花椰菜花叶病毒的酶联免疫吸附分析

我们用酶联免疫吸附分析(ELISA)的双抗体夹心法,研究了花椰菜花叶病毒(CaMV)的定量测定。以提纯的CaMV免疫家兔,得到教价为1：2000的抗血清。经硫酸铵沉淀、DEAE-纤维素(DE-32)离子交换层析纯化了IgG抗体。用于标记的酶为辣根过氧化物酶。该酶经硫酸铵沉淀、DEAE-纤维素(DE一32)离子交换层析、刀豆球蛋白A-琼脂糖4B(ConcanavalinA-Sepharose 4B)亲和层析纯化,使RZ值达2.6。标记抗体制备用过碘酸盐氧化法。     

蛇咬罹灾者蛇毒抗体的酶联免疫吸附检定法

<正>前言 酶联免疫吸附法(ELISA)在早期蛇咬中毒中检验蛇毒抗体有可能作为一种流行病学工具推行在世界很多地区,这些地区由同时存在的医学上有重要性的蛇种的中毒频率是不清楚的,特别是那些地方咬伤经常不能被临床理由证明。在尼日利亚草地龙首蝮蛇(Carpet viper Echis carinatus)的咬伤引起一个严重的健康危害。据最近流行病学研究提示:在尼月利亚斑堡(Bambur)蛇咬发病率每年是100000居民中有602起,其死亡率为12.2％。这个研究相当程度上是借助于用ELISA法研究蛇毒抗体。我们现在     

用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测白喉毒素的抗体

<正> 本文叙述了定量测定白喉毒素抗体的酶联免疫吸附测定法(ELISA)。用ELISA技术与单间免疫扩散测定法比较,其结果能很好地相关,而且ELISA技术更为敏感一万倍。比在家兔体内皮肤试验法也至少敏感10倍。 绪言 某些方法用于定量测定白喉毒素的抗体,它包括体内和体外测定试验。体内测定如在家兔去毛的背上作皮内中和滴定试验,有利于测定实际中和毒素的抗体。虽然,在体内进行中和抗体滴度的测定是不可缺少的,但这些方法需要精心操作,代价高而又费时,另外,如果不进行大量的动物实验,     

一种定性比较抗体相对亲和力的酶联免疫吸附测定方法

目的:建立一种简便的对抗体相对亲和力进行定性比较的酶联免疫吸附测定(ELISA)方法,以便快速、简便地从大量抗体突变体中挑选高亲和力突变体。方法:将待测抗体倍比稀释后用直接ELISA方法进行定量,同时用相同浓度抗体作为一抗与抗原进行间接ELISA反应,以前者吸光度值为横轴、后者吸光度值为纵轴绘制散点图,通过拟和后的曲线判断抗体亲和力高低,并通过BIA-core法对该方法的准确性进行验证。结果:通过该方法获得的抗体亲和力高低情况与经测定抗体亲和力得出的结果一致。结论:该ELISA方法是一种简便可行、准确有效的抗体亲和力定性比较方法,可以应用于不同抗体的亲和力成熟比较研究。     

单克隆抗体酶联免疫吸附测定数据的微机分析

单克隆抗体酶联免疫吸附测定法(McAb-ELISA)是一种具有高特异性、准确性和敏感性的酶免疫测定技术。随着单克隆抗体技术的发展,针对各种抗原,尤其是酶和激素等蛋白抗原的微量McAb-ELISA相继建立并获得越来越广泛的应用。但是,人工处理McAb-ELISA测定数据比较费时费力,还可能掺杂主观因素。所以欧美发达国家在生物研究中已普遍引入计算机技     

应用酶联免疫吸附试验(ELISA)快速检测狂犬病毒抗体的研究

国内检测狂犬病毒抗体一直用小鼠接种的方法,尚未见快速检测的研究报道,在建立了狂犬病毒组化免疫酶和免疫荧光方法后,由于防治狂犬病需要更敏感的方法。又建立了酶联吸附试验(ELISA)。 采用新鲜配制的磷酸铝凝胶吸附和释放,结合超速离心来提纯。浓缩组织培养的狂犬病毒,以此作为包被抗原,用辣根过氧化酶标记的SPA为第2抗体,底物为磷苯二胺,作间接ELISA测定小鼠血清中的     

重组酶Exo的纯化及多克隆抗体制备

目的:纯化Exo重组酶融合蛋白并制备相应抗体。方法:用阴离子交换柱对蛋白进行初步纯化,然后用Ni-NTA介质填充的层析柱分离纯化含His标签的融合蛋白,用谷胱甘肽琼脂糖4B介质填充的层析柱分离纯化GST融合蛋白;二次纯化的蛋白利用硝酸纤维素膜结合法制备抗原蛋白并免疫实验动物。结果:ELISA结果显示血清抗体效价可达到1∶12 800,说明通过Western免疫印迹自制的多克隆抗体能特异地与Exo重组蛋白相互作用。结论:该蛋白纯化方法操作简单,制备的抗原纯度高,多克隆抗体特异性好。     

样品预处理对HCV-cAg酶联免疫吸附试验特异性的影响

目的:探讨血液样品预处理后对控制酶联免疫吸附试验中假阳性的效果.方法:向稀释血清样品中加入适量的C2H6OS和IgM抗体后,以HCV-cAg酶联免疫方法检测60份血清样品中丙型肝炎病毒核心抗原的阳性情况;与常规样品处理方法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测结果为标准进行比较分析.结果:60份血清样品,采用常规的样品处理方法检测出的阳性例数为34例,假阳性率迭25%;采用改良法检测出的阳性例数为23例,假阳性率达6.7%,二者相比差别具有统计学意义(P(≦) 0.05).结论:改良法血清样品预处理可提高ELISA法检出丙型肝炎病的特异性.     

CXXC5多克隆抗体的制备及表达研究

CXXC5基因是从人类胚胎心脏的cDNA文库中克隆出来的一个人类锌指基因,包含zf-CXXC5结构域,该基因编码322个氨基酸,在物种进化上高度保守.为了进一步研究该基因的功能,需要获得CXXC5蛋白并制备其抗体.通过PCR扩增方法扩增得到了CXXC5部分编码区序列,然后将其连接到PGEX4T-1上,转化到大肠杆菌BL...     

酶联免疫吸附技术(ELISA)对大豆根瘤菌的鉴定

本文用直接ELISA法检测大豆根瘤菌USDA 110和RTt 50的纯培养菌体和根瘤。确定了该试验的最佳工作条件:酶标结合物HRP—Ab 110和HRP—Ab50的工作稀释度分别为1:3200和1:800,抗体Ab 110和Ab 50的工作稀释度分别为1:3200和1:800,抗原USDA 110和RTt 50的最适工作浓度均为6×10~7细胞/ml。该法能够特异地检测和区别慢生型和快生型大豆根瘤菌。在这两种类型的大豆根瘤菌中,同种内的少数菌株存在交叉反应,通过吸收可以消除,从而使ELISA的检测达到菌株     

测定节肢动物捕食者与猎物关系的A蛋白双抗体夹心酶联免疫吸附技术

酶联免疫吸附技术（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）是70年代才发展起来的血清学技术,目前在昆虫生态学和生物防治研究中有大量的研究报道[1～8],研究发现其灵敏度和特异性都远远高于其它血清学方法,如毛细管环状沉淀法（capillaryringtest,CRI）,凝胶双扩散法（doublediffusiontest,DDT）和对流免疫电泳（cross－overimmuno－electrophoresis,COIEP）,而且检测速度快,适于田间大规模检测。ELISA主要有直接法（directmethod）、间接法（indirectmethod）、双抗体夹心法（doubleantibodysandwichmethod）和A蛋白…     

斑马鱼Fbxl5基因多克隆抗体的制备与检测

Fbxl5为F-box基因家族的一员,目前研究发现其与心脏的发育有关。为了在斑马鱼模型中进一步研究该基因的功能,有必要制备其多克隆抗体。通过桥式PCR扩增出亲水性和特异性均好的斑马鱼Fbxl5基因片段,将其克隆入表达载体pET-28a,转化至大肠杆菌Rosseta中。用IPTG诱导Fbxl5重组质粒得到His-Fbxl5的融合蛋白。这个融合蛋白用Ni-IDA凝胶柱亲和纯化,将纯化的His-Fbxl5融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。使用Western Blot检测,获得了Fbxl5原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗Fbxl5多克隆抗体。随后检测了Fbxl5在斑马鱼胚胎和成体组织中蛋白的表达,通过基因芯片分析在Fbxl5-MO和Std胚胎样品的mRNA含量差异.所得结果显示获得了较高效价和特异性好的斑马鱼Fbxl5多克隆抗体,为Fbxl5功能的进一步研究奠定了基础。     

抗人DR5多克隆抗体的制备与纯化

目的:分离纯化融合蛋白GST-eDR5,免疫小鼠制备抗人DR5多克隆抗体.方法:用GST纯化试剂盒和电泳两次纯化的融合蛋白GST-eDR5免疫小鼠,制备抗CST-eDR5抗血清,然后用GST纯化得到抗人DR5抗血清.通过Westem blot、ELISA方法鉴定抗血清特异性和效价.结果:通过亲和纯化得到了高纯度的融合蛋白GST-eDR5,其浓度为0.65μg/μl.免疫产生的DR5抗血清特异性高,且效价高达1:25600,纯化后的抗人DR5抗血清不再识别GST,只识别人DR5.结论:成功制备了高特异性、高效价的抗人DR5多克隆抗体,为深入研究其对肿瘤细胞的生长抑制和凋亡作用提供了实验工具.     

酶联免疫吸附试验鉴定侵袭性大肠杆菌及菌株的生物-血清学特性

<正> 最近,我们用酶联免疫吸附试验(EL-ISA)测定侵袭性大肠杆菌(EIEC)的毒力抗原和有毒力的痢疾菌株。 为了评价该试验对EIEC鉴定的特异性和实用性,将来自不同地区、O血清群为O28ac、 O112ac,O124,O136,O143,O144,O152和O164的100株EIEC菌株进行ELISA测定。在这100株菌中,不管其来源和血清群,56株为阳性。进一步通过其他     

OGT 多克隆抗体的制备及特异性分析

目的:为了探讨O-GlcNAc糖基转移酶OGT的生理和病理作用,需制备能高效特异性检测OGT的抗体。方法:在NCBI数据库中,查找人源OGT基因序列,根据OGT的结构特点,选取OGT的C末端催化结构域中的一段多肽序列(464-949位点氨基酸)做抗原。首先,构建OGT的C末端催化结构域(464-949位点氨基酸)的重组表达载体pET30-a-OGT-C,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,IPTG诱导表达融合His标签的OGT-C蛋白,Ni+珠亲和层析法纯化提取OGT-C蛋白。再以OGT-C重组蛋白作为抗原,免疫Wistar大鼠制备多克隆抗体,并用间接ELISA法检测OGT抗体的效价,Western blotting鉴定抗体特异性。结果:多抗效价达1:80000;在免疫印迹实验中,此多抗可以高效的检测重组抗原,并可以特异性识别培养细胞内源表达的ncOGT和mOGT这2种OGT亚型。结论:实验结果表明,获得高效价、高特异性的OGT多克隆抗体,在OGT的生物学研究中可以用于检测ncOGT和mOGT的表达。     

猕猴桃溃疡病菌拮抗菌的筛选、鉴定及其对植物病原真菌的抗性

从野生银杏中分离、筛选抗猕猴桃溃疡病内生细菌,并明确其对常见植物真菌病害的抑菌谱.采用"三步法"分离银杏内生细菌,并以猕猴桃溃疡病病原菌(Pseudomonas syringae pv.actinidiae,Psa)作为指标菌筛选拮抗菌;结合菌落形态特征、生理生化特征及16SrRNA基因序列对拮抗菌进行鉴定;开展盆栽防...     

酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠抗天花粉蛋白的IgE类抗体的研究

检测小鼠IgE类抗体的经典方法是被动皮肤过敏试验(PCA),这是一种生物测定,因而在应用上受到一定限制,并且也受动物本身变化的影响。1973年Hoffman首次报道了用ELISA检测血清IgE。此后有不少工作者相继报道了应用ELISA检测IgE或抗原特异的IgE类抗体。为研究对天花粉蛋白的免疫     

葡萄溃疡病菌限制性内切酶介导整合方法的建立及转化子库的构建

[目的]摸索葡萄溃疡病菌(Lasiodiplodia theobromae)限制性内切酶介导整合(Restriction enzyme mediated integration,REMI)的转化方法,并构建CSS-01s (L.theobromae)的REMI转化子库.[方法]利用REMI转化方法,将线性化的含有潮霉素抗性基因(Hygromycin phosphotransferase gene,Hyg)的pUCATPH质粒转化CSS-01s菌株的原生质体;测定其对潮霉素B的敏感浓度,摸索不同酶解液和酶解时间对原生质体制备的影响,统计不同限制性内切酶酶量对转化效率的影响,以摸索出的最优条件构建CSS-01s菌株的REMI转化子库,采用Southern blot的方法验证转化子.[结果]首次建立了一套L.theobromae的REMI转化方法,经转化得到包含6 000余个转化子的L.theobromaeCSS-01s转化子库,随机挑选的5个转化子经Southern blot分析,质粒均插入到了Hind Ⅲ相应的酶切位点处.[结论]浓度为2％崩溃酶+2％蜗牛酶酶混合液、酶解4h为原生质体获得的最优条件,每管转化体系中加入30 UHind Ⅲ时转化效率最高,该方法可以用来获得大量不同表型的REMI转化子.