MGMT 甲基化影响替莫唑胺对胶质母细胞瘤疗效的研究

目的:探讨MGMT甲基化如何影响替莫唑胺对胶质母细胞瘤的治疗效果。方法:选取41个胶质母细胞瘤患者(根据相同替莫唑胺化疗方案治疗下临床结局的不同分为两组)的肿瘤组织,采用甲基化特异性聚合酶链反应分析胶质瘤组织中MGMT基因启动子区过甲基化状态,同时采用免疫组织化学法分析胶质瘤组织中MGMT蛋白表达情况。结果:临床结局不佳组中,以MGMT蛋白表达阳性的肿瘤为主(72.2%),而在结局相对良好组中,MGMT蛋白表达的阳性率仅为39.1%;在MGMT蛋白表达阳性的22例胶质母细胞瘤组织中,7例MGMT启动子甲基化,阳性率为31.8%,在MGMGT蛋白表达阴性的19例中,14例MGMT启动子甲基化,阳性率为73.7%(P<0.05)。结论:MGMT基因启动子区的甲基化状态与MGMT蛋白的表达相关。MGMT基因启动子过甲基化,MGMT蛋白表达较低;MGMT基因启动子去甲基化,MGMT蛋白表达较高。MGMT启动子过甲基化通过抑制MGMT基因的表达而增加替莫唑胺的疗效。     

凋亡诱导因子介导缺氧/复氧致肥大心肌细胞凋亡的作用

心肌细胞凋亡导致心肌组织合胞体功能丧失,最终使代偿性心肌肥大向心力衰竭转化。过去的研究已经确认天门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspartate-specificcysteinylproteinase,caspase)依赖机制在心肌细胞凋亡中的作用,但对caspase非依赖机制即凋亡诱导因子(apoptosis-inducingfactor,AIF)在心肌细胞凋亡中的作用尚不明确。本研究应用血管紧张素Ⅱ(0.1μmol/L培养12h)诱导培养的小鼠肥大心肌细胞,利用三气孵箱建立缺氧/复氧模型以模拟缺血再灌注。应用RT-PCR、Westernblot、siRNA基因转染、Hoechst33258染色法检测AIF在mRNA和蛋白质水平的表达及细胞凋亡的变化,分析AIF在缺氧/复氧致肥大心肌细胞凋亡中的意义。结果如下:(1)与对照组比较,缺氧8h组(H8h)和缺氧12h组(H12h)AIFmRNA及蛋白表达水平均显著升高(mRNA:0.52±0.04及0.85±0.10vs0.29±0.08,P<0.05;蛋白质:2.07±0.15和3.12±0.19vs0.29±0.04,P<0.05),即随缺血时间的延长,AIFmRNA及蛋白表达水平均显著增加。(2)与对应单纯缺氧组比较,缺氧后给予复氧刺激,H8h/R组和H12h/R组AIFmRNA及蛋白表达水平均显著升高(mRNA:1.09±0.12和1.41±0.23,P<0.05;蛋白质:4.57±0.25和5.71±0.27,P<0.05)。仅在H8h/R及H12h/R组,可见AIF核转位显著增加。(3)AIFsiRNA转染可显著抑制肥大心肌细胞AIF的表达,对缺氧时细胞凋亡无明显影响(P>0.05),但可显著降低缺氧/复氧诱导的肥大心肌细胞凋亡率(P<0.05)。同时抑制AIF及caspase-3活性,可显著加强单一抑制剂对缺氧/复氧诱导的肥大心肌细胞凋亡的抑制作用。(4)抑制caspase-3活性对缺氧/复氧诱导的AIF核转位无明显影响。上述结果提示,缺氧/复氧时AIFmRNA、蛋白表达和核转位均显著增加,且在缺氧/复氧诱导肥大心肌细胞凋亡中具有重要的作用。     

清开灵对小胶质细胞BV2缺氧再复氧损伤gp~(91phox)表达的影响

目的:建立小胶质细胞缺氧再复氧损伤模型,观察产生ROS的NADPH氧化酶的重要功能亚基gp91phox的表达变化及清开灵的干预作用,丰富清开灵基于解毒通络法以祛除内毒恢复脉络的作用内涵。方法:体外培养小鼠胶质细胞BV2,细胞分为正常组、模型组和清开灵高、中、低剂量组,在1%O2三气培养箱中缺氧12小时再复氧12小时模拟缺血再灌注损伤,正常对照组在培养箱中培养24小时,实时荧光定量PCR法检测gp91phoxmRNA的转录水平,Western blot法检测gp91phox蛋白表达。结果:缺氧再复氧损伤后,模型组gp91phox基因转录水平和蛋白表达提高(P0.05);与模型组比较,清开灵低、中、高剂量组都有明显改善作用,其中低剂量(0.0625%)对基因转录降低更明显,高剂量组(0.25%)对gp91phox蛋白表达的抑制更显著,具有统计学意义(P0.05)。结论:清开灵可通过降低缺氧再复氧后小胶质细胞gp91phox的表达,减少活性氧的产生而抑制脑缺血损伤氧化应激反应。     

环孢霉素A通过ROS-Cyclophilin A-ERK1/2信号途径抑制人脐静脉内皮细胞与中性粒细胞粘附

为研究环孢霉素A(cyclosporin A,CsA)对缺氧／复氧诱导人脐静脉内皮细胞(ECV-304)与中性粒细胞粘附的影响,本工作以缺氧／复氧诱导粘附为模型,采用D-N-乙酰氨基己糖苷酶比色法检测粘附率,流式细胞术检测ECV-304细胞表面粘附分子E-选择素(E-selectin)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的表达,Fenton反应测定活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量,Westera-blot法检测ECV-304细胞亲环素A(cyclophilin A,CyPA)、磷酸化及总细胞外信号调节激酶(ERK1／2)蛋白的表达。结果发现,ECV-304细胞经缺氧／复氧处理后,ROS释放增多,E-selectin、ICAM-1的表达上调,其表面中性粒细胞的粘附增加,CsA能显著抑制缺氧／复氧的上述作用。缺氧／复氧后,CyPA蛋白表达明显上调,ERK1/2显著活化,细胞总ERK1/2蛋白表达无明显改变。CyPA抑制剂CsA以及CyPA反义寡核苷酸均明显减轻缺氧／复氧诱导的ERK1/2激活,显著减少ECV-304细胞与中性粒细胞柑附。ERK112信号通路特异性阻断剂PD98059亦显著抑制ECV-304细胞与中性粒细胞的粘附。上述结果提示,CsA抑制缺氧气／复氧诱导的ECV-304细胞与中性粒细胞粘附,并可能通过抑制ROS-Cyclophilin A-ERK112的信号转导途径实现。     

贝伐单抗联合替莫唑胺对老年胶质母细胞瘤术后患者预后的影响

目的:探讨贝伐单抗联合替莫唑胺对老年胶质母细胞瘤术后患者预后的影响。方法:选择2014年1月到2016年1月在第四军医大学西京医院诊治的老年胶质母细胞瘤术后患者78例,根据治疗方法的不同分为观察组与对照组各39例,观察组给予替莫唑胺与贝伐单抗联合治疗,对照组只给予替莫唑胺治疗,观察和比较两组患者的的预后情况。结果:观察组与对照组的有效率分别为48.7%和23.1%,观察组显著高于对照组(P0.05)。观察组治疗期间的肝肾反应、胃肠道反应、疲乏、骨髓抑制等毒副反应的发生率明显低于对照组(P0.05)。观察组治疗后的KPS与ECOG评分分别为64.22±2.19分和1.65±0.45分,对照组为56.35±4.50分和2.41±0.51分,组间对比差异明显(P0.05),且与治疗前对比也有明显差异(P0.05)。观察组与对照组的的中位生存时间分别为30个月和21个月,观察组的3年生存率为41.0%,对照组为16.4%,观察组都明显优于对照组(P0.05)。结论:贝伐单抗联合替莫唑胺可显著改善老年胶质母细胞瘤术后患者的生存质量,提高治疗疗效与延长患者的生存时间,且安全性较高。     

黄芩素抑制人巨细胞病毒感染星形胶质细胞的实验研究

目前对人巨细胞病毒(human cytomegalovirous,HCMV)感染尚无特异有效的治疗和预防手段,研究通过观察黄芩素(baicalein,BAI)抑制HCMV体外感染人星形胶质细胞引起的IE、pp65 mRNA及蛋白表达的变化,探讨黄芩素抗HCMV感染的机制。运用MTT法检测BAI组、HCMV组、HCMV+BAI组和对照组细胞的细胞活性,观察BAI对HCMV感染致人星形胶质细胞增殖异常的抑制作用;Real-time PCR检测不同组之间IE、pp65 mRNA表达的变化;免疫荧光、Western blot技术检测IE、pp65蛋白表达的变化。MTT结果显示,20μmol/L BAI+HCMV组的吸光值在24、48、72 h均高于HCMV组(P0.05);形态学观察病毒感染48 h时,HCMV组细胞出现明显的细胞病变效应(CPE),而20μmol/L BAI+HCMV组细胞状态较好,CPE不明显;Real-time PCR结果显示在感染48和72 h时20μmol/L BAI+HCMV组IE、pp65的mRNA表达明显低于HCMV组(P0.05);免疫荧光、Western blot结果显示20μmol/L BAI+HCMV组细胞的IE、pp65蛋白表达明显低于HCMV组(P0.05)。以上结果显示,适当浓度的黄芩素能抑制HCMV感染所致的细胞增殖异常,同时降低IE及pp65的mRNA和蛋白表达量。     

基于转录组测序的黄芩素对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的研究

目的 通过转录组测序(RNA sequencing, RNA-Seq)初步探讨黄芩素对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)的作用机制。方法 采用VITEK MS质谱检测仪和Vitek2-Compact药敏分析对菌株T3进行鉴定和药敏试验。通过微量肉汤稀释法测定黄芩素(baicalein, BE)对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌T3的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC)。用Illumina NovaSeq 6000转录组测序平台对1/2 MIC黄芩素处理的肺炎克雷伯菌株T3和正常对照组进行RNA-Seq;利用Trimmomatic、Rockhoppe、edgeR和Goatools等生物信息学工具软件处理转录组数据,并分析得到的2组间差异表达基因、基因本体论(gene ontology, GO)注释、GO富集及KEGG代谢通路。结果 菌株T3为对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌,黄芩素对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌T3的MIC为160μg/mL。与对照组相比,黄...     

维生素C联合替莫唑胺对胶质瘤细胞的毒性作用及其机制*

目的:探讨维生素C(VC)联合替莫唑胺(TMZ)对胶质瘤细胞活力的毒性作用及其机制。方法:在体外条件下培养人胶质瘤细胞BMG-1和SHG44细胞,设对照组(不施加VC与TMZ)、TMZ组(0.2 mmol/L)、VC(0.5 mmol/L)+TMZ(0.2 mmol/L)组,TMZ(0.2 mmol/L TMZ)+U0126(10 μmol/L)组,每组实验重复3次。采用MTT实验检测细胞生存率;流式细胞术和Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡情况; ROS检测试剂盒检测活性氧簇(ROS)水平, Western blot检测与凋亡、自噬及ERK通路相关蛋白的表达。结果:与对照组比较,TMZ组胶质瘤细胞的存活率显著下降(P＜0.05)。与TMZ组比较,VC+TMZ组胶质细胞瘤细胞的存活率显著下降(P＜0.01),VC+TMZ组中细胞凋亡率显著升高,且Bax、Cleaved caspase-3及Cleaved PARP蛋白表达显著增加,Bcl-2表达显著降低,而ROS水平及细胞自噬率显著降低,LC3-II/LC3-1表达显著降低,p62表达显著增加(P均＜0.05)。同时,联用可降低BMG-1和SHG44细胞中的p-ERK1/2相关蛋白的表达水平,且提高细胞凋亡率(P均＜0.05)。结论:VC联合TMZ能够增强对胶质瘤细胞的毒性,而这一作用是通过ERK信号通路来促进细胞凋亡并抑制替莫唑胺所介导的自噬作用。     

TRPC3参与糖氧剥夺致培养的少突胶质细胞凋亡

目的:研究瞬时受体电位通道蛋白3(transient receptor potential channel 3,TRPC3)是否参与糖氧剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)少突胶质细胞的凋亡。方法:以原代培养的新生SD大鼠少突胶质细胞为对照组,以OGD2h的少突胶质细胞为模型组,将模型组+Pyr3阻断设为处理组。采用蛋白质免疫印迹法检测TRPC3蛋白的表达水平,MTT试剂盒比色法检测各组细胞存活率,Annexin V-FITC试剂盒染色后经流式细胞仪检测细胞凋亡,fluo-3染色后经流式细胞仪和激光共聚焦显微镜测定胞内游离钙的变化。结果:少突胶质细胞A2B5和MBP特异性标记阳性,细胞纯度可达到95%以上;少突胶质细胞OGD2h成功建立OGD模型;OGD组TRPC3蛋白表达增加;OGD组细胞活性为(54.34±6.55)%,凋亡率为(24.24±0.86)%,与对照组有显著差异(P0.05),Pyr处理组细胞存活率为(72.26±5.41)%,凋亡率为(14.82±0.28)%,与OGD组有显著差异(P0.05);OGD组胞内游离钙浓度显著升高,而Pyr3阻断以后可以部分抑制其升高。结论:TRPC3表达增加介导胞内游离钙离子水平的升高可能是OGD少突胶质细胞凋亡的重要原因之一。     

锁阳乙酸乙酯提取物的雌激素样作用研究

雌激素提高学习记忆能力的功能已被广泛承认,前期实验证实锁阳乙酸乙酯提取物(ECS)可表现出雌激素样作用,提高去卵巢大鼠的学习记忆能力及血清E2水平,对Aβ损伤SK-N-SH细胞有一定的保护作用。为了进一步研究ECS的雌激素样作用机制,拟在小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro2A)上探寻ECS对学习记忆相关蛋白突触素蛋白synaptophysin和环磷腺苷效应元件结合蛋白表达影响。采用CCK8法测定ECS对小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro2A)细胞活力的影响。将小鼠神经母细胞瘤细胞分为正常组、DMSO组、ECS组、Tamoxifen组、Tamoxifen+ECS组;正常组、ECS组、ECS+G15组和正常组、DMSO组、ECS组、PD98059组、PD98059+ECS组。采用Western blot法测定synaptophysin,p-creb蛋白表达情况。实验表明锁阳乙酸乙酯提取物可促进synaptophysin,P-CREB表达,ER受体竞争性拮抗剂Tamoxifen可降低synaptophysin表达,对ECS促进synaptophysin表达无显著影响。GPR30受体特异性阻断剂G15可显著降低ECS促进synaptophysin表达。p-CREB上游Erk1/2-MAPK通路的阻断剂PD98059可显著抑制ECS上调p-CREB表达,结合前期实验结果,我们认为ECS可与GPR30结合通过MAPK通路促进学习记忆相关蛋白synaptophysin表达。     

神经元-小胶质细胞EphA4/ephrin通路调控小胶质细胞介导的缺血后炎性损伤

目的观察神经元-小胶质细胞间EphA4/ephrin信号通路在脑缺血后的炎性损伤中的作用及机制。方法建立神经元-小胶质细胞混合培养体系和糖氧剥夺再复氧(oxygen-glucose deprivation and reperfusion, OGD/R)模型,使用预聚集化的EphA4-Fc激动小胶质细胞ephrin配体,检测OGD/R后的细胞凋亡、小胶质细胞增殖和亚型极化以及小胶质细胞功能改变。结果 EphA4受体高表达于原代神经元,与对照组相比,预聚集化EphA4-Fc干预加重OGD/R导致的细胞凋亡,促进小胶质细胞增殖以及向M1型(促炎型)极化(炎症表型)。结论神经元-小胶质细胞间EphA4/ephrin信号通路通过调控小胶质细胞亚型极化参与脑缺血后的炎性损伤的过程。     

Ephrin-A3逆向通路对海马星形胶质细胞谷氨酸摄取能力的影响

目的观察EphA4介导的ephrin-A3逆向通路激活对星形胶质细胞谷氨酸摄取能力的影响。方法采用原代培养的大鼠海马星形胶质细胞,使用免疫荧光双标法定位ephrin-A3在海马星形胶质细胞上的表达,Western blot法观察糖氧剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)后星形胶质细胞ephrin-A3表达水平的变化,随后实验分为三组:空白对照组(不含星形胶质细胞),药物对照组(加入IgG-Fc)和EphA4组(加入ephrin-A3逆向通路激动剂预聚集化的EphA4-Fc),分别在正常及缺血条件下的特定时间点以谷氨酸浓度测定试剂盒检测不同干预组星形胶质细胞谷氨酸摄取能力的变化。结果 ephrin-A3高表达于海马星形胶质细胞,并在缺血后出现蛋白表达水平一过性上调。与对照组相比,EphA4干预组星形胶质细胞谷氨酸摄取能力较对照组明显下降。结论 Ephrin-A3高表达于海马星形胶质细胞并参与调节星形胶质细胞谷氨酸摄取能力。     

ROCK特异性抑制剂Y27632对缺氧后少突胶质前体细胞分化的影响

目的观察ROCK特异性抑制剂Y27632对缺氧损伤(Oxygen-glucose deprivation,OGD)后少突胶质前体细胞分化的影响。方法培养SD大鼠大脑皮层少突胶质前体细胞,实验分为对照组、对照+Y27632组、OGD组、OGD+Y27632组四组;对细胞进行OGD处理2h,取4d后时间点,进行免疫荧光组化染色和Western blot实验,检测细胞A2B5、NG2、O4及MBP蛋白表达情况。结果与对照组相比,OGD组表达少突胶质细胞特异性蛋白MBP量明显增多(P0.01);OGD+Y27632组比单纯OGD组表达少突胶质细胞特异性蛋白MBP的量显著增加(P0.01)。结论 OGD损伤可促进OPCs的分化,Y27632特异性抑制ROCK可以进一步促进OGD损伤后OPCs的分化,提示ROCK信号通路在缺氧诱导OPCs分化的过程中有重要的调控作用。     

沉默NHE1抑制胶质母细胞瘤细胞的迁移和侵袭能力

钠氢交换蛋白1(sodium hydrogen exchange protein,NHE1)是调控细胞内酸碱平衡的膜蛋白。本研究旨在探究NHE1蛋白的表达对胶质母细胞瘤细胞迁移和侵袭影响。首先采用Matrigel-transwell侵袭实验比较胶质母细胞瘤U87和U251的侵袭能力,并分别分选出两细胞株强、弱亚群;采用反转录-实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-q PCR)检测U87和U251细胞以及两细胞株强、弱亚群中NHE1 m RNA水平;然后采用靶向NHE1 m RNA的si RNA(si-NHE1)和si RNA阴性对照(si-NC)分别转染U87细胞,RT-q PCR法和蛋白质免疫印迹实验检测两组中NHE1 m RNA和蛋白水平;Transwell实验检测两组细胞的迁移和侵袭能力。结果显示U87细胞的侵袭能力强于U251细胞,NHE1 m RNA在U87细胞表达量是U251细胞中的50.08倍,NHE1 m RNA在两种细胞株的强侵袭性亚群中的表达量分别是弱侵袭性亚群的19.8倍和62.3倍,差异均具有统计学意义(p0.05)。转染si-NHE1可有效降低U87细胞内NHE1的m RNA和蛋白水平。迁移实验中si-NHE1组和si-NC组细胞穿过8μm微孔滤膜数目分别是(188.33±16.04)和(138.00±9.54);侵袭实验中两组细胞穿过数目分别是(207.33±16.56)和(119.67±9.61),两实验数据差异均具有统计学意义(p0.05)。以上研究表明,NHE1在胶质母细胞瘤中的表达呈异质性,其表达水平与胶质母细胞瘤细胞的侵袭能力能正相关。沉默NHE1可显著抑制胶质母细胞瘤细胞的迁移和侵袭能力。本研究为解析胶质母细胞瘤的侵袭性生长的特性和临床治疗胶质母细胞瘤提供了新的思路。     

肾上腺髓质素调节诱导型一氧化氮合酶对缺氧肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨缺氧对肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖和凋亡的影响以及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的蛋白表达变化及肾上腺髓质素(ADM)在缺氧影响PASMC增殖和凋亡中的作用与意义.方法:离体缺氧培养大鼠PASMC,采用MTT比色法和PCNA的免疫组化法测定细胞增殖反应,采用流式细胞仪法检测细胞凋亡情况,采用Westen blot蛋白印迹法检测iNOS的蛋白表达.结果:①MTT法发现,缺氧24 h组的A值明显高于常氧组(P＜0.01),而缺氧 ADM组明显低于缺氧组(P＜0.01),与常氧组比较差别无显著性(P＞0.05),缺氧 L-NAME组A值明显高于缺氧组和常氧组(P＜0.01).②免疫组化法发现,常氧组PCNA呈弱阳性表达,而缺氧24 h组PCNA呈阳性表达(P＜0.01).ADM明显抑制了缺氧24 h组PCNA的表达(P＜0.01);而L-NAME则促进了缺氧24 h组PCNA的表达(P＜0.01).③流式细胞仪分析发现,常氧组、缺氧组、缺氧 ADM组、缺氧 L-NAME组,在缺氧培养24 h后,其凋亡指数比较差别无显著性(P均＞0.05).④Westen blot发现常氧组大鼠PASMC见少量iNOS表达,缺氧4 h后,表达明显增多(P＜0.01),8h,24 h持续高表达(P＜0.01);L-NAME对iNOS蛋白的表达没有影响.ADM促进iNOS蛋白的表达.结论:①缺氧能促进肺动脉平滑肌细胞低氧性增殖,对肺动脉平滑肌细胞的凋亡无影响.②缺氧能诱导肺动脉平滑肌细胞表达iNOS,ADM能促进iNOS的表达,ADM、iNOS在HPH发展中可能起到抑制作用.     

紫草素促进肺癌A549细胞凋亡

目的:探讨紫草素对A549人肺癌细胞凋亡的影响和可能的作用机制。方法:采用不同浓度的紫草素对体外培养的A549人肺癌细胞进行干预,CCK-8法和流式细胞术分别检测紫草素对A549细胞增殖和凋亡的影响,Western blot观察凋亡相关蛋白(Bcl-2和Bax)表达水平的变化,激光共聚焦显微镜检测紫草素处理12 h并用JC-1染色的A549细胞线粒体膜电位改变。结果:CCK-8分析显示,0.5μM、1μM、2μM、4μM和6μM实验组A549细胞相对存活率分别为(83.71±1.02)%、(57.47±2.78)%、(27.39±1.96)%、(16.96±1.47)%和(14.72±1.93)%,与对照组相比实验组A549细胞相对存活率明显降低;流式细胞术结果表明,1μM、2μM、4μM实验组A549细胞的凋亡率分别为(13.80±1.76)%、(40.90±3.48)%和(78.80±2.52)%,与对照组相比紫草素呈剂量依赖型促进A549细胞凋亡;Western blot结果证实,紫草素能降低A549细胞中Bcl-2蛋白的表达量,而升高Bax蛋白的水平;激光共聚焦显微镜扫描结果显示紫草素能降低A549细胞的线粒体膜电位,呈剂量依赖型。结论:紫草素能显著促进A549细胞凋亡,其机制可能与下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达和上调促凋亡蛋白Bax的表达有关。     

LMO3过表达对胶质细胞增殖的作用

构建重组质粒pcDNA4/HisA-LMO3,转染C8-D1A胶质细胞,对照组为pcDNA4/HisA空载体质粒转染组和未转染组,MTT观察各组细胞的体外生长情况,流式细胞术(FCM)测定各组细胞的细胞周期和凋亡细胞百分比,Western-blot检测LMO3转染后凋亡相关蛋白的表达变化,从而观察LMO3基因对C8-D1A胶质细胞体外生长的影响.RT-PCR、Western印迹显示pcDNA4/HisA-LMO3转染组LMO3mRNA及LMO3蛋白表达水平明显高于对照组;与对照组细胞相比,转染组细胞的增殖能力明显高于空载体对照组及C8细胞(P0.01),S期细胞增加,G0/G1期细胞减少,C8细胞转染LMO3后可以促进C8细胞从G0/G1期进入S期,从而促进细胞的增殖.     

正常与氧糖剥夺再复氧培养的星形胶质细胞来源外泌体miRNA测序分析

本研究通过高通量测序技术,分析正常培养和氧糖剥夺再复氧(oxygen and glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)培养星形胶质细胞来源外泌体的差异微小RNA(microRNA,miRNA)。采用超速离心法提取正常组和OGD/R组星形胶质细胞培养基上清的外泌体,透射电镜观察到提取的外泌体呈典型囊泡状,包膜完整,含有低电子密度的物质;纳米颗粒追踪技术(NTA)检测到星形胶质细胞外泌体大小为100.5±31.1 nm,占比为 96.8%;免疫印迹检测显示,提取物中有外泌体标志性蛋白肿瘤易感蛋白(tumour-susceptibility protein, TSG101)、热休克蛋白60 (heat shock proteins 60, Hsp60)、ALG-2相互作用蛋白X(ALG-2-interacting protein X, ALIX)的表达。与正常组相比,OGD/R组共有41个miRNA发生显著改变,其中20个miRNA显著升高,21个miRNA显著降低(P<0.05)。基因本体功能(GO)分析显示,差异靶基因主要参与蛋白质糖基化、脂质代谢过程、磷酸化作用、高尔基体、内质网、内吞体、细胞质囊泡和细胞突起等生物学过程;京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析发现,差异靶基因主要与丁酸代谢、β-丙氨酸代谢、脂肪酸降解、线粒体自噬和P53信号通路等代谢途径和信号通路有关。通过对正常组和OGD/R组的星形胶质细胞来源的外泌体miRNA测序并进一步施行靶基因功能富集分析,为后续研究星形胶质细胞外泌体对氧糖剥夺再灌注神经元发挥的保护作用的具体机制提供了一定的研究基础。     

雌二醇调控PI3K/Akt通路在大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞缺氧/复氧损伤中的作用

该文探讨了雌二醇在大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)缺氧/复氧(H/R)损伤中的作用及其机制。使用AECⅡ构建H/R损伤模型,将AECⅡ细胞随机分为正常对照组(NC组)、缺氧/复氧损伤组(HR组)、不同浓度雌二醇预处理+缺氧/复氧损伤组(E2+HR组)。倒置显微镜观察各组细胞形态学变化; CCK-8法检测各组细胞活力; ELISA法检测细胞培养物上清中IL-6、TNF-α的水平;流式细胞仪检测细胞凋亡情况; Western blot检测Akt、P-Akt、Gsk3β、P-Gsk3β和Caspase-3的表达水平。结果显示,与NC组相比,其余各组细胞活力显著下降, IL-6、TNF-α表达水平显著增加,细胞凋亡水平增加, Akt、P-Akt、P-Gsk3β表达水平降低, Caspase-3表达水平增加;与HR组相比, E2+HR组细胞活力升高, IL-6、TNF-α表达水平降低,细胞凋亡水平降低, Akt、P-Akt、P-Gsk3β蛋白表达水平升高,Caspase-3蛋白表达水平降低。由此提示, PI3K/Akt信号通路参与了大鼠AECⅡ的H/R损伤过程;雌二醇可减轻H/R引起的大鼠AEC...     

虫草素对肺癌细胞生长及迁移的影响

探讨虫草素对非小细胞肺癌细胞株H1781细胞凋亡及迁移的影响及作用机制。培养H1781细胞并分组,对照组用不含药物的培养基处理,虫草素组用含有10、20、30和40 μmol/L虫草素处理,处理24 h后测定细胞活力,通过显微镜观察细胞形态学,HE染色观察虫草素对细胞整体的影响,细胞免疫荧光技术检测细胞中MMP-9和DAPI核染色情况观察细胞凋亡,Western blotting检测凋亡等相关蛋白表达。与对照组相比,虫草素处理24 h后,H1781细胞系活力显著降低;细胞数量明显减少;HE染色观察发现随着虫草素浓度增加,细胞数量及细胞集团明显变少,免疫荧光技术检测发现药物处理后细胞凋亡明显促进;划痕实验发现虫草素明显降低细胞迁移能力;Western blotting实验中Bax、cleaved caspase-3蛋白表达明显上调,MMP-9、Bcl-2蛋白表达明显下调。虫草素对肺癌H1781细胞迁移有抑制作用、对凋亡有促进作用,推测其作用机制为上调促凋亡蛋白表达、下调抗凋亡蛋白表达。