miR-24对心脏成纤维细胞生长和迁移的影响及机制研究

目的:探讨miR-24对心脏成纤维细胞的生长和迁移的影响及机制。方法:采用RT-PCR检测心肌细胞和心脏成纤维细胞中mi R-24的表达水平。在心脏成纤维细胞中转染mi R-24 mimics、mimics control、mi R-24 inhibitors、inhibitors control后,通过Western blot检测细胞中Col-1、α-SMA的表达,MTT检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Transwell小室检测细胞迁移能力。通过靶基因预测库预测mi R-24的靶基因,荧光素酶鉴定靶基因的正确性,并通过RT-PCR和Western blot检测转染后细胞中Furin的表达。结果:心脏成纤维细胞HEH2中mi R-24的表达水平与心肌细胞H9C2相比差异显著(P0.01),心脏成纤维细胞中mi R-24表达上调。mi R-24 mimics组中Col-1、α-SMA的表达水平明显低于mimics control组(P0.01)。mi R-24 mimics组中细胞OD值较mimics control组显著降低(P0.01),mi R-24 inhibitors组中细胞OD值较inhibitors control组显著升高(P0.01)。mi R-24 mimics组、mimics control组、mi R-24 inhibitors组、inhibitors control组细胞凋亡无显著性差异(P0.05)。mi R-24 mimics组细胞迁移数目明显低于mimics control组,差异显著(P0.01),mi R-24 inhibitors组细胞迁移数目高于inhibitors control组,差异显著(P0.05)。mi R-24 mimics组细胞中Furin蛋白和m RNA水平明显降低,野生型Furin和mi R-24 mimics共转染的细胞中荧光素酶活性最低。结论:mi R-24在心脏成纤维细胞中高表达,通过靶基因Furin抑制心脏成纤维细胞合成Col-1、α-SMA,抑制心脏成纤维细胞增殖和迁移。     

miR-199a-3p负调控CBX7影响肺癌细胞NCI-H460的生物学行为研究

目的:探讨mi R-199a-3p负调控CBX7影响肺癌细胞NCI-H460的生物学行为。方法:qRT-PCR法检测并比较肺癌组织、癌旁正常组织、肺癌细胞、正常肺上皮细胞中的mi R-199a-3p m RNA相对表达量。比较远处转移肺癌组织、未转移肺癌组织中mi R-199a-3p m RNA相对表达量。qRT-PCR法、Western Blot法检测并比较肺癌组织、癌旁正常组织中的CBX7 m RNA及蛋白的表达水平。荧光素酶活性法检测mi R-199a-3p与靶基因CBX7的结合。比较mi R-199a-3p模拟物转染组与阴性对照组的肺癌细胞中的CBX7 m RNA相对表达量及CBX7蛋白表达水平。CCK8实验检测mi R-199a-3p对肺癌细胞增殖的促进作用。Tranwell实验检测mi R-199a-3p对肺癌细胞侵袭与迁移能力的影响。结果:肺癌组织中mi R-199a-3p明显高于癌旁正常组织,发生远处转移的肺癌组织中mi R-199a-3p m RNA的表达量明显高于未发生转移的肺癌组织,差异有统计学意义(P<0.001)。肺癌组织中CBX7m RNA、CBX7蛋白表达水平均明显低于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.001)。荧光素酶活性法证实mi R-199a-3p可与靶基因CBX7结合抑制CBX7的表达。肺癌细胞中mi R-199a-3p m RNA的相对表达量明显高于正常肺上皮细胞,CBX7 m RNA相对表达量明显低于正常肺上皮细胞(P<0.05)。对于肺癌细胞,mi R-199a-3p模拟物转染组的CBX7 m RNA相对表达量及CBX7蛋白表达水平均明显低于阴性对照组(P<0.001)。CCK8实验证实mi R-199a-3p能够促进肺癌细胞的增殖,Tranwell实验证实mi R-199a-3p对肺癌细胞侵袭与迁移具有积极的促进作用。结论:mi R-199a-3p在肺癌的发生发展过程中发挥重要作用,能够通过抑制CBX7基因的表达,促进肺癌细胞的增殖、侵袭和转移。     

过表达MicroRNA-21通过PTEN/PI3K/AKT信号通路调控人退变髓核细胞自噬的研究

目的:探讨过表达mi R-21通过PTEN/PI3K/AKT通路对人退变髓核细胞自噬的影响。方法:构建稳定过表达mi R-21 mimic人退变髓核细胞,转染无意义序列作为mi R-21 mimic control组,采用RT-qPCR检测转染效率;利用MDC荧光染色法观察细胞自噬泡;Western-Blot检测细胞自噬相关蛋白LC3和P62的表达以及PTEN/PI3K/AKT信号通路中关键蛋白PTEN、PI3K及AKT的表达水平。结果:RT-qPCR结果表明mi R-21 mimic转染成功且效率较高,与mi R-21 mimic control组及空白细胞对照组相比,差异显著(P0.05)。荧光显微镜观察MDC染色情况,mi R-21 mimic组的细胞中几乎没有发现自噬体,而mi R-21 mimic control组以及空白对照组细胞中自噬体均较多,与前者相比差异均明显,具有统计学意义(P0.05)。mi R-21 mimic组细胞中LC3-II/LC3-I表达量的比值均显著低于mi R-21 mimic control组及空白对照组细胞(P0.05);而P62在mi R-21 mimic组细胞中表达量显著高于mi R-21 mimic control组及空白细胞对照组,具有统计学意义(P0.05)。mi R-21 mimic组中PTEN蛋白的表达水平较低,与另外两组相比具有统计学意义(P0.05);磷酸化的PI3K(p-PI3K)和AKT(p-Akt)在mi R-21 mimic组中均明显高于mi R-21 mimic control组和空白细胞对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:mi R-21可以通过靶向沉默PTEN,促进PI3K和AKT发生磷酸化,进而使PTEN/PI3K/AKT信号通路被激活,最终抑制人椎间盘退变髓核细胞的自噬。     

miR-152靶向AT1R对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的:探讨微小RNA-152(mi R-152)靶向血管紧张素受体(AT1R)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响。方法:采用1μmol/L AngⅡ刺激体外培养的大鼠心肌成纤维细胞,通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,蛋白免疫印迹(Western blot)检测成纤维细胞中胶原蛋白I(Collagen I)、胶原蛋白I(Collagen Ⅲ)以及AT1R蛋白表达的影响,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测成纤维细胞中mi R-152和AT1R m RNA的表达。在AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞中分别转染mi R-152 mimic和mimic control、AT1R si RNA和si RNA control以及共转染mi R-152 mimic和AT1R过表达载体,以同样的方法检测细胞增殖和胶原合成情况。双荧光素酶报告基因实验检测mi R-152和AT1R靶向结合关系。结果:AngⅡ刺激能够促进心肌成纤维细胞增殖,上调成纤维细胞中胶原蛋白Collagen I和Collagen Ⅲ的表达,同时能够抑制mi R-152的表达,促进AT1R m RNA和蛋白的表达。在AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞中,过表达mi R-152或沉默AT1R均能够上调细胞增殖活力,促进胶原合成。双荧光素酶报告基因实验检测结果显示AT1R是mi R-152靶基因,mi R-152能够负向调控AT1R的表达。在AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞中,同时过表达mi R-152和AT1R能够逆转单独过表达mi R-152导致的细胞增殖抑制作用,回调胶原蛋白Collagen I和Collagen Ⅲ合成抑制作用。结论:mi R-152能够抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原合成,其作用机制可能是通过靶向AT1R的表达实现的。     

miR-448通过抑制上皮间质转化抑制肺癌细胞增殖和运动能力

探讨mi R-448对肺癌细胞增殖和运动的影响及其分子机制。采用实时荧光定量PCR(polymerase chain reaction)检测原发肺癌组织和癌旁正常组织mi R-448表达水平。转染mi R-448 mimic和inhibitor至肺癌A549细胞系,通过MTT(3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazoliumbromide)、平板克隆形成和Transwell实验观察mi R-448表达对A549增殖和运动能力的影响;利用Western blot检测EMT(epithelial-mesenchymal transition)标志物蛋白表达水平,通过实时荧光定量PCR检测EMT相关转录因子m RNA表达水平。实时荧光定量PCR显示较癌旁正常组织相比,mi R-448在原发肺癌组织中表达降低。MTT和平板克隆形成实验显示,过表达mi R-448抑制A549细胞增殖和运动能力;降表达mi R-448增强A549细胞增殖和运动能力。Western blot显示降表达mi R-448能下调上皮标志物E-cadherin,上调间质标志物Vimentin表达水平。实时荧光定量PCR显示降表达mi R-448能上调EMT相关转录因子Twist1和ZEB1 m RNA表达水平。mi R-448可通过抑制EMT抑制肺癌进展。     

microRNA-21对人舌鳞癌细胞的增殖和凋亡的影响

目的:探讨micro RNA-21(mi R-21)对人舌鳞癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:选取8例舌鳞癌组织和4例癌旁组织为研究材料,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)法对舌鳞癌及癌旁组织中的mi R-21相对表达量进行检测,利用人工合成的mi R-21mimic对人舌鳞癌Tca8113细胞进行瞬时转染,采用q RT-PCR法对Tca8113细胞中mi R-21相对表达量进行检测,采用四唑盐比色法(MTT)法对Tca8113细胞增殖情况进行检测,采用流式细胞术对Tca8113细胞周期与凋亡情况进行检测。结果:舌鳞癌组织中mi R-21的相对表达量(3.502±0.674),高于癌旁组织(0.998±0.192),差异有统计学意义(P0.05)。mi R-21mimic导致了Tca8113细胞中的mi R-21相对表达量上调(6.864±1.324),明显高于对照scramble组[(0.997±0.187),P0.05],对Tca8113细胞的增殖发挥了促进作用(P0.05)。经mi R-21mimic转染之后,Tca8113细胞进入S期的细胞出现了明显的增加[(27.4±5.1)%vs(48.6±8.7)%,P0.05],处于G1期的细胞出现了显著的减少[(56.3±9.6)%vs(36.2±7.2)%,P0.05],细胞凋亡数量出现了显著减少[(9.4±2.3)%vs(18.6±3.9)%,P0.05]。结论:mi R-21在舌鳞癌组织中高表达,过表达mi R-21有效促进了Tca8113细胞的增殖,抑制细胞的凋亡,mi R-21在舌鳞癌诊断和治疗可能具有一定的新型靶点价值。     

miR-223在结肠癌组织中的表达及促进结肠癌细胞迁移侵袭的机制研究

目的:探讨微小RNA-223 (mi R-223)在结肠癌组织中的表达及对结肠癌HT-29细胞侵袭、迁移能力的影响及机制。方法:检测mi R-223在结肠癌组织与癌旁组织中的表达。通过脂质体转染法将mi R-223模拟物(mi R-223 mimics,mi R-223 mimics组)及microRNA无关序列(mi R-223 NC,NC组)转染入结肠癌HT-29细胞。采用Real-time PCR检测转染后细胞中mi R-223和TWIST的表达,Western blot检测TWIST的蛋白表达,Tranwell检测细胞的迁移与侵袭能力。双荧光素酶报告基因检测mi R-223对TWIST基因启动子活性的影响。采用Transwell迁移与侵袭实验检测mi R-223 mimic及Twist si RNA共转染后人结肠癌细胞系HT-29迁移与侵袭能力的变化。结果:与癌旁结肠组织比较,mi R-223在结肠癌组织中呈现明显高表达(P0.05);与空白对照组和mi R-223 NC组比较,转染mi R-223 mimics后的HT-29细胞中的mi R-223表达显著增加(P0.05)。与阴性对照组和空载转染组相比较,mi R-223 mimics转染组穿透的细胞数目明显增加(P0.05),且mi R-223 mimics转染组的细胞侵袭能力显著增强(P0.05)。与mi R-223 NC组和空白对照组比较,转染mi R-223 mimics的HT-29细胞的TWIST基因m RNA和蛋白表达均显著增加(P0.05)。双荧光素酶检验结果显示TWIST为mi R-223的下游靶基因。共转染TWIST si RNA和mi R-223 mimics的结肠癌HT-29细胞的迁移与侵袭能力较单独转染mi R-223 mimics的HT-29细胞显著减弱(P0.05)。结论:mi R-223可能通过上调下游靶基因TWIST水平促进结肠癌HT-29细胞的迁移与侵袭。     

miR-382-3p靶向RASA1基因调控骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡

目的:探讨mi R-382-3p对骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法:用100 ng/mL的脂多糖(LPS)处理软骨细胞,记为LPS组,以正常培养的软骨细胞作为正常对照(NC)组。mi R-NC、mi R-382-3p、anti-miR-NC、anti-miR-382-3p转染至软骨细胞中,记为mi R-NC组、mi R-382-3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-382-3p组;将mi R-NC、mi R-382-3p、si-NC、si-RASA1转染至软骨细胞后再用100 ng/mL的LPS处理,记为mi R-NC+LPS组、mi R-382-3p+LPS组、si-NC+LPS组、si-RASA1+LPS组;将mi R-382-3p分别与pcDNA-NC、pcDNA-RASA1共转染至软骨细胞后再用100 ng/mL的LPS处理,记为mi R-382-3p+pcDNA-NC+LPS组、mi R-382-3p+pcDNA-RASA1+LPS组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测mi R-382-3p和Ras p21蛋白活化因子1(RASA1)m RNA表达水平;蛋白质印迹(Western blot)法检测RASA1、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved-caspase-3)蛋白表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡;荧光素酶报告实验检测mi R-382-3p和RASA1的靶向关系。结果:LPS诱导的软骨细胞中mi R-382-3p表达水平显著降低,RASA1表达水平显著升高,CyclinD1表达水平显著降低,Cleaved-caspase-3表达水平显著升高,细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高(P0.05)。过表达mi R-382-3p和敲减RASA1,LPS诱导的软骨细胞中CyclinD1表达水平显著升高,Cleaved-caspase-3表达水平显著降低,细胞存活率显著升高,细胞凋亡率显著降低(P0.05)。mi R-382-3p靶向调控RASA1,高表达RASA1部分逆转了mi R-382-3p高表达对LPS处理的软骨细胞增殖和凋亡的影响。结论:过表达mi R-382-3p促进软骨细胞增殖,抑制LPS诱导的软骨细胞凋亡,其机制可能与RASA1有关。     

食道癌组织miR-21、miR-182表达与临床病理特征及预后的关系

目的:探讨食道癌组织微小RNA-21(miR-21)、微小RNA-182(miR-182)表达与临床病理特征及预后的关系。方法:选取2011年4月到2013年7月期间在我院接受手术治疗的食道癌患者84例,取患者的癌组织和癌旁正常组织作为检验标本,比较癌组织和癌旁正常组织中miR-21、mi R-182的表达水平,并分析食道癌组织中mi R-182、mi R-21的表达与临床病理特征及预后的关系。结果:癌组织中mi R-21、mi R-182的相对表达量明显高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。食道癌组织中mi R-21的表达与淋巴结转移、临床分期有关(P<0.05),与性别、年龄、分化程度、肿瘤大小无关(P>0.05);食道癌患者癌组织中miR-182的表达与年龄、性别、肿瘤大小无关(P>0.05),与分化程度、临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。食道癌癌组织中miR-21、miR-182高表达患者的中位生存时间均低于低表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:食道癌组织mi R-21、mi R-182表达与患者的部分临床病理特征及预后有关,两者有望成为食道癌新的治疗靶点。     

miR-106b-93-25簇对子宫内膜癌细胞的调控作用研究

目的:检测mi R-106b-93-25基因簇对子宫内膜癌细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其机制。方法:q RT-PCR检测临床子宫内膜癌标本及癌旁正常组织中mi R-106b、mi R-93和mi R-25及其宿主基因MCM7的表达情况。将micro RNA及其拮抗剂转染ECC-1细胞后,MTT实验检测ECC-1细胞增殖情况,流式细胞术检测ECC-1细胞周期及细胞凋亡情况。荧光素酶报告系统验证mi R-106b和mi R-25分别直接调控p21和Bim。结果:临床标本子宫内膜癌组织与癌旁正常组织相比mi R-106b-93-25簇及其宿主基因MCM7的表达明显增高。mi R-106b-93-25簇能够促进ECC-1细胞增殖,减少凋亡。转染mi R-106b和mi R-93的细胞出现明显的S期阻滞,过表达mi R-25的细胞凋亡明显减少。mi R-106b-93-25簇通过抑制靶基因p21和Bim的表达,引起促增殖、抗凋亡作用。结论:mi R-106b-93-25簇能够促进子宫内膜癌细胞增殖,抑制凋亡,并使细胞发生S期阻滞。mi R-106b-93-25簇在子宫内膜癌的发生与发展中具有重要的作用。     

缺血性心肌病患者血浆microRNA-21的表达及作用机制研究

目的:探讨缺血性心肌病(ICM)患者血浆microRNA-21(miR-21)的表达及作用机制。方法:选取我院2010年2月-2016年3月收治的54例ICM患者为观察组,选取同期58例健康体检者为对照组,运用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)测定两组血浆miR-21表达水平,比较两组受试者总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、左心室射血分数(LVEF)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、左心室舒张末期容积(LVEDV)、N末端B型脑钠肽原(NT-proBNP)的变化,分析血浆miR-21水平与以上各项临床指标的相关性,评估miR-21在ICM诊治中的价值。结果:观察组LDL-C、HDL-C、LVEF水平低于对照组,差异有统计学意义(P0.05),血浆miR-21、TG、NT-proBNP及LVEDV水平高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。经Pearson相关分析显示,观察组血浆miR-21水平与NT-proBNP和LVEDV呈正相关(P0.05),而血浆miR-21水平与LVEF、LDL-C、HDL-C、TG、TC无相关性(P0.05)。结论:ICM患者血浆miR-21表达明显升高,并且其表达与NT-proBNP及LVEDV呈正相关,通过参与ICM患者心室重构发挥作用,可作为ICM诊治的新靶点及风险评估的新生物学标志物。     

miR-19通过Keap-Nrf2/HO-1信号通路对卵巢癌细胞增殖的影响

摘要 目的：研究卵巢癌组织和细胞中miR-19的表达,探讨其异常表达对卵巢癌细胞Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1（Kelch-like epichlorohydrin-associated protein1,Keap1）--核因子E2相关因子2（nuclearfactor-E2-relatedfactor2,Nrf2） /血红素氧合酶-1（heme oxygenase1,HO-1）信号通路及卵巢癌细胞增殖的影响。方法：回顾性收集2019年1月至2020年12月于我院就诊的患者经病理切片诊断为卵巢癌上皮细胞的手术标本30例,卵巢良性肿瘤标本30例,正常卵巢组织标本30例。免疫组化检测不同标本中Keap1、Nrf2、HO-1的表达,检测卵巢组织及细胞中miR-19、Keap1、Nrf2、HO-1的mRNA表达水平,及卵巢癌细胞中Keap1、Nrf2、HO-1的蛋白表达水平。在OVCAR-3细胞中沉默miR-19后,Western Blot检测细胞内Keap1、Nrf2、HO-1蛋白表达水平,收集沉默miR-19,对照组,沉默Nrf2、对照组的OVCAR-3细胞,继续培养0 h、24 h、48 h后,检测细胞增殖和凋亡。结果：Keap1蛋白在卵巢癌组织中的阳性表达显著低于良性卵巢肿瘤组织及正常卵巢组织;Nrf2和HO-1蛋白在卵巢癌组织中的阳性表达显著低于良性卵巢肿瘤组织及正常卵巢组织（P＜0.05）;沉默miR-19抑制其表达后,细胞内Keap1 mRNA、蛋白表达水平明显升高,Nrf2、HO-1 mRNA表达水平无明显变化,蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）;沉默miR-19 组、沉默Nrf2组与转染阴性对照组相比,增殖能力明显降低,凋亡能力明显升高（P＜0.05）。结论：卵巢癌细胞中,miR-19表达水平升高,可通过调控Keap1-Nrf2/HO-1信号通路影响卵巢癌细胞的增值、凋亡能力。     

miR-613通过靶向VEGFA抑制神经胶质瘤细胞的增殖、侵袭和血管生成

摘要 目的：旨在探究miR-613在胶质瘤中的表达及对细胞增殖、侵袭和血管生成的影响。方法：根据细胞转染将实验分组为对照miRNA组（Control组）、miR-613模拟物组（mimics组）和miR-613 mimics+VEGFA组（VEGFA组）。采用逆转录定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测胶质瘤细胞和组织中miR-613和VEGFA mRNA的表达水平;采用荧光素酶报告基因分析miR-613与血管内皮生长因子（VEGF）的关系;采用Western blotting检测VEGFA蛋白的表达水平;通过体外实验检测转染细胞的增殖能力、侵袭能力和管状形成能力。结果：与正常组织样本相比,胶质瘤I-II期组样本的肿瘤细胞呈现异形,具有深核染色,并且肿瘤细胞密度适度较低,而胶质瘤III-IV期组样本的肿瘤细胞的核分裂活跃,具有明显的微血管增殖和明显的细胞异型性;miR-613在胶质瘤I-IV期组织样本中显著降低（P<0.05）。在U87和U251细胞系的VEGFA-WT组中,与Control组相比,mimics组的荧光素酶活性显著降低（P<0.05）。与Control组相比,U87和U251细胞系中mimics组VEGFA的mRNA和蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）。克隆形成实验、血管生成实验和细胞侵袭实验结果表明,与Control组相比,mimics组的克隆形成数量、细胞侵袭数、内皮细胞HUVEC的管状形成数和Ang-2蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）;与mimics组相比,VEGFA组克隆形成数量、细胞侵袭数、内皮细胞HUVEC的管状形成数和Ang-2蛋白表达水平均显著升高（P<0.05）。结论：miR-613通过靶向VEGFA抑制了神经胶质瘤细胞的侵袭、增殖和血管生成,提示miR-613可能成为未来治疗胶质瘤的潜在靶点。     

miR-155靶向SOCS1对骨肉瘤Saos2细胞的增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨microRNA-155(miR-155)对骨肉瘤Saos2细胞增殖、侵袭和迁移的影响以及其作用机制。方法:利用实时荧光定量(qRT-PCR)实验检测miR-155在正常成骨细胞与骨肉瘤Saos2细胞中的表达水平,以及miR-155-mimic、miR-155-inhibitor的转染效率。采用CCK-8实验检测细胞的增殖能力,Transwell实验和划痕实验分别检测Saos2细胞的侵袭和迁移能力,Western blot检测细胞内的STAT3磷酸化水平以及SOCS1表达水平,双荧光素酶报告基因实验进行靶基因验证。结果:miR-155在骨肉瘤Saos2细胞中表达明显高于正常成骨细胞(P0.001)。在分别转染miR-155-mimic和miR-155-inhibitor后,Saos2细胞内miR-155表达水平明显上调和下降(P0.001)。过表达miR-155可促进Saos2细胞增殖、侵袭和迁移,降低SOCS1的蛋白水平,上调STAT3的磷酸化水平,差异均具有统计学意义。相反,降低miR-155水平可抑制Saos2细胞的增殖、侵袭和迁移能力,差异均具有统计学意义。结论:骨肉瘤Saos2细胞中高表达的miR-155可以通过抑制SOCS1表达来激活STAT3信号通路进而促进细胞的增殖、侵袭和迁移,因此,靶向抑制miR-155表达可以作为潜在治疗骨肉瘤的途径。     

lncRNA CEBPA-AS1靶向miR-455-3p调控胃癌细胞生物学行为的分子机制研究

摘要 目的：探讨lncRNA CEBPA-AS1对胃癌细胞生物学行为的影响及其可能作用机制。方法：qRT-PCR法检测胃癌组织、癌旁组织与正常人胃上皮GES1细胞和人胃癌SNU-1、AGS、HS-746T细胞系中lncRNA CEBPA-AS1、miR-455-3p的表达量。si-NC、si-lncRNA CEBPA-AS1、miR-NC、miR-455-3p mimics、si-lncRNA CEBPA-AS1与anti-miR-NC、si-lncRNA CEBPA-AS1与anti-miR-455-3p分别转染至SNU-1细胞（分别命名为si-NC组、si-lncRNA CEBPA-AS1组、miR-NC组、miR-455-3p组、si-lncRNA CEBPA-AS1+anti-miR-NC组和si-lncRNA CEBPA-AS1+anti-miR-455-3p组）后,MTT实验与平板克隆形成实验分别检测细胞增殖及克隆形成能力,Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验与qRT-PCR实验验证lncRNA CEBPA-AS1与miR-455-3p的靶向调控关系,Western blot法检测MMP2、MMP9蛋白表达情况。结果：与癌旁组织比较,胃癌组织中lncRNA CEBPA-AS1的表达量显著升高,miR-455-3p的表达量显著降低,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与GES1细胞比较,SNU-1、AGS、HS-746T细胞中lncRNA CEBPA-AS1的表达量显著升高,miR-455-3p的表达量显著降低,其中SNU-1细胞的lncRNA CEBPA-AS1表达量最高,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与si-NC组比较,si-lncRNA CEBPA-AS1组细胞活力降低,细胞克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少,MMP2、MMP9蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。与miR-NC组比较,miR-455-3p组细胞活力降低,细胞克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少,MMP2、MMP9蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。lncRNA CEBPA-AS1可靶向结合miR-455-3p,并可负调控miR-455-3p的表达。与si-lncRNA CEBPA-AS1+anti-miR-NC组比较,si-lncRNA CEBPA-AS1+anti-miR-455-3p组细胞活力升高,细胞克隆形成数、迁移及侵袭细胞数增多,MMP2、MMP9蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：干扰lncRNA CEBPA-AS1表达可通过靶向调控miR-455-3p而抑制胃癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭。     

血清微小RNA-21水平与糖尿病肾病患者氧化应激的相关性研究

目的:探讨血清微小RNA-21(mi R-21)水平与糖尿病肾病(DN)患者氧化应激的相关性。方法:选择2015年1月到2017年5月我院就诊的169例DN患者作为研究对象,其中DN分期早期组95例,中晚期组74例。另选同期在我院接受健康体检者90例作为对照组,对比各组血清mi R-21水平和氧化应激指标,分析患者血清mi R-21水平与氧化应激指标的相关性。结果:各组血清mi R-21水平相比差异有统计学意义(P0.05),中晚期DN组及早期DN组血清mi R-21水平均明显低于对照组,且中晚期DN组又明显低于早期DN组,差异均有统计学意义(P0.05)。各组氧化应激指标相比差异有统计学意义(P0.05),中晚期DN组及早期DN组丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、晚期氧化蛋白产物(AOPP)及NADPH氧化酶4(NOX4)均明显高于对照组,且中晚期DN组又明显高于早期DN组;而血红素氧合酶1(HO-1)明显低于对照组,且中晚期DN组又明显低于早期DN组,差异均有统计学意义(P0.05)。依据Spearman法分析相关性发现,血清miR-21水平与MDA、SOD、AOPP及NOX4均呈负相关(P0.05),与HO-1呈正相关(P0.05)。结论:血清mi R-21水平与DN患者氧化应激指标均具有明显的相关性,临床上可尝试将miR-21纳入到DN患者病情监测的指标体系中,从而有助于疾病的诊治及患者的预后。     

miR-182在前列腺癌组织中的表达及其对前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察前列腺癌组织及不同前列腺癌细胞系中miR-182的表达,并探讨下调其表达对前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法:采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测30例前列腺癌组织和30例相应的癌旁组织以及前列腺正常上皮RWPE-1细胞、前列腺癌PC-3、LNCa P和DU145细胞中miR-182的表达,进一步采用Lipfectamine 2000脂质体转染miRNA-182 inhibitor和阴性对照miRNA于PC-3细胞后,通过噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫印迹(Western blot)法检测转录因子FOXO1、血管内皮生长因子(VEGF)和抑癌基因p53蛋白的表达。结果:miR-182在前列腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P0.05);miR-182在前列腺癌细胞系PC-3、LNCa P和DU145中的表达均高于前列腺正常上皮细胞RWPE-1(P0.05),其中PC-3细胞中miR-182表达水平最高。转染miRNA-182 inhibitor至PC-3细胞成功下调miR-182表达后,细胞的增殖能力明显受到抑制,细胞凋亡能力明显增强,FOXO1表达水平显著升高,VEGF和p53的表达明显降低,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:miR-182在前列腺癌组织及细胞中呈高表达,下调miR-182的表达可能通过增加FOXO1的表达并减少VEGF和p53的表达,抑制前列腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

miR-182靶向抑制FBXW7表达影响非小细胞肺癌细胞增殖研究

目的:研究microRNA-182(miR-182)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达,并探讨其对NSCLC细胞增殖的影响及作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测miR-182在11例NSCLC及相应癌旁组织中的表达情况;Western blot检测FBXW7,c-Jun,c-Myc及cyclin D蛋白的表达;将miR-182模拟物,抑制物及相应空白对照瞬时转染H460细胞后,以细胞增殖与活性检测和克隆形成实验检测细胞系的增殖情况;流式细胞术检测细胞周期和凋亡变化;荧光素酶报告基因实验证实miR-182对FBXW7的靶向性作用。结果:NSCLC组织中miR-182的相对表达水平显著高于癌旁组织(P0.05)。转染组与对照组相比,H460细胞生长、克隆形成能力显著增强,细胞周期进程加快,细胞凋亡受到抑制(P0.05)。在NSCLC组织中,FBXW7蛋白的表达水平明显低于癌旁组织(P0.05)。miR-182 mimics显著降低野生型FBXW7质粒荧光素酶的活性,然而将结合位点突变后,miR-182 mimics则不再影响荧光素酶的活性。结论:miR-182在NSCLC组织中高表达,与FBXW7之间存在靶向关系,通过下调FBXW7蛋白表达促进NSCLC细胞的增殖,参与肿瘤的发生发展,预示其可能成为一种潜在的生物标志和治疗靶点。