锂和三尖杉酯碱对HL—60细胞增殖,分化和c—myc表达的影响

本研究利用细胞培养技术观察了氯化锂和三尖杉酯碱（ＨＴ）对ＨＬ－６０细胞增殖的影响,不同浓度的氯化锂对ＨＬ－６０细胞的集落形成和３Ｈ－ＴｄＲ参入均呈剂量依赖式抑制;三尖杉酯碱亦有类似的作用。在培养体系中加氯化锂和三尖杉酯碱时,对ＨＬ－６０细胞数及集落形成抑制作用与单用二者相比较有明显增加。用ＮＢＴ还原试验,氯化锂和三尖杉酯碱均促进ＨＬ－６０细胞的分化,小剂量氯化锂还能加强三尖杉酯碱对ＨＬ－６０细胞诱导分化作用。从氯化锂和三尖杉酯碱处理的ＨＬ－６０细胞中提取总ＲＮＡ,应用ＲＴ／ＰＣＲ检测ｃ－ｍｙｃ的表达,结果表明经氯化锂和三尖杉酯碱处理的ＨＬ－６０细胞ｃ－ｍｙｃ表达均降低,与未处理的ＨＬ－６０细胞ｃ－ｍｙｃ比较,说明氯化锂和三尖杉酯碱均能抑制ｃ－ｍｙｃ的表达,提示ｃ－ｍｙｃ很可能在白血病细胞增殖、分化中起调控作用。     

高三尖杉酯碱对HL60细胞诱导分化与对细胞膜通道影响相互关…

本实验显示,高三尖杉酯碱能使人白血病ＨＬ６０细胞诱导分化,随着药物浓度的增加,细胞诱导分化率亦明显增加,高三尖杉酯碱能抑制细胞膜Ｎａ＾＋,Ｋ＾＋ＡＴＰ酶活性,并能增加胸腺嘧啶核苷进入细胞,这些均可有是高三尖杉酯碱产生诱导分化的途径。     

中国组织化学与细胞化学杂志 第5卷

(1996年)第 1期目次大鼠电惊厥后ｃ ｆｏｓ在中枢神经系统中的表达胡江元等 (1)……………………………………………柔红霉素在人敏感和抗三尖杉酯碱的ＨＬ - 6 0细胞中分布和积聚变化何琪扬等 (6 )…………………射频消融对心室肌细胞能量代谢酶系和Ｃａ -ＡＴＰ酶影响的研究王扬淦等 (11)……………含单克隆抗体Ａｎｔｉ-ＬＡ18的上清对人外周血单个核细胞作用的观察薛　琳等 (16 )………………大鼠肺内ＮＯＳ阳性神经及其来源的研究祝善乐等 (2 2 )…………………………………………ＳＨＲ和ＳＤ鼠脑梗塞后外侧皮质细胞的代谢变化雷万龙…     

抗肿瘤药物三尖杉酯碱对HeLa细胞增殖的影响及其与CenpB基因的关系

以人子宫颈癌细胞株HeLa为对象,采用免疫印迹、流式细胞光度术和间接免疫荧光．流式细胞光度术等方法,分析三尖杉酯碱对细胞增殖周期、凋亡等的影响,并检测着丝粒蛋白CenpB基因表达的水平,进一步分析它与细胞增殖的关系及三尖杉酯碱的作用效应。结果表明：0．2μg/mL三尖杉酯碱作用时间的延长带来HeLa细胞G1期缩短、S期延长的时相变化趋势,与之相关的是G2期向G1期过渡的缓慢延迟;凋亡率呈现增加的趋势;相对于未处理的对照细胞,0．2μg/mL三尖杉酯碱的作用使CenpB蛋白表达水平降低,但不呈简单的时间函数关系,这可能是细胞周期检验点应对药物诱导作用的反馈调节的体现,而重要着丝粒结构蛋白CenpB的基因表达调节与之可能有明显的相关性。     

沉默MDR1基因增强急性早幼粒白血病耐药细胞HT9药物敏感性

该研究利用短发卡RNA（small hairpinin RNA,shRNA）表达载体沉默HT9急性早幼粒白血病耐药细胞MDRl基因表达,以提高细胞对三尖杉酯碱、阿霉素的敏感性。通过设计合成编码shRNA的DNA模板序列,定向克隆到pSilencer2．1－u6neo质粒,成功构建1个P－gP蛋白基因特异的shRNA表达载体,稳定电转染HT9细胞,实时荧光定量PCR分析MDRlmRYAg表达,Westem blot检测细胞P—gp蛋白表达,流式细胞术检测P—gP蛋白外排泵功能,MTT法检测细胞对药物敏感性。结果显示,成功构建了shRNA表达载体pSilencer2-1-U6neo—MDRl,转染HT9细胞后,PCR检测重组质粒整合到HT9／sh－2－1－1细胞基因组DNA,获得稳定遗传;HT9／sh－2－1—1细胞MDRlmRNA表达降低了78．84％（P〈0．01）,P—gP蛋白表达降低了48．27％（P〈0．05）,细胞内Rh0123相对荧光强度由（10．8±0．58）％升高至（73．56±1．37m;转染细胞对三尖杉酯碱、阿霉素敏感性明显增强,IC50分别由（2．06±0．15）gmol／L降至（0．57±0．01）gmol／L、（4．04±017）gmol／L降至（1．56±0．05）μtmol／L。提示shRNA干扰表达载体pSilencer2．1－U6neo—MDRl能够稳定、持久地抑制MDRI基因表达,并能有效增强HT9细胞对三尖杉酯碱、阿霉素的敏感性。     

双光子及共聚焦激光扫描显微镜同时多参数观察三尖杉酯碱诱导的HL-60细胞凋亡

三尖杉酯碱(harringtonine,HT)是从中国海南粗榧(Cephalotaxus hainanensis Li)中提取的一种抗肿瘤药物,能诱导人早幼粒白血病HL-60细胞凋亡.应用双光子及共聚焦激光扫描显微镜,结合特异性荧光探针Hoechst 33342,四甲基罗丹明乙酯(TMRE)和Fluo 3-AM,同时观察了HT诱导HL-60细胞凋亡过程中细胞核、线粒体膜电势和细胞内钙浓度的变化,建立了一种在单细胞层次适时、无损伤、多参数观察活细胞的方法.     

三尖杉培养细胞中抗癌活性成分的研究

从三尖杉（ＣｅｐｈａｌｏｔａｘｕｓｆｏｒｔｕｎｅｉＨｏｏｋ．ｆ．）茎和叶片作外植体在ＭＳ附加ＫＴ ０．１ ｍ ｇ／Ｌ、ＮＡＡ ３ ｍ ｇ／Ｌ培养基上诱导出的愈伤组织,建立了三尖杉悬浮培养细胞系,研究了光、ｐＨ 值、激素、碳源和添加物等因子对悬浮细胞生长的影响。结果表明： ｐＨ ５．８ 及低浓度的糖和ＮＡＡ适于细胞生长,糖含量超过４０ ｇ／Ｌ则不利于细胞生长,ＮＡＡ 大于３ ｍ ｇ／Ｌ抑制细胞生长。蔗糖或葡萄糖作碳源,二者无明显区别。添加水解蛋白或氨基酸不适合细胞生长。白光对细胞生长有明显的抑制作用。建立了灵敏、快速高效液相色谱测定方法,测得离体培养细胞含有三尖杉碱及抗癌酯类生物碱：三尖杉酯碱、异三尖杉酯碱和高三尖杉酯碱。细胞悬浮培养中合成生物碱的能力明显高于固体培养,前者有效生物碱的含量和细胞增长速率均比后者高１ 倍以上。悬浮培养细胞中各生物碱组分比率为：２２％ 三尖杉碱,６％ 氧桥三尖杉碱,８％ 三尖杉酯碱,２３％ 高三尖杉酯碱,４１％ 异三尖杉酯碱。用气相色谱－质谱联用技术,除测得上述生物碱外,还检测到细胞培养物中含有去氧三尖杉酯碱、麦角甾醇、豆甾醇和谷甾醇等化合物     

早幼粒细胞诱导凋亡过程中Bcl-2动态平衡表达

细胞凋亡机制的探索对于急性早幼粒细胞白血病治疗至关重要。B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)基因家族是调控细胞凋亡的关键基因。拮抗和促进细胞凋亡的动态平衡决定细胞的命运。本研究通过对凋亡相关基因的表达水平与细胞生长趋势的分析表明,高三尖杉酯碱与全反式维甲酸联合处理细胞可以更有效地促进早幼粒细胞凋亡(P<0.05)。随着药物浓度变化,Bcl-2与相关基因的表达呈现先升高后降低的趋势(P<0.05)。低浓度药物处理时,抗凋亡蛋白质Bcl-2表达升高,阻止细胞凋亡(P<0.05)。随药物浓度的升高,Bcl-2表达降低,细胞凋亡率提高,进入深度凋亡期(P<0.05)。荧光显微镜观察与流式细胞术的方法验证了细胞凋亡的情况。本研究进一步阐明了高三尖杉酯碱联合全反式维甲酸诱导早幼粒细胞凋亡过程中,Bcl-2及细胞凋亡与增殖的相关基因表达水平的变化与分子机制,为深入探索药物联合诱导凋亡提供可靠支持,为临床治疗做出基础理论的补充。     

诱导的HL60细胞表面β1—4半乳糖基转移酶的研究

本文用荧光标记的受体底物〔Ｇｎβ１－２Ｍα１－６（Ｇｎβ１－２Ｍα１－３）Ｍβ１－４Ｇｎβ１－４（Ｆｕｃα１－６）Ｇｎ－ＰＡ〕,结合高效液相层析（ＨＰＬＣ）建立了细胞表面β１－４半乳糖基转移酶的活性检测方法。用这种方法研究ＨＬ６０细胞,发现不同的培养时间,其细胞表面的酶变化明显,在２４小时酶活性最高,此时细胞处在分裂间期。用佛波酯（ＰＭＡ）,视黄酸（ＲＡ）等细胞诱导分化剂处理ＨＬ６０细胞株时,发现其表面活性发生了明显的变化,ＰＭＡ诱导的细胞其表面酶活性在２４小时变化最大,升高到对照的１．３倍;而ＲＡ处理的细胞其表面酶活性在７２小时变化最大,升高到对照的１．７２倍。     

重组人粒系集落刺激因子（rhG—CSF）对白血病细胞HL—60生长 …

本文研究了ｒｈＧ－ＣＳＦ对人白血病细胞系ＨＬ－６０的作用。结果表明：ｒｈＧ－ＣＳＦ能够显著抑制ＨＬ－６０细胞生长和Ｃ－ｍｙｃ基因的表达,降低＾３Ｈ－ＴｄＲ的摄入。在含ｒｈＧ－ＣＳＦ的培养液中经过２－５天的培养,部分ＨＬ－６０细胞具备ＮＢＴ还原能力。这或许说明ｒｈＧ－ＣＳＦ能导致ＨＬ－６０细胞向成熟方向分化的结果。     

西安市学生膝部长骨的干骺融合时间与身高等发育指标的关系

本文根据西安市2612例学生的活体测量以及电子计算机对数据的统计分析,得出了西安市学生身高等发育指标及有关指数,绘制了有关的发育曲线,讨论了身高等发育指标与膝部长骨干骺融合的关系。