MMP-2、MMP-9及P53的表达在肝移植后肿瘤复发与转移预测中的价值研究

目的：探讨MMP-2、MMP-9及P53的表达在预测肝癌行肝移植后肿瘤复发与转移中的价值。方法：选择肝癌行全肝移植患者85例,应用免疫组化方法检测其切除的肝癌组织中MMP-2、MMP-9及P53的表达,并对患者进行移植术后随访,观察术后肝癌复发与转移情况。分析MMP-2、MMP-9及P53的表达与移植后肝癌复发与转移之间的关系和意义。结果：肝癌组织中MMP-2、MMP-9及P53阳性表达率均明显高于癌旁组织（P〈0.01）。MMP-2表达与肝癌肿瘤直径、TNM分期、病理分级及门静脉癌栓显著相关性（P〈0.05）,MMP-9表达与肝癌肿瘤直径、TNM分期、门静脉癌栓及肿瘤包膜显著相关性（P〈0.05）,P53表达与肝癌肿瘤直径、门静脉癌栓及肿瘤包膜显著相关性（P〈0.05）。MMP-2、MMP-9在未复发和转移组中的表达明显低于复发和转移组（P〈0.05）,而P53在两组间的表达差异无显著性（P〉0.05）。肝癌组织中MMP-2、MMP-9高阳性表达均是预测肝癌患者肝移植后肿瘤复发和转移的独立预见因子,而P53未显示其具有预测意义。结论：MMP-2、MMP-9及P53在肝癌组织中呈高表达,MMP-2、MMP-9的表达水平可以有效预测肝癌患者肝移植后肿瘤复发和转移。     

MMP-2、MMP-9 及P53 的表达在肝移植后肿瘤复发与转移预测中 的价值研究

目的:探讨MMP-2、MMP-9及P53的表达在预测肝癌行肝移植后肿瘤复发与转移中的价值。方法:选择肝癌行全肝移植患者85例,应用免疫组化方法检测其切除的肝癌组织中MMP-2、MMP-9及P53的表达,并对患者进行移植术后随访,观察术后肝癌复发与转移情况。分析MMP-2、MMP-9及P53的表达与移植后肝癌复发与转移之间的关系和意义。结果:肝癌组织中MMP-2、MMP-9及P53阳性表达率均明显高于癌旁组织(P<0.01)。MMP-2表达与肝癌肿瘤直径、TNM分期、病理分级及门静脉癌栓显著相关性(P<0.05),MMP-9表达与肝癌肿瘤直径、TNM分期、门静脉癌栓及肿瘤包膜显著相关性(P<0.05),P53表达与肝癌肿瘤直径、门静脉癌栓及肿瘤包膜显著相关性(P<0.05)。MMP-2、MMP-9在未复发和转移组中的表达明显低于复发和转移组(P<0.05),而P53在两组间的表达差异无显著性(P>0.05)。肝癌组织中MMP-2、MMP-9高阳性表达均是预测肝癌患者肝移植后肿瘤复发和转移的独立预见因子,而P53未显示其具有预测意义。结论:MMP-2、MMP-9及P53在肝癌组织中呈高表达,MMP-2、MMP-9的表达水平可以有效预测肝癌患者肝移植后肿瘤复发和转移。     

肝脏移植后乙肝复发的临床病理学研究

目的:探讨乙肝终末期肝移植术后乙肝复发的组织病理学特征.方法:回顾性研究分析18例移植术后乙肝复发病人的肝脏病理学和血清学检查资料.结果:14例病人在术后抗病毒治疗过程中乙肝病毒出现YMDD变异.4例病人肝癌复发行化疗后乙肝复发.14例病毒发生YMDD变异病人将恩替卡韦加阿德福韦替换拉米夫定治疗,4例肝癌复发者化疗后用恩替卡韦治疗.经治疗后,14例病人肝脏功能渐近恢复,乙肝病毒DNA拷贝数＜102 U/ml,4例肝癌复病人最终死亡.肝移植术乙肝复发后肝脏病理呈现出肝细胞坏死,纤维化增生和炎症反应.血清学检查呈现出乙肝病毒DNA复制增多.结论:乙肝终末期肝移植术后乙肝复发时肝组织坏死、炎症反应以及纤维化增生与乙肝病毒拷贝数相关.术后检测乙肝病毒以及有效及时的抗乙肝病毒治疗能明显改善病人的预后.     

基于碱基组成的横向基因转移预测方法研究概况

横向基因转移(Horizontal gene transfer,HGT)是指物种从亲代以外的个体中获取遗传物质的过程,它对研究生物进化、细菌多样性等有着重要作用。目前最常用的HGT预测方法是基于碱基组成的方法。本文主要介绍此类方法的常用特征及研究现状。     

新型造影剂在小鼠肝脏肿瘤Micro-CT活体成像中的应用

目的利用新型纳米颗粒造影剂结合Micro-CT成像技术,建立小鼠肝脏成像方法,并用于肝脏肿瘤的活体成像。方法 6只6-8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分成A组和B组,分别尾静脉注射纳米颗粒造影剂Exi Tron nano 12000 50μL和100μL;在注射前、注射后3 min、24 h、7 d、14 d、28 d和56 d对所有小鼠肝脏进行Micro-CT活体扫描;分别在小鼠肝左叶和肝右叶内选取感兴趣区（ROI）进行灰度值分析,比较不同时间点肝组织对比度的变化。确定合适的造影剂剂量,尾静脉注射至3只雄性16月龄HBV转基因肝癌模型小鼠（C组）,同上进行Micro-CT活体扫描,并于第56天全部安乐死后取肝脏观察病理学改变。结果 A组和B组小鼠在注射不同浓度造影剂后,冠状位重建图像及肝脏感兴趣区的平均灰度值结果显示：肝脏实质造影后均比注射前明显增强,24 h达到峰值,注射后56 d内,小鼠肝脏感兴趣区的平均灰度值与注射前相比仍维持在较高的水平,B组显著高于A组（P〈0.01）,确定后续实验采用B组造影剂剂量（100μL）。C组注射100μL造影剂后,各时间点均能比较清楚地看到肝脏癌性结节存在,病理学观察发现肝脏出现非典型增生,肿瘤细胞核大,染色质加深和肝细胞坏死。结论利用纳米颗粒造影剂结合Micro-CT成像技术,成功建立了小鼠肝脏活体成像方法,并可应用于肝脏肿瘤的活体成像研究。     

麻醉对免疫抑制与肿瘤复发的影响

术后肿瘤复发是导致患者死亡的主要原因。大量研究表明:围手术期患者的免疫功能与肿瘤复发密切相关,而麻醉药物或方法对机体免疫功能的抑制是导致肿瘤复发的重要因素。因此,本文拟就麻醉药物或方法对围手术期免疫功能和肿瘤复发的影响进行综述。     

膀胱肿瘤复发机制的研究进展

膀胱癌是泌尿生殖系统肿瘤中最为常见的一种,其临床特点主要是高发病率、高复发率和低度恶性.其远期治疗效果仍不满意,术后局部复发率高达60%～70%.肿瘤大小、分期、分级及治疗方法均与复发有关.如何有效地预防膀胱肿瘤复发成为膀胱肿瘤治疗的关键之一.因此探讨膀胱肿瘤的复发机制具有重要意义.本文对膀胱肿瘤的复发机制的研究进展做一综述.     

四君子汤加减降低胃肠肿瘤患者术后复发转移的研究进展

胃肠道肿瘤已经成为我国的高发肿瘤,降低肿瘤的复发转移是目前研究的热点问题。四君子汤的应用在降低胃肠肿瘤患者术后复发转移中的确起到了重要的作用。本文检索了近10年国内外的相关文献,分别从中医理论的认识、临床研究、实验研究及药理研究等方面,总结四君子汤在胃肠肿瘤患者术后复发转移的防治方面的进展。     

肿瘤相关巨噬细胞与肺癌复发无相关性

宿主抵抗恶性肿瘤的功能主要是通过体内具有杀伤活性的细胞及其分泌的递质来完成的,例如,杀伤性T淋巴细胞、活性巨噬细胞(Mφ)、天然杀伤细胞(NK细胞)及抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用。验中活性 Mφ特别引人关注,它不仅可直接杀伤肿瘤细胞,还可抑制肿瘤细胞的 DNA 合成。尽管许多实其     

埃可病毒25型新型中和实验方法的建立与应用

目的:建立一种新型的快速、高通量的埃可病毒25型(ECHO25)中和抗体检测方法,并初步评价其在ECHO25中和抗体筛选和血清流行病学调查中的应用价值。方法:应用免疫荧光方法筛选ECHO25高亲和性抗体并将其作为检测单抗,结合酶联免疫斑点检测技术(ELISPOT)建立ECHO25中和抗体检测方法;使用不同效价的血清评价该方法的准确性;采用所建立的中和方法对ECHO25单克隆抗体、临床血清样品进行检测。结果:建立了快速检测ECHO25中和抗体的Nt-ELISPOT方法,以ECHO25单克隆抗体5B9作为检测抗体;相比经典的中和实验方法 Nt-CPE,该方法可显著缩短检测时间(从5~7 d缩短至1 d以内),检测结果具有较好的一致性;采用所建立的Nt-ELISPOT方法首次筛选获得3株对ECHO25具有较好中和能力的单克隆抗体;临床血清样品检测结果显示厦门地区可能存在ECHO25的流行。结论:该方法可以应用于中和抗体筛选和血清学的临床辅助诊断,为ECHO25的防治研究提供支持。     

建立小鼠膀胱肿瘤原位模型的优化方法

目的探讨硝酸银、盐酸、胰酶和乙醇预处理构建鼠膀胱肿瘤的成瘤机制。方法 24G静脉留置针插入膀胱,PBS冲洗后,将小鼠随机分为5组,每组6只:(1)乙醇作用组:22%乙醇0.1 mL保留20 min;(2)胰酶作用组:0.2%胰酶保留30 min;(3)酸碱作用组:0.1 mmol/L HCl 0.1 mL作用15 s后,PBS冲洗,0.1 mmol/L NaOH0.1 mL作用5 s,排空膀胱;(4)硝酸银作用组:0.15 mol/L硝酸银保留10 s;(5)对照组:0.1 mL生理盐水。术后1和24h随机处死每组3只小鼠,摘取膀胱,HE染色观察膀胱黏膜病理变化;戊二醛固定,电镜下观察膀胱黏膜细胞微结构变化;甲苯胺蓝染色,观察膀胱黏膜固有层肥大细胞数目变化;过碘酸-希夫(PAS)染色,观察膀胱黏膜GAG层变化。40只小鼠应用上述前四组预处理因素处理膀胱后,建立膀胱癌原位模型,计算各组成瘤率。结果胰酶和乙醇处理1h后,局部上皮伞状细胞脱落,黏膜下层暴露;酸碱和硝酸银处理组大部黏膜完整性破坏,黏膜下层暴露较多,连续性中断;对照组和实验组间炎症细胞浸润均不表现出统计学差异。24 h后,胰酶和乙醇组可见局部轻度水肿并充血,黏膜完整性恢复较好,细胞间见紧密连接;而酸碱和硝酸银组上皮黏膜薄厚不均一,仍可见部分脱落黏膜。结论利用硝酸银和酸碱预处理膀胱可作为鼠膀胱肿瘤原位模型构建的首选方法。     

基于Image J软件的裸鼠肝脏原位肿瘤图像定量分析方法

目的:采用门静脉注射肝细胞癌细胞的方法,能够在裸鼠肝脏形成多发与弥散的肿瘤病灶,进而模拟进展期肝细胞癌的转移与侵袭性生长。本研究旨在建立基于图像分析软件Image J的裸鼠肝脏原位肿瘤图像定量分析方法。方法:培养高侵袭性的人肝细胞癌细胞系MHCC97-H,通过肝门静脉注射的方法,将MHCC97-H细胞接种于裸鼠肝脏,经2~4周生长,MHCC97-H细胞能够在裸鼠肝脏形成多发与弥散的肿瘤病灶;收集动物获得肝脏脏器进行拍照,对所得图片进行分析;用Image J软件对图像进行定量分析,分别确定整体肝脏脏器的面积与肿瘤病灶的面积,二者之比即可反映出肝细胞癌在裸鼠肝脏形成肿瘤病灶占肝脏脏器的面积比例;在此基础上,对接种有肝细胞癌细胞的裸鼠,行灌胃给药,给予2 mg/kg剂量的分子靶向药物索拉非尼进行治疗,分别确定对照组与治疗组肝脏形成的肿瘤病灶并进行定量分析,可依据此计算索拉非尼治疗对肿瘤病灶的抑制率。结果:MHCC97-H细胞接种能够在裸鼠肝脏形成多发与弥散的肿瘤病灶,用Image J软件可准确圈出肝脏脏器上的肿瘤病灶,确定病灶占肝脏脏器的面积比例。利用本研究的方法能够定量分析索拉非尼对MHCC97-H细胞形成多发、弥散病灶的抑制作用。结论:建立了基于图像分析软件Image J的裸鼠肝脏原位肿瘤图像定量分析方法,对抗肿瘤药物活性评价相关研究具有重要意义。     

新型p1 基因型肺炎支原体分型方法的建立与应用

【目的】针对肺炎支原体新型p1基因型(V2c型)菌株检测工作的需要,建立相应PCR检测方法并进行评价。【方法】针对新型V2c型肺炎支原体菌株p1基因变异区域序列设计特异性扩增引物,建立对V2c型肺炎支原体菌株进行PCR检测的检测方法并用相关基因测序进行验证。使用所建立的巢式多重PCR对北京地区2008-2011年分离到的214株临床肺炎支原体进行分型分析。【结果】特异引物可有效检测出V2c菌株,在其它型别菌株均无阳性扩增。214株肺炎支原体临床分离株中1型菌株占90.2%(193/214),V2a型菌株占0.9%(2/214),V2c型菌株占8.9%(19/214);未检出2型菌株。【结论】针对V2c型肺炎支原体所建立的基于p1基因的PCR检测方法,能有效区分以往方法无法检测出的新型V2c型肺炎支原体菌株,对开展肺炎支原体流行病学调查和病原分析有重要意义。     

新型冠状病毒纳米PCR快速检测方法的建立

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染可导致致命性肺炎,且极具传染性。自2019年年末在我国出现以来,已在全球蔓延。为了建立一种灵敏、快速检测SARS-CoV-2的分子检测方法,本研究使用金纳米颗粒配合普通PCR检测方法,针对SARS-CoV-2核衣壳蛋白建立了SARS-CoV-2 NanoPCR新型分子检测方法。特异性结果显示,该方法对猪流行性腹泻病毒、牛冠状病毒、犬冠状病毒、水貂冠状病毒、猫传染性腹膜炎病毒均无交叉反应,表明该方法的特异性良好。敏感性结果显示,该方法的最低检测量为3.69×10⁴拷贝/μL,高于普通PCR最低检测量10倍,表明该方法的敏感性良好。使用建立的方法对3份临床样品进行检测,该方法与普通PCR方法结果一致,10倍稀释样品后,NanoPCR相比较普通PCR条带仍然具有较高辨识度。综上,本研究建立的灵敏、特异的NanoPCR方法可以对临床样品进行快速诊断和鉴定。     

一种新型丙型肝炎病毒培养方法的建立

以丙肝病毒 (ＨＣＶ)为切入点 ,建立一套通过基因操作技术在体外细胞培养系统中生产高滴度反转录病毒颗粒的大规模病毒培养技术平台 ,并将该技术应用于其它难以体外大规模培养的反转录病毒的生产。该体系包括一株插入Ｔ7ＲＮＡ聚合酶基因的重组痘苗病毒ｖＴＦ 3和 2个重组质粒 ,质粒ＰＴ7ＨＣＶ在上游Ｔ7启动子和Ｔ7终止子之间插入ＨＣＶ基因组ｃＤＮＡ ,可通过Ｔ7ＲＮＡ聚合酶指导转录产生 9 5ｋｂ的ＨＣＶＲＮＡ ;另一质粒Ｐ...     

杜氏盐藻玻璃珠新型转化方法的建立

首次采用玻璃珠法成功转化了杜氏盐藻(以下简称盐藻),转化细胞经染色后呈现蓝色,表明外源报告基因GUS得到了成功的表达。同时还进行了转化时间、转速、PEG和质粒DNA浓度等因素对转化影响的分析,优化了转化条件。结果显示最佳的转化条件为:在800μL盐藻(106个细胞/mL)中加入150μLPEG和90μL质粒,在300mg玻璃珠存在的条件下,于转速2400r/min涡旋12s能够得到较为理想的转化结果。该方法与已报道的转化方法相比,具有操作简便、省时快捷、不需要昂贵消耗试剂和仪器设备、比较经济等优点。此方法的建立为深入研究盐藻基因工程提供了有力的工具。     

新型冠状病毒灭活疫苗抗原含量检测方法的建立

目的 建立新型冠状病毒(新冠病毒)灭活疫苗抗原含量检测的双抗体夹心ELISA方法,并对该方法检测2家企业疫苗的适用性进行验证。方法 使用羊抗S蛋白抗体作为包被抗体,兔抗S蛋白抗体作为显示抗体,建立了双抗体夹心ELISA方法,并对方法的准确度、精密度进行验证;分别使用该方法及企业自建方法对2家企业生产的各20批次疫苗产品进行检测,评价方法的一致性。结果 成功建立了新冠病毒灭活疫苗抗原含量检测方法,该方法线性良好,R²>0.99。方法验证结果显示,对于2家企业疫苗回收率均在80%～120%范围内,试验内与试验间CV均<10%。方法比对结果显示,该方法与企业方法检测结果比值对于A企业比值在0.83～1.22之间,平均为1.02;与B企业比值在0.91～1.07之间,平均为0.99;不同方法检测结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论 成功建立了新冠病毒灭活疫苗抗原含量检测方法,该方法的准确性与精密度良好,并且对国内2家企业生产的疫苗具有较好的适用性。     

房颤射频消融术后复发风险预测评分系统的建立及评价

目的:探讨心房颤动(房颤)患者射频消融术后复发的风险因素,并依此构建个性化的风险评分系统。方法:选取2017年1~8月行射频消融术的房颤患者154例作为研究对象,依据术后3个月的随访结果将患者分为复发组及未复发组,采用单因素分析和Logistic回归分析对各风险因素进行分析,构建其评分系统,采用Hosmer-Lemeshow拟合优度检验和ROC曲线下面积评价评分系统的准确度及区分度。结果:术后随访3个月的结果显示共37例(24.03%)房颤患者出现复发,房颤类型、病程、体质量指数(BMI)、左房前后径(LAD)、左房容积(LAV)及超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平均是房颤复发的独立风险因素(P<0.05)。构建的风险评分系统得分为0~26分,Hosmer-Lemeshow拟合优度检验:x^2=7.520,P=0.482;ROC曲线下面积为0.864(95%CI:0.837~0.891),预测评分值为15分时,约登指数最大(0.605),此时的敏感度和特异度分别为77.3%和83.2%。结论:房颤患者射频消融术后的复发率较高,依据风险因素构建的风险评分系统具有较高的预测效率和区分能力,可作为房颤患者射频消融术后复发风险评估的参考工具。     

肝癌患者血清乙肝病毒特异性miRNAs水平指标检测与术后肿瘤复发的相关性研究

目的:HBV感染患者血清中HBV相关miRNAS的表达水平会出现变化,分析乙肝病毒特异性miRNAs在乙肝肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者血清中的表达水平与术后肿瘤复发的关系.方法:采用实时荧光定量RT-PCR (Real-time RT-PCR)检测38例乙肝肝癌患者手术前后血清乙肝病毒特异性miRNAs(miR-122和miR-22)的表达.分析血清乙肝病毒特异性miRNAs的袁达水平与肝癌切除术后的预后与复发的关系.结果:乙肝肝癌患者血清miR-122和miR-22明显高于良性肝病和正常对照组(P＜0.01).手术前后血清miR-122和miR-22的表达差异显著(P＜0.01).乙肝肝癌患者血清miR-122和miR-22表达的高低与HBVDNA、肝硬化、AFP、肿瘤大小、病理分化、TNM分级有关(P＜0.05).血清miR-122和miR-22低表达组的复发转移率显著低于高表达组(P＜0.01).结论:miR-122和miR-22在乙肝肝癌患者血清中表达上调与肝癌复发转移率高和预后差密切相关,提示其可能是一个潜在的HCC预后分子标志物.     

心血管疾病相关的MicroRNA-21新型检测方法的建立

[目的]建立一种测定miR-21含量新型实验方法。[方法]利用microRNA-21(miR-21)作为靶标,并设计基于双链特异性核酸酶(Duplex specific nuclease,DSN)及杂交链式反应(Hybridization chain reaction,HCR)的探针MP、H1及H2,通过加入靶标从而引起DSN和HCR反应,达到双重信号放大的目的,最终信号输出方式为DNAzyme显色,裸眼可视,根据其产生颜色强度对靶标进行定量检测。[结果]DSN结合HCR靶标的最低检测限可达1 pmol/L,线性范围为1 pmol/L～1μmol/L,特异性良好,除靶标miR-21外,非特异性靶标均无明显信号产生,在人体血清实际样品中检测miR-21,其回收率可达到92. 3%～101. 5%。[结论]该检测方法成功建立测定miR-21含量的技术平台,灵敏性可达1 pmol/L,且特异性好、快速可视,为研究及临床诊断心血管疾病提供技术依托。