的】优化解淀粉芽胞杆菌PC2产抑菌活性物质发酵培养基及发酵条件。【方法】以马铃薯葡萄糖液体培养基为基础,依据发酵液对金黄色葡萄球菌抑菌圈的单因素试验结果,采用Box-Behnken响应面法优化发酵培养基,二次通用旋转组合设计,频率分析法优化发酵条件。【结果】影响发酵液抑菌活性的培养基主要组分为马铃薯、蔗糖和L-谷氨酸钠,最优发酵培养基配方为:马铃薯188.0 g/L,蔗糖22.0 g/L,L-谷氨酸钠1.80 g/L,培养基成本为0.81元/L;最佳发酵条件为:接种量6%、发酵温度30°C、装液量40 mL/250 mL、摇床转速185 r/min、发酵时间24 h、初始pH 7.0。优化后发酵液对金黄色葡萄球菌抑菌圈直径为30.82 mm,较优化前的18.22 mm增加了12.60 mm。【结论】优化后的培养基和发酵条件提高了解淀粉芽胞杆菌PC2发酵液的抑菌活性,为该菌株的工业化生产应用提供了依据。     

柠条锦鸡儿不同极性部位抗氧化及抗须癣毛癣菌活性初筛

本文对柠条锦鸡儿的花、叶、枝皮和根皮的乙醇提取物进行了极性部位的分离,并对各部位的提取物进行了抗氧化及抗须癣毛癣菌的活性筛选。抗氧化活性通过DPPH、ABTS、羟自由基(·OH)和超氧阴离子(O_2~-·)自由基的清除能力来评价,抗须癣毛癣菌活性通过抑菌圈实验来进行初步筛选。结果表明,以Vc为对照,柠条锦鸡儿花和叶的提取物具有很好的DPPH和ABTS自由基的清除能力,尤其是它们的乙酸乙酯部位;但所有的提取物对·OH和O_2~-·自由基的清除能力均较弱(P0.001)。抑菌圈实验发现,花、叶和枝皮的乙酸乙酯部位具有一定的抗菌活性,其中枝皮的抗菌活性最好;通过测定生物量,当秋季采集枝皮乙酸乙酯部位提取物浓度为128μg/m L其抑菌率可达到50%。活性筛选结果说明柠条锦鸡儿的花、叶和枝皮具有一定的深入开发潜力。     

桦褐孔菌发酵及其提取物清除自由基活性的研究

用1,1-diphenyl-2-picryhydrazyl(DPPH)酶标仪法,对桦褐孔菌发酵液的甲醇提取物的自由基清除率进行了测定,发现该提取物具有较强的清除自由基的活性;进一步用DPPH薄层试验,结果发现该菌的CHCL3提取物中主要含有两个具清除自由基活性的组分.在此基础上,以清除自由基活性为指标,对桦褐孔菌液体发酵条件进行优化,发现当培养条件为:葡萄糖20g/L、甘油6mL/L、蛋白胨15g/L、CuSO4 0.005g/L、酪氨酸0.05g/L;种龄为7d、装液量为50mL/250mL、转速为180r/min、接种量为10%时,桦褐孔菌发酵液提取物的清除自由基活性最强.     

瓦宁木层孔菌中多酚和黄酮类成分分离及清除自由基活性的研究

采用硅胶和反相C18柱层析方法,首次从瓦宁木层孔菌中分离得到了5个化合物,运用NMR波谱法分析和鉴定为樱花亭、7-甲氧基二氢莰非素、二氢莰非素、4-(3,4-二羟苯基)-3-丁烯-2-酮、hispolon。并通过建立体外二苯基苦味酰基苯肼自由基（·DPPH）、超氧阴离子自由基（·O2?）以及羟自由基（·OH）发生体系,研究了5个化合物对·DPPH、·OH和·O2?的清除作用。结果表明当浓度达到100μg/mL时,化合物4-(3,4-二羟苯基)-3-丁烯-2-酮和hispolon对·DPPH清除率分别为92%和93%,对·OH的清除率分别为90%和95%,而对·O2?的清除率分别为70%和77%,略低于清除·DPPH和·OH的能力;二氢莰非素对·O2?自由基的清除率为39%,强于清除·OH和·DPPH的能力;而樱花亭和7-甲氧基二氢莰非素对3种自由基的清除率均低于30%。2个多酚类化合物清除自由基的能力均强于3个黄酮类化合物。5个化合物清除自由基能力均表现出一定的浓度依赖性。     

绿粘帚霉菌株发酵液抗真菌活性及稳定性测定

采用杯碟法测定绿粘帚霉（RCEF4099）菌株的发酵液对8种植物病原真菌的抗菌活性。结果表明RCEF4099菌株发酵液对5种供试病原真菌的抑菌圈直径在18mm以上。对菌株发酵液的稳定性测定结果表明菌株转接6代之前,活性稳定,从第7代开始其活性缓慢降低,第10代的抑菌圈直径仅比出发菌株减少了1．7mm。RCEF4099菌株发酵液有较好的热稳定性,发酵液加热到60％仍有较高活性。该菌株的发酵液对酸的稳定性较好,抑菌活性最强的pH值为4。     

粗糙脉孢菌纤维素酶液体发酵优良形态突变体筛选

丝状真菌被广泛地用于包括纤维素酶在内的工业酶生产过程。在液体深层发酵中,丝状真菌菌丝形态直接影响发酵液的流变特性,进而与目标酶蛋白产量存在着重要的关联。目前,针对丝状真菌工业酶液体发酵菌丝形态的研究依然是从传统的发酵工程学角度出发,对与发酵水平紧密相关的形态、粘度等性状相关基因的认识远远不够。为了挖掘深层发酵中对丝状真菌发酵产酶性能具有重要影响的形态发育相关基因,以粗糙脉孢菌Neurospora crassa单基因突变体库中的95株形态突变株为研究对象,在结晶纤维素为碳源的条件下进行筛选,探寻与野生型菌株蛋白产量有显著差异的突变株。同时,对这些突变株的内切-β-1,4-葡聚糖酶酶活、β-葡萄糖苷酶酶活、发酵液粘度和菌丝干重进行了测定,并观察了发酵液中突变株的菌丝形态。实验结果表明,与野生型菌株相比,突变株SZY32、SZY35、SZY39和SZY43发酵液中蛋白浓度显著降低,突变株SZY11、SZY63、SZY69和SZY87发酵液中蛋白浓度显著性提高。值得注意的是,突变株SZY11和SZY43发酵液菌丝体主要形态为菌球状,其发酵液粘度分别降低75%和50%,突变株SZY87在发酵液中呈长丝状,发酵液粘度显著升高至少2倍。这些与产酶水平相关的形态、粘度基因的获得将有助于丝状真菌纤维素酶等工业酶高产工程菌株的理性构建。     

一株对稻瘟病菌有抗菌活性的特基拉芽孢杆菌 WRN032的筛选及发酵条件优化

采用牛津杯法抑菌试验,根据多种芽孢杆菌对不同植物病原真菌的生长抑制效果进行筛选,得到特基拉芽孢杆菌WRN032对稻瘟病菌的生长抑制效果最佳。以吸光度和抑菌圈直径为指标,设计进行单因素试验、多因素显著性筛选试验和中心点复合试验对特基拉芽孢杆菌WRN032的发酵条件进行优化,得到该菌株抗菌活性最优的发酵条件为:接种量1%,摇瓶装液量40%,葡萄糖浓度2%,摇床转速220 rpm,初始pH6.5,培养时间48 h,培养温度30℃。在此条件下,特基拉芽孢杆菌WRN032的发酵液吸光度和萃取物的抑菌圈直径与优化前相比分别提高了186.63%和154.10%。     

地锦草内生放线菌生物活性及活性菌株L57的鉴定

根据13株分离自药用植物地锦草(Euphorbia humifusa)的内生放线菌的酶活性以及抗菌、抗氧化等重要特征来首次探讨地锦草内生放线菌的生物活性,以期为开发新的活性物质提供参考依据。通过观察菌落周围是否有透明圈对分泌的胞外淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶等常见酶进行活性测定;使用滤纸扩散法检测菌株抗菌活性;利用PCR特异性扩增检测菌株的PKS-Ⅰ,PKS-Ⅱ,NRPS基因;对菌株发酵液乙酸乙酯粗提物进行抑菌、抗氧化活性检测,并对高活性菌株进行形态观察及16S r DNA系统进化分析鉴定。结果表明:13株菌中至少12株菌具有一种酶活性,其中2株可同时产生以上3种酶。4株具有稳定且较强的抑菌能力,13株菌生物合成基因PCR筛查结果均为阴性。1株菌对DPPH自由基有较强清除作用(清除率≥50%),2株菌对·OH自由基有较强清除作用(清除率≥50%)。其中L57的活性物质粗提物具有广谱抗菌活性,对鲍曼不动杆菌的抑菌圈直径达22. 62 mm,并对DPPH自由基具有较强清除率,经形态观察及16S r DNA序列分析初步确定L57归属为噬油微杆菌(Microbacterium oleivorans)。研究证明地锦草内生放线菌可作为探寻新型活性物质的良好资源。     

暹罗芽胞杆菌FJAT-45551用于农业生物防治的优化培养

以具有防病促长且抑菌谱广的暹罗芽胞杆菌(Bacillus siamensis)FJAT-45551为出发菌株,分别以生物量和发酵液的青枯雷尔氏菌和尖孢镰刀菌抑菌活性为指标,通过单因子和正交试验对其培养基成分和发酵培养条件进行优化,从而提高其抑菌活性。结果表明,优化后的培养基配方为:麸皮20 g/L,蛋白胨25 g/L,MgSO_4·H_2O 0. 2 g/L,CaCl_20. 1 g/L,FeSO_4·7H_2O 0. 1 g/L,NaH_2PO_4·H_2O 0. 5 g/L,K_2HPO_40. 5 g/L;最适发酵培养条件为:接种量1%、摇床转速130 r/min、温度20℃、装液量50 mL(250 mL的摇瓶装液50 mL)、初始pH值为6. 0。在优化的发酵条件下,FJAT-45551发酵液对番茄青枯病菌(Ralstorinia solanacearum)FJAT-91的抑菌圈直径达30. 82 mm,较优化前的抑菌圈直径增加了9. 09 mm,抑菌活性提高了41. 83%。     

花脸香蘑菌丝体提取物的体外抗氧化活性

分别测定花脸香蘑Lepista sordida发酵菌丝体不同浓度乙醇溶剂提取液在4种抗氧化模型中的抗氧化作用。结果表明, 各种菌丝体提取液对二苯基苦味酰基苯肼自由基(·DPPH)和羟自由基(·OH)均有显著的清除作用, 其清除作用随着乙醇溶剂浓度的提高而降低: 在3 g/L菌丝生药浓度时, 去离子水提取物对DPPH自由基和羟自由基的清除率分别为90.55%和81.9%; 在6 g/L菌丝生药浓度时, 50%乙醇和70%乙醇提取物对DPPH自由基的清除率分别为53.7%和45.2%, 对羟自由基的清除率分别为79.4%和78.4%。各菌丝提取物也具有极强的抗脂质过氧化能力, 在5 g/L菌丝生药浓度64 h内, 水提物、50%乙醇和70%乙醇提取物对亚油酸过氧化物的抑制率分别为100%、96%和89.2%。在一定浓度下, 各提取液对邻苯三酚自氧化也均有抑制作用。     

冠突散囊菌对茶叶品质成分及其抗氧化活性影响

从茯砖茶样中分离纯化制得冠突散囊菌Eurotium cristatum菌株,选用普通炒青绿毛茶做茶坯,应用人工接种发酵技术进行固体发酵制成发酵散茶。结果表明：冠突散囊菌发酵一个月后的炒青绿茶不仅品质成分明显改善,茶黄素和茶红素高于其他样品,而且苦涩味减轻;采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）法和2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)（ABTS）法测定发酵散茶的抗氧化活性,结果显示,对两种自由基的清除能力分别达到75%和56%以上,与湖南茯砖茶相近。发酵散茶的ABTS自由基清除能力分别高于对照和浙江茯砖茶64.7%和80.6%,而对DPPH的清除能力略低于对照,但是高于浙江茯砖茶。