PSP下调miR-345-5p对雨蛙素诱导的AP腺泡细胞氧化应激和炎症因子表达

目的探讨黄精多糖（PSP）对雨蛙素诱导的急性胰腺炎（AP）腺泡细胞氧化应激和炎症因子表达的影响及分子机制。 方法取对数期大鼠胰腺腺泡细胞AR42J,采用100 nmol/L雨蛙素处理细胞6 h,建立AP腺泡细胞损伤模型,并采用不同浓度（1、2、4 mg/mL）PSP处理AP细胞（AP+PSP-L、AP+PSP-M、AP+PSP-H）。试剂盒检测细胞中丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）活性以及培养液中白细胞介素-6 （IL-6）、肿瘤坏死因子-α （TNF-α）和IL-1β水平,实时荧光定量PCR （RT-qPCR）检测miR-345-5p表达水平。将miR-345-5p抑制物转染AR42J细胞,检测下调miR-345-5p表达对AP细胞氧化应激和炎症因子表达的影响。将miR-345-5p模拟物转染AR42J细胞,检测上调miR-345-5p表达和PSP处理对AP细胞氧化应激和炎症因子表达的影响。两组比较采用t检验,多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。 结果与对照比较,AP细胞MDA含量、IL-6、TNF-α、IL-1β水平和miR-345-5p表达水平均升高,SOD和GPx活性降低（P < 0.05）。与AP细胞比较,不同浓度（1、2、4 mg/mL）PSP作用的AP细胞中MDA含量[（1.08± 0.07）比（0.88±0.06）,（0.73±0.06）,（0.60±0.05） nmol/mg]降低,SOD [（43.01±4.37）比（59.60±5.62）,（72.37±6.32）,（94.21±8.70） U/mg]和GPx活性[（29.03±2.51）比（44.11± 4.71）,（58.07±4.20）,（72.67± 6.56） U/mg]均升高,培养液中IL-6 [（310.72±22.27）比（257.01±20.85）,（192.28±17.70）,（146.93±11.90） pg/mL]、TNF-α [（223.82±21.87）比（175.57±15.85）,（137.00±11.31）,（89.26±7.05） pg/mL]、IL-1β表达水平[（41.66±3.85）比（33.82±3.20）,（26.15±2.56）,（20.14±1.71） pg/mL]和miR-345-5p表达水平（2.78±0.24比2.38±0.21,1.91±0.12,1.25±0.13）均降低,且呈浓度依赖性,差异有统计学意义（P均< 0.05）。下调miR-345-5p表达后,AP细胞中MDA含量[（1.13±0.08）比（0.72±0.06） nmol/mg]降低,SOD活性[（41.31±3.98）比（81.73±7.62） U/mg]和GPx [（28.82±2.97）比（61.41±5.81） U/mg]升高,培养液中IL-6 [（314.65±25.02）比159.76±11.93） pg/mL]、TNF-α [（235.18±23.13）比（100.41±8.09） pg/mL]和IL-1β水平[（48.67±4.50）比（27.73±2.54） pg/mL]降低（P均< 0.05）。上调miR-345-5p表达可逆转PSP对AP细胞的影响。其中MDA含量[（0.58±0.03）比（0.95±0.08） nmol/mg]升高、SOD活性[（96.52±9.54）比（54.24±4.15） U/mg]、GPx活性[（79.62±6.23）比（39.81±3.84） U/mg]降低、IL-6 [（145.38±12.49）比（275.38± 21.55） pg/mL]、TNF-α [（84.83±7.81）比（183.73±16.39） pg/mL]和IL-1β [（19.38±1.85）比（36.97±3.62） pg/mL]的表达水平升高（P均< 0.05）。 结论PSP以剂量依赖方式减轻雨蛙素诱导AP细胞炎症反应和氧化应激损伤,其机制与下调miR-345-5p表达有关。     

低氧训练对肥胖小鼠Ghrelin-GHSR通路的影响

目的对肥胖小鼠施加低氧训练,观察胃组织Ghrelin和下丘脑GHSR水平的变化,以探究低氧训练是否影响Ghrelin-GHSR通路改善肥胖体质。方法雄性C57BL/6J小鼠,随机分为普通对照组(C,n=8)和高脂膳食组(H,n=52)。H组建立肥胖模型后,随机分为肥胖对照组(HC)、肥胖常氧运动组(HE)、肥胖低氧暴露组(HH)和肥胖低氧运动组(HHE)。运动各组进行中等强度跑台训练,低氧各组进行间歇低氧暴露(11. 2%氧气含量),记录每周体重和摄食量,共4周。测试血清TC、TG、GLU和总Ghrelin水平,RT-PCR法检测下丘脑GHSR和胃Ghrelin mRNA表达水平,WB检测下丘脑GHSR和NPY蛋白含量及胃组织Ghrelin、Goat和HIF-2α蛋白含量。结果(1)干预4周后,HE、HH和HHE组体重较HC组显著降低;低氧干预的最初阶段,HH和HHE组的摄食量出现下降,但随着干预时间的延长,肥胖各组的摄食量逐步趋近;(2) HC组血液各指标显著高于C组,HH组TC水平较HC组显著降低,HE、HH和HHE组GLU水平较HC组显著下降; HH和HHE组血清总Ghrelin水平较HC组显著降低;(3) HC组下丘脑GHSR mRNA和胃Ghrelin mRNA水平较C组极显著下降,HH和HHE组下丘脑GHSR mRNA及HHE组胃Ghrelin mRNA水平较HC组显著上升;(4) HE、HH和HHE组下丘脑GHSR蛋白水平显著高于HC组; HE组和HHE组NPY蛋白水平显著高于HC组;(5) HE、HH和HHE组胃Ghrelin蛋白水平显著高于HC组; HE组和HHE组Goat蛋白水平显著高于HC组; HH组和HHE组HIF-2α蛋白水平显著高于HC组。结论低氧训练可通过调控Ghrelin-GHSR信号通路,影响糖脂代谢,从而降低肥胖小鼠的体重。     

下调血管生成素样蛋白7表达对血管紧张素Ⅱ介导的血管平滑肌细胞炎症反应的影响

目的探讨RNA干扰血管生成素样蛋白7 （Angptl7）基因对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的血管平滑肌细胞（VSMC）炎症因子的影响及其作用机制。 方法体外培养人VSMC,分为常规F12K培养基培养（对照）和1 μg/mL AngII培养24 h。VSMC用AngⅡ（1 μg/mL）处理24 h后,采用siRNA-Angptl7和阴性对照siRNA-NC在Lipofectamine 2000介导下转染VSMC。RT-qPCR检测mRNA表达水平;Griess反应测定一氧化氮（NO）含量;蛋白免疫印记法检测相关蛋白的改变;酶联免疫吸附法检测VSMC中炎症因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-1β （IL-1β）和IL-6水平。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验,两组间比较采用独立样本t检验。 结果与对照比较,1 μg/mL AngⅡ处理可促进VSMC中Angptl7 mRNA （0.97±0.06比3.05±0.21）和蛋白表达（1.01±0.12比1.61±0.14）,亦可促进VSMC中IL-1β[（45.21±8.10）比（126.17±11.77） pg/mL]、IL-6[（50.50±7.51）比（108.50±9.51）pg/mL]和TNF-α的表达[（60.77±9.58）比（185.67±17.35）pg/mL],差异有统计学意义（P均< 0.01）。与对照和转染siRNA-NC相比,转染siRNA-Angptl7下调Angptl7蛋白表达（0.99±0.12,0.98±0.12比0.44±0.14,P < 0.01）。与AngⅡ干预组相比,siRNA-Angptl7降低AngⅡ介导的VSMC炎症反应相关蛋白TNF-α、IL-6和IL-1β的表达,核因子κB （NF-κB）/诱导型一氧化氮合酶（iNOS）/环氧化酶2 （COX-2）信号通路相关蛋白NF-κB、iNOS和COX-2表达及NO含量亦降低,差异有统计学意义（P均< 0.01）。与siRNA-NC相比,siRNA-Angptl7组AngⅡ诱导的VSMC炎症反应相关蛋白TNF-α （0.99±0.13比0.51±0.12）、IL-6 （1.00±0.12比0.38±0.05）和IL-1β的表达（0.99±0.14比0.48±0.11）,NF-κB （1.00±0.10比0.42±0.08）、iNOS （1.02±0.12比0.42±0.10）和COX-2表达（1.00±0.11比0.52±0.12）均降低,NO含量[（54.78±2.76）比（18.08±3.61）μmol/L]亦降低,差异有统计学意义（P均< 0.01）。 结论AngⅡ可通过Angptl7促进VSMC炎症反应,下调Angptl7蛋白表达可以抑制VSMC的炎症反应,其作用机制可能与抑制NF-κB/iNOS-COX-2信号通路有关。     

ω-3 PUFAs对小鼠炎症性肠病调节性T细胞影响的研究

目的探究ω-3多不饱和脂肪酸（ω-3PUFAs）对小鼠炎症性肠病（IBD） CD4⁺ CD25⁺ Foxp3⁺调节性T细胞（Treg）的影响。 方法选取新疆医科大学第五附属医院实验动物中心提供健康雄性Balb/C小鼠120只,均采用三硝基苯磺酸诱导成IBD模型,根据腹腔注射药物随机分为空白对照组（生理盐水）、ω-3 PUFAs组[2.5g/（kg·d）浓度ω-3 PUFAs]、硬脂酸对照组（饱和脂肪酸硬脂酸）、二十二碳六烯酸（DHA）组。各组小鼠组织学评分,Treg细胞表型,胞内细胞因子mRNA表达水平,上清液中细胞因子水平比较采用单因素方差分析。 结果与空白对照组比较,硬脂酸空白对照组、DHA组与ω-3 PUFAs组小鼠组织学评分[（4.12±0.89）分比（3.82±0.51）分、（2.51±0.74）分、（1.04±0.36）分] 、干扰素（IFN）-γ水平[（203.51±10.29） pg/mL比（165.32± 11.67） pg/mL、（128.34±6.77）pg/mL、（105.29±6.81）pg/mL]均下降,CD4⁺ CD25⁺ Foxp3⁺ Treg细胞表型比例[（3.80±0.89）﹪比（7.22±1.13）﹪、（3.90±0.75）﹪、（10.10±1.29）﹪]、细胞Foxp3 mRNA表达水平[（96.74±6.65）比（107.33±6.82）、（122.67±8.53）、（165.22±10.43）]、白细胞介素10（IL-10） mRNA表达水平[（0.59±0.18）比（0.98±0.29）、（1.22±0.59）、（1.47±0.53）]、上清液中细胞因子IL-10水平[（83.51±4.67） pg/mL比（108.35±7.22）pg/mL、（122.29±15.33）pg/mL、（153.67±15.28） pg/mL]、Foxp3水平[（9.65±1.29）pg/mL比（13.73± 1.32）pg/mL、（15.67± 2.57）pg/mL、（19.53±2.18）pg/mL]均升高,差异具有统计学意义（P均< 0.05）;与硬脂酸对照组比较,ω-3 PUFAs组与DHA组细胞Foxp3、IL-10 mRNA表达水平、上清液中细胞因子IL-10、Foxp3水平均升高,IFN-γ水平降低,差异具有统计学意义（P均< 0.05）。 结论ω-3 PUFAs可以有效调节IBD小鼠免疫功能紊乱,减轻机体炎症水平,为IBD治疗提供新思路。     

类叶升麻苷通过上调miR-204对缺氧/复氧诱导H9C2细胞凋亡的抑制作用

目的探讨类叶升麻苷对缺氧/复氧（H/R）处理大鼠心肌细胞（H9C2）损伤的影响及其分子机制。 方法体外培养H9C2细胞,H/R （4 h/20 h）建立心肌细胞损伤模型,并采用1、10、100 μmol/L类叶升麻苷,转染miR-204模拟物阴性对照（miR-NC）、转染miR-204模拟物（miR-24）,100 μmol/L类叶升麻苷干预+转染miR-204抑制剂阴性对照、100 μmol/L类叶升麻苷+转染miR-204抑制剂干预H/R细胞。分别进行RT-qPCR、MTT、流式细胞术、Western blot检测miR-204表达水平、细胞活力、细胞凋亡率和相关蛋白表达,利用相应试剂盒检测乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测白细胞介素-6 （IL-6）、白细胞介素-β （IL-β）和肿瘤坏死因子-α （TNF-α）的含量。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验。 结果与心肌损伤模型比较,10、100 μmol/L类叶升麻苷的细胞凋亡率[（25.62±1.96）%比（18.17±1.27）%,（11.24±0.57）%]、Bax（0.71±0.05比0.51±0.04、0.29±0.03）、LDH [（243.16±11.31）比（121.22±4.52）,（94.39±2.82）U/g]、MDA [（1.82±0.07）比（1.13±0.04）,（0.92±0.04）nmol/mg]、IL-6 [（121.45±6.18）比（87.16±4.53）,（47.11± 2.24）pg/mL]、IL-1β [（229.82±8.48）比（175.32±8.73）,（113.14±5.63）pg/mL]和TNF-α表达水平[（138.18±6.60）比（92.24±4.04）,（61.53±4.17）pg/mL]降低,Bcl-2 （0.18±0.01比0.35± 0.03、0.52±0.04）、SOD [（18.72±1.26）比（38.81±1.51）,（45.43±1.29）U/mg]和GSH-Px表达水平[（58.74±2.28）比（89.24±2.82）,（94.66±3.05）U/mg]升高（P均< 0.05）;与miR-NC比较,转染miR-204的细胞凋亡率[（24.12±1.12）%比（9.26±0.49）%]、Bax （0.62±0.04比0.25±0.02）、LDH [（229.11±8.47）比（86.32±5.92）U/g]、MDA [（1.75±0.08）比（0.85± 0.05）nmol/mg]、IL-6 [（134.47±7.31）比（55.26±2.13）pg/mL]、IL-1β [（211.14±9.70）比（98.11±3.18）pg/mL]和TNF-α表达水平[（152.92±3.49）比（51.34±2.66）pg/mL]降低,Bcl-2 （0.22±0.01比0.57±0.03）、SOD [（20.92±1.38）比（47.68±1.76）U/mg]和GSH-Px表达水平[（62.65±2.76）比（91.13±3.80）U/mg]升高（P < 0.05）;10、100 μmol/L类叶升麻苷可提高H/R诱导H9C2细胞中miR-204的表达水平（P < 0.05）;且下调miR-204逆转了类叶升麻苷对H/R处理H9C2细胞凋亡、氧化应激和炎症因子的影响。 结论类叶升麻苷可能通过上调miR-204表达缓解H/R诱导的H9C2细胞损伤。     

δ-联蛋白通过AKT信号通路调控OGD/R后的炎症反应

δ-联蛋白(delta-catenin)作为高表达于神经系统的黏附蛋白质,在神经系统的功能发挥中有着至关重要的作用,但其在缺血缺氧性脑病中的研究尚未见报道。本文通过体外培养原代皮层神经元,构建氧糖剥夺/再灌注（oxygen-glucose deprivation/reperfusion, OGD/R）模型。用Western 印迹、LDH等方法显示,与对照组相比,δ-联蛋白在OGD/R模型后的不同时间点（0、4、12、24 和48 h）表达呈先降低后升高的趋势。在12 h表达量最低（0.48±0.08 vs 1.53±0.18,P<0.05）,在48 h表达升高到对照组水平（1.35±0.15 vs 1.53±0.18,P>0.05）。用siRNA慢病毒干扰δ-联蛋白表达后,ELISA结果显示,和对照组相比,OGD/R后,IL-1β和IL-18升高（24.80±1.64 vs 12.75±0.87,28.12±2.69 vs 12.99±1.24,P<0.05）,但在干扰δ-联蛋白表达后,和OGD组相比,IL-1β和IL-18释放降低（12.81±0.78 vs 24.80±1.64,14.27±1.37 vs 28.12±2.69,P<0.05）。Western 印迹结果显示,AKT信号通路磷酸化位点Ser 473活化增高（1.08±0.04 vs 0.85±0.06,P<0.05）,但Thr 308位点活化无改变（1.17±0.06 vs 1.11±0.08,P>0.05）。在siRNA慢病毒干扰并且联合使用AKT信号通路抑制剂GSK 690693后,和OGD+siRNA组相比,IL-1β和IL-18释放增高（24.58±0.99 vs 12.81±0.78,31.62±2.23 vs 14.27±1.37,P<0.05）。上述结果显示,δ 联蛋白通过AKT信号通路调控OGD/R后的炎症反应,这可作为δ-联蛋白功能研究的新的实验依据。     

血管钠肽抑制低氧刺激心脏成纤维细胞增殖的机制研究

目的：研究血管钠肽（VNP）抑制低氧刺激的心脏成纤维细胞增殖的机制。方法：发离、培养乳鼠心脏成纤维细胞,随机分为四组：对照组、低氧组、低氧＋VNP组和低氧＋8－Bromo-cGMP组。以MTT法观察各组细胞的生长情况,分别采用放射免疫和免疫组化的方法研究了VNP对细胞内cGMP水平和增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响。结果：低氧24h可以使培养的乳鼠心脏成纤维细胞MTT A490nm值显著升高（P＜0．05vs对照组）,VNP（10^-7mol/L和8－Bromo-cGMP(10^-3mol/L)均可以显著降低低氧刺激的心脏成纤维细胞MTT A490nm值（P＜0．05vs低氧组）;对照组和低氧组细胞内cGMP水平无显著差异,而VNP（10^-7mol/L）能升高细胞内cGMP水平（P＜0．05vs对照组、低氧组）;低氧组PCNA的表达显著强于对照组（P＜0．05vs对照组）,VNP（10^-7mol/L可以使低氧刺激的心脏成纤维细胞PCNA表达减弱（P＜0．05vs低氧组）。结论：VNP抑制低氧刺激的心脏成纤维细胞增殖与升高细胞内cGMP水平、减弱PCNA的表达有关。     

芍药苷通过抑制脊髓Akt-NF-kB信号通路及小胶质细胞激活缓解炎症性疼痛

芍药苷具有抑制炎症和镇痛的作用，在治疗炎症疼痛方面具有重要价值，但其作用机制尚不明确。本研究发现，弗氏完全佐剂诱导小鼠炎症疼痛模型，用80 mg/kg芍药苷腹腔注射能有效缓解疼痛。检测发现芍药苷治疗后，小鼠机械性痛阈与热板痛阈均明显升高（机械性痛阈值：由6.38±1.00 g提高至8.31±0.81 g；热板痛阈值：由5.78±0.76 s提高至9.90±1.58 s）；同时抑制外周炎症因子TNF-α等的释放（由708.71±46.55 pg/mL降低至588.65±16.02 pg/mL）；免疫组织化学检测发现，芍药苷能有效抑制脊髓背角小胶质细胞的激活；NO检测结果发现，脊髓部位NO合成降低（3.55±0.28 μmol/L·g^-1Pro降至2.25±0.71 μmol/L·g^-1Pro）；Western 印迹检测证实，脊髓部位iNOS在使用芍药苷后，表达恢复正常水平。同时发现，Akt-NF-κB信号可能参与芍药苷的镇痛作用。上述结果提示，芍药苷缓解慢性炎症疼痛可通过抑制炎症因子释放，也通过抑制脊髓小胶质细胞的激活，而此过程依赖抑制Akt-NF-κB信号的激活。     

白藜芦醇通过调节SIRT1/NF-κB通路减轻力竭训练致大鼠肾脏炎症反应

白藜芦醇是天然存在的沉默信息调节因子2相关酶1(sirtuin1，SIRT1)小分子激动剂，其肾的保护作用已在多种肾疾病动物模型中得到了验证。然而，白藜芦醇是否能够改善力竭训练导致的大鼠肾损伤，以及是否通过SIRT1/NF κB信号通路调节运动性肾损伤大鼠肾炎症反应，尚缺乏系统研究。本研究将32只SD大鼠随机分为安静对照组(Con组)，白藜芦醇组（Rsv组），力竭运动组（Ex组），力竭运动+白藜芦醇组（Ex+Rsv组）。Rsv和Ex+Rsv组每天灌胃50 mg/kg体重剂量的白藜芦醇， Ex和Ex+Rsv组进行4周力竭训练，最后1次训练后24 h取材。本研究结果显示，与Con组相比，Ex组大鼠Scr（175.66 ± 16.08 vs.153.34 ± 8.67，P < 0.01）、BUN（6.67 ± 0.53 vs.5.37 ± 019，P < 0.01）和尿NGAL（9.01 ± 0.18 vs.7.48 ± 0.31，P < 0.01）水平均显著升高，Ex组大鼠肾组织NF κB P65在蛋白质水平表达显著升高（0.77 ± 010 vs. 0.27 ± 0.03，P < 0.01）；各组大鼠肾组织SIRT1在蛋白质水平表达上，Rsv组显著高于Con组（0.90 ± 0.14 vs. 0.43 ± 0.15，P < 0.05），Ex+Rsv组显著高于Ex组（1.0 ± 0.28 vs. 0.38 ± 0.12，P< 001）；与Ex组相比，Ex+Rsv组大鼠肾组织NF-κB P65（0.57 ± 0.13 vs. 0.77 ± 0.10，P < 0.05）和Ac-NF-κB P65（0.52 ± 0.13 vs. 0.78 ± 0.11，P < 0.05）在蛋白质水平表达显著降低。以上结果表明，4周大强度力竭运动导致大鼠出现运动性肾损伤，并激活大鼠肾NF-κB的表达。白藜芦醇可显著提高大鼠肾组织SIRT1在蛋白质水平的表达，并增加脱乙酰化作用，降低NF-κB P65蛋白质乙酰化修饰水平，进一步降低NF-κB的表达。白藜芦醇减轻力竭训练致大鼠肾的炎症反应的机制可能与SIRT1/NF-κB通路有关。     

Sonic Hedgehog通过上调Timp-3促进小鼠退行性膝关节炎的修复

刺猬因子（Hedgehog, Hh）信号通路广泛参与脊椎动物的胚胎发育和组织稳态的调控。已有报道认为，Hh参与骨性关节炎的发生和发展，但是其机制尚未详细阐述。本研究通过小鼠右后肢膝关节前交叉韧带切断手术，建立退行性膝骨关节炎小鼠模型，探索sonic hedgehog（Shh）因子在退行性膝关节炎中的作用及其机制。小鼠成功建模4周后，在模型组和假手术组小鼠膝关节腔中注射小鼠Shh-N蛋白因子，通过ELISA检测关节液中炎性因子IL-1β、TNF-α和解聚素金属4（a disintegrin and metalloprotease with thrombospondin motifs4，ADAMTS-4）蛋白酶的水平，以及通过qRT-PCR检测软骨组织中金属蛋白酶组织抑制剂-3（metalloproteinase inhibitor 3，Timp-3）基因的表达。结果显示，与假手术组相比，退行性膝骨关节炎模型小鼠骨关节腔内，IL-1β和TNF-α水平显著增高（24.5±5 vs 251.0±17.5 pg/mL，P < 0.001；16.5±3.4 vs 197.0±15.6 pg/mL, P < 0.001）；与PBS对照组相比， Shh-N组小鼠关节液中炎性因子的IL-1β和TNF-α水平明显降低（116.0±8.7 vs 251.0±17.5 pg/mL，P < 0.001； 89.0±7.8 vs 197.0±15.6 pg/mL, P < 0.001）。其中，小鼠的攀爬时间（1 700.0±185.6 vs 116±8.7 s，P < 0.001）和长距离运动能力均有显著改善（174.0±162.3 vs 132.0±34.5 m，P < 0.001）；qRT-PCR结果显示，软骨组织中Timp-3基因表达明显增高（5.0±0.3 vs 2.4±0.6 fold，P < 0.001）。同时，伴随着ADAMTS-4的水平显著降低（P < 0.001）。本研究提示，Shh因子显著改善小鼠退行性膝关节炎的恢复，其机制可能是通过上调Timp-3基因的表达，降解内源性聚蛋白多糖酶而实现的。     

Hypoxic Cell Death in Human NT2-N Neurons: Involvement of NMDA and Non-NMDA Glutamate Receptors

Abstract: Human NTera2 teratocarcinoma cells were differentiated into postmitotic NT2-N neurons and exposed to hypoxia for 6 h. The cultures were evaluated microscopically, and percent lactate dehydrogenase (LDH) release after 24 and 48 h was used as an assay for cell death. After 48 h LDH release was 24.3 ± 5.6% versus 13.8 ± 3.7% in controls ( p < 0.001). Cell death was greatly diminished by MK-801 pretreatment (15.4 ± 5.1%, p < 0.001). If glutamate was omitted from the medium, glutamate levels after 6 h of hypoxia were reduced from 101 ± 63 to 2.3 ± 0.3 µ M , and cell death at 48 h was also markedly reduced (15.4 ± 4.5%, p < 0.001). The α-amino-3-hydroxy-5-methylisoxazole-4-propionate antagonist 6-cyano-7-nitroquinoxaline-2,3-dione (18.7 ± 5.1%, p < 0.001) and mild hypothermia (33.5–34°C) during hypoxia (19.5 ± 2.75, p < 0.05) were moderately protective. Basic fibroblast growth factor (24.1 ± 3.2%), the nitric oxide synthase inhibitor N ^G-nitro- l -arginine methyl ester (22.8 ± 8.1%), the antioxidant N-tert -butyl- o -phenylnitrone (18.9 ± 5.9%), and the 21-aminosteroid U74389G (24.0 ± 3.4%) did not protect the cells. N -Acetyl- l -cysteine even tended to increase cell death (30.1 ± 2.5%, p = 0.06). Treatment with MK-801 at the end of hypoxia did not reduce cell death (23.3 ± 2.3%). In separate experiments, a 15-min exposure to 1 m M glutamate without hypoxia did not result in significant cell death (14.7 ± 2.4 vs. 12.2 ± 2.1%, p = 0.07). We conclude that, although somewhat resistant to glutamate toxicity when normoxic, NT2-N neurons die via an ionotropic glutamate receptor-mediated mechanism when exposed to hypoxia in the presence of glutamate. As far as we know, this is the first reported analysis of the mechanism of hypoxic cell death in cultured human neuronlike cells.     

替米沙坦调控miR-495-3p/心肌细胞增强因子2A通路减轻缺氧诱导的神经细胞PC12损伤

目的探讨替米沙坦（TM）调控miR-495-3p/心肌细胞增强因子2A （MEF2A）通路对缺氧诱导PC12细胞损伤的影响和机制。 方法将PC12细胞进行正常培养（对照）,缺氧（缺氧24 h）,缺氧+ 0.1、1、10 μg/mL TM、缺氧+ miR-NC （转染miR-NC）,缺氧+miR-495-3p （转染miR-495-3p模拟物）,缺氧+TM+anti-miR-NC （转染anti-miR-NC,10 μg/mL TM）和缺氧+ TM+anti-miR-495-3p （转染anti-miR-495-3p,10 μg/mL TM）处理。酶联免疫吸附实验（ELISA）检测乳酸脱氢酶（LDH）漏出量和超氧化物歧化酶（SOD）的活性,流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量PCR （RT-qPCR）和Western blot检测miR-495-3p、心肌细胞增强因子2A （MEF2A）表达水平。两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。 结果与对照比较,缺氧处理的PC12细胞LDH漏出率[（9.46±0.97）﹪比（45.69±4.31）﹪]、细胞凋亡率[（5.36±0.54）﹪比（28.36±2.41）﹪]、MEF2A mRNA（1.00±0.08比2.74±0.26）和MEF2A蛋白表达水平（0.39±0.03比0.87±0.06）均升高;SOD活性[（12.24 ±1.13）比（5.13±0.52 ）U/mL）]和miR-495-3p表达水平（1.00±0.08比0.35±0.03）均降低,差异有统计学意义（P均< 0.05）。与缺氧处理比较,缺氧+0.1、1、10 μg/mL TM干预的PC12细胞LDH漏出率[（45.69±4.31）﹪比（32.14±3.84）﹪、（23.54±3.17）﹪、（16.87±1.46）﹪]、细胞凋亡率[（28.36±2.41）﹪比（22.46±2.31）﹪、（17.14±1.65）﹪、（10.23±1.12）﹪]、MEF2A mRNA（2.74±0.26比2.26±0.23、1.87±0.19、1.34±0.18）和MEF2A蛋白表达水平（0.87±0.06比0.75±0.05、0.63±0.04、0.46±0.03）均降低;SOD活性[（5.13±0.52）比（6.87±0.69 ）、（8.01±0.81）、（10.12±1.02）U/mL]、miR-495-3p表达水平（0.35±0.03比0.49±0.04、0.61±0.06、0.83±0.07）均升高,差异有统计学意义（P均< 0.05）。与缺氧+ miR-NC比较,缺氧+ miR-495-3p的PC12细胞LDH漏出率[（46.87±4.28）﹪比（19.65±1.87）﹪]和细胞凋亡率[（28.38±2.44）﹪比（12.36±1.25）﹪]均降低,SOD活性[（5.15±0.51）比（9.67±0.97）U/mL]升高,差异有统计学意义（P均< 0.05）。与缺氧+TM+anti-miR-NC比较,缺氧+TM+anti-miR-495-3p的PC12细胞LDH漏出率[（17.64±1.79）﹪比（32.69±3.57）﹪]和细胞凋亡率[（10.98±1.75）﹪比（22.64±2.13）﹪]均升高,SOD活性[（12.63±1.27）比（7.32±0.71）U/mL]降低,差异有统计学意义（P均< 0.05）。 结论TM通过上调miR-495-3p/MEF2A通路对缺氧诱导的PC12细胞损伤具有保护作用。     

人脐带间充质干细胞对脂多糖活化的小胶质细胞BV-2表型的影响

目的探讨人脐带间充质干细胞（hUCMSCs）对脂多糖（LPS）活化的小胶质细胞功能表型的影响。 方法实验设未诱导对照组（加入PBS无LPS诱导的BV-2细胞），LPS诱导组（加入1.0 μg/mL的LPS诱导BV-2细胞向M1型分化），按比例加入不同浓度hUCMSCs进行干预（LPS+低、中、高浓度hUCMSCs干预组hUCMSCs与BV-2细胞比例分别为：1:100、1:10、1:1），分别于24、48、72 h观察BV-2形态变化，Griess法检测细胞培养上清中M1表型产物一氧化氮（NO）的浓度；将hUCMSCs与BV-2细胞在不同条件下（LPS+/LPS-）共培养，qRT-PCR检测BV-2细胞M2表型标记物精氨酸酶1表达变化。数据分析采用重复测量资料的方差分析，组间比较采用Tukey分析。 结果BV-2细胞经LPS诱导后活化，细胞变大，呈"煎饼状"、"阿米巴状"变化，呈经典的M1表型分化；与未诱导对照组相比，LPS诱导组48、72 h BV-2细胞NO含量升高[48 h：（0.507±0.012）μg/mL比（5.183±0.171）μg/ mL；72 h：（0.934±0.024）μg/ mL比（12.498±0.168） μg/mL，P均< 0.01]，与LPS诱导组比较，LPS+低、中、高浓度hUCMSCs干预组72 h [（12.498±0.168）μg/mL比（11.852±0.149）μg/ mL、（9.796±0.048）μg/mL、（1.876±0.063） μg/mL]及LPS+中、高浓度hUCMSCs干预组48 h NO含量[（5.183±0.171） μg/ mL比（3.921±0.066）μg/mL、（1.202±0.012）μg/ mL]降低，且呈干预浓度依赖性NO含量下降，差异均有统计学意义（P均< 0.01）。精氨酸酶1 qRT-PCR结果显示：与未诱导组比较，单纯高浓度hUCMSCs干预组3个时间点精氨酸酶1的相对表达量均升高（1.046±0.057比19.266±0.641，1.114±0.093比16.977±0.749，1.139±0.118比16.959±0.625），与LPS诱导对照组（0.000）比较，未诱导对照组（1.046±0.057，1.114±0.093，1.139±0.118）及LPS+高浓度hUCMSCs干预组精氨酸酶1表达（0.879±0.077，1.023±0.081，1.121±0.078）升高，差异具有统计学意义（P均< 0.01）。 结论LPS可诱导小胶质细胞BV-2炎症反应，而hUCMSCs可抑制活化小胶质细胞的炎症反应，抵消LPS对BV-2的诱导效应，促进小胶质细胞由促炎的M1型向抗炎的M2型转变。     

脑肠肽Ghrelin-GHSR信号系统与肿瘤的关系

脑肠肽Ghrelin是一种含有28个氨基酸的生长激素释放肽,为生长激素促分泌素受体(growth hormone secretagogue recep-tor,GHSR)的内源性配体。Ghrelin及其功能性受体GHSR-1a广泛分布于中枢和外周组织。此外,在多种肿瘤组织和癌细胞中发现有Ghrelin及其功能性受体GHSR-1a的表达。我们的前期工作和目前的研究发现Ghrelin可与经典的功能性受体GHSR-1a或新型受体结合,通过激活多条信号转导通路,对肿瘤的生物学行为发挥重要的调控作用。因此,脑肠肽Ghrelin-GHSR信号系统可为肿瘤的临床诊断和预后评估发挥重要作用,并为肿瘤的分子治疗提供新靶点。     

Effect of overexpression of inhibin alpha (1-32) fragment on bovine granulosa cell proliferation, apoptosis, steroidogenesis, and development of co-cultured oocytes

The objective was to determine the effects of an inhibin alpha (1-32) fragment gene on proliferation, apoptosis, and steroidogenesis of bovine granulosa cells (GC) isolated from medium and small follicles (diameter >4-8 and 1-4mm, respectively), and the effect of GC, previously transfected with pEGISI, on oocyte maturation and in vitro embryo development. To enhance expression of the inhibin alpha (1-32) fragment, GC were transfected with pEGISI. Transfection inhibited (P<0.05) GC proliferation (88.8+/-2.1%; mean+/-S.E.M.) compared to the control and EGFP groups (100% and 97.5+/-2.1%) from medium follicles, with no significant effect on GC from small follicles. Apoptosis was higher (P<0.01) in transfected GC than in controls. Transfection increased (P<0.05) estradiol synthesis from both medium and small follicles (0.57+/-0.13 and 0.86+/-0.13 pg/mL vs. 0.19+/-0.05 and 0.35+/-0.09 pg/mL in controls) after culturing for 48 h, with suppression (P<0.05) in transfected GC after 96 h. Transfection reduced (P<0.05) progesterone synthesis in GC from both medium and small follicles (24.5+/-3.4 and 75.4+/-4.6 ng/mL vs. 45.42+/-5.33 and 117.32+/-11.99 ng/mL in controls) after culture for 48 h, with no significant difference after 96 h. Maturation rate of oocytes co-cultured with transfected GC from medium follicles was decreased relative to control (61.5+/-6.8% vs. 71.2+/-5.7%, P<0.05), with no significant effect on embryo development. In conclusion, overexpression of inhibin alpha (1-32) fragment regulated GC development; effects on subsequent oocyte maturation were both time- and stage-dependent.     

急性缺氧暴露不同时间家兔血浆心钠素、抗利尿激素、醛固酮的变化

本实验观察了８０只家兔在急性缺氧６、１２、２４、３６、４８、６０、７１ｈ后肺指数、血浆心钠素（ＡＮＰ）、抗利尿激素（ＡＶＰ）、醛固酮（ＡＬＤ）及尿量的变化。结果表明：在缺氧２４－７２ｈ,肺指数明显升高,尿量减少;缺氧１６ｈ,血浆ＡＮＰ明显升高;而缺氧４８和６０ｈ无ＡＮＰ升高现象。缺氧７２ｈ,血浆ＡＮＦ又明显高于缺氧前水平;血浆ＡＶＰ只在缺氧２４ｈ明显升高;血浆ＡＬＤ未见显著性变化。这些结果提示：在缺氧状态下,ＡＮＰ、ＡＶＰ的释放均与缺氧暴露的时间有关。这些激素的平衡失调可能与急性缺氧性肺水肿的发生有关。