转基因动物与心血管疾病

与血压调控有关的如ｒｅｎｉｎ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎｏｇｅｎ转基因鼠模型出现高血压 ,用于研究ＲＡＳ(ｒｅｎｉｎａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎｏｇｅｎｓｙｓｔｅｍ)中各成分致高血压的作用 ,以及相互关系 ,发现人ｒｅｎｉｎ转基因大鼠出现高血压 ,而转基因小鼠不出现高血压 ,只有ｒｅｎｉｎ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎｏｇｅｎ联合转基因小鼠才出现高血压。与动脉粥样硬化与脂质代谢有关的如ＬＤＬ受体转基因动物可增强ＬＤＬ的清除 ;ａｐｏＥ3基因转基因鼠可增强ＬＤＬ的清除 ,而突变的ａｐｏＥ则诱发高脂血症 ,ａｐｏＥ4与ａｐｏＥ7转基因鼠…     

肾素血管紧张素及降钙基因相关肽在肾性高血压大鼠的动态变化

高血压是一种严重危害人类健康的常见病症。近年来,与血压调节有关的血管活性物质在高血压发病中的作用越来越受重视。本实验观察了不同时期肾性高血压（ｒｅｎａｌｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ,ＲＨ）大鼠主动脉、肾脏组织肾素血管紧张素系统（ＲＡＳ）以及主动脉、血浆降钙基因相关肽（ＣＧＲＰ）的动态变化,旨在探讨其在肾性高血压发生发展中的作用。１　材料与方法健康雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠（本校动物部提供）,体重１６０～１８０ｇ,随机分成两组：肾性高血压组（ＲＨ组）与假手术组（Ｃ组）。采用Ｇｏｌｄｂｌａｔｔ方法复制两肾—夹…     

动脉平滑肌细胞sis／PDGF—B链的表达和调控

介绍平滑肌细胞ｓｉｓ／ＰＤＧＦ－Ｂ链表达和调控的进展。ｃ－ｓｉｓ原癌基因是ＰＤＧＦ－Ｂ的同源基因,将外源的ＰＤＧＦ基因导入哺乳类细胞是研究ＰＤＧＦ功能和调控的重要手段。内皮素ＩＬ、ＴＮＦ、血管紧张素Ⅱ和蛋白激酶Ｃ可调节ｓｉｓ基因的表达。ｓｕｒａｍｉｎ和新霉素的人工合成为拮抗ＰＤＧＦ效应提供广阔的前景。ｃ－ｓｉｓ可通过激活ｃ－ｍｙｃ,ｃ－ｆｏｓ等原癌基因而促进细胞增殖。     

血管平滑肌细胞过表达人EP4受体改善血管紧张素Ⅱ诱导的高血压

前列腺素E_2(prostaglandinE_2,PGE_2)在心血管系统中具有重要的调节作用,PGE_2通过G蛋白耦联受体(EP1、EP2、EP3、EP4)参与机体血压的稳态维持。本文旨在利用血管平滑肌细胞特异性人EP4转基因小鼠(VSMC-hEP4 Tg)研究血管平滑肌细胞过表达人EP4受体对小鼠血压的作用及机制。通过转基因技术构建VSMC-hEP4 Tg小鼠并进行鉴定;使用尾套法测定小鼠在基础状态及高、低盐饮食条件下的血压水平;在小鼠背部皮下埋置血管紧张素Ⅱ (angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ)缓释泵后检测其血压变化;颈动脉插管法测量小鼠血压对Ang Ⅱ静脉灌注的急性反应以及两种EP4特异性激动剂(CAY10580和CAY10598,0.5 mg/kg)对小鼠血压的影响;使用血管张力仪测定小鼠肠系膜动脉血管环对Ang Ⅱ诱导的血管收缩力;运用Western blot检测EP4特异性激动剂PGE1-OH对Ang Ⅱ诱导的肌球蛋白磷酸酶靶亚基1 (myosin phosphatase target subunit 1, MYPT1)磷酸化的作用。结果显示:与野生型(wild type, WT)小鼠相比,VSMC-hEP4 Tg小鼠基础血压明显较低,在高、低盐饮食条件下其血压均保持较低水平;VSMC-h EP4 Tg小鼠的血压在Ang Ⅱ缓释给药及静脉灌注后均显著低于WT小鼠,其肠系膜血管环对Ang Ⅱ的反应性也明显下降。此外,CAY10580和CAY10598均能使WT小鼠血压显著降低。进一步研究发现,PGE1-OH可抑制肠系膜动脉中Ang Ⅱ介导的MYPT1 Thr696位点的磷酸化。以上结果表明,血管平滑肌细胞特异性过表达人EP4基因可显著降低小鼠基础血压,并能减轻Ang Ⅱ诱导高血压的发生,其机制可能与EP4抑制Ang Ⅱ的信号通路有关,提示基于EP4特异性的长效激动剂的开发可能在高血压防治中有重要价值。     

动脉平滑肌细胞sis／PDGF－B链的表达和调控

介绍平滑肌细胞ｓｉｓ／ＰＤＧＦ－Ｂ链表达和调控的进展。ｃ－ｓｉｓ原癌基因是ＰＤＧＦ－Ｂ的同源基因,将外源的ＰＤＧＦ基因导入哺乳类细胞是研究ＰＤＧＦ功能和调控的重要手段。内皮素、ＩＬ、ＴＮＦ、血管紧张素Ⅱ和蛋白激酶Ｃ可调节ｓｉｓ基因的表达。ｓｕｒａｍｉｎ和新霉素（ｎｅｏｍｙｃｉｎ）的人工合成为拮抗ＰＤＧＦ效应提供广阔的前景。ｃ－ｓｉｓ可通过激活ｃ－ｍｙｃ、ｃ－ｆｏｓ等原癌基因而促进细胞增殖。     

Alpha 1抗胰蛋白酶核基质附着区增强RNA聚合酶Ⅱ依赖的转录

核基质附着区是一种真核生物的DNA元件,能调控染色体结构和活性。为研究体内MAR相关的染色质准入和转录调控,我们从人基因组中克隆了Alpha 1抗胰蛋白酶核基质附着区（α1-AT MAR）并将其连入pEGFP-C1载体。分别以空载体和携带MAR的载体通过脂质体法转染人胚肾293细胞系。经G418筛选20天的细胞池用作实验分析。半定量RT-PCR及荧光显微镜观察显示此MAR能够增强临近基因的表达。进一步用染色质免疫共沉淀（ChIP）共定位CMV启动子和RNA聚合酶Ⅱ（RNAPⅡ）,PCR结果显示存在MAR元件时,更多的RNA聚合酶Ⅱ被富集到启动子区。ChIP方法可用于证实MAR介导的转录激活,在实时检测方面比RT-PCR提供了更多动力学信息。这项技术为我们进一步研究基因表达调控提供了技术平台。     

有氧运动上调Agtr1a基因甲基化改善高血压肠系膜动脉ACE1-AT1R收缩轴功能

血管紧张素Ⅱ 1A受体(angiotensin Ⅱ type 1A receptor, AT1aR)是Ang Ⅱ的主要受体亚型。AT1aR基因(Agtr1a)启动子区DNA甲基化水平的变化是调控AT1aR表观遗传的重要机制。为明确运动是否通过调节Agtr1a基因启动子区甲基化水平而减弱ACE1-AT1R收缩轴功能,从而起到改善高血压血管功能的作用,本研究选用3月龄自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat, SHR)和正常血压对照组大鼠(Wistar-Kyoto, WKY),随机分为正常血压安静组WKY-C、正常血压有氧运动组WKY-E、高血压安静组SHR-C、高血压有氧运动组SHR-E,各组n=24。12周跑台运动结束后,有氧运动显著减低运动组大鼠血压和体重(P0.05);采用微血管环张力测定技术测定肠系膜动脉对去甲肾上腺素(norepinephrine, NE)、血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ)的反应性。结果显示,有氧运动显著减弱高血压大鼠肠系膜动脉对血管收缩因子NE、AngⅡ的收缩反应(P0.05);高效液相色谱法(high performance liquid chromatography, HPLC)测定血浆中ACE1-AT1R收缩轴主要活性肽血管紧张素原(angiotensinogen, AGT)、AngⅡ的水平。结果显示,有氧运动显著减弱高血压大鼠肠系膜动脉对血管收缩因子NE、AngⅡ的收缩反应(P0.05);免疫印迹法和q-PCR技术测定肠系膜动脉ACE1、AT1R蛋白质和AT1aR的mRNA水平相对含量。结果显示,有氧运动显著降低高血压大鼠肠系膜动脉ACE1、AT1R蛋白质和AT1aR mRNA水平(P0.05);亚硫酸氢盐测序BSP法测定Agtr1a基因的启动子区甲基化水平。结果显示,有氧运动显著上调高血压大鼠肠系膜动脉Agtr1a基因启动子区甲基化水平(P0.05)。本研究表明,有氧运动通过上调高血压肠系膜动脉Agtr1a基因启动子区甲基化水平,即而减弱RAS系统ACE1-AT1R收缩轴功能,从而抑制高血压血管张力增高,缓解血压增高。     

侧脑室注射血管紧张素Ⅱ对大鼠血压和缰核内神经元电活动的影响

实验观察了侧脑室注射（ｉｃｖ）及缰核（ｈａｂｅｎｕｌａ ｎｕｃｌｅｕｓ）内微电泳血管紧张素Ⅱ（ＡⅡ）与「Ｓａｒ＾１,Ｔｈｒ＾３」－ＡⅡ（ＳＴ－ＡⅡ,ＡⅡ拮抗剂）对正常和诮激性高血压（ｓｔｒｅｓｓ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ＳＩＨ）大鼠血压及内外侧缰核（ＭＨｂ、ＬＨｂ）内心血管神经元入电活动的影响。结果如下：ｉｃｖ ＡⅡ或ＳＴ－ＡⅡ,正常鼠和ＳＩＨ大鼠血压均升高或降低,ＳＩＨ鼠较正常     

缰核参与应激性高血压的形成及其机制研究

电击大鼠足底形成应激性高血压（ＳＩＨ）,研究了缰核（Ｈｂ）在其中的作用机制。损毁Ｈｂ可降低ＳＩＨ升高的幅度。ＳＩＨ鼠内外侧Ｈｂ（ＭＨｂ,ＬＨｂ）对谷氨酸（Ｇｌｕ）的敏感性高于正常鼠。足底电击使血浆和Ｈｂ内血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）明显升高,侧脑室和ＭＨｂ分别注射ＡｎｇⅡ或ｓａｒａｌａｓｉｎ,在ＳＩＨ鼠引起明显的血压变化。微电泳ＡｎｇⅡ,ｓａｒａｌａｓｉｎ可分别明显改变ＳＩＨ鼠Ｈｂ内神经元的放电活动。     

与人体ε—珠蛋白基因5‘旁侧正调控元件（ε—PREⅡ）…

人体ε－珠蛋白基因５’旁侧ＤＮＡ序列对该基因时空表达与调控起着十分重要的作用。本文运用交电泳阻抑法,ＤＮａｓｅＩ足印法和Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析法发现在胚胎裂红白血病细胞株Ｋ５６２细胞中有一个特异的核蛋白因子,它能专一地与人体ε珠蛋白基因５‘旁侧一个红细胞专一和发育时期特异的正调控元件（ε－ＰＲＥⅡ,－４４６ｂｐ到－４１９ｂｐ）相结合竞争实验表明该因子与ε－ＰＲＥⅡ的结合能被人体ε－     

电刺激肾神经传入纤维对肾水钠钾排出的影响

本文探讨肾神经传入纤维对肾排泄功能的影响及其机制。在戊巴比妥钠麻醉猫中,切除双侧颈动脉窦神经、主动脉神经和迷走神经(SAD+VD),电刺激肾神经传入纤维使动脉血压明显升高,去神经肾的尿量,排钠量显著增多,排钾量和肾小球滤过率不变。神经完好肾的排钠量显著增加,尿量、排钾量和肾小球滤过率均无显著变化。在刺激肾神经传入纤维时,将动脉血压控制在对照期血压水平,两侧肾的尿量、排钠量、排钾量显著减少;神经完好肾的肾小球滤过率减少,而去神经肾的肾小球滤过率无显著改变。脊髓横断不能消除神经完好肾上述肾排泄功能的改变,但可消除去神经肾排泄功能的改变。这些结果表明,在SAD+VD猫中,控制动脉血压不变时,刺激肾神经传入纤维可使有神经肾和去神经肾排尿、排钠和排钾减少。在神经完好肾中这些反应可在脊髓水平完成。     

肾神经传入纤维在DOCA─salt大鼠高血压形成中的作用

于大鼠皮下埋入含醋酸去氧皮质酮（ＤＯＣＡ）的硅胶管以形成ＤＯＣＡ－ｓａｌｔ高血压,其中一组动物在埋管前切除（Ｔ＿９－Ｌ＿２）脊髓右侧背根神经,每周以尾套法测定大鼠收缩压,埋管后６周测定大鼠脑和血浆中儿茶酚胺（ＣＡ）和血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）的浓度,用电脑血管显微图像分析系统测量血管的结构变化。与对照鼠相比,ＤＯＣＡ－ｓａｌｔ高血压大鼠下丘脑和延脑的肾上腺素含量和ＡｎｇⅡ放免活性及血浆去甲肾上腺素（ＮＥ）浓度均明显增加,血浆ＡｎｇⅡ浓度降低,心系数（心重／体重）和肠系膜动脉的中层厚度、壁厚与腔径（壁腔）比值增大;切除脊髓背根可明显延缓ＤＯＣＡ－ｓａｌｔ高血压的形成、预防以上组织ＣＡ浓度和ＡｎｇⅡ放免活性增加以及缓解心肌和血管平滑肌的肥厚。提示,肾神经传入纤维在ＤＯＣＡ－ｓａｌｔ高血压形成中起作用,其机制可能通过影响脑内肾上腺素能神经元和激活脑肾素－血管紧张素系统增加交感传出而起作用。     

不同血压水平下刺激腓深神经对兔肾交感神经放电的影响

本实验观察了53例兔在不同血压水平下不同参数的腓深神经刺激对肾交感神经活动的影响。物在正常血压时,用低强度电流(3V,0.15—0.3mA,12Hz,0.5ms)刺激腓深神经可明显抑制肾交感冲动发放,静脉注射纳洛酮可以阻断此抑制效应;而用中等强度电流(10V,0.5—0.8mA)刺激腓深神经对肾交感活动没有明显抑制效应。当静脉匀速注射硝普钠使动物血压降低、肾交感冲动增加时,用中等强度刺激腓深神经可使肾交感冲动发放进一步增多,而用低强度刺激对肾交感活动无显著影响。静脉注射东莨菪碱(0.25mg/kg)可阻断低血压时刺激腓深神经引起的肾交感兴奋效应,但静脉注射纳洛酮(0.4mg/kg)却不能阻断。又当静脉匀速注射去甲肾上腺素造成动物较高血压时,肾交感冲动减少,用上述二种强度刺激腓深神经均使肾交感活动进一步受到明显抑制,此抑制效应可被静脉注射纳洛酮阻断,但不受东莨菪碱的影响。实验结果表明:刺激腓深神经引起的不同肾交感活动反应与所用刺激参数及动物血压水平和肾交感活动水平有关。刺激腓深神经引起的交感活动减弱或增强的反应,其神经机制可能不完全相同。前者可能有阿片受体的参与,而后者可能是胆碱能受体起着较重要的作用。     

CD3ε和PMA对fas基因转录调控作用的研究

研究了ＣＤ３ε和ＰＭＡ对细胞凋亡基因ｆａｓ的转录调控作用．根据已知的人ｆａｓ基因５＇上游序列设计引物,用ＰＣＲ法从人胸腺细胞基因组ＤＮＡ中扩增出ｆａｓ５＇上游长为４４６ｂｐ的启动子片段．将此片段定向克隆到以虫荧光素酶为报告基因的真核细胞表达载体ｐＸＰ２中．经限制性内切酶酶切鉴定及序列测定分析表明此重组表达质粒ＤＮＡ的结构和序列正确．用此质粒（ｐＸＰ２－ｆａｓｕｐ）瞬时转染人ＪｕｒｋａｔＴ淋巴细胞,分析报告基因的表达水平．结果表明ｆａｓ基因上游－５０６到－６０的区域有弱启动子活性,约是阴性对照的１．５倍．抗ＣＤ３ε抗体和ＰＭＡ处理均可增强ｆａｓ启动子的活性,促进报告基因的表达,其虫荧光素酶活性分别是未经处理的ｐＸＰ２－ｆａｓｕｐ转染细胞的１．７倍和３．３倍,但二者没有协同作用．ＰＫＣ的抑制剂ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ和ＰＴＫ的抑制剂ｈｅｒｂｉｍｙｃｉｎＡ可抑制ＰＭＡ诱导的ｆａｓ基因转录,使虫荧光素酶基因的表达降至未用ＰＭＡ处理的水平．但ＰＴＫ的另一种抑制剂ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ可与ＰＭＡ发挥协同作用,上调ｆａｓ基因的转录,使虫荧光素酶活性增加到５倍．这些结果为阐明ＣＤ３ε及ＰＭＡ介导Ｔ淋巴细胞激活和凋亡的分子机制     

PKC对人mdr1基因转录调控的研究

研究了ＰＫＣα、β１和β２亚型对多药耐药基因ｍｄｒ１转录的调控作用．以ｍｄｒ１基因上游调控序列驱动的虫荧光素酶报告基因表达载体和ＰＫＣ基因表达载体共同转染ＣＯＳ７细胞后,测定虫荧光素酶报告基因表达水平．实验结果表明,ＰＫＣα、β１及β２对ｍｄｒ１基因的转录有下调作用,ＰＭＡ可进一步加强这一作用;在此转染体系中,ＰＫＣ抑制剂ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ也可抑制ｍｄｒ１基因的转录,但在只转染ｍｄｒｌｕｃ的细胞中,ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ对ｍｄｒ１的转录则没有影响,提示ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ仅在ＰＫＣ过量表达的细胞中抑制ｍｄｒ１基因的转录．     

肾胚细胞瘤原癌基因novC在tTA调控系统中的表达

ｎｏｖ基因与肾甲细胞瘤密切相关,在肾母细胞瘤细胞中大量表达,而在正常的成年肾中不表达。通过将Ｂｕｊａｒｄ′ｓｔＴＡ调控系统引入ＱＴ６细胞系中,同时将ｎｏｖＣ基因克隆到ｐＵＨＤ１０３质粒中,与ｐＵＨＤ＿ｔＴＡ质粒共转染细胞,诱导ｎｏｖＣ大量表达（其分子量约为４８ｋＤ）,建立了使ｎｏｖ基因大量表达的细胞系统,为研究ｎｏｖＣ基因对细胞的调控机制建立了体外细胞模型系统。     

肾动脉射频消融对兔压力负荷性高血压的作用研究

目的：建立新西兰兔的高血压模型和观察肾动脉射频消融（Renal Sympathetic Denervation,RSD）对高血压的影响。方法：通 过腹主动脉内径缩窄50%~60%建立兔高血压模型,建模后分为假手术对照组、对照组+ 射频组、高血压组、高血压+ 射频组4 组,建模2个月后使用临床常用的射频消融导管经腹进行双侧肾动脉外膜消融去除肾交感神经,术后继续饲养2 个月,通过颈动 脉插管测定血压数值变化。结果：通过腹主动脉缩窄术成功建立新西兰兔压力负荷高血压模型。RSD 术后2月,新西兰兔的心率 无明显区别（P>0.05）,高血压组的血压仍然明显高于对照组（P<0.05）,然而,高血压+射频组的血压低于高血压组（P<0.05）;同时 对照+射频组与对照组的血压无明显差异(P>0.05)。结论：通过腹主动脉缩窄术可以稳定地建立新西兰兔压力负荷高血压模型, 经RSD 后血压明显下降,且这种降压作用只对高血压有作用。我们首次从动物水平验证RSD可以降低压力负荷导致的血压升 高。     

生物钟基因与肾脏功能和疾病

哺乳动物昼夜节律的产生与生物钟基因的周期性表达密切相关.Bmall、Clock、Per和Cry是研究最为广泛的核心生物钟基因.肾脏在维持机体体液平衡和血压稳态方面发挥重要作用,其多数生理功能均呈现出一定的昼夜节律性,如动脉血压的调节、肾血流量的维持、肾小球滤过率的调控,以及水的重吸收和钠的排泄等都会随昼夜变化而产生节律...     

维甲酸对鼻咽癌细胞生长、表型和瘤基因表达的作用

研究了维甲酸（ＲＡ）对鼻咽癌细胞生长、表型和癌基因表达的作用．用ＲＡ诱导鼻咽癌细胞,绘制诱导前后的细胞曲线,观察细胞形态,并用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交和ＤＮａｓｅⅠ超敏感区分析法检测基因表达和调控．结果表明,ＲＡ能显著抑制鼻咽癌细胞的生长,前５ｄ下降约５０％．ＲＡ处理后的细胞从典型的多边形形态变成扁平、细长,类似纤维细胞状的形态．ＲＡ诱导前ｃ－ｍｙｃ基因和ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因ＨＮＥ２细胞中高表达,而诱导后ｃ－ｍｙｃ基因表达水平急剧下降,ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因无明显改变．在实验中还发现ＲＡ诱导前后的ｃ－ｍｙｃ基因和ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因中一些重要的超敏感位点和它们的功能．由实验结果可得到如下结论：ＲＡ能促进鼻咽癌细胞分化,通过对染色体上调控位点的作用来抑制ｃ－ｍｙｃ基因的表达,ＤＮａｓｅⅠ超敏感位点与细胞的分化程度、细胞的组织特异性和基因表达状态有关,ｃ－ｍｙｃ基因可通过不同的调控方式而失活．     

一种新发现的降压活性多肽—肾上腺髓质素（adrenomedullin）

肾上腺髓质素是最近发现的一种新的活性多肽,它广泛分布于机体多种组织中,具有扩张血管、降低血压、抑制内皮素和血管紧张素Ⅱ释放等作用。该活性多肽在正常机体血压调控及高血压发病中的作用正在研究中。