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在真菌反硝化作用中,一种独特的细胞色素P-450起着一氧化氮还原酶的作用。用λgtll构建了柱孢菌cDNA文库。纯化的柱孢菌C.P-450nor2免疫兔,制备抗体。并用4抗体选出阳性克隆。 相似文献
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用DE-52纤维素柱色谱法和FPLC法分离纯化了大肠杆菌表达的重组缣孢菌色素P-450nor,经梯度洗脱MonoQ纯化后的fR.P-450nor为单一色谱峰,比活达55.20U/mg、纯化倍数约为1100倍,SDS-PAGE检测为单一谱带。 相似文献
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利用BactoBac杆状病毒载体表达系统将真菌细胞色素P450nor基因克隆至转移载体pFastBac1中, 得到重组质粒pFastBacP450nor, 再将其转化进入含穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac中发生转座作用, 得到含P450nor基因的重组穿梭载体rBacmid pAcP450nor。分离提取重组Bacmid DNA, 并转染培养的昆虫细胞Sf9, 得到重组病毒rAcp450nor。经酶切和PCR 鉴定, 细胞色素P450nor基因正确地插入到病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下, SDSPAGE分析证明:表达蛋白的分子量为43kD左右。Western blotting分析结果表明:有一条特定的杂交带存在, 且分子量相同(约43kD)。进一步证明了含有真菌细胞色素P450nor基因的重组表达载体和重组病毒构建成功,并在昆虫细胞Sf9中实现了高效表达, 经MTT法测定表达的细胞色素P450nor具有还原NO的生物学活性。 相似文献
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用DE-52纤维素柱色谱法和FPLC法(fastProteinliquidchromatography)分离纯化了大肠杆菌表达的重组缣孢菌细胞色素P-450nor(recombinant fusariumoxvsporumcytochromeP-450nor,rF.P-450nor).经梯度洗脱MonoQ纯化后的rF.P-450nor为单一色谱峰,比活达55.20U/mg,纯化倍数约为1100倍,SDSPAGE检测为单一谱带. 相似文献
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纯化的重组缣孢菌细胞色素P-450nor(recombinant fusarium oxysporum cytochrome P-450nor,rF·P-450nor)用于动力学研究. 测得米氏常数Km(NO)和Km(NADH)分别为0.128 mmol/L和0.208 mmol/L. Vmax(N2O)为11 363 min-1. 光谱吸收特性研究表明:rF·P-450nor具有典型的血红素蛋白的特性,在413 nm有最大吸收峰. 加入还原剂Na2S2O4时,最大吸收峰前移至405 nm. 与CO结合后,再加入还原剂Na2S2O4时,在450 nm处表现最大吸收.与NO结合后,最大吸收峰移至430 nm附近. 这些光谱特征的变化与天然的F·P-450nor完全一致. 相似文献
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真菌的反硝化作用与细胞色素P-450刘德立(华中师范大学生物系,武汉430070)关键词反硝化作用,细胞色素P-450反硝化作用是将硝酸盐或亚硝酸盐还原成N2或N2O的过程,是大气氮循环中的一部分。多种细菌具有反硝化能力。但近年来的研究证明:有些真菌... 相似文献
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根据已报道的人参、三七等植物的细胞色素P450(Cytochrome P450,P450)基因的cDNA序列设计引物,利用RT-PCR法克隆刺五加P450基因的cDNA全长序列,并分析其在不同生长发育时期和器官中的表达情况。结果显示,克隆了全长为1 410 bp的刺五加P450基因的cDNA序列,该基因编码469个氨基酸残基组成的蛋白质。GenBank登录号为KF498590,与人参、三七的P450氨基酸序列一致性分别为91.5%和90.4%。刺五加的P450基因在不同生长发育时期和器官中均有表达,但表达量具有显著差异(P0.05)。最大表达量出现在盛花期,为最低表达量(萌芽期)的1.26倍。各器官中,叶片的表达量最高,是最低量幼茎的1.49倍。 相似文献
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昆虫细胞色素P450基因的克隆及其策略 总被引:1,自引:0,他引:1
本记述了目前已克隆的105个昆虫细胞色素P450基因cDNA和片段,它们分属CYP4、CYP6、CYP9、CYP12、CYP18和CYP28等6个家族:同时,综述和分析了克隆这些基因、cDNA和片段所采用的策略及其优缺点。 相似文献
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利用RT—PCR技术,从小菜蛾体内克隆了细胞色素P450基因CYP6序列,GenBank登录号为AY971374。生物信息学技术分析表明,该序列由1661bp组成,熔点102℃,退火温度87℃,单链分子质量539.83kDa,双链分子质量1079.65kDa,可以翻译514个氨基酸,组成的蛋白质分子式C2682H4154N702O747S30,分子量是59146.5,总原子数8315,等电点pl为8.63,高级结构与Cytochrome P450 Bm-3基因有较高的相似性。 相似文献
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细胞色素P450与肿瘤 总被引:4,自引:0,他引:4
本文综棕了细胞色素P450同工酶与致癌物代谢、与抗癌药的相互作用以及化的关系,并对调控P450同工酶以防治肿瘤的策略进行了论述。由于P450同工酶具有多态性、工物特异性及可诱导性的特点,在调控P450同工酶以防治肿瘤的问题上,针对不同人群、不同疾病状况及不同用药方案可能需采取抑制或诱导的不同策略。 相似文献
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本文克隆了东亚飞蝗Locusta migratoria manilensis(Meyen)细胞色素P450(cytochrome P450)基因全长,表达重组蛋白,并对其可溶性进行了分析。通过提取东亚飞蝗总的RNA,反转录成cDNA,设计特异性引物,PCR克隆东亚飞蝗细胞色素P450基因,将测序正确的目的片段克隆至原核表达载体pET-28a中,在大肠埃希菌Escherichia coli Rosetta中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测重组蛋白表达结果。结果表明:东亚飞蝗细胞色素P450基因开放阅读框全长为1 551 bp,编码516个氨基酸,与GenBank中已登录的东亚飞蝗细胞色素P450基因(HM153426)的同源性为99%,重组质粒pET-28a-P450在E.coli Rosetta中获得高效表达,重组蛋白相对分子质量(Mr)约为53 000,主要以包涵体的形式存在。 相似文献
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细胞色素P450与癌症基因治疗 总被引:4,自引:0,他引:4
细胞色素P45 0基因与癌症化疗潜药(该类潜药可通过P45 0催化的加单氧酶反应而活化 )结合的癌症基因疗法引人注意[1]一些抗癌药物可被P45 0酶系代谢 (表1 )。环磷酰胺 (CPA )、异环磷酰胺 (ifos famide)、甲基苄肼、甲苄肼 ( procarbazine)和氮烯咪胺 (dacarbazine) ,经特定P45 0酶系的代谢所产生的中间物具有抗癌活性。硫代TEPA、阿霉素、依托泊甙 (etoposide)和三苯氧胺 (tamoxifen)本身具有抗癌活性 ,但通过P45 0代谢形成的具有细胞毒性的代谢物 ,抗癌活性可得到加强。还… 相似文献
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细胞色素P450的多样性 总被引:16,自引:0,他引:16
细胞色素P450的多样性*邱星辉冷欣夫(中国科学院动物研究所,北京100080)关键词细胞色素P450多样性细胞色素P450是一类以还原态与CO结合后在波长450nm处有吸收峰的含血红素的单链蛋白质[1~3]。它于1958年被发现以来,就引起了人们的... 相似文献
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昆虫细胞色素P450研究:P450基因 总被引:3,自引:0,他引:3
细胞色素P450广泛存在于生物界,它因参与许多外来物质和内源性物质的代谢而具有十分重要的作用[1-5]细胞色素P450的研究大约有50多年的历史[3]。60年代的工作主要是对这一血红素蛋白的生物化学和生物物理学特征的了解以及膜结合P450酶系的酶学功能[3]。70年代的研究集中在细胞色素P450酶系的分离纯化及其活性的重组。纯化P450的成功证明了许多P450在物理学和酶学特征方面的不同,也为制备抗体及利用抗体来确定某种P450的存在与数量以及抑制特定P450的酶活性提供了手段,使进一步阐明P450的反应机制成为可能。80年代分子生物学技术的… 相似文献
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昆虫细胞色素P450的研究:P450基因的进化 总被引:1,自引:0,他引:1
80年代分子生物学方法被用于分离和鉴定特定P450的CDNA或基因组克隆[‘],至今已知的P450基因包括70个基因家族、127个亚家族的40O多个,基因序列的数量还在迅速增加I’]。不同P450间的进化关系在一些综述中都有涉及[”’,‘],本文介绍这一主题的一些主要观点,重点放在P450功能的进化及其机制。亚细胞色素P450的基本特征及其分类与命名所有细胞色素P450具有一非共价结合的血红素和环绕高度保守的半跳氨酸的一段26氨基残基的保守序列,这一半跳氨酸提供血红素铁的第5个配体(ligand)。当血红素铁接受电子被还原后再与CO结合产… 相似文献