一株无花果内生真菌及其次生代谢产物

从无花果Ficus carica 叶中分离获得1株具有抗菌活性的内生真菌ZJWCF255,通过形态学和ITS rDNA序列分析将菌种鉴定为炭角菌属Xylaria sp.,其发酵液经活性跟踪分离,采用硅胶柱层析及HPLC等方法获得4个化合物。根据波谱数据,化合物1–4分别鉴定为cytochalasin C、D、Q、R。Cytochalasin Q（3）对11种植物病原真菌均具有较强的抑制活性,对蔓枯病菌的抑制率最强,EC50值为0.04μg/mL。该化合物对3种肿瘤细胞SMMC-772、MCF-7、MGC80-3具有较强体外抑制活性,其IC50值分别为（17.24±2.55）、（7.75±1.37）、（10.30±1.34）μg/mL。首次报道了cytochalasin Q（3）的抗菌活性及对3种肿瘤细胞的体外抑制活性,植物内生真菌是获得抗菌与抗肿瘤活性先导化合物的重要来源。     

植物内生真菌及其活性代谢产物研究进展

植物内生真菌是一大类未被充分研究过的真菌,其物种及代谢产物均具有生物多样性,现今从植物内生真菌中得到的活性物质种类远比从土壤微生物中得到的多。对植物内生真菌的研究具有重要的生态学意义和经济学意义,在各个领域中应用前景广泛。作者主要综述了植物内生真菌及其活性物质研究的最新进展。     

一株具有拮抗作用黄精内生菌HJ-3的鉴定及抗菌活性研究CSCD

本研究从安徽道地药材黄精中筛选出一株内生菌HJ-3,采用五点对峙培养法观察该菌株对8种植物病原真菌的拮抗作用,将HJ-3菌株的发酵产物经萃取浓缩配制成不同浓度,通过滤纸片扩散法检测其对4种供试菌的抑菌活性,并用LC-MS检测分析。结果表明:内生菌HJ-3对8种常见植物病原真菌均表现出明显的拮抗活性,其中对立枯丝核菌等7种病原真菌拮抗活性很明显,盘长孢状刺盘孢拮抗活性较弱;另外发现,不同浓度的发酵产物对4种供试菌均有一定抑菌作用,其中对金黄色葡萄球菌抑菌效果较好。经形态学分析及16S rRNA基因测序,将该内生菌HJ-3鉴定命名为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。LC-MS检测分析,获得一种5,5′-methylenebis(2-tert-butyl-4-methylphenol)酚类物质以及三种同系列化合物。研究结果为黄精内生菌药物开发奠定基础,也为植物内生菌药物广泛应用提供依据。     

植物内生菌及其活性代谢产物

植物内生茵是一种新的微生物资源,具有潜在的应用价值。近年来,从植物内生茵中寻找新的生物活性物质的研究方兴未艾。对近年来从植物内生茵中发现的抗肿瘤、抗茵、抗病毒、杀虫、免疫抑制、抗氧化、降糖等活性化合物及其相应的产生茵的研究作一简要综述。     

草原与荒漠植物内生真菌次生代谢产物研究进展

草原与荒漠植物内生真菌是一类特殊生境真菌类群,由于其独特的生存与生态环境,该类真菌在进化的过程中产生出具有不同生态与生物功能的次生代谢产物。相对于其他植物内生真菌而言,该类真菌化学研究相对薄弱与零散,但是目前仍然从这类特殊生境真菌类群中发现了大量结构新颖、活性独特并具有不同化学生态与生物功能的次生代谢产物。本文主要从化学结构角度综述近年来从草原与荒漠植物内生真菌中分离的次生代谢产物(生物碱、聚酮、酚酸、萜类、环肽等5类结构)、药理活性(抗病毒,免疫调节,促进骨髓增殖,细胞毒及Hsp90抑制剂活性等)与化学生态功能活性(杀虫、拒食与动物神经毒活性等),拟为该类特殊生境真菌类群次生代谢产物进一步开发提供研究基础与理论依据,同时对该领域研究存在的问题进行分析与探讨并提出展望。     

艾纳香内生真菌Diaporthe sp.次生代谢产物

【目的】从艾纳香内生菌J1中获得活性次生代谢产物。【方法】对菌株J1进行ITS序列分子鉴定,综合运用多种色谱技术对其发酵产物进行分离纯化,结合波谱学技术对其进行结构表征。【结果】经构建系统进化树,鉴定菌株J1为Diaporthe sp.,从该菌株大米培养基中分离得到7个单体化合物,经鉴定分别为Dicerandrol A (1)、Dicerandrol B (2)、4,6-dihydroxy-1H-isoindole1,3(2H)-dione (3)、Cytochalasin H (4)、Cytochalasin J (5)、4,6-dihydroxy-2,3-dihydro-1H-isoindol-1-one (6)、Cerebroside C (7)。所有化合物均为首次从该菌中分得,化合物1对枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis KCTC 1021具有非常强的抑制活性,MIC值为0.125μg/mL。【结论】Diaporthe sp.富含抑菌活性化合物,具有开发成微生物源农药潜力。     

木榄内生真菌菌株ZD6及其代谢产物的抑菌活性

根据形态学特征和ITS序列分析结果,将一株从木榄茎中分离到的内生真菌菌株ZD6鉴定为桔青霉Penicillium citrinum Thom.,该菌株在优化后的发酵培养基(1%麦芽糖,2%甘露醇,1%谷氨酸钠,0.5%蛋白胨,0.15%酵母膏,200g/L土豆汁,pH6.5)中28℃、160r/min振荡培养7d后的发酵液具有明显的抑菌活性。利用柱层析及重结晶等方法从该发酵液的乙酸乙酯和正丁醇提取物中分离得到4个化合物:大黄素、环(丙氨酸-甘氨酸)、赤藓醇和甘露醇,其中的大黄素和赤藓醇为首次在桔青霉中发现,它们对枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis的生长具有明显的抑制作用,最低抑菌浓度(MIC)分别为25μg/mL和50μg/mL;大黄素对绿脓杆菌Pseudomonas aeruginosa的生长也具有一定的抑制作用,MIC为100μg/mL。     

蛇足石杉中的新内生真菌及其代谢产物的分离与鉴定

从蛇足石杉内生菌的次级代谢产物中寻找活性成分,为进一步开发利用蛇足石杉药用植物资源提供了新途径,但至今其内生菌代谢产物的系统性研究较为少见。种类丰富的内生真菌普遍存在于各种植物中,但蕨类植物中内生真菌的研究较少。为了寻找蛇足石杉内生菌中的细胞毒活性成分,该研究从蛇足石杉根部分离得到一株球毛壳属(Chaetomium sp.)真菌M336,对其化学成分进行了研究。对蛇足石杉内生真菌M336采用PDA固体培养基扩大发酵,发酵物经提取及乙酸乙酯萃取后,通过正相硅胶柱色谱法、Sephadex LH-20凝胶柱色谱法、薄层制备、高效液相色谱等色谱手段对其发酵物中的化学成分进行分离纯化,利用理化性质、质谱、核磁等波谱分析技术,并结合相关文献数据鉴定化合物的结构。结果表明：从内生真菌M336发酵提取物的乙酸乙酯萃取部分分离并鉴定出8个化合物,分别为chaetoviridines F、chaetoviridines E、5′-epichaetoviridin A、5′-epichaetoviridin A、xanthoquinodins Al、xanthoquinodins A2、xanthoquinodins B1和毛壳菌素。从M336中分离得到8个化合物,化合物3有一定的抑菌作用,其余化合物有一定的细胞毒活性。该研究结果丰富了蛇足石杉内生真菌球毛壳属中的天然细胞毒活性的化合物。     

一株抗肿瘤活性的粗榧内生真菌的鉴定及其产物特性初步研究

利用传统分类学方法、电子显微镜观察、18S rDNA和ITS序列的测定以及系统发育分析对一株分离自粗榧抗肿瘤活性内生真菌HCCB1621进行分类鉴定,并对其产物抗肿瘤活性进行了初步研究．各种指标鉴定其为木霉属真菌绿色木霉（Trichoderma viride Pers．ex Fr）．该菌株经发酵培养120h,抗瘤活性达最强;活性在pH4～9范围内稳定：60℃处理1h,活性稳定,这些特性为活性产物的分离纯化和稳定性研究提供了必要的参考．     

多花黄精和安徽黄精叶片发育的比较解剖学研究

对多花黄精(Polygonatum cyrtonema)和安徽黄精(P.anhuiense)不同发育时期的叶片进行了比较解剖学研究。结果表明:(1)在叶片发育过程中,气孔器指数都是由低到高,达到最高值后再逐渐降低并趋于稳定;(2)叶片长宽比在发育过程中都呈上升趋势,且与叶片形状之间有一定的相关性,叶片长宽比与表皮细胞长宽比之间没有明显的相关性;(3)两者叶片的上下表皮细胞的发育方式基本一致,都是由表皮细胞进行横向和径向生长的过程;(4)在叶片的分化过程中,首先分化出来的是表皮,其次是叶肉,最后是叶脉;(5)多花黄精的叶缘在发育早期叶肉中有大型薄壁细胞出现,但叶片成熟时,大型薄壁细胞消失或继续保存,而安徽黄精在整个发育过程中,叶肉中都未见大型薄壁细胞出现。该研究为黄精属互生叶类和轮生叶类植物的叶片发育研究积累了实验资料。     

Analysis of the genetic structure and morphology of Polygonatum cyrtonema in Anhui Province,eastern China revealed three distinct genetic groups

Polygonatum cyrtonema Hua, a rhizome-propagating herb endemic to China, is used in many traditional Chinese medicines and foods. The hilly mountains in western and southern Anhui province is one of its main natural distribution and artificial cultivation areas. We assessed the genetic diversity and structure of P. cyrtonema germplasm resources in Anhui by nine pairs of SSR primers and selected morphological characters. The results showed that the 13 sampled populations of P. cyrtonema possessed normal levels of genetic diversity but could be clustered into three distinct genetic groups. The levels of within-group genetic diversity was similar among the three groups, but their distribution areas and morphological characters were remarkably different. Group I was confined to the Tianmu (including Jiuhua) Mountains, group II was distributed in the Huangshan Mountains, and group III was restricted to the Dabie Mountains. Furthermore, the leaf length:width ratio significantly differed among groups, and the peduncle length of group I was significantly shorter than that of the other two groups. Levels of genetic differentiation among the three groups was close to that between different species within the genus. Thus, the three genetic groups of P. cyrtonema should be considered as independent units for conservation and breeding management in the Anhui region.     

多花黄精诱导愈伤组织与不定芽培养基筛选

以多花黄精Polygonatum cyrtonema的根状茎为外植体,通过L9(34)正交试验比较不同植物生长调节剂及其组合对多花黄精愈伤组织诱导的影响,筛选最适生长调节剂配方,同时筛选通过器官发生方式直接成芽较为合适的培养基。结果表明,含有2,4-D和KT的培养基诱导愈伤组织效果显著,多花黄精愈伤组织诱导的最适培养基为MS + 6-BA 2.0 mg·L-1 + 2,4-D 0.5 mg·L-1 + NAA 0.1 mg·L-1 + KT 1.0 mg·L-1,该培养基的愈伤组织诱导率可达39.10%;培养基MS + 6-BA 4.0 mg·L-1 + NAA 0.2 mg·L-1可诱导多花黄精根状茎直接产生不定芽。     

黄精凝集素PCL-2诱导人前列腺癌LNCap细胞凋亡及机制研究

研究黄精凝集素PCL-2对人前列腺癌LNCap细胞生物活性和可能的抗肿瘤机制。从黄精药材中提取分离得到黄精凝集素PCL-2,体外培养LNCap细胞,采用WST-1和集落形成实验评价PCL-2对LNCap细胞的增殖作用;2,7-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针法检测LNCap细胞内ROS含量;qRT-PCR和Western blot法检测PCL-2对LNCap细胞中相关基因和蛋白表达的影响。研究结果显示PCL-2能显著抑制LNCap细胞的增殖,促进细胞中ROS生成;PCL-2通过上调LNCap细胞中Bax、Caspase-3及Caspase-9基因mRNA和蛋白表达并下调Bcl-2基因mRNA和蛋白表达水平诱导LNCap细胞凋亡。本研究结果表明PCL-2诱导LNCap细胞凋亡活性作用显著,可作为抑制前列腺癌的潜在药物。     

吸水链霉菌BS-112产生的抗真菌活性物质的分离纯化与结构鉴别

【目的】分离纯化吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)BS-112产生的抗真菌活性物质,究明各活性组分的结构,测定其对黄曲霉的抑制作用,为该菌株及其产生的抗真菌活性物质的应用提供依据。【方法】通过大孔吸附树脂柱层析、硅胶柱层析及制备HPLC等方法,对该菌株产生的抗真菌活性物质进行分离纯化;利用质谱(MS)和核磁共振谱(NMR)解析各活性组分的结构;采用微量液体稀释法测定各活性组分对黄曲霉的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MFC)。【结果】从BS-112菌株发酵液中分离获得4个抗真菌活性组分,利用波谱技术确定其结构分别为Tetrins A和B、Tetramycins A和B。96孔板法测得这4个化合物对黄曲霉的MIC分别为3.13μg/mL、12.56μg/mL、1.56μg/mL、6.25μg/mL,MFC分别为6.25μg/mL、25.0μg/mL、3.13μg/mL、12.56μg/mL。【结论】BS-112菌株产生的抗真菌活性物质由Tetrins A和B、Ttramycins A和B 4个化合物组成,它们对黄曲霉均具有良好的抑制作用。     

Isolation and identification of an endophytic fungus Pezicula sp. in Forsythia viridissima and its secondary metabolites

In a survey of endophytic fungal biodiversity, an antimicrobial endophytic isolate zjwcf069 was obtained from twigs of Forsythia viridissima, Zhejiang Province, Southeast China. Zjwcf069 was then identified as Pezicula sp. through combination of morphological and phylogenetic analysis based on ITS-rDNA. Zjwcf069 here represented the first endophytic fungus in Pezicula isolated from host F. viridissima. From the fermentation broth, four compounds were obtained through silica gel column chromatography and Sephadex LH-20 under the guide of bioassay. Their structures were elucidated by spectroscopic analysis as mellein (1), ramulosin (2), butanedioic acid (3), and 4-methoxy-1(3H)-isobenzofuranone (4). Compound 4 here stood for the very first time as natural product from microbes. In vitro antifungal assay showed that compound 1 displayed growth inhibition against 9 plant pathogenic fungi, especially Botrytis cinerea and Fulvia fulva with EC₅₀ values below 50 μg/mL. Endophytic fungi in medicinal plants were good resources for bioactive secondary metabolites.     

水稻内生枯草芽孢杆菌G87抗菌蛋白的分离纯化及理化特性

【目的】为得到枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)G87的抗菌蛋白,明确其蛋白理化特性。【方法】采用硫酸铵沉淀和柱层析法进行分离纯化。【结果】获得单一抗菌活性蛋白(峰6-2-1),此抗菌蛋白分子量为50.8 kDa,等电点为5.90。经初步分析,抗菌蛋白不含脂,而含有少量(0.62%)糖;其蛋白部分具有脯氨酸或羟脯氨酸,但不含芳香族氨基酸。抗菌蛋白在高温(≥60℃)和较碱(pH8)环境下活性明显下降,但较抗紫外线、氯仿和胰蛋白酶、蛋白酶K、胃蛋白酶。【结论】枯草芽孢杆菌G87的抗菌蛋白为不含芳烃的糖蛋白,对高温和碱性条件敏感,而对蛋白酶类和紫外线等不敏感。     

水葫芦内生拟枝孢镰刀菌SC1608的次生代谢产物

研究了一株水生植物水葫芦内生拟枝孢镰刀菌Fusarium sporotrichioides SC1608大米发酵物的抗真菌活性次生代谢产物,从中共分离获得6个化合物,经高分辨质谱、三重四极杆质谱和核磁共振谱分析,分别鉴定为4个鞘糖脂类化合物:asperamide B(1)、asperamide D(2)、asperam...     

一株红茄苳内生烟曲霉菌的分离鉴定及其发酵产物抗氧化活性

【目的】红树林内生真菌生长于特殊的生境,有些菌株能分泌出结构新颖和具有生物活性的物质。从红树林植物红茄苳(Rhizophora mucronata)中分离获得一株内生真菌HQD24,对其进行生物学鉴定和抗氧化活性评价。【方法】综合运用形态结构及ITS r DNA序列分析,HQD24被鉴定为曲霉属(Aspergillus)的烟曲霉(Aspergillus fumigatus)。采用抗氧化多活性模型,2-2′二苯基-1-三硝基苯肼(DPPH)自由基测定法、2′-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)自由基测定法、超氧自由基测定法、还原Fe~(3+)能力、螯合Fe~(2+)能力对HQD24麦麸发酵提取物的石油醚萃取物、二氯甲烷萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物进行抗氧化活性评价。【结果】经抗氧化活性实验发现不同有机溶剂萃取成分都具有清除DPPH自由基、ABTS自由基、超氧自由基和还原Fe~(3+)、螯合Fe~(2+)的能力,尤其是清除ABTS自由基和超氧自由基,抗氧化活性的能力都随着浓度的增高而增强。当不同有机溶剂萃取粗提物浓度为1.5 g/L时,二氯甲烷萃取物清除ABTS自由基率为71.92%,正丁醇萃取物清除超氧自由基率为62.36%,综合评价,HQD24的发酵产物中具有抗氧化活性的物质主要分布于二氯甲烷萃取粗提物和正丁醇萃取粗提物,其次分布于乙酸乙酯萃取粗提物,石油醚萃取粗提物中抗氧化活性物质含量最少。【结论】研究结果预示红树林内生烟曲霉菌是产生抗氧化活性物质的重要资源,HQD24菌株可以作为进一步实验研究的对象。