不同昆虫病原线虫一共生细菌组合的生化特性研究

本文分别以无菌的小卷蛾斯氏线虫的A24品系线虫与其自身携带的共生细菌菌株和与格氏线虫RS92品系的共生细菌菌株,以及以无菌的嗜菌异小杆线虫的H06品系线虫与其自身携带的共生细菌菌株和与大异小杆线虫HNA品系的共生细菌菌株建立单菌组合;测定了各组合感染期线虫的致病力、干重和体内主要生化物质的含量.结果发现,共生细菌除了对感染期线虫的致病力产生显著影响外,对线虫干重、蛋白质、氨基酸、糖原和脂肪酸等生化物质的含量也有很大的影响.     

必需氨基酸延缓秀丽隐杆线虫衰老的研究

利用模式生物秀丽隐杆线虫,考察8种人体必需氨基酸对衰老的影响。首先建立秀丽隐杆线虫寿命模型,以雷帕霉素为阳性对照药,分别考察8种必需氨基酸对线虫生存时间的影响。再用筛选出的氨基酸处理线虫21d,通过秀丽隐杆线虫-绿脓杆菌感染模型,考察氨基酸对线虫的抗感染能力的影响,利用实时荧光定量Real-Time RT-PCR方法检测氨基酸处理线虫后DAF-16/FOXO下游基因和免疫相关基因的表达水平。结果表明8种必需氨基酸中苏氨酸和异亮氨酸既能延长野生型线虫的寿命又能延长daf-16突变型线虫的寿命,同时还能增强秀丽隐杆线虫抗绿脓杆菌感染的能力,并提高免疫相关基因lys-7、clec-67的表达水平,而DAF-16/FOXO下游基因表达没有明显变化。因此苏氨酸和异亮氨酸能延长线虫寿命、提高抗感染能力,且对线虫寿命的延长作用不完全依赖于DAF-16/FOXO转录因子。     

植物抗线虫基因的分子定位与克隆

植物线虫严重危害农业生产并造成产量损失。抗线虫基因的分子标记定位与克隆是抗线虫基因工程的基础。现就几种植物中的抗线虫基因的分子定位及克隆进行了综述 ,同时针对已克隆的抗线虫基因所编码的蛋白质的结构特征和克隆新方法进行评述 ,并对通过遗传途径发展抗线虫品种进行了展望     

刀孢轮枝菌胞外几丁质酶的基因克隆及系统发育分析

食线虫真菌是植物寄生线虫的重要天敌,它们所产生的胞外水解酶(蛋白酶、几丁质酶和胶原蛋白酶等)能够降解线虫体壁和卵壳中的蛋白质及几丁质等结构成分并在侵染过程中发挥着重要的作用。本文中,我们发现刀孢轮枝菌Lecanicillium psalliotae对南方根结线虫Meloidogyne incognita卵具有较强的侵染能力。为了进一步研究刀孢轮枝菌胞外几丁质酶的性质,我们通过简并引物设计和DNA walking方法从刀孢轮枝菌的基因组中成功地克隆得到一个内切几丁质酶基因Lpchi1,该几丁质酶编码基因含有3个内含子,编码423个氨基酸。同源性和系统发育分析表明,不同生防真菌来源的几丁质酶具有较高的同源性并根据分子量的大小形成三个不同的进化分枝。     

甘薯茎线虫乙酰胆碱酯酶基因Dd-ace-2全长cDNA的克隆和序列分析

利用RT-PCR、RACE技术克隆了甘薯茎线虫(Ditylenchus destructor)乙酰胆碱酯酶基因(Dd-ace-2) cDNA (GenBank 登录号EF583058), 用DNAMAN5.0、MEGA3.0进行了序列分析。克隆的Dd-ace-2 基因cDNA全长2425 bp, 包含一个2205 bp的开放阅读框, 编码734个氨基酸。Dd-ace-2基因推导的氨基酸序列与南方根结线虫(Meloidogyne incognita)、秀丽小杆线虫(Caenorhabditis elegans)和动物寄生线虫胎生网尾线虫(Dictyocaulus viviparous)ace-2的氨基酸序列同源性分别达48.0%、42.7%和42.1%。在推导的734个氨基酸残基的前体蛋白中, 前面的701个氨基酸残基是成熟的乙酰胆碱酯酶序列, 其预测的分子量为79240.38 D。在一级结构中, 形成催化活性中心的3个氨基酸残基(Ser291, Glu442和His574)、胆碱结合位点Trp(177), 以及在亚基内形成二硫键的6个半胱氨酸完全保守; 在电鳐乙酰胆碱酯酶分子的催化功能域中存在14个保守的芳香族氨基酸残基, 其中10个在甘薯茎线虫乙酰胆碱酯酶中完全保守。与其它线虫和物种乙酰胆碱酯酶的聚类分析显示, 甘薯茎线虫的乙酰胆碱酯酶与其它线虫乙酰胆碱酯酶ACE-2同属一个支系。     

洱源西湖底质中捕食线虫真菌多样性研究

捕食线虫真菌是环境中线虫密度的主要控制因子之一, 目前对水生捕食线虫真菌多样性的相关研究还较少。我们对大理州洱源县西湖不同样点底质中捕食线虫真菌多样性进行了调查, 并对底质中捕食线虫真菌多样性与线虫密度的相关性进行比较分析。结果共从78 份底质中分离到135 株捕食线虫真菌菌株, 初步鉴定有3 属23 种捕食线虫真菌, 待定种3 种。捕食线虫真菌总检出率为85.90%, 其中Arthrobotrys oligospora 和Arthrobotrys conoides 的物种优势度Y 值分别为0.091 和0.023, 检出率分别为31.35%和12.71 %, 为优势种。在所分离到的捕食线虫真菌中, 产黏性菌网的种类占86.44%。表明西湖底质中存在丰富的捕食线虫真菌资源, 产黏性菌网的捕食线虫真菌为优势种群。捕食线虫真菌多样性与线虫密度呈负相关关系(r=–0.957, P<0.01), 负相关性极显著, 即捕食线虫真菌种群对线虫密度具有良好的控制作用。     

两对姊妹线虫成虫生殖系细胞学特征研究

采用DAPI-荧光染色法研究松材线虫、拟松材线虫、李氏长尾线虫和吴氏长尾线虫等两对形态相似的姊妹线虫的成虫生殖系细胞学特征,描述并且比较了两对姊妹线虫之间以及姊妹线虫对之间的成虫生殖系细胞排列方式和贯穿于生殖细胞分裂过程中的染色体变化行为,同时也图示了这4种线虫的成虫生殖系细胞核形态图和染色体形态图。研究表明,利用线虫成虫生殖系细胞学特征来探讨线虫种类之间甚至个体之间的相互关系,将可能便于人们更好地界定线虫"种"的范围及解释线虫进化和系统发育过程;研究还表明,经DAPI-荧光染色的生殖系细胞排列模式可能可以作为一种较好的线虫分类特征。此外,本研究的4种线虫的染色体数目均为2n=12。     

综述与专论: 线粒体未折叠蛋白反应调控线虫衰老研究进展

蛋白质稳态是生物细胞应对压力的核心。线粒体作为一种重要的细胞器,依赖复杂的蛋白质网络行使正常功能,因此蛋白质稳态对其十分重要。当生物体受到外界压力,产生了蛋白质稳态的改变,为了维持机体功能的正常运转,细胞会激活一种称为线粒体未折叠蛋白反应的转录应答机制,从而维持线粒体蛋白质稳态,恢复线粒体功能,以应对压力,保持机体健康。本文主要介绍了线粒体的特征,线粒体未折叠蛋白反应的概念,线虫中线粒体未折叠蛋白反应的信号转导机制,以及线粒体未折叠蛋白反应对线虫衰老的影响。     

棉铃虫感染中华卵索线虫后血淋巴游离氨基酸含量的变化

中华卵索线虫Ovomermis sinensis感染棉铃虫Helicoverpa armigera 1天后,棉铃虫幼虫血淋巴中游离氨基酸总量大幅度下降,各种游离氨基酸的含量也是如此变化。感染2～4天后的棉铃虫血淋巴中游离氨基酸总量变化不大,各种游离氨基酸的含量有升有降。感染5～6天后的棉铃虫血淋巴中游离氨基酸总量和各种氨基酸的含量都急剧上升。研究表明,中华卵索线虫寄生棉铃虫时,棉铃虫血淋巴中游离氨基酸含量的变化朝着有利于线虫生长发育的方向进行。     

福建鸟类寄生饰带类线虫三新种的记述

本文报道作者近年来在福建省福州地区进行鸟类寄生线虫调查时所采集的饰带类线虫的三新种。伪树莺针形线虫,新种Acuariapseudicettiaesp.nov.寄生于毛脚燕Delichonurbica的砂囊角质层小;鸥梳旋线虫,新种Pectinospiruralarisp.nov.寄生于灰背鸥La-russchislisagus的砂囊角质层中;福建裂饰线虫,新种Schistorophusfukienensissp.nov.采自金鸻Charadriusdominicusfulvus和黑腹滨鹬Calidrisalpinasakhlina的砂囊。所有模式标本均保存于河北师范大学生物系。     

五种线虫头端顶面的扫描电镜观察

应用扫描电镜观察了弗氏旷口线虫、似血矛线虫、辐射食道口线虫、粗纹食道口线虫、哥伦比亚食道口线虫的头端顶面。对弗氏旷口线虫和似血矛线虫口囊内齿或口矛的形态,三种食道口线虫的叶冠、化感器和感觉乳突进行了描述。     

根结线虫天敌真菌及其高效菌株筛选*

本文报道捕食和寄生南方根结线虫(Meloidogyne incognita)和爪哇根结线虫(M. javanica)的天敌真菌6属14种。其中 Arthrobotrys candida A．Cladodes var. macroides．A. musiformis,Monacrosporium cionopagum,M．Doedycoides Drechmeria coniospora,Hdrposporium crassum. H. lilliputanum,Myzocytlum huraicola 和 Verticillum coccospora为我国新纪录种。室内测定结果表明：GACA IB (Arthrobotrys oligospora)、GACM 102 (Monacrosporium doedycoides)菌株对南方根结线虫和爪哇根结线虫均具极高的捕食率,接种线虫7天后,捕食率达98％以上,接种20天后,捕食率均达100％。     

五种线虫头端顶面的扫描电镜观察

应用扫描电镜观察了弗氏旷口线虫、似血矛线虫、辐射食道口线虫、粗纹食道口线虫、哥伦比亚食道口线虫的头端顶面。对弗氏旷口线虫和似血矛线虫口囊内齿或口矛的形态,三种食道口线虫的叶冠、化感器和感觉乳突进行了描述。     

中国食线虫真菌的种类

对我国24个省市,涉及40余种植物的300多个土样的调查,分离出食线虫真菌近千个分离物,共鉴定出食线虫真菌29属57种,包括捕食线虫真菌4属25种,其中Arthrobotrys arthrobotryoides, A. brochopaga, A. cladodes var. macroides, A. microspora,A. musiformis, A. straminicola, Monacrosporium ellipsosporinm, M. thaumasium, M. pravicollis,Stylopage grandis, Dactylella ramiformis, Monacrosporium qiuanum, Monacrosporium sinense等10种为国内新记录。内寄生真菌4属4个种、其中Catenaria angullulae, Harposporiumarcuatum, Nematoctonus leiosporus为国内新记录。定殖于大豆孢囊线虫真菌22属25种,其中Catenaria auxiliaris, Cylindrocarpon heteronema, C. willkommii, Fusariella bizzozeriana,Nematophthora sp., Phoma eupyrena, Phoma leveilei,Pithomyces sp,Trichocladium opacum.Verticillium chlamydosporium等10属种为国内新记录,其中Nematophthora, Fusariella,Trichocladium三属为国内新记录属,Rhizoctonia sp., Stachybotrys elegans, F.bizzozeriana,C.heteronema, C.willkommii等为首次发现定殖于大豆孢囊线虫孢囊上。对所鉴定的真菌进行了描述和讨论并制作了检索表。     

乙醇干扰线虫味觉可塑性相关基因的生物信息学分析

为研究复合胺信号途径调控乙醇影响下的线虫行为及味觉可塑性,以Tph-1基因、Ser-4基因、Ser-7基因为研究对象,通过生物信息学的方法,对其表达蛋白质的理化性质、信号肽、跨膜区、亚细胞定位及磷酸化修饰位点进行预测分析.研究结果显示,Tph-1蛋白含有429个氨基酸,等电点为5.76,为不稳定且亲水性蛋白质,没有明显...     

一种经济、简便的双向电泳方法

双向电泳是蛋白质分析的一门较为精确的技术.对电泳方法进行改良并采用普通垂直薄板等电聚焦技术,不仅大大降低了蛋白质双向电泳的成本,而且操作过程简单,是一种用于初步分析蛋白质的较好方法.在中华卵索线虫(Ovomermis sinensis)雌雄成虫可溶性差异蛋白的分析中获得了较满意的结果.这一改良方法的建立,可望促进双向电泳的广泛应用.     

节丛孢属丝孢菌对松材线虫和拟松材线虫的捕食*

利用节丛孢属捕食线虫真菌的 8个种 ,1 1个菌株 ,对松材线虫 (Bx)和拟松材线虫(Bm)进行了捕食力的测定。结果显示节丛孢属真菌对这两种线虫的捕食能力既存在种间差异 ,也存在同种不同菌株间的差异。指状节丛孢的 3个菌株Ad 1 ,Ad 2 ,Ad 3菌株对两种线虫均表现出较高的捕食率 ,接种 7d后对Bx和Bm的捕食率分别达到了 98.08%,91.16 %,86.3 %和 96.28%,90.45 %,85.38%;同一菌株对松材线虫和拟松材线虫的捕食没有选择性。此外 ,通过对松材线虫和拟松材线虫     

松材线虫和拟松材线虫体内细菌的透射电镜观察及分离鉴定

【目的】松材线虫是松树萎蔫病的病原,拟松材线虫在形态等方面与松材线虫极其相似。关于两种线虫与细菌的研究多集中于体表伴生细菌。本文要揭示松材线虫和拟松材线虫体内是否存在细菌。【方法】对松材线虫和拟松材线虫进行透射电镜观察;并采用1%升汞和抗菌素混合液对两种线虫虫体进行体表消毒后研磨,制备悬浮液涂布NA平板;通过生理生化测定和16S rDNA序列分析鉴定细菌种类。【结果】松材线虫和拟松材线虫透射电镜照片显示在两种线虫肠道内均发现细菌;体表无菌的松材线虫和拟松材线虫共分离到3株体内细菌;这3株细菌分别属于寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)和爱文氏菌属(Ewingella)。【结论】松材线虫和拟松材线虫体内均存在细菌;这些细菌对这两种线虫可能具有一定的生理生态作用。本文是松材线虫和拟松材线虫体内存在细菌的首次报导。     

鱼类寄生毛细科线虫－新属新种的研究

作者在武陵山地区的鱼类寄生线虫调查工作中,发现一种毛细线虫,经研究,为一新种,定名为岁新毛细线虫,新种(Neocapillaria phoxini sp.nov.).根据其特征,为此建立一新属──新毛细线虫属.       

秀丽小杆线虫分泌蛋白组的计算机分析

结合计算机技术和生物信息学的方法,采用组合的信号肽分析软件SignalP v3.0、TargetP v1.01、Big-PI Predictor和TMHMM v2.0,预测了秀丽小杆线虫（Caenorthaditis elegans ws123）的全基因组19855个ORF编码蛋白的信号肽,同时系统分析了信号肽的特征。结果表明,在19855个秀丽小杆线虫的蛋白中,有1990条为带有信号肽的分泌型蛋白,其中,1936条为典型的分泌型信号肽（即信号肽酶Ⅰ型信号肽）,53条为信号肽酶Ⅱ型信号肽,1条为信号肽酶Ⅳ型信号肽;在Ⅰ型信号肽中,有41条为RR-motif亚组型信号肽。在1990条信号肽中,有742条没有典型的N-区,其余1248条包含典型的3个区。比较了秀丽小杆线虫与原核生物分泌蛋白信号肽中20种氨基酸残基在信号肽酶切位点的使用情况,表明：在Ⅰ型信号肽酶切位点,其信号肽中使用的氨基酸总体趋势与原核生物基本相似,但秀丽小杆线虫选用的氨基酸种类更多,变化更大;在Ⅱ型信号肽酶切位点,秀丽小杆线虫脂蛋白信号肽中使用的氨基酸的种类与原核生物有很大的不同。通过与真核单细胞生物比较,作为真核多细胞生物的秀丽小杆线虫,其分泌蛋白信号肽所占比例更高、种类更多,可知线虫信号肽的组成具有很高的多态性,表明该物种的分泌蛋白具有多种功能。此外,分析结果显示,脂蛋白信号肽在结构上比分泌型信号肽更为保守。在秀丽小杆线虫分泌蛋白中出现了少数氨基酸组成完全一致的信号肽,采用BLAST 2 SEQUENECES对具有相同信号肽的分泌蛋白进行了序列比对,结果表明具有相同信号肽的分泌蛋白同源性非常高,它们的存在是生物进化过程中基因倍加（duplication）及环境选择的结果,信号肽特征的详细描述必将对这些蛋白功能的研究提供重要的帮助。