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RNAi机制研究的最新进展 总被引:7,自引:0,他引:7
RNAi即RNA干涉,是近几年才发现的一种由双链RNA引起的基因沉默的现象,从无脊椎动物到脊椎动物,从低等真菌到高等植物都普遍存在RNAi.RNAi的机制也成为人们关注的焦点,出现了许多有关RNAi机制的报道。从基因组甲基化,转录后水平以及转译水平三个层次对近两年关来关于RNAi机制研究的最新进展结合我们的工作作一较为详细的综述。 相似文献
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RNAi的作用机制及其应用 总被引:2,自引:0,他引:2
由双链RNA介导的,序列特异的转录后基因沉默的过程称为RNAi(RNA interference),它是双链RNA分子在mRNA水平关闭相应序列基因表达的过程,是一门新兴的基因阻断技术。RNAi有望成为今后分析人类基因组功能的有力工具,在病毒感染、肿瘤、移植免疫等疾病的治疗上有很诱人的广阔前景。 相似文献
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RNAi是一种高度特异化的mRNA降解过程,能在哺乳动物细胞中诱导特异的基因沉默。这一发现为人类某些疾病的治疗研究开辟了新的途径。随着研究的不断深入,RNA i在抗病毒研究中受到越来越多的关注。本文拟就RNA i的机制、siRNA靶系列的选择及制备和抗病毒研究现状作一综述。 相似文献
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RNA干扰是外源性或内源性双链RNA诱发的mRNA水平上的基因沉默机制。RNA技术具有高效性、特异性。最近将RNA干扰应用于许多病毒性疾病的治疗研究均取得了显著的基因沉默效果,为病毒的预防和治疗开辟了一条新途径。就RNA干扰作用机制及抗病毒效应作一综述。 相似文献
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植物抗病毒分子机制 总被引:1,自引:0,他引:1
在与植物病毒的长期斗争中,植物进化出多种抗病毒机制,其中RNA沉默和R基因介导的病毒抗性是最受人们关注的两种机制.一方面,RNA沉默是植物抵抗病毒侵染的重要手段.植物在病毒侵染过程中可形成病毒来源的双链RNA,经过DCL蛋白的切割、加工形成sRNA,与AGO蛋白结合形成RISC指导病毒RNA的沉默,用于清除病毒.相应地,病毒在与植物的竞争中进化出RNA沉默抑制子,抑制宿主RNA沉默系统以逃避宿主RNA沉默抗病毒反应,增强致病能力.另一方面,植物也进化出R基因介导植物对包括病毒在内的多类病原的抗性.R蛋白直接或间接识别病毒因子,通过一系列的信号转导途径激活植物防御反应,限制病毒的进一步侵染.对植物抗病毒的研究有助于人们对植物抗病分子基础的理解,有重要的科学意义和潜在应用价值.本文综述了植物抗病毒分子机制的重要进展. 相似文献
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RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指由双链RNA(double-stranded RNA,ds RNA)诱发的一种使特定基因沉默的现象。作为一种研究基因功能、发现新基因和抗病毒的新型手段,近年来RNAi技术在昆虫、真菌、植物和哺乳动物等的研究中已被广泛应用,但是在甲壳动物研究中尚处于起步阶段。对甲壳动物RNAi技术实施方法做了简要介绍;着重综述了RNAi技术在甲壳动物CHH家族神经肽类基因功能、蜕皮和生长调控机制、配子及性腺发育调控和甲壳动物抗病毒机制研究上的应用进展。 相似文献
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[目的]建立一种新型的军团菌鉴定方法,并探讨该法在鉴定环境水源和临床标本军团菌菌株中的应用价值.[方法]根据军团菌16S rRNA基因保守序列设计引物,以分离培养得到的可疑军团菌菌株作为模板,采用PCR法对模板扩增,并用限制性内切酶对PCR产物进行酶切分析,建立一种嗜肺军团菌及非嗜肺军团菌的鉴定方法.对16株嗜肺军团菌、22株非嗜肺军团菌及12株其他细菌标准菌株进行检测,验证该方法的可靠性,最后用该法检测广州地区分离的169株可疑军团菌菌株并进行基因测序.[结果]该PCR方法检测嗜肺军团菌及非嗜肺军团菌所有标准菌株均为阳性,非军团菌检测结果均为阴性;进一步的Hinf Ⅰ酶切分析可准确的区分嗜肺军团菌标准菌株;广州地区分离的169株可疑军团菌菌株经该法检测发现160株为军团菌,其中79株为嗜肺军团菌,与基因测序检测结果一致.[结论]PCR-酶切技术可快速、特异地检测军团菌及嗜肺军团菌,适用于环境水源和临床标本可疑军团菌菌株的检测. 相似文献
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转录后基因沉默与植物抗病毒防卫机制 总被引:6,自引:1,他引:6
介绍了转录后基因沉默及其作为植物一种抗病毒防卫机制的最新研究进展,并进一步探讨了植物与病毒互作及共进货过程、基因沉默及其诱导技术在植物基因调控表达、改良植物抗病性和植物功能基因组学等研究领域的应用前景。 相似文献
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目的:制备基于XcmⅠ酶切的高效TA克隆载体,并检测其克隆PCR产物的效果。方法:设计一对互补配对的寡核苷酸,经过变性及退火后插入质粒pUC19的多克隆位点,从而在该多克隆位点中引入2个XcmⅠ酶切位点,用XcmⅠ酶切后即获得含有3’突出T碱基的T载体;为了提高该T载体的克隆效率,优化了2个XcmⅠ酶切位点之间的碱基数目,排除了载体自连产生白色克隆的可能性,使假阳性大大减少;此外,为了便于完全酶切与未完全酶切载体的分离,在2个XcmⅠ之间插入了一段无关DNA片段。结果:改进得到的T载体可以有效克隆PCR产物,其阳性克隆率可达95%。结论:构建了基于XcmⅠ酶切的TA克隆载体,经过改进的T载体具有很高的克隆效率。 相似文献
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RNA干扰抗病毒研究进展 总被引:3,自引:1,他引:3
RNA干扰(RNA Interfering,RNAi),又称RNA干涉,是一种由双链RNA介导的、转录后mRNA水平关闭相应基因表达的序列特异性基因沉默机制,它也是体内基因组抵御外在感染和内部转座的一种保护机制,广泛存在于各种生物,如植物、真菌、昆虫、后生动物和哺乳动物,包括人类。 相似文献
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RNA沉默(RNA silencing)是真核生物中的一种抵抗外源遗传因子(病毒、转座子或转基因)及调控基凶表达的防御机制。参与植物RNA沉默的酶及蛋白质主要包括6种RNA依赖的RNA聚合酶、4种Dicer-like(DCL)核酸内切酶和10种Argonautes蛋白。植物中4条RNA沉默途径分别由微小RNA(miRNAs)和3种小干扰RNA(siRNAs)介导,包括反式作用siRNAs(ta-siRNAs)、天然反义siRNAs(natsiRNAs)和异染色质siRNAs(hc-siRNAs)。在植物RNA沉默的系统性传播中,由DCL4或DCL2将dsRNAs裁剪为次级SiRNAS,以放大RNA沉默信号和增强沉默效应。 相似文献
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目的:克隆辣根过氧化物酶同工酶C基因,为此基因的表达作准备。方法:用PCR方法从辣根的总DNA中扩增得到一种辣根过氧化物酶同工酶C基因HRPC2,通过PCR的方法去除内含子后连接到pMD18-T载体上,测序证明正确后,用限制性内切酶切下目的基因,插入到巴斯德毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建成重组质粒pC2EX9K。再将辣根过氧化物酶同工酶C基因在毕赤酵母中进行克隆、鉴定。结果:重组质粒pC2EX9K转化毕赤酵母后,经PCR鉴定,证明形成了目的基因的克隆。结论:应用毕赤酵母作为受体菌,pPIC9K为载体,成功克隆了HRPC2。 相似文献
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农杆菌介导淀粉分支酶基因RNAi片段转化玉米的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
以玉米自交系“178”和“R18红”的胚性愈伤组织为材料,通过愈伤组织对潮霉素的敏感性实验,确定了潮霉素15 mg/L~25 mg/L为愈伤组织适宜的选择压。利用农杆菌(Agrobacterium tum efaciens)介导将淀粉分支酶基因RNA干涉表达载体转入玉米自交系中,并对农杆菌转化系统的条件进行研究。结果表明:在感染液和共培培养基中分别都加入100μm ol/L乙酰丁香酮和50 mg/L抗坏血酸,农杆菌LBA4404的菌液OD600为0.6、侵染时间20 m in为农杆菌转化的最适条件。对转化的愈伤组织分化诱导出苗后进行PCR检测,证明外源目的基因已整合到玉米基因组中,转化率最高达到2.4%。 相似文献
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枯草杆菌内切葡聚糖酶基因的克隆及表达 总被引:2,自引:0,他引:2
以质粒Puc18为载体,从枯草杆菌(Bacilussubtilis)DB104基因组中克隆到一个内切葡聚糖酶基因。限制酶切分析表明重组质粒中的插入片段为3.5kb,其中各含有一个EcoRI,HindⅢ和PvuⅡ位点。该插入片段含有一完整的内切葡聚糖酶基因,其自身启动子能被大肠杆菌转录系统所识别。当加入lacZα基因启动子的诱导物IPTG后,内切葡聚糖酶表达量提高2.8倍。加入0.5%葡萄糖能抑制该基因的表达。该基因在大肠杆菌DH5αF′中表达的内切葡聚糖酶分布为:胞外67.3%,胞间周质3.9%,胞内28.8%。Southern杂交证实了该插入片段来自供体菌B.SubtilisDB104。 相似文献
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应用聚合酶链反应(PCR),对分离自不同地区、不同宿主来源的26株肾综合征出血热病毒进行了分型,其中包括4个型别的国际标准株,用异硫氰酸胍-酚-氯仿方法从感染的Vero-E6细胞中提取总RNA,设计了5对寡核苷酸引物,一对为汉坦病毒特异性引物;4对为不同型特异性引物。PCR分型表明,26株中除1株Rr可同时被汉坦(HYN)和Seoul(SEO)两型特异性引物扩增外,其余25株分别只被4个型别引物中的一个所扩增,依次为HTN16株,SEO7株,Puumala(PUU)1株,ProspectHill(PH)1株。PCR分型的结果与空斑减少中和试验完全一致,表明PCR可以对肾综合征出血热病毒准成分型。应用限制性内切酶分析了扩增产物,结果与理论基本一致,证实了扩增产物的特异性。 相似文献