黄芩素的结构修饰以及抗肿瘤活性研究

为了改善黄芩素的抗肿瘤活性。本实验以黄芩素为原料,对其进行结构修饰。首先通过mannich反应,在8位引入胺亚甲基,然后通过酰基化反应在7位(6位)酚羟基上引入不同的疏水性基团。并利用CCK-8法对目标化合物进行抗MCF-7肿瘤细胞的活性评价。结果合成得到了6个目标化合物,通过1HNMR、13CNMR、MS和化学手段相结合的方法确定了其结构,其中化合物2~6为新化合物。实验利用黄酮类邻二酚羟基的特性,通过与氯化锶的络合反应,巧妙而简单的确证了所得目标化合物的酯键是在化合物的7位羟基上。抗MCF-7肿瘤活性实验表明,在黄芩素8位上引入含氮原子的胺亚甲基后活性比先导化合物黄芩素强,在其7位上再引入酯键后3个化合物活性比先导化合物强。     

HPLC同时测定龙胆泻肝制剂中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的含量

目的:建立同时测定龙胆泻肝制剂中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素4种有效成分含量的HPLC分析方法.方法:色谱柱:Dikma Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈- 0.05％磷酸溶液,梯度洗脱;波长:278 nm.结果:黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的线性范围分别为0.418～4.18μg(r=0.9999),0.2～2μg(r=0.9999),0.233～2.33 μg(r=0.9999),0.215～2.15(r=0.9998).2种制剂4种成分的平均回收率分别为98.10％ (RSD=0.59％),98.05％( RSD=1.37％),98.88％( RSD=1.44％),98.10％( RSD =0.59％)和98.40％ (RSD=0.46％),99.33％ (RSD=1.74％),99.09％( RSD=1.22％),98.82％(RSD=1.42％).结论:该方法快速、简便、准确、具有良好的重复性和回收率,可作为龙胆泻肝制剂中这4种成分的含量测定方法.     

10种晋产野生黄芩根中黄芩苷、黄芩素与汉黄芩素含量比较

采用高效液相色谱法对山西省10个产地野生黄芩根中主要有效成分黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素含量进行了测定分析。结果表明,10种晋产野生黄芩根中主要有效成分含量差异明显,黄芩苷的含量为5.79%~15.31%,黄芩素的含量为0.49%~2.28%,汉黄芩素的含量为0.07%~0.42%。黄芩苷含量与纬度高低呈负相关。山西北部朔州市右玉县沟北村与山阴县西郭家窑村的野生黄芩根中黄芩苷含量低于《中国药典》规定的8.0%,山西东南部晋城市陵川县瓦窑上村的野生黄芩根中黄芩苷含量则高达15.31%。山西中西部吕梁市交城县双家寨村的野生黄芩根中黄芩素和汉黄芩素含量均为最高,分别为2.28%和0.42%。     

海南山苍子挥发油GC-MS分析及抗肿瘤活性研究

利用二氧化碳超临界技术提取海南山苍子挥发油,GC-MS对其成份进行分析,鉴定出52个化合物,占挥发油总量的95.65%。通过分子蒸馏分离山苍子油,测试各组分的活性。实验结果显示海南山苍子挥发油以及分子蒸馏分离的各组份均具有抗肿瘤活性。海南山苍子挥发油对人胃癌细胞的抑制活性最好,IC50为6.29μg/m L。组份D1、R1、D2、R2对人白血病细胞抑制活性最好,IC50分别为16.6、7.76、6.73、5.97μg/m L。     

黄芩多糖的提取及其抗氧化和抗肿瘤活性研究

以中药黄芩(Scutellaria baicalensis)为材料,通过比较分析水提醇沉法、微波提取法及超声波提取法的提取率,寻找最优的提取方法.对黄芩多糖(S.baicalensis polysaccharides,SBP)进行精制后,通过体外抗氧化实验,检测SBP的羟自由基和超氧阴离子的清除能力及总抗氧化能力.通过...     

汉黄芩素抗骨肉瘤143B细胞的实验研究

目的:观察汉黄芩素对人骨肉瘤细胞系143B增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:采用体外培养人成骨肉瘤细胞系143B,CCK-8实验检测不同浓度汉黄芩素对骨肉瘤143B细胞增殖抑制作用;流式细胞术分析汉黄芩素对癌细胞周期分布及凋亡的影响;Western Blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3的表达水平。结果:CCK-8结果显示汉黄芩素以时间、浓度依耐性的方式抑制骨肉瘤143B细胞的增殖;流式细胞术结果表明汉黄芩素可导致骨肉瘤细胞周期阻滞于G0/G1期并以浓度依赖的方式诱导骨肉瘤细胞凋亡;Western Blot检测结果证明,汉黄芩素可上调骨肉瘤细胞中促凋亡蛋白Bax、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3的表达,而下调抑制凋亡蛋白Bcl-2。结论:汉黄芩素抑制骨肉瘤细胞增殖、导致细胞周期阻滞,促进其凋亡,并呈现时间和浓度依赖性,汉黄芩素激活Caspase凋亡途径及诱导细胞周期阻滞可能是其抗骨肉瘤的作用机制。     

酶解法提取黄芩中黄芩素的工艺研究

本文对黄芩药材中黄芩苷的酶解条件和黄芩素的提取工艺进行研究,以样品中黄芩素的含量为指标,采用正交实验对影响酶解的温度、时间和药材粒度进行考察;以黄芩素的提取率为指标,经正交实验优选乙醇浓度、用量、回流次数和时间。得出如下较理想的酶解条件和提取工艺:黄芩药材粉碎至10~20目,加水6倍,于60℃保温10 h;酶解后的黄芩药材加8倍量70%乙醇回流提取2次,每次1 h。黄芩素的提取率大于70%,工艺稳定可行。     

玉米芯抗肿瘤活性研究

采用MTT法检测玉米芯水提物对人结肠癌细胞株SW480、SW620、DLD1以及正常人肝细胞HL-7702的增殖活力的影响;倒置显微镜下观察细胞形态的变化;DAPI染色法检测该水提物对不同细胞株细胞核凋亡的影响.结果表明:不同浓度(1、2、4、6 mg/mL)的玉米芯水提物对人结肠癌细胞株均有抑制能力,且呈明显的量效依赖关系.用该水提物处理正常细胞HL-7702,在低浓度时没有抑制作用,在高浓度时略有抑制作用.该水提物对各细胞株作用24h,半数抑制浓度(IC50)分别为2、3、4、6 mg/mL.显微镜观察表明:经该玉米芯水提物处理后的结肠癌细胞,形态发生明显的改变,细胞形状变圆,贴壁细胞数量明显减少.DAPI染色结果显示:多数细胞核表现出染色质的不均一性,有典型的“梅花”状凋亡小体出现.     

海南粗榧内生真菌抗肿瘤抗菌活性的筛选

对72株海南粗榧(Cephalotaxus hainanensis Li)内生真菌进行了抗肿瘤和抗菌活性筛选。结果显示, 有9株内生真菌至少对一种指示瘤株具有细胞毒活性, 5株内生真菌对金黄色葡萄球菌有较强的抑菌活性, 1株内生真菌对辣椒疫霉有抑制作用。这表明海南粗榧内生真菌是寻找有价值的生物活性成分的潜在资源, 其生物活性成分值得进一步研究。     

白杨素与咖啡酸苯乙酯抗肿瘤活性比较

研究白杨素和咖啡酸苯乙酯对不同肿瘤细胞的细胞毒性。正常培养的乳腺癌细胞(MCF-7、MDA-MB-231)、肺腺癌细胞(A549)、宫颈癌细胞(Hela)及血管内皮细胞(HUVECs)经不同浓度的白杨素和咖啡酸苯乙酯(20、40、80、160μM)分别处理24和48 h,倒置显微镜观察细胞形态,SRB法检测细胞存活率,吖啶橙染色和Hoechst 33258检测了对MDA-MB-231细胞凋亡的影响;划痕法检测了对细胞迁移的影响;荧光探针DCFH-DA、JC-1检测细胞内活性氧(ROS)和线粒体膜电位,免疫细胞化学法检测了NF-κB p65水平。结果表明,白杨素和咖啡酸苯乙酯以时间和剂量依赖的方式抑制肿瘤细胞增殖和迁移,上调MDA-MB-231细胞内的ROS,下调细胞内的线粒体膜电位和NF-κB p65水平。白杨素和咖啡酸苯乙酯是潜在的抗肿瘤活性的天然产物。     

高良姜素含氮衍生物的合成及其抗肿瘤活性

高良姜素是一种天然来源的黄酮醇类化合物,药理作用广泛,但尚未有关于其结构修饰的研究报道。本文以高良姜素为原料,设计、合成了5个高良姜素含氮衍生物,并对其结构进行1H NMR、13C NMR及MS表征;然后采用MTT法测试结构修饰产物的抗肿瘤活性,结果表明化合物2-苯基-3,5,7-三羟基-8-(吗啉甲基)-4H-色烯-4-酮(2c)和2-苯基-3,5,7-三羟基-8-(哌嗪-1-甲基)-4H-色烯-4-酮(2d)对人前列腺癌PC-3细胞株的增殖抑制活性(IC_(50):11.37和13.57μmol/L)显著优于高良姜素(IC50:41.66μmol/L),分别提高了3.66倍和3.07倍;化合物2-苯基-3,5,7-三羟基-8-(哌嗪-1-甲基)-4H-色烯-4-酮(2d)对人结肠癌LOVO细胞株的增殖抑制活性较高良姜素提高了5.22倍。该系列衍生物的抗肿瘤活性的增强可能与8-位上含氮杂环的引入有关。     

安宫牛黄丸中黄芩苷和黄芩素的含量测定

目的:利用高效液相色谱法建立安宫牛黄丸中黄芩苷和黄芩素含量的测定方法.方法:采用高效液相色谱法.以VenusilASB-C18柱(4.6mm×250mm,5μm)为色谱柱;流动相分别为:乙腈-0.4%磷酸(21:79;35:65);检测波长:277 nm;流速:1 ml.min-1.结果:安宫牛黄丸中黄芩苷和黄芩素的含量分别为0.148%;0.0169%.结论:该方法准确、灵敏度高、重现性好,可以作为安宫牛黄丸中黄芩苷和黄芩素含量的测定方法.     

虫草素衍生物体外抗肿瘤活性及体内药代动力学研究

本实验以虫草素为母核,合成三个虫草素衍生物,研究其体外抗肿瘤活性以及在大鼠体内的药物代谢动力学。以人肝癌细胞HepG2为研究对象,通过MTT法测定三种虫草素衍生物对其抑制作用。通过HPLC方法考察三个虫草素衍生物大鼠血浆药物浓度随时间变化趋势,检测大鼠血浆中药物含量并评价其药动学特性。研究发现,虫草素衍生物对HepG2细胞的抑制率增加。虫草素及三个衍生物IC_(50)值分别为0.12、0.11、0.07、0.06μM。虫草素衍生物T_(max )时间延长,药物在体内存在时间延长;随着C_(max)的升高,药物在体内的作用浓度升高。     

牛至油体外抗肿瘤活性研究

目的观察牛至油对肿瘤细胞株的生长抑制作用。方法采用MTT法检测不同浓度的牛至油对体外培养的多种肿瘤细胞株的生长抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50)。结果不同浓度牛至油作用后,人肝癌细胞系HepG2、人子宫颈癌细胞系JTC-26和肺癌细胞系A549出现增殖阻滞。MTT法确定牛至油对肝癌HepG2的IC50为118μg/ml;人子宫颈癌JTC-26的IC50为118μg/ml;肺癌A549的IC50为59μg/ml。结论牛至油具有体外抗肿瘤活性。     

海南黄芩中黄酮类化合物的分离与鉴定

目的:分离纯化海南黄芩中黄酮类化合物,并对其进行结构鉴定。方法:采用95%乙醇回流提取,醇提物用石油醚和氯仿萃取获得黄酮类化合物;采用岛津LC-10AD二元低压半制备液相色谱仪和Agilent半制备色谱柱(Phenyl,2.5 mm×25.0 cm,5μm)对氯仿萃取物进行分离纯化;采用高效液相色谱法对分离纯化获得的化合物进行纯度测定,并采用1H-NMR、13C-NMR波谱技术对其进行结构鉴定。结果:从海南黄芩中分离得到了5种化合物,纯度均大于95%,分别鉴定为5-羟基-7,8,2',6'-四甲氧基二氢黄酮、5,6,7-三羟基-2'-甲氧基黄酮、5,2'-二羟基-6,7-二甲氧基黄酮、黄芩素和黄芩素-7甲醚。结论:5种化合物均为首次从海南黄芩中分离得到,它们的获得丰富了海南黄芩化学成分组成,为其深入研究与开发提供了科学依据。     

TAT-凋亡素融合蛋白的表达及其抗肿瘤活性

凋亡素(apoptin)由鸡贫血病毒vp3基因编码,能特异地诱导肿瘤细胞凋亡而对正常细胞 没有毒性,为了获得可转导入细胞内部的凋亡素,将人工合成的编码TAT蛋白转导结构域的DNA片段与凋亡素编码基因克隆入质粒pET-28a内,构建出表达融合蛋白TAT-apoptin的原核表达载体pET-28a-TAT-apoptin.在大肠杆菌Rosetta（DE3）中表达融合蛋白,利用IDA -Ni2+ 亲和柱纯化,葡聚糖凝胶G 25除去尿素后得到可溶的变性蛋白.纯化后的TAT apoptin加入体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)和人肺癌Anip973细胞,对照组加入TAT-麦芽糖结合蛋白（TAT-MBP）. 经免疫组化检测,转导1 h后TAT-MBP分布于以上两种细胞的胞浆和胞核,TAT-apoptin则主要分布于2种细胞的胞浆内,转导24 h后TAT-MBP的亚细胞定位没有变化,TAT-apoptin分别定位于HUVECs的胞浆和Anip973的胞核中.脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）显示转导48 h后,TAT-MBP处理过的 HUVECs和Anip973细胞、TAT-apoptin处理过的HUVECs没有明显改变,而TAT-apoptin处理过的Anip973细胞大量凋亡.以上结果表明TAT apoptin融合蛋白在肿瘤治疗上有潜在的应用价值.     

滇产两面针中抗肿瘤活性生物碱成分研究

从滇产两面针的干燥根中分离得到12个化合物,通过其一维或二维核磁共振谱、质谱和理化性质的解析并结合文献鉴定了它们的结构,分别为9-去甲氧基两面针碱(1)、8-dehydroxyl-buesgenine(2)、6β-hydroxymenthyldihydronitidine(3)、花椒木精(4)、rhoifoline B(5)、两面针碱(6)、白屈菜红碱(7)、博落回碱(8)、白鲜碱(9)、γ-崖椒碱(10)、茵芋碱(11)和鹅掌楸碱(12)。其中,化合物1和2为新结构化合物。通过MTT法,首次评价了化合物1～12对黑色素瘤细胞WM9增殖的抑制活性,并发现化合物3和6对WM9细胞的增殖表现出较强的活性,半数抑制浓度(IC_(50))值分别为1.936μM和0.880μM,研究结果为抗肿瘤药物候选药物分子的发现提供了科学依据。     

海南大风子活性成分研究

用色谱技术对海南大风子(Hydnocarpus hainanensis (Merr.) Sleum.)枝条的乙醇提取物进行分离纯化,从中分离得到了6个化合物,经波谱数据分析与文献数据对照,分别鉴定为eoniferaldehyde (1)、mulberroside C(2)、mulberrofuran G(3)、mulb...     

台湾香檬果皮川陈皮素分离制备及其抗肿瘤活性研究

以台湾香檬(Citrus depressa)果皮为原料,采用超声波提取川陈皮素并用高效液相分离鉴定,探讨台湾香檬果皮川陈皮素的抗肿瘤活性。采用MTT法检测川陈皮素对肺癌、肝癌、卵巢癌细胞株增殖的影响,通过流式细胞仪采用双染法检测川陈皮素对肝癌细胞凋亡的作用。结果表明,台湾香檬果皮川陈皮素对肿瘤细胞有一定的广谱抑制作用,并能有效促进肝癌细胞凋亡。