高效液相色谱-串联质谱法测定六堡茶中黄曲霉毒素B1的研究

目的建立以多壁碳纳米管作为QuEChERS吸附剂,高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法测定六堡茶中黄曲霉毒素B_1的分析方法。方法采用乙腈提取,并在样品提取液中加入分散固相基质净化后进行测定。结果在2.6~41.6μg/kg浓度范围内具有良好线性关系,黄曲霉毒素B_1的回收率为83.8%,相对标准偏差(RSD)4.7%,n=10,方法检测限为2.6μg/kg。结论该法有较好的灵敏度,能够满足六堡茶中黄曲霉毒素B_1测定的要求。     

鸡蛋中呋喃唑酮代谢物金标试纸条快速分析

基于呋喃唑酮代谢物3-氨基-2-恶唑烷酮(AOZ)的小鼠单克隆抗体和小分子抗原抗体竞争法检测的原理,建立了鸡蛋中AOZ的胶体金试纸条检测方法。AOZ经过邻硝基苯甲醛衍生后,能够被抗体识别,进而通过试纸条的方法进行检测。结果表明:该检测方法灵敏度高,通过肉眼判断最低检测限为0.02μg/kg,消线含量为0.5μg/kg。该方法能够实现鸡蛋中AOZ的快速检测和高灵敏度分析。     

紫苏油中的多环芳烃残留量的测定方法研究

对不同方法提取的紫苏油,经超声波辅助正己烷-丙酮提取、硅胶-氧化铝复合柱净化后,采用气相色谱-质谱-选择离子检测法对其中多环芳烃的残留量进行定性和定量检测,结果表明：在10～1000 μg/L浓度范围内,16种PAHs有良好的线性关系,相关系数为0.994～0.999,加标回收率在77.4%～91.7%,日内（n = 10）相对标准偏差为3.20%～6.92%,检测限为0.08～0.45 μg/kg。该方法快速准确、分析灵敏度高、重复性好,可适合于食用油中PAHs的快速分离与检测。3种方法提取的紫苏油中PAHs残留量均在国家规定的食用油中多环芳烃含量标准范围内。     

快速提取类球红细菌中辅酶Q10的方法研究

目的：建立一种从类球红细菌中快速分离纯化辅酶Q10的方法。方法：对影响超声提取辅酶Q10的各因素,包括提取试剂、超声频率、循环次数及工作时间的最佳条件进行正交试验,比较超声破碎法与碱醇皂化法提取辅酶Q10的差异。结果：在超声提取中,提取试剂和循环次数对辅酶Q10提取效果具有显著性影响;在超声频率0.5s、丙酮提取3min、循环3次的条件下提取的辅酶Q10的含量比碱醇皂化法提高了近6倍。结论：超声破碎法是一种简单、迅速、高效的提取辅酶Q10方法。     

气相色谱法检测水痘减毒活疫苗原液中二甲基亚砜残留量

目的 建立测定水痘减毒活疫苗原液中二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide, DMSO)残留量的气相色谱法,并进行方法学的验证和初步应用。方法 采用气相色谱法检测,对色谱柱、柱温、分流比以及供试品预处理方法进行了优化,并对优化后的方法进行系统适用性和专属性、线性和范围、准确度和精密度、定量限和检测限、耐用性的方法学验证。结果 色谱柱使用DB-624(30 m×0.53 mm, 3.00μm)毛细管柱,以氮气为载气,进样口温度设定为250℃,FID检测器温度设定为270℃,柱温为120℃,分流比为5∶1。供试品在检测前采用乙腈沉淀蛋白的预处理方式(体积比1∶9～1∶19)以去除其中的干扰杂质。方法学验证结果显示,系统适用性和专属性良好,DMSO色谱峰与杂质分离良好,在50～1 000μg/mL范围内线性关系良好(R²=0.999 9)。检测限为20μg/mL,定量限为50μg/mL;准确度结果均在90%～110%之间,精密度的RSD均<10%。水痘减毒活疫苗原液中的DMSO残留量均未检出。结论 建立的气相色谱法能稳定、准确、快速地检测水痘减毒活疫苗原液...     

PCR-膜芯片技术在牦牛及犏牛肉制品的真假鉴定中的应用

旨在利用PCR-膜芯片技术快速高效的鉴定牦牛及犏牛肉制品的真假。采集样品(猪、山羊、黄牛、水牛、牦牛、鸡、鸭、兔、狗、真犏牛、假犏牛肉样各8个,19个肉干制品样品),提取并纯化DNA,利用11对特异性引物进行多重PCR,将扩增产物与含有12个探针的膜芯片反向点杂交,测试膜芯片的准确度及灵敏度,并鉴定市场上销售的牦牛肉制品真假。结果表明,膜芯片准确度高,特异性强,无交叉反应,灵敏度能达到0.1 ng,检测灵敏度高。通过鉴定市场上销售的假牦牛肉干制品几乎都以黄牛和水牛肉为原料制作。应用PCR-膜芯片技术可快速准确的鉴定出牦牛肉制品的真假,有利于打击假冒产品,维护市场平衡。     

龟甲DNA检测试剂盒的研制与评价

研制一种集DNA提取与PCR鉴定为一体的龟甲检测试剂盒,考察试剂盒的特异性、敏感性、重复性及稳定性。通过优化DNA提取和PCR检测方法,将所需试剂组合成试剂盒,用其提取龟甲正品及伪品mtDNA,进行PCR鉴定。试剂盒提取龟甲正品及伪品mtDNA的OD260/OD280为1.80±0.05,正品龟甲在335bp和410bp出现两条清晰条带,伪品龟甲则无条带出现,试剂盒特异性为100%,检测限为0.025 g,经反复冻融20次后依然有效,3次重复性检测均重现相同结果。龟甲DNA检测试剂盒特异性强、灵敏度高、稳定性好,适用于龟甲药材的快速检测。     

种子醇溶蛋白提取及检测条件探索

以大麦、小麦、玉米、高粱和苏丹草的种子为材料提取种子的醇溶蛋白,分析了不同提取剂及不同固液比[种子粉末样品质量(g)与提取剂的体积(mL)的比例]对种子醇溶蛋白提取效果的影响,并对SDS-PAGE检测醇溶蛋白中的不同胶浓度、厚度以及样品上样量等的影响进行了研究.结果表明,60%的正丙醇、乙二醇、异丙醇和叔丁醇分别是小麦、大麦、玉米以及高粱和苏丹草的最佳提取剂,将1∶6比例提取的种子醇溶蛋白以15μL上样,0.5mm厚度的15%分离胶电泳可以得到清晰的电泳检测图谱.     

两种从土壤中提取DNA方法的比较

为土壤微生物多样性研究选取理想的DNA提取方法,该文比较了直接法和间接法从土壤中提取微生物总DNA的效果。结果表明：直接法提取量大,每克土壤提取到DNA约10．26μg,而间接法仅提取到0．55μg,直接法DNA提取量约为间接法的19倍。直接法得到的DNA包含细菌种群较间接法丰富,DGGE分析结果显示,二者的条带数分别为35条和28条,占检测条带总数的92．1%和78．9%。间接法提取到DNA纯度较直接法高,不需纯化即可用于PCR扩增和BamHⅠ酶切反应。     

螺旋藻中β-胡萝卜素高效液相色谱测定方法的研究

采用高效液相色谱法直接测定螺旋藻中β-胡萝卜素组分的含量.色谱柱为YMC-pack ODS(4.6mm i.dx 150 mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-二氯甲烷(体积比60:30:10),在435nm波长处检测.研究结果表明:β-胡萝卜素的检测限为20ng,线性范围在4.60～36.80 mg/L,相关系数为0.9996,加样平均回收率为96.61%.方法准确、简便、快速,适用于螺旋藻及螺旋藻制品中β-胡萝卜素组分的检测.     

超高液相色谱法同时测定北五味子中7种木脂素类化合物

建立了超高效液相色谱法(UPLC)同时测定北五味子中7种主要木脂素类成分的检测方法。采用ACQUITY UPLC~BEH C_(18)色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.7μm);以水-乙腈为流动相,梯度洗脱分离,PDA检测波长254 nm,流速0.4 m L/min,柱温30℃,进样量2μL。优化了色谱分离条件,并进行了线性方程、准确度、重复性、回收率等方法学考察,在优化条件下,7种木脂素的出峰时间在5 min内,且线性关系良好(r0.9994),方法检出限范围为0.0105~0.1600μg/m L,定量限为0.1050~0.8200μg/m L,相对标准偏差(RSD)在0.0340%~1.3800%之间,样品加样回收率在95.09%~104.50%范围内。本方法大大缩短了分析时间,灵敏度高,适用于北五味子中7种木脂素类成分的同时测定。     

超高效液相色谱-串联质谱法检测小菜蛾血清中的β-蜕皮激素

【目的】研究建立可以准确检测小菜蛾血清中痕量β-蜕皮激素的超效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)分析法。【方法】小菜蛾血清β-蜕皮激素样品用乙腈提取并进行蛋白沉淀,以C18色谱柱分离,经UPLC-MS/MS检测,以芸苔素内酯为内标物,内标法定量。【结果】结果表明,在0.5-50μg/L浓度范围内β-蜕皮激素线性相关系数R~2=0.9998;在0.5、10和50μg/L3个添加水平下的平均回收率在91.9%-104.9%之间,相对标准偏差(RSDS,n=5)在3.2%-9.2%之间;方法的定量限为0.5μg/L。【结论】该方法具有操作简单、灵敏度高,稳定性好,应用性强等优点,可为昆虫血清中的β-蜕皮激素检测提供科学准确的方法。     

利用SEC-HPLC法测定重组人透明质酸酶的纯度

目的:建立检测重组人透明质酸酶(rHuPH20)纯度的高效分子排阻色谱法(SEC-HPLC)。方法:利用SEC-HPLC法建立检测rHuPH20纯度的方法,并对方法的专属性、线性、精密度(重复性和中间精密度)、检测限、定量限和耐用性等指标进行评估。结果:空白溶剂在设定的积分范围内无特异峰出现;样品浓度为30~480μg/m L时,数据呈线性关系,决定系数r~2=0.9994;重复性实验峰面积相对标准偏差(RSD)为1.9%;中间精密度实验峰面积RSD为1.1%;检测限为样品浓度10μg/m L时进样体积20μL,即进样量0.2μg;定量限为样品浓度30μg/m L时进样体积20μL,即进样量0.6μg;耐用性实验中,峰保留时间RSD为0.4%,峰面积RSD为1.0%。结论:建立的SEC-HPLC法各项指标符合要求,可用于rHuPH20的纯度检测。     

新疆外来入侵杂草豚草属LAMP快速检测技术的建立

【目的】开发外来入侵生物三裂叶豚草和豚草不同生育期、不同部位的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)技术,以达到田间快速、准确和高效识别的目的。【方法】以SYBR Green Ⅰ为指示剂,分别针对三裂叶豚草和豚草不同发育阶段(幼苗期、生长期、种子期)开展LAMP技术开发。【结果】特异性验证结果显示,所检测杂草的LAMP产物均呈阳性(产生白色沉淀),而与其对照的其他2种杂草的LAMP产物均为阴性(无白色沉淀)。灵敏度检测结果显示,该体系的DNA最低检测限为10^-10 ng·μL^-1,比常规聚合酶链式反应灵敏度高。【结论】本研究建立的LAMP检测体系能有效应用于三裂叶豚草和豚草样本的快速检测,为其快速、高效识别提供技术支撑。     

石墨炉原子吸收法测定葡萄糖中的铅残留量

目的建立石墨炉原子吸收法检测葡萄糖中铅残留量的方法,并对该方法进行验证。方法采用石墨炉原子吸收法,确立仪器工作参数以及原子化程序;依据《欧洲药典》8.0版原子吸收法的相关规定进行方法验证,分别验证方法的线性、范围、准确度、重复性、中间精密度、检测限、定量限等;并初步应用。结果检测条件:波长A283.3 nm、氘灯背景校正技术、灯电流10 m A、狭缝宽度0.7 L、上样量20μL、基体改进剂加入量5μL、测定模式峰面积法、灰化温度1 000℃、原子化温度1 800℃;样品前处理:精密称取葡萄糖5.0 g,用0.5%硝酸溶液溶解并定容至100 m L;三次拟合的校正曲线的相关系数均在0.999以上,SD最低0.5∶SD最高2.0;范围为5~50 ng/m L(即0.1~1 mg/kg);回收率在97.8%~102.1%之间,连续3个平行结果的重复性在0.2%~1.7%之间,3个不同日期测定结果的中间精密度在1.2%~2.2%之间;检测限为0.444 ng/m L,定量限为1.48 ng/m L,按照《欧洲药典》8.0版要求的限度单位换算成mg/kg,分别相当于0.008 88 mg/kg、0.029 6 mg/kg。对3批葡萄糖进行测定,结果均为未检出。结论该方法操作简单、检测快速,且具有准确度和精密度高、灵敏度高、检测结果准确可靠等优点,可以取代《欧洲药典》8.0版采用的萃取—火焰原子吸收法和《中国药典》2015版(二部)的重金属检查法进行葡萄糖品种铅残留量项目的测定。     

三种重要水果褐腐病菌快速检测试纸的研制

以水果上3种重要的褐腐病菌,即美澳型核果褐腐菌(Monilinia fructicola)、核果褐腐菌(M. laxa)和仁果褐腐菌(M.fructigena)为检测对象,研究开发适用于口岸水果检疫的快速检测试纸。以硝酸纤维素膜为固相载体,以病菌翻译延长因子基因(Translation elongation factor 1-alpha,EF-1α)为检测靶标,生物素标记的PCR扩增产物为检测标记物,采用DNA-DNA杂交方式对3种褐腐病菌进行试纸法快速检测。分别以褐腐病菌DNA和本研究构建的EF-1α重组质粒DNA为阳性标准品检验试纸的特异性和灵敏度。试验结果表明,本研究开发的检测试纸能够同时特异地检出以上3种褐腐病菌,整个检测流程(包括DNA提取和扩增过程)在2 h内即可完成,最低检测限达到10 fg/μL。其特异性强、灵敏度高、稳定性好,且检测结果可肉眼判定,无需依赖昂贵设备,便于向基层检疫实验室推广使用。     

轮状病毒NASBA检测研究

轮状病毒是世界范围内流行性胃肠炎暴发的重要病因。以患者粪便为样抽提轮状病毒RNA,在轮状病毒VP7高保守基因区段上设计引物,运用核酸序列依赖的扩增(NASBA)法进行检测,变性琼脂糖凝胶电泳和Northern杂交验证。NASBA预期的特异性产物为392bp,并在仅以目标核酸为模板或在浓度高达1μg/μL的非特异性核酸存在的混合模板中,均有清晰的目标带产生,表现出了很高的特异性。其灵敏度和RT-PCR相同甚至更高,可检测到50pg的核酸,并且当反应时间为3h时检测灵敏度最高。NASBA法扩增效率高、灵敏度高、快速易操作,尤其适用在基层单位推广应用。     

丹参分析样品中丹参酮的超声波辅助提取

为了提取丹参分析样品中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ及丹参酮ⅡA等有效成分,建立了以CH3OH-CH2Cl2为提取溶剂的超声波辅助提取法。优化的提取条件是,液／固比：133．3mL／g,提取溶剂组成：φ（CH2Cl2）=0．2,提取时间：8min。与几种常规提取法（如甲醇回流法、CH3OH—CH2Cl2室温浸取法）相比较,超声波辅助提取法具有提取时间短、丹参酮提取量高等优点,适用于丹参中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ及丹参酮ⅡA同时测定的样品前处理。     

一种水稻幼苗单株DNA的快速提取及PAGE银染改良法

目的:为了提高SSR分子标记技术在水稻遗传育种中的研究效率,介绍一种快速的适于SSR-PCR扩增的水稻幼苗单株DNA提取法及PAGE银染法。方法:在常温下加入少量SDS提取液将单株叶片迅速捣碎,再加入300μLSDS提取液,65℃水浴10min后离心,取上清用乙醇沉淀后离心,超净工作台吹干后用100μLTE回溶即可。改进的PAGE银染法只需染色、冲洗、显影等3步,用乙醇和硝酸银作为染色液,去离子水快速冲洗1次后置显影液中即可显影。结果:本法可快速提取DNA,不须液氮研磨、氯仿抽提,提取的DNA经0.8%琼脂糖凝胶电泳检测表明质量较好,且扩增结果稳定可靠,满足了SSR-PCR的需要。改良的银染法与常规银染法的检出结果相同,但快速方便,整个过程只需10min,且背景较浅,灵敏度高。结论:快速提取法及PAGE银染改良法结合SSR分子标记技术,可有效地用于杂种后代的遗传连锁分析和分子标记辅助育种时的单株检测。     

蛹虫草子实体中海藻糖含量的测定

为分析食用菌中海藻糖的含量,以蛹虫草子实体为材料,比较了提取溶剂、提取方式及提取时间等条件对海藻糖提取效果的影响,确定海藻糖分析的前处理方法为：1g子实体粉中加入100mL 90%乙醇热回流提取1h。采用高效液相色谱法测定海藻糖,优化后的色谱条件为：SUGAR SP0810柱（300mm×8mm）,超纯水洗脱,流速0.5mL/min,柱温70℃,示差折光检测器检测,进样量10μL。方法学考察结果表明,该方法准确度高,稳定性、精密度、重现性好,对海藻糖标准品的检测特异性良好,适用于蛹虫草子实体中海藻糖含量的