中频交变磁场对大鼠F98胶质瘤细胞的体外生物效应

目的:观察中频交变磁场对大鼠F98胶质瘤细胞增殖能力的影响,初步探讨中频交变磁场抑制肿瘤细胞增殖的生物学机制。方法:体外培养大鼠F98胶质瘤细胞,使其暴露于场强为5 m T的恒定磁场中,并分别加载频率为0、50、100、200、300、400、500、600、700 KHz的不同磁场。磁场暴露24至72小时后,采用MTT法检测细胞增殖、计算抑制率并筛选出抑制胶质瘤细胞生长的最佳磁场频率,应用染色技术和流式细胞术对细胞形态、细胞凋亡、细胞周期进行验证。结果:MTT检测数据表明,100、200、300KHz组细胞增殖抑制率明显高于其他组(P0.05),并且200 KHz组细胞增殖抑制最为显著,抑制率为17%;HE染色显示磁场干预后细胞生长欠佳;Hoechst染色显示细胞核染色质浓缩聚集、核碎裂、核边集,表现出细胞凋亡的典型变化。流式细胞术显示:200 KHz组细胞凋亡率高于对照组(P0.05);各组细胞周期无显著差异。结论:200 KHz的中频交变磁场有抑制大鼠F98胶质瘤细胞增殖的作用,促使肿瘤细胞凋亡,但其具体机制仍待继续研究。     

旁效应在基因治疗中的作用

目前化疗、放疗等治疗形式在癌症治疗效果上非常有限,而基因治疗是一种非常有前景的方法,旁效应是指部分细胞转入的特定基因片断会发生漂移,进入到没有转基因的细胞中,其在基冈治疗中也起着重中之重的作用.本文简单介绍了一些基因转移系统、基因治疗方法,重点阐述旁效应在基因治疗中的作用及其产生机理,从而提高基因治疗的效率.     

旁效应在基因治疗中的作用

目前化疗、放疗等治疗形式在癌症治疗效果上非常有限,而基因治疗是一种非常有前景的方法,旁效应是指部分细胞转入的特定基因片断会发生漂移,进入到没有转基因的细胞中,其在基因治疗中也起着重中之重的作用。本文简单介绍了一些基因转移系统、基因治疗方法,重点阐述旁效应在基因治疗中的作用及其产生机理,从而提高基因治疗的效率。     

TXNIP在高糖诱导的小鼠视网膜Müller细胞自噬中的作用及相关机制

目的:探讨硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin interacting protein,TXNIP)对高糖诱导的小鼠视网膜Müller细胞自噬的影响及其可能机制。方法:采用高糖诱导体外培养的小鼠视网膜Muller细胞,通过RNA干扰降低TXNIP的表达,免疫荧光、Western blot和Real-time PCR检测自噬相关蛋白及丝氨酸/苏氨酸激酶/雷帕霉素靶蛋白(serine/threonine kinase 1/mechanistic target of rapamycin kinase,AKT/m TOR)的表达。结果:高糖诱导的Muller细胞中TXNIP、微管相关蛋白1轻链3α(microtubule associated protein 1 light chain 3 alpha,LC3Ⅱ)、Sequestosome1(p62/SQSTMl)的表达均显著增加(P<0.05);而TXNIP敲降的Muller细胞中自噬相关特征性蛋白(LC3Ⅱ、P62)的表达则显著降低(P<0.05)。结论:TXNIP可能通过AKT/m TOR信号通路来抑制糖尿病性视网膜病变中Müller细胞自噬活性,并引起细胞发生凋亡。     

细胞色素C在apoptin诱导宫颈癌Hela细胞凋亡中的作用

目的研究肿瘤特异性凋亡基因（apoptin）在诱导Hela细胞凋亡中的信号转导机制。方法用含有apoptin基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的Hela细胞;采用MTT法检测Hela细胞的凋亡;以比色法检测caspase-8和caspase-3的相对活性;Western blotting检测凋亡细胞中细胞色素C的表达量。结果 MTT法证明ap-optin基因瞬间转染的Hela细胞凋亡率明显高于其他各组（P〈0.01）;caspase-3的活性升高,但caspase-8活性没有明显变化;细胞色素C释放量明显增多。结论 Apoptin基因可能通过促进线粒体释放细胞色素C激活caspase-3,进而诱导Hela细胞凋亡。     

PUMA在结肠癌细胞中的表达及诱导细胞凋亡中的作用

目的:通过5-Fu诱导携带有野生型p53基因的HCT116和携带有突变性p53基因的HT-29两种结肠癌细胞系,比较两株细胞在各时间点凋亡水平和PUMA mRNA表达情况的差异,探讨PUMA对细胞凋亡的作用及诱导其表达的基本途径。方法:用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)检测不同结肠癌细胞株HT-29、HCT116在抗肿瘤药物5-Fu作用下不同时间点结肠癌细胞株内PUMA mRNA表达水平的差异,用吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)荧光染色检测各时间点细胞的凋亡水平,分析其与PUMAmRNA表达水平之间的关系。结果:携带有野生型P53基因的结肠癌细胞株HCT116在5-Fu作用下6h即可出现PUMA mRNA的表达,随着药物作用时间的延长其表达强度增加,并且与细胞凋亡水平呈正相关;含有突变型P53基因的结肠癌细胞株HT-29在5-Fu作用下无PUMA的表达。结论:通过5-Fu诱导细胞凋亡出现的PUMA表达需要野生型P53基因,突变型P53基因无法诱导PUMA的表达。PUMA与结肠癌细胞凋亡水平呈正相关,是一种促凋亡蛋白。     

TCTP在肝癌细胞增殖过程中的作用及机制研究

目的:研究翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)在肝癌细胞增殖过程中的作用及相关机制。方法:通过western blot技术检测14对肝癌与癌旁组织中TCTP的蛋白表达水平。通过siRNA(small interference RNA)技术在肝癌细胞系SMMC-7721和BEL-7404中下调TCTP的表达,然后通过CCK-8实验、克隆形成实验和EdU实验观察下调TCTP对肝癌细胞增殖的影响。通过western blot技术分析TCTP促进肝癌发生这一过程中可能涉及的分子通路。结果:相比于对应的癌旁组织,TCTP在肝癌组织中显著高表达。用siRNA技术下调TCTP水平后能够明显抑制肝癌细胞的增殖能力。下调TCTP的表达之后,AKT和ERK蛋白的磷酸化水平也随之降低。结论:TCTP在肝癌组织中显著高表达,并且在肝癌细胞的增殖过程中发挥着极其重要作用,其作用机制可能与AKT和ERK通路的磷酸化激活有关。     

蜂毒素通过下调F2RL1表达从而遏制胶质瘤细胞荷瘤小鼠肿瘤增殖的机制

摘要 目的：探讨蜂毒素通过下调F2RL1表达从而遏制胶质瘤细胞荷瘤小鼠肿瘤增殖的机制。方法：40只雄性 NOD/SCID小鼠（5周龄,15-18 g）购自北京维塔河实验动物技术公司。实验前,让小鼠适应环境一周。NOD/SCID 小鼠在右侧海马体中注射了2×10⁵ U87-MG细胞建立异种移植模型。当肿瘤体积增长到100 mm³时,将小鼠随机分为模型组（空腹注射生理盐水）和蜂毒素组（腹腔注射5 mg/kg 蜂毒素）,每组20只小鼠。在第5天(注射的第5天)、第10天、第15天每次处死5只小鼠,通过实时PCR分析小鼠肿瘤组织中F2RL1、Bcl-2、Bax和Capase-3的mRNA表达。使用卡尺测量荷瘤小鼠肿瘤体积,使用电子天平对肿瘤组织进行称重测量。通过蛋白印迹分析肿瘤组织中p-PI3K、p-AKT 和p-mTOR的蛋白表达。通过TUNEL染色检测人脑肿瘤中凋亡细胞的百分比。结果：蜂毒素组F2RL1 mRNA表达较模型组降低（P<0.05）,蜂毒素抑制F2RL1 mRNA表达。第5 d、10 d和15 d测得肿瘤体积发现蜂毒素肿瘤体积较模型组减小（P<0.05）。第5 d、10 d和15 d测得肿瘤体积发现蜂毒素肿瘤重量较模型组减轻（P<0.05）。蜂毒素组p-PI3K、p-AKT 和p-mTOR的蛋白表达较模型组降低（P<0.05）。蜂毒素组Bax和Capase-3的mRNA表达较模型组降低（P<0.05）,蜂毒素组Bcl-2 mRNA表达较模型组升高（P<0.05）。蜂毒素组TUNEL阳性细胞的百分比较较模型组升高（P<0.05）。结论：蜂毒素通过下调肿瘤小鼠体内F2RL1表达抑制PI3K/AKT信号通路激活,促进了体内肿瘤细胞凋亡,从而有效抑制经胶质瘤细胞的生长、增殖。     

PTEN在脑胶质瘤中的研究进展

本文叙述了当前国内外抑癌基因 PTEN(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)在胶质瘤细胞中的信号传导通路的最新进展.文中阐述了 PTEN 的分子结构、胶质瘤中的表达、相关信号传导通路以及在胶质瘤的发生、侵袭、增殖、凋亡等中的作用.研究表明,PTEN 对于胶质瘤的早期诊断和对胶质瘤的基因治疗可能具有重要的意义.     

Phylogenetic and Structural Analysis of Translationally Controlled Tumor Proteins

The translationally controlled tumor protein (TCTP) is conserved in all eukaryotes studied thus far. Recent evidence points to an important role for TCTP in the induction of cell proliferation in animals through an interaction with G proteins. TCTP may also constitute an intercellular secreted signal that modulates the immune response in the vertebrates. Because of its sequence conservation and ubiquity, the analysis of its amino acid sequence divergence between different taxa may provide insight into the structural constraints on the evolution of this protein. In the present study, we analyzed the phylogeny of TCTP sequences from a wide range of organisms and found that, with some exceptions, the groupings formed were consistent with the evolutionary history. Indeed, at the level of lower-order taxa, the groupings are in agreement with their established phylogeny, thus indicating that the substitution rates of the TCTP residues varied evenly between members of the same clade. Predicted three-dimensional structures of representative TCTPs, based on the reported 3D structure of Schizosaccharomyces pombe, indicated that these proteins are highly conserved among diverse taxonomic groups. However, analysis of the primary structure indicated subtle differences in the domain-forming pocket that potentially interacts with G proteins, particularly among Diplomonadidae, Apicomplexa, and other parasites of vertebrates. These differences support the notion that these specific TCTPs could block the normal immune response by acting as dominant negative mutants. Structural differences were also observed in a reported sequence of TCTP from Plasmodium knowlesi, in which the presence of an extra alpha-helix could also interfere in the interaction with G proteins.     

受翻译调节的肿瘤蛋白的结构与功能

受翻译调节的肿瘤蛋白（translationally controlled tumor protein, TCTP）是一种普遍存在并且大量表达的蛋白,在进化上高度保守,与其它任何蛋白家族均未显示出明显的序列同源性.该家族的蛋白基本上都具有TCTP1和TCTP2两个特征结构区.TCTP与Mss4/Dss4(mammalian suppressor of Sec4)蛋白家族结构相似,二者构成结构超家族.TCTP的合成受到钙、真核翻译起始因子eIF4E(eukaryotic translation initiation factor 4E)和双链RNA依赖的蛋白激酶(dsRNA dependent protein kinase,PKR)的调节.具有与钙结合,与微管蛋白结合,抗细胞凋亡,抑制翻译,促进组胺释放等生物学活性.另外,它还可作为肿瘤逆转的靶标.系统发育分析提示,在真核细胞进化中, TCTP的直向同源基因起源于1.0×109年前.本文对TCTP的分子特点, 生物学功能及其研究现状进行了综述.     

胶质瘤来源外泌体通过高迁移率族蛋白B1促进胶质瘤干细胞形成

摘要 目的：研究胶质瘤来源外泌体中高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对胶质瘤干细胞形成的影响及其意义。方法：使用外泌体提取试剂盒提取原代胶质母细胞瘤来源外泌体,通过透射电子显微镜、纳米粒度电位仪和Western blotting对外泌体进行鉴定;采用Western blotting检测外泌体中HMGB1的表达量;通过qRT-PCR、Western blotting、克隆球计数检测外泌体对胶质瘤干细胞形成的影响;siRNA敲低HMGB1的表达水平,并通过qRT-PCR、Western blotting、克隆球计数检测外泌体中HMGB1对胶质瘤干细胞形成的影响。结果：原代胶质瘤细胞可以分泌外泌体到肿瘤微环境并且外泌体中存在HMGB1;原代胶质瘤细胞来源外泌体可以上调邻近胶质瘤细胞干性相关分子CD133、OCT4、NANOG、SOX2的表达并促进干细胞克隆球的形成;通过siRNA敲低原代胶质瘤细胞HMGB1的表达后,外泌体中HMGB1的含量降低并且外泌体促进胶质瘤干细胞形成的作用减弱。结论：胶质瘤细胞来源外泌体可以通过HMGB1促进胶质瘤干细胞的形成。     

NDRG2对胶质瘤U87-MG细胞组蛋白乙酰化的影响及机制研究

目的:探讨NDRG2对胶质瘤U87-MG细胞组蛋白乙酰化的影响,从代谢组学角度明确其抑癌机制,为胶质瘤治疗提供新思路。方法:利用慢病毒介导的外源性NDRG2基因在胶质瘤U87-MG细胞株中过表达,并采用MTT检测其对胶质瘤U87-MG细胞增殖的影响,采用Western blot技术研究其对胶质瘤U87-MG细胞组蛋白乙酰化及AKT-ACLY通路磷酸化状态的影响,并使用酶联反应检测胞内乙酰辅酶A的水平。结果:NDRG2在胶质瘤U87-MG细胞中外源过表达可降低AKT及下游分子ACLY的磷酸化水平,减少胞内乙酰辅酶A的合成,抑制组蛋白乙酰化。结论:NDRG2可能通过抑制AKT通路,减少组蛋白乙酰化,进而抑制胶质瘤U87-MG细胞增殖。     

翻译调控肿瘤蛋白的结构、功能以及在肿瘤发展中的作用

翻译调控肿瘤蛋白(translational controlled tumor protein,TCTP),又称p23、组胺释放因子(histamine releasing factor,HRF)等,是一类在动植物中具有高度保守性和同源性的蛋白,主要介导细胞凋亡、细胞增殖与分化、细胞骨架重排、炎症反应等重要事件,与肿瘤的发生发展进程密切相关.针对TCTP的相关研究不仅有助于进一步了解各种肿瘤的生理病理周期,同时也提示其在寻找治愈肿瘤的方法中有望成为新的靶点.本文将对TCTP的结构、生物学功能以及在各种肿瘤中的作用进行综述.     

IL-6在胶质母细胞瘤的表达及作用机制研究

目的:探讨白介素6(IL-6)在胶质母细胞瘤(GBM)中的表达,并探讨其高表达的作用机制,以期阐明GBM发生发展潜在分子机制。方法:采用免疫组化检测表皮生长因子变体3 (EGFRv III)阳性和阴性GBM组织IL-6的相对表达。以恶性胶质瘤细胞U87MG为研究对象,构建表达EGFRv III的U87MG-EGFRvIII细胞,用IL-1β分别处理U87MG、U87MG-EGFRvIII细胞,ELISA检测IL-6分泌量。采用EGFR下游效应通路p38MAPK、MK2、MEK1/2、JNK抑制剂SB、sc-48、PD、SP预处理细胞1小时,IL-1β刺激细胞后,检测各组IL-6分泌量变化。将IL-1β处理后的U87MG-EGFRvIII细胞记为IL-1β组,以不做任何处理细胞记为Control组,用联合SB、sc-48处理的IL-1β细胞依次命名为IL-1β+SB和IL-1β+sc-48组,western blot检测p38MAPK-MK2通路蛋白和IL-6蛋白表达,qPCR检测IL-6 m RNA表达。结果:IL-6在EGFRv III阳性GBM组织中普遍高表达,在EGFRv III阴性GBM组织中普遍低表达。EGFRv III可在未受IL-1β刺激的恶性胶质瘤细胞中上调IL-6基础分泌,也可在IL-1β刺激情况下进一步促进IL-6分泌。在U87MG细胞中,所有通路抑制剂对IL-6分泌均无影响;在U87MG-EGFRvIII细胞中p38 MAPK-MK2通路抑制剂SB和sc-48明显抑制IL-1β诱导的IL-6分泌,而MEK1/2、JNK抑制剂PD和SP则无明显影响。IL-1β能够诱导p38MAPK-MK2通路激活,诱导细胞内IL-6表达增加,联合SB、sc-48处理细胞后,p38MAPK-MK2通路活性降低,细胞内IL-6表达降低。结论:癌基因EGFRv III能够上调恶性胶质瘤细胞中IL-6基础分泌,IL-1β可进一步刺激IL-6分泌,其机制可能与p38MAPK-MK2通路激活有关。     

长链非编码RNA n336928对胃肠胰神经内分泌肿瘤细胞增殖及迁移的影响

摘要 目的：从基础实验层面研究长链非编码RAN n336928(LncRNA n336928,即n336928)在胃肠胰神经内分泌肿瘤(Gastro-entero-pancreatic neuroendocrine tumors，GEP-NETs)进展中的作用与影响。方法：首先采用实时定量荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)检测n336928在人正常胰腺导管上皮细胞系(hTERT-HPNE)、GEP-NETs细胞株(QGP-1、 STC-1)中表达情况。采用靶向n336928的小干扰(si-RNA)，以转染试剂lipo3000为载体进行敲降。通过CCK8法、克隆实验和 EdU 实验观察细胞增殖活力，通过Transwell 实验观察细胞迁移能力变化，通过流式分析实验检测n336928敲低是否与周期阻滞和细胞凋亡相关，并用Western blotting 检测周期和凋亡相关标志性蛋白表达。结果：QGP-1和STC-1中 n336928的mRNA水平的表达相较于hTERT-HPNE明显升高(P＜0.05)，抑制QGP-1及STC-1中 n336928的表达后，细胞的增殖及迁移能力明显减弱(P＜0.05)。QGP-1细胞转染n336928小干扰后，细胞周期主要阻滞在G1/S期，且细胞凋亡明显增加。与对照组相比，敲降组的周期相关蛋白（CyclinD1）明显减少，相反凋亡相关蛋白(Caspase3)明显升高(P＜0.05)。为了进一步研究基因作用机制，我们用RNA免疫沉淀反应（RIP）验证n336928可与EZH2结合，并共同调控下游基因P21。结论：LncRNA n336928可通过结合EZH2并表观调控下游基因P21，而参与胃肠胰神经内分泌肿瘤的发生发展过程。     

Neuroligin对SH-SY5Y细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨Neuroligin(NLG)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y增殖和凋亡的影响。方法:体外培养SH-SY5Y细胞24 h后,分别用浓度为50,100,200μmol/L的NLG siRNA转染SH-SY5Y细胞并共孵育24 h,然后采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度NLG siRNA对SHSY5Y细胞增殖率的影响,以及Real-time PCR法检测SH-SY5Y细胞中凋亡基因Bax、Bcl-2、Bcl-x L和caspase-9基因表达水平的变化。结果:与空白对照组及siRNA阴性对照组相比,转染NLG siRNA后SH-SY5Y细胞增殖率显著下降,细胞凋亡相关基因被激活,导致细胞凋亡。结论:NLG对神经元细胞具有保护作用,抑制神经细胞凋亡。