假单胞菌产脂肪酶条件的初步探索

对假单胞菌（Pseudomonassp）2106菌株产脂肪酶条件的初步探索表明,该菌株脂肪酶为组成型,不受油脂类底物的诱导。碳源的种类（单糖、双糖、多糖）和浓度对产酶影响不大,氮源以豆饼粉和玉米浆混合添加最好。最适发酵温度为32℃,摇瓶转速140r／min。实验中还通过正交试验优化了产酶培养基组成。     

产碱假单胞菌脂肪酶的克隆表达及酶学性质研究

【目的】克隆产碱假单胞菌的脂肪酶基因,实现其在大肠杆菌中异源表达并进行酶学性质研究。【方法】通过基因文库构建和PCR,获得脂肪酶基因,并以pET30a(+)为表达载体、E.coli BL21(DE3)为宿主菌,在大肠杆菌中进行异源表达,表达产物经HisTrapTM亲和层析柱纯化后进行酶学性质研究。【结果】从产碱假单胞菌中克隆得到一个脂肪酶基因,大小为1 575 bp(GenBank登录号为JN674069)。该酶分子量为55 kD,最适底物为p-NPO,最适反应温度和pH分别为35°C、pH 9.0。重组酶经1 mmol/L的Cu2+处理30 min可使酶活提高至156%。在最适反应条件下重组酶的比活力为275 U/mg,Km和Vmax分别为80μmol/L和290 mmol/(min.g protein)。【结论】产碱假单胞菌脂肪酶基因的克隆与表达不仅积累了脂肪酶基因的资源,并为其在手性拆分中的应用奠定基础。     

脂肪酶产生菌的选育及产酶条件的优化

A lipase-producing bacterium strain was isolated from soil and was identified as Pseudomonas sp.. Its lipase yield was improved 2.25-fold by combined beatment of UV irradiation and NTG. The lipase fermentation condition for the mutant strain was optimized with Plackett-Burman design and Response Surface Analysis(RSA), and the formula of the optimum medium suitable for industrial scale fermentation was thereby established. A maximum yield of 87.5 U/ ml was obtained.     

类产碱假单胞菌耐热碱性脂肪酶基因的克隆

将类产碱假单胞菌(Pseudomonas pseudoalcaligene)总DNA经Sau3AI部分酶解后的35～50kbDNA片段与经BamHI线性化及CIAP处理过的粘粒pIJ285连接,以大肠杆菌LE392为受体,构建类产碱假单胞菌的基因文库。通过三丁酸甘油酯平板和橄榄油平板法检测克隆子,获得一株具有耐热碱性脂肪酶活性的菌株LE392(pHZ1401)。随后将pHZ1401上的外源DNA片段进行亚克隆,从而获得了具有脂肪酶活性的菌株HB101(pHZ1402)和HB101(pHZ1403),它们分别携带有2.9kb和3.0kb的外源片段。两外源片段约有2kb的重叠区。HB101(pHZ1403)所分泌的脂肪酶活性比HB101(pHZ1402)高4倍,是出发菌的5倍。     

类产碱假单胞菌耐热碱性脂肪酶的研究

从福建省福州市温泉澡堂污水浸润土壤中分离筛选到一株耐热碱性脂肪酶产生菌——类产碱假单胞菌(Pseudomonas pseudoalcaligenes)F331。产酶最适条件为:碳源小麦粉,氮源豆饼粉,起始培养pH9.4～9.5,培养温度24～26℃,培养周期32～34h。经硫酸铵盐析、Sepharose 4B和Sephadex G-200柱层析得到纯化的酶组分。该酶最适作用温度50℃,最适作用pH 10.0,60℃保温80min酶活基本不损失,在pH 7.0～10.0范围内酶蛋白稳定:Ca~(2+)和Mg~(2+)对酶有激活作用,Pb~(2+).Zn~(2+)、Fe~(2+)和Co~(2+)对酶活有抑制作用。该酶分子量45700。     

假单胞菌1299产胆固醇酯酶的研究 Ⅰ.适宜的产酶条件

从土壤中分离到一株产胞外胆固醇酯酶较高的假单胞菌。其适宜产酶条件:油脂0.75%,脲素或NaNO_30.2%,酵母膏0.5%,K_2HPO_40.2%,pH7.5,28—30℃,通气培养,20小时内酶活力可达800—1500u/L。     

施氏假单胞菌PS59产脂肪酶发酵条件及脂肪酶洗涤性能优化北大核心CSCD

旨在对施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)PS59产脂肪酶发酵培养基进行单因子优化及响应面分析,选择出最佳的碳氮源,并分别对加酶量、洗涤时间、洗涤温度、洗涤pH和表面活性剂添加量对脂肪酶洗涤效果的影响进行评估,确定各个因素最佳值。结果表明,实验室培养施氏假单胞菌产脂肪酶的最佳碳氮源分别为蔗糖和大豆蛋白胨。优化发酵培养基配方为(g/L):大豆蛋白胨22.39 g,蔗糖10 g,K_2HPO_4·3H_2O 1 g,MgSO_4·7H_2O 0.5 g,无水CaCl_2 0.05 g,橄榄油8.1 g,pH 8.1,培养温度30℃,培养36 h获得平均脂肪酶产量为36.12±1.32 U/mL,相对于起始酶活15.65±4.81 U/mL,产量提高了1.3倍。确定最佳洗涤效果加酶量为100 U,最佳洗涤温度为25℃,最佳洗涤时间为25 min,洗涤pH对该脂肪酶洗涤效果影响不大。在最佳洗涤条件下,加酶洗涤液的洗涤效率可以提高30%-40%。     

假单胞菌1299产胆固醇酯酶的研究 Ⅰ.适宜的产酶条件

从土壤中分离到一株产胞外胆固醇酯酶较高的假单胞菌。其适宜产酶条件:油脂0.75%,脲素或NaNO₃0.2%,酵母膏0.5%,K₂HPO₄0.2%,pH7.5,28—30℃,通气培养,20小时内酶活力可达800—1500u/L。     

假单胞菌1299产胆固醇酯酶的研究——Ⅰ.适宜的产酶条件

从土壤中分离到一株产胞外胆固醇酯酶较高的假单胞菌。其适宜产酶条件:油脂0.75%脲素或NaNO₃ 0.2%,酵母膏0.5%,K₂HPO₄0.2%,pH7.5,28—30℃,通气培养,20小时内酶活力可达800—1500u/L。     

脂肪酶抑制剂产生菌Bacillus sp.LF深层发酵条件研究

随着生活水平的不断提高 ,肥胖在中国也开始成为影响人们健康的主要危险之一。目前市场上常见的减肥产品主要是作用于大脑 ,通过抑制食欲减少食物的摄入 ,由于这类药可能产生大脑、心血管及神经系统的副作用 ,不宜长期使用。瘦素 (Leptin)是一种肥胖基因表达的多肽激素 ,也是通过食欲中枢发挥作用 ,可以抑制食欲 ,提高代谢率 ,达到减肥的目的。因而另一类减肥药品脂肪酶抑制剂近年来受到国内外重视。脂肪酶抑制剂可直接阻断人体对脂肪的吸收 ,它不需要通过影响中枢神经系统来抑制人体的食欲 ,而是阻止脂肪在胃肠道的吸收。文献报道脂肪酶抑…     

一株脂肪酶产生菌的筛选及产酶条件优化研究

通过利用溴甲酚紫显色培养基初筛和酶活测定法复筛得到产脂肪酶的一株细菌HP2,经形态学观察和生理生化测定初步鉴定该菌株为不动杆菌属。并对该菌株的摇床培养产酶条件进行了初步研究,采用正交试验对HP2菌株发酵产脂肪酶的条件进行了优化,得到最佳发酵条件为初始pH为7.7,培养温度为35℃,接种量(V/V)为1.5%,发酵周期为48 h,酶活力达到129.7 U/mL。     

Stability of a Pseudomonas Sp. Lipase:Comparison Between Solubilized Enzyme in Reverse Micelles and Suspended Lipase in Dry Solvents

The stability of a relatively hydrophobic lipase from Pseudomonas sp., solubilized in reverse micellar media or suspended in dry solvents, was studied and compared. Factors such as the enzyme-solvent interaction, enzyme environment, hydration degree of the system, interphase quality, droplet size, and water activity were studied. A mixed micellar system which stabilized the lipase is reported. In the case of simple AOT micelles, lipase destabilization with respect to water in small droplet sizes and stabilization in the biggest micelles was observed. These effects resulted from lipase penetration into the interphase of the smaller nanodroplets, and the restriction of its conformational mobility in the region of structured water of the largest micelles, respectively. Mixed micelles increased lipase stability, which was mainly related to increased droplet size. Modification with polyethylene glycol decreased lipase stability in reverse micelles, due to the greater interaction with the micellar interphase. The preparation of nanodroplets, in which native and modified lipases were 5.4 and 9.4 times, respectively, more stable than in water, is reported. In contrast to the micellar media, low water contents (low A_w values) stabilized the solid lipase suspended in organic solvent systems. Under the hydration conditions studied here, lipase stability increased when more polar solvents were used. Two alternatives were necessary to obtain similar stabilities in n-heptane as compared with polar solvents: reduction of the water content or use of a low aquaphilic support.     

脂肪酶产生菌的筛选及一株黑曲霉产脂肪酶最适条件研究

通过固体平板筛选,从520株真菌中分离得到194株产脂肪酶菌。再选择其中透明圈较大的43株菌进行液体复筛,得到产酶活力最高的一株菌为黑曲霉L_1。最后,确定了此菌的最适产酶条件为:橄榄油作碳源,酵母膏作氮源,pH5.8,28℃培养4天。     

木聚糖酶产生菌的选育及发酵条件研究

采用富集培养、透明圈平板筛选,从长期在其上堆放秸秆的土壤中分离到-株木聚糖酶产生菌黑曲霉C2。对该菌株进行紫外线诱变处理,然后采用自然选育的方法筛选到-株木聚糖酶高产菌株C2—56,并对该菌株的适宜发酵条件和酶学特性进行了初步研究。结果表明,C2—56三角瓶发酵酶活达656．8U／g,比出发菌株C2提高了140％;发酵条件以80％麸皮和20％玉米芯为培养基,采用3％接种量,在曲盘上发酵72h为宜,酶活达1750U／g;该菌株产生的木聚糖酶具有较差的热稳定性和较好的pH稳定性,适宜反应温度和pH分别为50℃和pH4．2。     

BA-25菌株碱性纤维素酶产酶条件优化研究

试验研究了分离自烟草调制过程中的产芽孢细菌Bacillussp.BA-25菌株碱性纤维素酶产生的优化条件.结果表明:麸皮是最佳碳源,豆饼粉是最佳的氮源,且当碳氮比为2∶1时产酶活性最高;NaCl和KH2PO4对纤维素酶的合成具有重要作用,其适宜用量分别为0.5%～1.0%和0.1%;培养液的初始pH会极大地影响产酶活性,其最适pH为10.最优化的发酵工艺参数为:种子菌龄为24h,在300mL摇瓶中,装入30mL培养基培养温度为37℃,摇床转速为160r/min,在发酵24h后补充1%的葡萄糖,培养48h,该菌产碱性纤维素酶活力可以达到68.4U/mL.     

Aspergillus sp.脂肪酶发酵条件优化及酶学性质的研究

作者为了得到一种热稳定性较好的脂肪酶新酶种,通过研究分离白极端环境的Aspergillus sp．的最佳产酶条件及其所产脂肪酶的酶学性质,得出了该菌产酶的最佳发酵条件为：以1％黄豆饼粉为氮源、0．2％玉米淀粉为碳源,1．5％橄榄油为诱导物,起始pH6．0左右。装量10mL（250mL三角瓶。摇瓶转速180r／min）、发酵时间为96h。在最佳发酵条件下可得最大发酵酶活36U/mL。Aspergillus sp．所产的脂肪酶的酶学性质是：最适pH为9．0,在pH5．0—10．0于20℃下放置24h后,残余酶活仍保持在起始酶活的90％以上;该酶的最适温度为50℃,50℃保温60min后仍保留70％以上的酶活。Aspergillus sp．所产脂肪酶的热稳定性较好。     

Spectrophotometric Assay of Lipase Activity: A New 4-nitrophenyl Ester of a Dialkylglycerol Suitable as a Chromogenic Substrate of Pseudomonas cepacia Lipase

Evaluation of Pseudomonas cepacia lipase (PCL) activity by a titrimetric method with triacylglycerols (TAG) and synthetic dialkylglycerol esters (DAGE) established the chain length selectivity of the enzyme and this information has been used to design a new chromogenic substrate [1,2-di-O-octyl-sn-glycerol-3-O-(4-nitrophenyl) glutarate] for the determination of the lipolytic activity of PCL.     

Spectrophotometric Assay of Lipase Activity: A New 4-nitrophenyl Ester of a Dialkylglycerol Suitable as a Chromogenic Substrate of Pseudomonas cepacia Lipase

Evaluation of Pseudomonas cepacia lipase (PCL) activity by a titrimetric method with triacylglycerols (TAG) and synthetic dialkylglycerol esters (DAGE) established the chain length selectivity of the enzyme and this information has been used to design a new chromogenic substrate [1,2-di-O-octyl-sn-glycerol-3-O-(4-nitrophenyl) glutarate] for the determination of the lipolytic activity of PCL.     

适于非水相催化用细菌脂肪酶基本性质的研究

对假单胞菌产脂肪酶的基本酶学性质进行了研究．该酶水解油脂时的最适作用ｐＨ为９．０,最适作用温度为４５℃;在ｐＨ７．０～１０．０范围内稳定,在６０℃以下热稳定性良好．Ｋ＋、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋等金属离子对酶有明显的激活作用,而Ｈｇ２＋、Ｃｕ２＋、Ｓｎ２＋等重金属离子却对酶有较强的抑制作用;几种表面活性剂和胆汁盐均使酶发生不同程度的失活．该酶在水解油脂时表现出１,３－位置专一性,且对不同种类和来源的油脂水解作用速率不同