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1.
P5 3基因的突变 ,失活及缺失与 5 0 %的人类肿瘤发生有关 .最近 ,又发现一新“P5 3样”抑癌基因P73,定位于1p36 2 1p36 3,由 13个外显子及 12个内含子组成 ,该基因编码的蛋白质在结构和功能上均与 p5 3蛋白相似 .P73基因转录剪切可产生多种同种型 p73蛋白α ,β,γ及δ .p73α,β低水平表达具广泛性 ;在外周血淋巴细胞、原始角质细胞及不同肿瘤细胞株和白血病中可检测到 p73γ及δ .正常人类组织中 p73低表达 ,很多肿瘤细胞却高表达 p73,研究表明对于癌变细胞最普遍的是 p73的过表达而不是丢失 :p73蛋白过表达发生在胸腺癌… 相似文献
2.
p53的两种结合蛋白:53BP1和53BP2 总被引:1,自引:0,他引:1
p53基因是一种广谱的肿瘤抑制基因,其产物p53为一多功能的转录调节因子,可以发挥调节细胞生长、细胞凋亡和DNA修复的作用。在人类肿瘤已发现多种p53基因的点突变,但突变不是p53蛋白质丧失功能的唯一途径。胞内蛋白可能影响其活性和功能。53BP1和53BP2是p53在胞浆中的两种结合蛋白。本文阐述了有关这两种蛋白质的研究进展。 相似文献
3.
张雪峰 《国外医学:分子生物学分册》1999,21(4):193-196
电离辐射能够诱导细胞一系列基因的表达,与辐射抗性相关的基因如p53抑癌基因、癌基因、DNA损伤修复相关以及影响细胞生长分化多种调控基因等,通过参与调节细胞周期,促进细胞DNA损伤修复和抑制细胞凋亡等多种途径,最终使得细胞的辐射抗性增加。目前人们对其中一些基因的作用机制已有所了解,而对更多的基因的作用机理尚不清楚。认识细胞辐射抗性相关基因的表达调控和生物功能对阐明辐射抗分子机制至关重要。 相似文献
4.
p38蛋白激酶在热损伤诱导单核细胞Raw264.7凋亡中的作用 总被引:5,自引:0,他引:5
为探讨p38蛋白激酶在热损伤诱导单核细胞株Raw 264.7凋亡中的调控作用.应用流式细胞检测术、透射电镜技术、DNA 凝胶电泳、Western blot、激酶活性测定检测p38蛋白激酶在热损伤诱导细胞凋亡中的作用.结果显示,热损伤后5 m in,p38即被激活,30 m in 时达到最高水平,然后逐渐下降,2 h 达基底水平;热损伤后3 h 细胞凋亡率开始明显增高,p38蛋白激酶活性增高是细胞凋亡发生之前的事件;进一步观察了p38特异性抑制剂FHPI对细胞凋亡的影响,发现FHPI可以抑制热损伤诱导的细胞凋亡.上述结果提示,p38参与介导热损伤诱导的Raw 264.7细胞凋亡. 相似文献
5.
p53基因mdm2基因在肿瘤细胞中的相互调控作用 总被引:4,自引:0,他引:4
mdm2(murine-double minute2)最初是在一种可致瘤的小鼠在纤维细胞中发现的。该基因编码一种锌指蛋白,可与P53蛋白酸性活化区结合,抑制P53介导的转录活性阻止P53诱导凋亡的作用。P53基因是一种重要的抑癌基因,该基因编码一种DNA结合磷蛋白,在调节细胞增殖和促进细胞凋亡过程中起着重要的作用。P53也可调节mdm2基因的表达。p53蛋白水平的升高级相应剌激MDM2蛋白水平的升 相似文献
6.
在所有研究过的人体肿瘤组织或细胞中,p53似乎是突变频率最高的一个基因,研究和检测p53基因及其编码产物的变化将具有很需要的意义,我们将野生型p53基因编码3'端703bp的cDNA片段插入到大肠杆菌表达载体pBV220,得到了一个重组体表达质粒pRR33,经热诱导表达,用SDS-PAGE和Western印迹法证实p53蛋白多肽在大肠杆菌中得到了表达,它不仅可用于抗p53蛋白抗体的制备,而且也可用 相似文献
7.
大鼠催乳素基因真核细胞可表达性质粒的构建及应用研究 总被引:4,自引:0,他引:4
735bp的PRLcDNA片段从质粒PRL-SP65#1中回收后,用粘性末端连接法将其重组到真核表达载体pcDNA3上,筛选出正向连接重组体pcDNA3-PRLS和反向连接重组体pcDNA3-PRLAS。将重组体pcDNA3-PRLs和空载体pcDNA3分别转入NIH3T3细胞系,用G418筛选出阳性细胞后与未转染的NIH3T3细胞在加E2和不加E2的情况下,用原位杂交的方法,分别用PRLcDNA探针和原癌基因c-H-rascDNA探针进行检测,未转染的NIH3T3细胞在加E2和不加E2时都几乎无催乳素基因的表达,同样,转入空载体的NIH3T3细胞也无PRL的表达,而转入重组体pcDNA3-PRLS的NIH3T3细胞则有大量的PRL基因的表达,与对照组相比有显著差异(P<0.01)。正常和转入空载体的NIH3T3细胞有一定程度的原癌基因c-H-ras的表达,当分别加入E2和转入重组体pcDNA3-PRLS后,NIH3T3细胞中的c-H-ras基因表达水平都显著升高(P<0.05)。 相似文献
8.
血管平滑肌细胞增殖与Cdk抑制蛋白p27的表达 总被引:4,自引:1,他引:4
p27蛋白是细胞周期素依赖性激酶(Cdk)抑制蛋白家族中的一种,主要对外部促进或抑制细胞增殖的信号起反应。本研究应用流式细胞仪(FCM)双标记的方法观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管加压素(AVP)和血小板源生长因子(PDGF)对血管平滑肌细胞(VSMCs)细胞周期百分比和p27蛋白表达量的影响。静止状态培养的VSMCs加入AngⅡ,AVP,PDGFBB后,在不同时间收集细胞,用碘化丙啶(PI)标记细胞DNA,以确定细胞所处的周期。用p27蛋白的单抗和标记了FITC的二抗标记细胞,通过流式细胞仪测定被激发出的荧光量来确定细胞p27蛋白表达的相对量。结果显示,AngⅡ刺激VSMCs增生,其蛋白含量增加了436%(P<001),但不抑制p27蛋白的表达;AVP可轻度抑制p27的表达,有轻度促进VSMCs增殖和增生的作用(P<005);PDGF明显抑制p27的表达,引起细胞增殖。本研究结果提示,p27蛋白抑制VSMCs通过G1期进入S期,是抑制VSMCs增殖的重要调节因子。 相似文献
9.
目的:构建表达重组反义p73基因的重组逆转录病毒,观察其对人肝癌细胞HepG2的凋亡诱导活性,并进一步探讨其作用机制。方法:克隆p73基因的反义片段,重组法构成逆转录病毒载体pBabe-p73(pBP73),以脂质体Lipofectamine2000将其转染293A细胞进行病毒包装;将逆转录病毒感染人肝癌细胞HepG2,用MTT法检测细胞生长抑制情况,Western blotting检测p73的表达;再分别用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡;最后检测p53,caspase-3和bcl-2蛋白的表达变化。结果 重组质粒pBP73经鉴定连接正确,其转染293A细胞后上清液中可得到病毒,滴度达5×107pfu;MTT检测见pBP73病毒组48和72h细胞抑制率高于对照组(45.1% vs. 5.3%,69.5% vs.17.3%,均p<0.05)。琼脂糖凝胶电泳出现典型梯形条带;流式细胞仪检测出现凋亡峰,于转染48h后达最高峰,其凋亡百分率高达20.47%;p73蛋白高表达组p53和caspase-3蛋白的表达亦有显著升高(p<0.05),但bcl-2蛋白未见表达差异。结论:成功构建了p73逆转录病毒,反义p73基因在体外能够有效地诱导人肝癌细胞HepG2的凋亡,其可能机制是通过激活caspase-3而发生作用。 相似文献
10.
研究发现白色念珠菌诱导小鼠胸腺细胞凋亡与白色念珠菌上调小鼠血清TNF α水平、胸腺细胞caspase 3的活性及bax ,p5 3基因表达有关。尾静脉注射 4× 10 6白色念珠菌 ,于 2 4h处死小鼠 ,用流式细胞仪检测发现白色念珠菌组小鼠胸腺细胞凋亡百分率 (2 3.6 3± 1.85 ) %显著高于正常对照组 (1.87±0 .81) %,P <0 .0 1。DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示 ,白色念珠菌组呈现典型的凋亡“梯状带” ,而正常对照组无“梯状带”出现。ELISA方法检测小鼠血清TNF α水平结果发现 ,正常对照组小鼠血清TNF α小于 2 5ng/L ,而… 相似文献
11.
毛细血管扩张性共济失调突变蛋白在细胞凋亡过程中被Caspase┐3降解 总被引:1,自引:0,他引:1
新近的研究揭示:caspase蛋白酶在细胞凋亡中起着死亡执行者的重要功能.一些蛋白相继被证明在细胞凋亡中可被caspase特异切割,其中参与DNA损伤修复过程的聚ADP核糖聚合酶(PARP)以及DNA依赖的蛋白激酶(DNA-PK),在细胞凋亡过程中被caspase选择性切割具有特殊的功能意义.为探索与DNA-PK催化亚基有较高同源性,含有caspase切割位点,且功能上目前也被认为是感受DNA损伤和参与信号传导途径的ATM(Ataxiatelang-iectasiamutated)蛋白,是否在凋亡过程中也可被切割而降解?应用体外转录与翻译系统获得ATM蛋白的PI3K结构域,同时通过建立无细胞反应体系获得含caspase活性的细胞抽提液,将两者在体外共同保温.结果发现:ATM蛋白与caspase-3能免疫共沉淀,ATM蛋白的PI3K结构域可被caspase-3特异切割,并观察到辐射诱发细胞调亡中ATM蛋白的降解.从而进一步证实了DNA损伤修复的抑制,促进细胞凋亡的发生. 相似文献
12.
细胞凋亡相关基因研究进展 总被引:7,自引:0,他引:7
张晓东 《国外医学:分子生物学分册》1994,16(4):148-151
细胞凋亡研究已成为当今国内外研究的新热点,本就近年来有关与细胞凋亡相关的基因或因子研究的进展做一综述,着重阐述了bc1-2、myc、p53和APO-1/FasTGFβ1等对细胞凋亡的影响和作用,以期有助于进一步提示细胞凋亡的分子机理。 相似文献
13.
将Epstein-Barr病毒(EBV)膜抗原(MA)BLLF1基因,插入含有CMV启动子的真核表达载体pcDNA3下游BamHI位点,构建成真核表达质粒pcDNA3-MA。将纯化的DNA注射Balb/c小鼠股四头肌。经免疫的动物产生抗EB病毒MA特异性的抗体和中和抗体,依赖抗体细胞介导的细胞毒作用(ADCC),特异性T淋巴细胞增生性反应及细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤作用。基因免疫与基因-蛋白 相似文献
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利用GFP示踪细胞内源性P53活性检测DNA损伤 总被引:2,自引:1,他引:1
DNA损伤的检测对预防癌症和遗传病等非常重要。采用分子克隆技术,将报告基因—绿色荧光蛋白(GFP)置于SV40基本启动子调控下,构建成对照载体pSV-GFP。在SV40基本启动子上游插入寡核苷酸P53RE,构建成示踪载体p53RE-GFP。转染NIH3T3细胞,以GFP示踪细胞内源性P53的转录激活活性。紫外线照射或H2O2处理转化细胞使DNA损伤,诱导细胞内源性P53的表达。用激光扫描共聚焦成像系统(LSCIS)对细胞进行红、绿、蓝三色光融合成像,并测定GFP经488nm激发后发出的绿色荧光光密度,验证GFP示踪P53的特异性。p53RE-GFP转化细胞3T3-REG经紫外线照射或H2O2处理后,GFP的表达增高,处理后1hr光密度即达到最高水平,随后逐渐降低。血清“饥饿”—非DNA损伤处理的3T3-REG细胞,以及经紫外和H2O2处理的对照载体pSV-GFP转化细胞3T3-SVG,GFP的表达无明显增强。实验表明:GFP示踪内源性P53转录激活活性用于检测DNA损伤有很高的灵敏度和特异性,适宜推广应用。 相似文献
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生长素结合蛋白cDNA的克隆及其在烟草中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
基于拟南芥内质网生长素结合蛋白基因的cDNA序列,设计合成了Ap5和Ap3两个引物,应用RT-PCR技术扩增了拟南芥的ABP基因。将该基因克隆在植物表达载体p35SSIN的35S启动子必Nos3‘端之间,得到植物表达载体p35SE。通过农杆菌介导的方法对烟草SR1进行了转化,由分子杂交等检测证明,生长素结合蛋白基因已在烟草中表达,同时转基因烟草后代对生长素的敏感性明显增加。 相似文献
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p16抑癌基因定点突变及其在大肠杆菌中的表达与纯化 总被引:1,自引:0,他引:1
为了研究错义突变对p16功能的影响,应用PCR体外定点突变方法对p16cDNA进行体外定点突变,并将野生型和突变型p16cDNA克隆于pGEX-5T载体,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达,Western印迹鉴定确证表达.而后用谷胱甘肽-Sepharose4B亲和层析纯化野生型和突变型p16融合蛋白.得到了第48位密码子CCG(Pro)→CTG(Leu)突变的p16-P48突变体,并在大肠杆菌中表达了42kD的GST-p16和GST-p16P48L融合蛋白.最后经纯化得到了野生和P48L突变的p16融合蛋白 相似文献
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CD3ε和PMA对fas基因转录调控作用的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
研究了CD3ε和PMA对细胞凋亡基因fas的转录调控作用.根据已知的人fas基因5'上游序列设计引物,用PCR法从人胸腺细胞基因组DNA中扩增出fas5'上游长为446bp的启动子片段.将此片段定向克隆到以虫荧光素酶为报告基因的真核细胞表达载体pXP2中.经限制性内切酶酶切鉴定及序列测定分析表明此重组表达质粒DNA的结构和序列正确.用此质粒(pXP2-fasup)瞬时转染人JurkatT淋巴细胞,分析报告基因的表达水平.结果表明fas基因上游-506到-60的区域有弱启动子活性,约是阴性对照的1.5倍.抗CD3ε抗体和PMA处理均可增强fas启动子的活性,促进报告基因的表达,其虫荧光素酶活性分别是未经处理的pXP2-fasup转染细胞的1.7倍和3.3倍,但二者没有协同作用.PKC的抑制剂staurosporine和PTK的抑制剂herbimycinA可抑制PMA诱导的fas基因转录,使虫荧光素酶基因的表达降至未用PMA处理的水平.但PTK的另一种抑制剂genistein可与PMA发挥协同作用,上调fas基因的转录,使虫荧光素酶活性增加到5倍.这些结果为阐明CD3ε及PMA介导T淋巴细胞激活和凋亡的分子机制 相似文献
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利用DNA重组技术,将转录因子NF-κBp50基因片段插入pGEX-2T质粒载体,经DNA序列分析证明克隆的正确性.将重组的pGEX-2T/p50转化入大肠杆菌JM109,表达出pGEX-2T/p50融合蛋白.经WesternBlot检测证实表达产物对抗p50c的抗体呈特异性反应,表明克隆的正确性,并成功地应用纯化的p50蛋白制备了免疫血清.为进一步对NF-κB的功能进行研究打下了良好的基础 相似文献
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依赖P53的P53R2基因在细胞周期检验点对损伤DNA的修复作用 总被引:2,自引:0,他引:2
1 .p5 3基因及P5 3蛋白p5 3基因最初被认为是一个普通的癌基因 ,其产物的作用是刺激肿瘤细胞的生长。但后来发现原先研究的p5 3基因只是野生型p5 3基因的突变体 ,只有突变型p5 3基因的产物才能刺激不正常细胞 (如癌细胞 )的生长 ,而野生型p5 3基因的产物对肿瘤则有抑制作用 ,正常的p5 3基因原来是一个抑癌基因。经长期研究发现 ,突变型p5 3基因在人类多种肿瘤细胞中广泛存在。P5 3蛋白是p5 3基因编码的蛋白转录因子 ,其相对分子质量为 5 .3× 1 0 3,是由 393个氨基酸残基组成的[1] 。P5 3蛋白是一种重要的抗肿瘤因子 ,它能以序… 相似文献
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恒河猴Fas基因的克隆 总被引:1,自引:0,他引:1
目的研究猴艾滋病发病机制中细胞凋亡的作用,克隆凋亡相关基因Fas的cDNA序列。方法从恒河猴腹股沟淋巴结中提取总RNA,根据人的Fas cDNA序列设计上、下游引物,通过RT-PCR扩增出目的cDNA片段,将这一片段克隆到pGFM-T Easy载体中,筛选阳性克隆并进行序列测定。结果首次克隆了恒河猴Fas基因,编码序列为1005 bp,将其序列提交GenBank,收录号为AY007572。结论克隆的新序列与GenBank已收录的人和食蟹猴的Fas基因在编码序列的长度上稍有区别,人的编码序列为1008bp,食蟹猴的为996 bp。 相似文献