SD-PMA-ddPCR检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌

【目的】检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌活菌。【方法】利用脱氧胆酸钠(SD)对受损细胞预处理,然后使叠氮溴化丙锭(PMA)进入受损细胞与DNA发生共价交联,提取细菌基因组DNA进行微滴式数字PCR(dd PCR)检测。【结果】0.1%SD和5.0 mg/L PMA协同作用,可以有效抑制108 CFU/m L的单核细胞增生李斯特氏菌死菌DNA的PCR扩增。经过SD和PMA对样品预处理,dd PCR可以在死菌存在条件下,定量检测鸡肉中单核细胞增生李斯特氏菌活菌,消除了"假阳性"结果的出现。活菌灵敏度检测结果显示:SD-PMA-dd PCR的灵敏度为2.0 copies/20μL。SD-PMA-dd PCR方法精密度和稳定性良好。【结论】SD-PMA-dd PCR在检测食源性致病菌方面有巨大的发展空间。     

食品中单核增生李斯特氏菌检测研究进展

单核增生李斯特氏菌和李斯特菌病的危害近年来引起世界各国食品和卫生部门的广泛关注.关于如何找到一种快速、敏感、准确、合理的检验方法,是当今各国食品卫生部门亟待解决的重要研究课题.对该菌的传统分离方法、免疫学检测方法、核酸检测等方法的最新进展进行了综述,为进行该菌的准确、快速检测奠定了基础.     

辽宁省食品中单核细胞增生李斯特菌污染调查分析

目的 分析2019年辽宁省市场出售食品的单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)污染情况,初步确定该菌易引起的高危食品种类,为食品风险监测提供参考。方法 从我省13个监测点中共抽取753份不同种类食品样本,根据国标法GB4789.30-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》对样本进行L.monocytogenes菌株的分离及生化鉴定。结果 样品中检出L.monocytogenes 22株,检出率为2.9%(22/753)。污染最严重的是冷冻鱼糜制品9.4%(12/128),其次为预制半成品3.6%(8/221)和熟肉制品1.0%(2/196)。结论 辽宁省市售食品存在不同程度L.monocytogenes污染,尤以冷冻鱼糜制品污染较为突出,应继续加强对市售食品L.monocytogenes的检测及监管能力。     

PCR技术检测单核细胞增生李斯特氏菌研究进展

单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)是危害公共卫生和食品行业的一种重要人畜共患病致病菌.PCR技术是近年来被广泛地运用到食源性致病菌快速检测的分子生物学方法之一.就PCR技术检测单核细胞增生李斯特氏菌中的特异性鉴别基因、模板DNA制备等关键因素及多重PCR、巢式PCR、反转录PCR与定量PCR等主要技术进行了综述.     

单核细胞增生李斯特菌噬菌体

单核细胞增生李斯特菌(Listeria munocytogenes,LM)是一种对人畜危害较大的人兽共患病原菌,同时也是四大食源性细菌之一。LM噬菌体是一类专一寄生于LM中的细菌病毒,它除了作为研究细菌病毒侵染细菌的模式工具之外,已经成为检测和控制食品中LM污染的重要工具之一。近年来,国外一些学者对LM噬菌体A118、PSAA511和P100基因组、溶源性及裂解感染的分子机制及其应用等方面开展了许多研究工作,并取得了一些卓有成效的研究成果,本文对相关研究进展进行了概述。     

单核细胞增生李斯特氏菌PCR-DHPLC检测新技术的建立

应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术建立食品中单核细胞增生李斯特氏菌fimY的快速检测方法。根据单核细胞增生李斯特氏菌prfA和hlyA基因序列的特点设计特异性引物,PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测。以单核细胞增生李斯特氏菌等61株参考菌株做特异性试验;单核细胞增生李斯特氏菌菌株稀释成不同梯度,进行灵敏度试验。试验结果表明该方法具有很好的特异性,灵敏度较高,检测低限可达到为181CFU/ml。可以快速、准确检测单核细胞增生李斯特氏菌,是食品中致病菌快速检测的新技术。     

基因dat对单核细胞增生李斯特氏菌的生物学特性影响

单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,Lm)是一种重要的食源性致病菌,其基因dat编码D-丙氨酸氨基转移酶,可将D-谷氨酸转变为D-丙氨酸,后者是细菌细胞壁肽聚糖的组成成分。在Lm野生株EGDe actA及inlB双基因缺失株(EGDeΔactAΔinlB)的基础上,利用同源重组的方法进一步构建了缺失基因dat的菌株(EGDeΔactAΔinlBΔdat),并对该缺失菌株生长状态、毒力基因表达水平、细胞侵袭及生物被膜的形成量等基本生物学特性进行研究,运用Real Time-PCR(RT-PCR)测定Lm毒力基因的相对表达量。结果表明,基因的缺失对突变菌株的生长能力以及生物被膜形成有重要的调控作用,并导致毒力基因srt A、plc A表达量下调,VIP、inlA表达量上调,对Coca-2细胞的侵袭无影响。此缺失株的构建为进一步研究基因dat的功能提供了材料。     

单核细胞增生李斯特菌检测技术研究进展

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是常见的食源性致病菌之一。目前,在众多单增李斯特菌的检测方法中应用较广的是免疫学检测法、分子学检测法。免疫学检测时间短,操作简单,但该方法依赖高特异性的抗体,会出现假阳性,还需要进一步鉴定检测结果。分子学检测法克服了免疫学检测法不能在种的水平鉴定单增李斯特菌的缺点,省时省力,灵敏度高,但是分子学检测法需要丰富的操作经验,并且不适于现场大批量检测。新兴的代谢学检测法、光谱学检测法、生物传感器等也都有各自的优缺点。本文综合近年最新文献,就单增李斯特菌检测的最新方法、检测进展及未来发展趋势予以分析综述,以期为该菌的检测提供参考。     

单核细胞增生李斯特菌抗酸应激机制

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,简称单增李斯特菌)是重要的人畜共患食源性病原,在青贮饲料、发酵食品、宿主胃内以及巨噬细胞吞噬体内都会遭遇酸应激。该菌有多种抗酸应激系统,如F0F1-ATPase、谷氨酸脱羧酶(Glutamate decarboxylase system,GAD)、精氨酸脱亚胺酶(Arginine deiminase,ADI)、鲱氨酸脱亚胺酶(Agmatine deiminase,Ag DI)系统等。在环境pH(pHex)4.5条件下可维持其细胞内pH(pHi)稳态,在pHex 3.5时仍能存活;用温和酸应激(pHex 4.5)预处理单增李斯特菌,可以通过酸耐受反应(Acid tolerance response)提高其在致死性酸性环境中的存活率,这一过程受σB正调控,即σB激活可以保护单增李斯特菌应对多种环境应激。因此,σB可以作为新型抗菌药物的靶标。更为重要的是,弱酸性发酵食品要严格控制李斯特菌的污染,以降低消费者的感染风险。     

单核细胞增生李斯特菌的检测技术进展

单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一类人畜共患的食源性致病菌。近年来其检测技术取得了迅猛的发展,本文对目前使用的基于培养、免疫学和分子生物学技术的三大类单核细胞增生李斯特菌检测方法进行了综述,同时对单核细胞增生李斯特菌检测的新策略进行了展望。     

单核细胞增生性李斯特菌及其快速检测

李斯特氏菌是一类人畜共患病的病原体 ,其中以单核细胞增生性李斯特氏菌 (Ｌｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏ ｇｅｎｅｓ ,ＬＭＯ)为人们所重视 ,这种菌可引起多种畜禽和人类疾病 ,本文从ＬＭＯ的生物学特性、流行病学角度出发 ,来介绍ＬＭＯ的传播特性及其预防、快速检测方法。1　ＬＭＯ生物学特性和流行病学特性ＬＭＯ是革兰氏阳性短小杆菌 ,需氧或微嗜氧 ,2 0～ 2 5℃时有动力 ,对温度适应性较强 ,1～ 4 5℃内均可繁殖 ,较低温度下比其他细菌长得更好 ,并且毒性更大 ,该菌耐热 ,经过巴氏消毒后 ,部分细菌仍可存活 ,对亚硝酸盐、食盐及低 …     

单核细胞增生李斯特菌喹诺酮耐药机制研究

以食源性单核细胞增生李斯特菌(LM)环丙沙星耐药株为研究对象,旨在调查LM对喹诺酮产生耐药的分子机制。采用琼脂二倍稀释法测定菌株对环丙沙星的最小抑菌浓度(MIC);通过PCR检测喹诺酮耐药决定区(QRDR)基因突变以及质粒介导喹诺酮耐药(PMQR)基因的分布;实时荧光定量PCR检测lde基因在LM菌株中的相对表达量;利用SOE-PCR技术构建lde基因缺失突变株,调查外排泵Lde的作用。结果表明,15株LM耐药菌株GyrA、GyrB、ParC和ParE亚基的氨基酸序列与敏感株100%相似;所有菌株中均未检出PMQR基因。加入外排泵抑制剂利血平后,菌株L28和L47对环丙沙星的MIC值分别下降为原来的1/8和1/4。lde基因在耐药株和敏感株中均有表达,且表达量相近;在环丙沙星的作用下,lde基因在耐药株中的相对表达量增加显著,而在敏感株中的表达量基本没有变化;加入利血平后,lde在耐药株中的表达明显受到抑制。缺失lde基因后,菌株对环丙沙星由耐药转为敏感;利血平存在下突变株对环丙沙星的MIC值不受影响。本研究证明外排泵Lde介导LM对喹诺酮类药物耐药。     

单核细胞增生李斯特菌单克隆抗体的制备与鉴定

以单核细胞增生李斯特菌细胞碎片免疫BALB/c小鼠,间接ELISA法成功筛选获得2株稳定分泌抗LM的单克隆杂交瘤细胞株4A7、4H11.抗体效价为1∶160 000以及1∶20 000,亚型为IgG1、IgG2a,Dot-ELISA结果表明4A7和4H11单克隆抗体具有很好的属特异性,Western blot分析表明4A7、4H11抗体分别与单核细胞增生李斯特菌62 kDa以及32 kDa外膜蛋白抗原表位结合,胶体金免疫电镜实验进一步确证以上抗体可有效识别单核细胞增生李斯特菌细胞表面抗原.     

ISA 61 VG佐剂增强单核细胞增生李斯特氏菌灭活疫苗的保护性免疫应答

单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,Lm)是重要的人兽共患李斯特氏菌病的致病菌,疫苗免疫是预防该病原菌感染的有效手段之一。本研究研制了添加矿物油佐剂MontanideTM ISA61VG的新型灭活细菌疫苗,并对其安全性和免疫应答特性进行了研究。结果表明,ISA 61 VG佐剂疫苗具有较好的安全性;诱导小鼠产生的抗李斯特氏菌溶血素O抗体滴度以及IgG2a/IgG1比值显著高于无佐剂免疫组;在致死剂量Lm攻毒下,能对小鼠提供100%的免疫保护。因此,ISA 61VG佐剂能显著增强灭活疫苗诱导宿主产生体液免疫和细胞免疫应答的能力,从而提高灭活疫苗的保护性免疫应答作用,是预防人和动物Lm感染的潜在疫苗候选株。     

食品中金黄色葡萄球菌平板计数不确定度的评定

在金黄色葡萄球菌检测过程中,由于样品中金黄色葡萄球菌计数受到样品制备、溶液稀释、向培养基添加样液、培养时间和操作人员技能等因素的影响,使检测结果离散度较大。实验主要研究采用在同一时间段内,应用同一批次的培养基和试剂,按相同的检测过程,对同一批样品进行检测。根据检测过程和检测结果对不确定度的贡献,探讨金黄色葡萄球菌计数的不确定度评定。     

减毒单核细胞增生李斯特氏菌作为疫苗载体在肿瘤治疗中的应用

肿瘤免疫疗法已成为继手术、化疗和放疗之后的第四种肿瘤治疗方法,是当今肿瘤治疗的新希望。将细菌疫苗应用于肿瘤治疗的研究已经历了多方面的探索。单核细胞增生李斯特氏菌因其能够趋向肿瘤病灶,在肿瘤微环境保护下激起肿瘤浸润细胞的免疫反应,削弱免疫抑制作用而受到研究者的广泛关注。并且,其在乳腺癌、肝癌、黑素瘤、胰腺癌等癌症中都已具有较为广泛的研究。本文就单核细胞增生李斯特氏菌的免疫应答方式、作为肿瘤载体的优势、减毒策略以及在多种肿瘤免疫治疗中的应用进行综述。     

凉拌豆制品中单核细胞增生李斯特菌生长模型建立的研究

单核细胞增生李斯特菌是凉拌豆制品中检出率较高的一种致病菌。本研究考察了温度(4℃、15℃、25℃、30℃和37℃)对凉拌豆制品中单核细胞增生李斯特菌生长的影响,并采用SGompertz和SLogistic模型对不同温度下单核细胞增生李斯特菌的生长数据进行拟合;在此基础上,以拟合度(R2)、准确因子(A_f)和偏差因子(B_f)为指标,比较并建立了凉拌豆制品中单核细胞增生李斯特菌的二级生长模型。结果表明,SGompertz模型能更好的拟合凉拌豆制品中单核细胞增生李斯特菌在不同温度下的生长数据,平方根模型能够较准确地预测凉拌豆制品中单核细胞增生李斯特菌的生长状况,因此依次选择此两种模型作为单核细胞增生李斯特菌在凉拌豆制品中的一级和二级生长模型,且模型具有可靠性。研究结果可为凉拌豆制品中单核细胞增生李斯特菌的定量风险评估提供依据。     

食用槟榔中霉菌和酵母的测量不确定度评定

近年来槟榔的食用安全引起了社会的广泛关注,槟榔行业对微生物控制的要求也进一步提高,微生物检测的准确性和可靠性越来越受到重视。然而,目前尚无槟榔微生物的分析报道。本研究建立了槟榔中霉菌和酵母定量检测测量不确定度评定的方法。结果表明,霉菌与酵母的扩展不确定度分别为0.342 4和0.286 4,其中,重复检测引入的不确定度远高于其他因素引入的不确定度。此外,本研究还发现,霉菌和酵母的不确定度评定应该分开进行。