用超常的复性温度改善小麦RA PD分析的效果

用38～66℃不同复性温度处理,比较了18条随机引物的扩增结果.发现复性温度在40～50℃之间均有数量不等的扩增产物,不同引物的最高复性温度不同,有些引物用60℃以上的复性温度仍有扩增产物.一些在35～38℃的复性温度下非特异性产物较多的引物,通过大幅度提高复性温度,能提高扩增产物的特异性,获得清晰的RAPD带型。 Abstract:To decrease nonspecific products and obtain clear RAPD patterns,18 10- mer random primers were tested at different annealing temperatures.The results indicated that all the amplification can be performed when the annealing temperature is in the range of 40~50℃.There were a few primers with which the amplification was still performed when the annealing temperature is above 60℃.By using high annealing temperatures,some primers which produce more nonspecific product at the annealing temperatures of 35~38℃ could generate reproducible and distinct bands.     

粘类小麦细胞质雄性不育系的RAPD分析

利用250条10-聚寡核苷酸随机引物对具粘果山羊草(Aegilops kotschyi)、易变山羊草(Ae.variabilis)、偏凸山羊草(Ae.ventricosa)和二角山羊草(Ae．bicornis)细胞质不育系及其保持系5-1的总DNA进行了RAPD多态性分析,其中31条引物对4种不育系及其保持系总DNA均无扩增,217条引物扩增条带完全相同。有2条随机引物在2种不育系之间有特异的扩增片段,其中引物S22在偏凸山羊草细胞质雄性不育系基因组DNA中扩增出分子量约为1600bp的特异带,引物S202在粘果山羊草细胞质雄性不育系基因组DNA中扩增出约1300bp特异带。线粒体基因组DNA的RAPD分析表明,4种不育系及其保持系mtDNA存在明显的差异。证明了S22—1600为偏凸山羊草细胞质不育系及其mtDNA基因组DNA的RAPD特异片段．S202—1300可能为粘果山羊草细胞质不育系及其ctDNA基因组DNA的RAPD特异片段。     

小麦耐盐突变体的RAPD分析

以冀麦２４和其耐盐的一代８９０１－１７为材料,用ＲＡＰＤ技术对其进行比较分析研究。在的用的２１５个引物中有５１个扩增出多态性,既有量的差异又有质的差异,初步断定此５１个引物扩增出的多态性与突变有关,为进一步用ＢＳＡ方法细筛出与耐盐突变体紧密连锁的ＲＡＰＤ分子标记下打下基础,同时,还分析了影响ＲＡＰＤ扩增结果的因素。     

用Langdon二体代换系统建立小麦染色体RAPD标记

以一套Ｌａｎｇｄｏｎ硬粒小麦二体代换系及其亲本Ｌａｎｇｄｏｎ、中国春和中国春双端体为材料,研究适于硬粒小麦和普通小麦的理想ＲＡＰＤ分析条件,进行小麦Ａ、Ｂ和Ｄ染色体组各个染色体的ＲＡＰＤ分析。结果表明,ＡｍｐｌｉＴａｑＳｔｏｆｆｅｌｆｒａｇｍｅｎｔ比ＴａｑＤＮＡＰｏｌｙｍｅｒａｓｅ优越。所用１２个随机引物中,７个引物扩增出的１３个特异产物,可确定在硬粒小麦ＬａｎｇｄｏｎＡ、Ｂ染色体组和中国春Ｄ染色体组中的１０个个别染色体上。４个标记进一步定位在相应的４个染色体臂上。结果还表明,用Ｌａｎｇｄｏｎ二体代换系统、中国春双端体为材料,容易得到重复性高、特异性强的ＲＡＰＤ标记。     

用RAPD和染色体原位杂交检测Elymus rectisetus染色体附加到普通小麦中

报道小麦×Elymusrectisetus属间杂种BC2F236个衍生系,通过染色体原位杂交和RAPD分析,检测Elymusrectisetus染色体及其特异染色体DNA标记。原位杂交结果表明,36个衍生系中大多数系含1对异源Erectisetus染色体,少数系含3条以上Ereclisetus染色体;RAPD结果表明,有13个随机引物（OPBA-08、OPB－14OPEA-09、OPF-05、OPF－09、OPJ-05、OPK-03、OPN-12、OPP-20、OPS－12、OPT-20、OPZ-09、OPZ-11）能够在这36个衍生系中分别扩增出普通小麦所没有的Erectisetus特异的染色体DNA片段。其中Erectisetus特异染色体DNA片段OPF－05480bp、OPF－09650bp和OPZ-11350bp只能够在“1048”系统的全部8个株系中扩增出;OPN-12350bp只能够在“1057”系统的全部6个株系中扩增出;OPB-14900bp和OPM-05420bp只能够在“1034”、“1026”2个系统的全部22个株系和“1057”－5－3株系中扩增出。直接获得了3个类型不同的异附加系,省去常规通过测配和附加系两两杂交F1PMCMI细胞学鉴定来确证异附加系之间的异同。由此说明染色体原位杂交和RAPD分析有机结合是鉴定异附加系（异代换系）快速有效的方法,且方法简单、易行．     

普通小麦抗、感赤霉病品种(系)的RAPD标记分析

采用RAPD技术,用524个随机引物对3个抗病品种和4个感病品种的基因组DNA进行扩增,发现3个引物能在抗、感品种间检测到稳定的多态性。这3个引物及它们产生的多态片段是S347 1220bp、S372 872bp和S375 1360bp,其中S347 1220bp和S372 875bp在感病品种上呈显性扩增,在抗病品种上无扩增,相反S375 1360bp在感病品种上无扩增,在抗病品种上呈显性扩增。初步判断这3个特异带与小麦赤霉病抗性有关。     

小麦双引物RAPD分析方法的研究

ＲＡＰＤ标记是近几年迅速发展的一种新型分子标记,标准的ＲＡＰＤ的反应是以１０个寡聚核苷酸作引物,通过ＰＣＲ反应扩增出基因组的部分片段,我们在研究外源ＤＮＡ导入小麦后外源遗传物质的追踪时,对这个方法进行了改进,采取了双引物进行扩增,结果双引物反应能够比单引物反应扩增出更多的多态性片段。分子杂交结果表明,双引物扩增出的新片段与单引物扩增片段无同源性,并对双引物扩增出的多态性片段产生的可能原因进行讨论。     

小麦耐盐种质遗传多样性的RAPD分析

选用２２个引物对２４份小麦耐盐种质进行ＲＡＰＤ分析,共产生２００条扩增片段,多态性片段数为１７２条,扩增片段的多态性百分率为８６％,利用ＮＹＳＴＳ软件根据Ｊａｃｃａｒｄ系统分析ＲＡＰＤ结果,并按ＵＰＧＭＡ类平均法进行聚类。２４份材料相似系数在０．２１￣０．９７之间,其中含有多枝赖草、黑麦和偃麦草等外源染色体的多１７４、ＷＲ８３０和南前１２７被分别在３个独立的组,多１７４和南前１２７的亲关系最远,相     

小麦14＋15谷蛋白亚基基因的RAPD分析

利用分离群体分组分析法 BAS 对山农9021中的14+15亚基基因进行RAPD分析,从85个引物中筛选出引物OPF07,可在含有14+15亚基基因的单株中稳定地扩增出特异DNA带,将其命名为OPF071275,它与14+15优质亚基基因的遗传距离为8.58±0.821cM,该标记经多次重复表现稳定,可以作为14+15亚基基因的一个分子标记.     

小麦叶片直接用于PCR和RAPD反应的方法

本研究以经过碱处理的小麦叶片直接作为PCR和RAPD反应的模板,并应用于小麦转基因目标性状的跟踪检测、品种多态性分析等方面。该方法具有快速、简便等特点,尤其是在受测群体较大时,此种方法更显得经济有效。 Abstract:In this paper we introduce a new method of PCR and RAPD reaction by using a small quantity of wheat leaf tissue with alkali treatment.It can be used either to detect target gene or to analyze polymorphism of wheat varieties.This method is simple and reliable,especially for a large-scale detection.     

用RAPD技术鉴定两个小冰麦易位系

本文对从小冰麦异附加系中选育出的两个抗锈品系小冰麦33号,小冰麦34号及其原始亲本新曙光一号和抗源供体天兰冰草进行了RAPD分析,确定了小冰麦33号和小冰麦34号是含一段冰草DNA的易位系,文中还讨论了RAPD做为一种准确,快速鉴定易位系的方法的可行性。     

冰草P基因组特异RAPD标记的筛选

以二倍体、四倍体和六倍体冰草（P基因组）以及中国春、Fukuho、栽培一粒小麦和硬粒小麦（ABD基因组）等为材料进行RAPD分析,从520个RAPD随机引物中,筛选出2个P基因组特异的RAPD分子标记OPC04和OPP12.利用OPC04和OPP12对小麦族其它基因组植物和8个小麦-冰草二体附加系进行扩增,结果表明OPC04和OPP12在ABD、C、E、AG、I、M、R、S、V、Y等基因组扩增中未出现相应结合位点;而在对8个小麦-冰草二体附加系扩增中均出现此2个特异片段,且扩增稳定、重复性好.进一步表明OPC04和OPP12是冰草P基因组的特异标记,可作为小麦-冰草重组系外源P染色质的鉴定标记之一.     

棉花合子期化学诱变获得的早熟品系及其RAPD分析

报道了在棉花自花授粉后，利用花粉管通道将０．５ｍｍｏｌ／ＬＮａＮ３直接导入鲁棉６号的胚囊中，在变异后代中，采取系统选择的方法，选育出了一个早熟品系，它的熟期比鲁棉６号提前２５天，并且性状稳定，经过对鲁棉６号和早熟株系进行ＲＡＰＤ分析，结果表明，ＮａＮ３可以引起民后代ＤＮＡ序列的广泛变异，并且棉花基因组可能存在着诱变剂作用的热点。     

喀斯特高海拔山区玉米骨干自交系遗传多样性RAPD标记分析

以代表我国玉米6个主要杂种优势群旅大红骨、Lancaster、Reid、苏湾、墨白和塘四平头的标准测验种丹340、自330、7922、苏37、449、黄早四和适应我国喀斯特高海拔山区的玉米骨干自交系为材料,利用RAPD标记对其进行遗传多样性和杂种优势群划分.从90个随机引物中筛选出21个多态性好的引物扩增材料,共产生146条谱带,其中124条谱带有多态性,占86.3%,说明喀斯特高海拔山区的玉米骨干自交系具有较丰富的遗传多样性.通过UPGMA聚类分析,以遗传相似系数为0.632,可将我国喀斯特高海拔山区玉米种质资源的16个骨干自交系划分为5个类群.     

应用RAPD分析技术研究生姜青枯病的土壤防治

利用随机扩增多态性技术(RAPD)研究生姜连作地、施加有机肥后的生姜连作地及新开地中土壤微生物多样性与生姜青枯病的关系, 结果发现, 连作地的青枯病发病率为100%, 新开地没有发病, 而施加有机肥的连作地生姜青枯病发病率降至37%。发现施加有机肥连作地的真菌、放线菌数量增加, 平板上不同菌落形态的真菌、细菌、放线菌增加明显。多样性指数分析发现Shannon指数、Simpson指数等均显著增加。随机扩增条带出现连作地的条带丰富度较少、新开地的条带最多、施加有机肥连作地的RAPD条带明显多于连作地, 接近新开地, 并出现了一些连作地没有的特异条带。结果表明, 施加有机肥可以改善土壤微生物群落结构。     

白杨派树种亲缘关系的RAPD分析

运用RAPD技术对白杨派中7个树种和3个人工杂交种共计50个无性系的亲缘关系进行分析.结果表明:筛选出的26条随机引物共扩增产生222条谱带,其中200条为多态性谱带,多态性带达90.09%,且种间遗传变异大于种内无性系间的遗传变异.聚类分析结果显示,参试的50个材料可分为2大类:第一类由山杨、响叶杨、河北杨组成;第二类由毛白杨、银毛杨、84K杨、银白杨、银灰杨、新疆杨和银新杨组成;3个人工杂交种与白杨亚派树种的亲缘关系较近;人工杂交种银毛杨与84K杨间亲缘关系最近.