灵芝富碘实验中氨基酸含量的探讨

在灵芝ＴＷ液体深层富碘培养过程中,碘元素能显著提高灵芝菌丝体中氨基酸的含量,不富碘的灵芝菌丝体氨基酸含量为２６．９５％,在培养基中添加０．１％碘化钾而获得的富碘灵芝菌线体及富碘锌锗硒灵芝菌丝体氨基酸含量分别为３５．３７％,３５．８６％,另外基氨基酸的组成也相对发生了显著的变化,因而推测碘元素可能是灵芝中某些氨基酸合成过程中的辅基或是其激活因子。     

卫星灵芝液体发酵富集硒锌的研究

研究不同浓度的硒、锌对卫星灵芝菌丝体生长的影响,初步探讨卫星灵芝菌丝体生物富集硒、锌的效应。采用平板培养法及液体发酵法研究锌、硒对卫星灵芝菌丝体生长的影响及富集效应。培养基中不同浓度的亚硒酸钠对菌丝体生长均具有不同程度的抑制作用,但灵芝菌丝体的富硒量随着硒浓度的增加而提高,当亚硒酸钠浓度为40 mg/L时,菌丝体中的生物量、富硒量及富硒转化率最高,分别为1.54%、2 131.55 mg/kg、32.91%;培养基中硫酸锌浓度低于150 mg/L的范围内对卫星灵芝菌丝体生长有明显的促进作用,硫酸锌浓度为60 mg/L时菌丝体中的锌含量和富锌转化率最高,分别为1 142.91 mg/kg、1.76%。培养基中同时添加40 mg/L的亚硒酸钠和60 mg/L硫酸锌,菌丝体生长量1.60%,富硒量301.85 mg/kg,富硒率4.84%;富锌量为540.41 mg/kg,富锌率为5.72%。     

生物富硒对灵芝营养成分的影响

在人工栽培灵芝中,通过外施硒盐以生物转化法获得富硒灵芝,以不同含硒量的富硒灵芝子实体为试样,系统研究了灵芝生物富硒后对其主要营养成分多糖、蛋白质、氨基酸和矿物质等的影响。结果表明：硒可以明显提高灵芝中多糖、蛋白质以及氨基酸的含量,但并不改变灵芝蛋白质的分布和蛋白质中氨基酸的组成配比,而对矿质元素则有不同的影响,如富硒灵芝子实体中人体必需微量营养元素硒有极明显地增加,而铜和钼等人体必需微量元素的含量有一定量的增加,但铁、钙、锶等矿质元素的含量则有所下降。     

灵芝菌丝体富硒条件优化及其硒多糖抗氧化活性研究

利用正交试验对灵芝菌丝体液体发酵富硒条件进行优化,研究培养基中不同碳源、氮源和亚硒酸钠浓度对菌丝体生物量、硒含量、富硒率以及胞外酶活性的影响,此外还对硒多糖的抗氧化活性进行了初步研究。结果表明:当培养基中碳源为20%马铃薯、氮源为2%麸皮、Na_2SeO_3浓度为5 mg/L时,培养基中菌丝生物量最高达到3.86 g/L,硒含量最高为0.576 mg/g,富硒率也达到最高为44.47%。Na_2SeO_3对菌丝生长的影响大于碳源和氮源;同样的Na_2SeO_3对胞外酶活性的影响最大,最优组的POD和PPO酶活性都较其他组高,且随着Na_2SeO_3浓度的升高,其酶活性逐渐降低。富硒灵芝菌丝体粗多糖都具有较强的体外抗氧化活性,通过相关性分析发现,其粗多糖的抗氧化活性与硒含量、富硒率具有显著的正相关。显示硒多糖在食品和药品等领域具有良好的开发利用前景。     

蛹虫草菌产生的胞外多糖及其理化性能和抗氧化活性的初步研究

蛹虫草菌Cordycepsmilitaris在液体发酵条件下可产生胞外多糖,其粗多糖的蛋白含量在14．31％左右,氨基酸含量为13．8％,共有17种氨基酸,水分5％左右,多糖含量大约占80％。蛹虫草菌胞外多糖具有良好的增稠性、触变性、抗盐耐热和对广泛pH的稳定性能。蠕虫草菌丝体及其胞外多糖具有一定的抗氧化活性,在60℃的促进氧化条件下放置7天,0．05％含量的菌丝体及其胞外多糖降低油脂氧化率分别达到18．8％和19．8％。     

灵芝氨基酸研究

采用日立８３５－５０型氨基酸自动分析仪,测定了泰山地区的五种灵芝成品的氨基酸含量。结果表明,除色氨酸被水解破坏而未检出外,其它１７种氨基酸含量丰富,其氨基酸的总含量最高为１２．８７％,低的为４．６７６％,并含有７种人体必需氨基酸,值得深度开发利用。     

等离子体诱变灵芝选育高产纳米硒菌株

本研究应用介质阻挡放电（DBD）等离子体对一种富硒灵芝的原生质体进行诱变,并筛选出高产纳米硒菌株。通过实验,得到优化的等离子体放电条件,如：电压15.6kV、电流1.8mA、放电频率1.8kHz、处理2.5min等,在此条件进行诱变处理,通过随机扩增多态性DNA标记（RAPD）法鉴定,筛选出6株突变菌株。对突变菌株进行传代培养,富硒培养测定菌丝体中硒含量发现突变菌株（H10）与出发菌株相比,菌丝体中纳米硒含量提高了大约30%,从而得到富硒的优良突变菌株。本研究为灵芝提供了一种方便可行的诱变方法,并为灵芝纳米硒相关产品的开发和应用提供了优良菌株。     

斜盖伞诱导子促进灵芝三萜积累及其调控机制

近年来,灵芝产业高速发展,但其主要药效成分灵芝三萜的含量较低,是影响其品质的重要原因,因此探索一种提高灵芝三萜含量的生物技术手段极具应用前景。本研究以6株斜盖伞Clitopilus spp.真菌为材料分别制备多种类型的真菌诱导子,将其添加到灵芝菌丝体液体摇瓶中,研究对灵芝菌丝体生物量和灵芝三萜积累的影响。其中,Clitopilus sp. HSL-YX-7-A的高压灭菌发酵液(HSLFB)、C. hobsonii NL-19的菌丝干粉(NL-19DMP)、C. prunulus 84496的发酵液提取物(84496 FBE)和Clitopilus sp. HSL-YX-7-A的菌丝提取物(HSL ME)显著提高了灵芝菌丝体生物量和灵芝三萜含量,相对于对照组,生物量分别提高了450.09%、64.64%、46.97%和66.14%,灵芝三萜分别提高了53.01%、25.58%、25.17%和20.47%,灵芝三萜总产量则分别提高了585.15%、104.65%、86.43%和110.45%。进一步研究表明,经HSL FB、NL-19 DMP和HSL ME处理后,灵芝三萜生物合成途径关键酶...     

富硒灵芝菌丝多糖、蛋白的提取及其体外抗氧化和抗肿瘤活性研究

灵芝具有较强的硒富集能力，其中的硒元素多以硒多糖、硒蛋白等有机硒形式存在。本研究以灵芝菌丝为研究对象，采用不同方法提取菌丝多糖及菌丝蛋白，探究外源施硒对二者的含量及其抗氧化活性的影响，并初步探究了水提多糖和可溶性蛋白的抗肿瘤活性。结果表明，以硒含量为95μg/mL的培养基发酵得到的菌丝体，其可溶性蛋白及硒含量较高，分别为1.630 8 mg/g和36.905 7μg/g;采用超声辅助碱提法时，多糖含量较高，为32.070 9 mg/g,且该多糖的硒含量为33.864μg/g。与对照组相比，富硒组灵芝菌丝体其多糖和蛋白的抗氧化性较强，且均表现出浓度依赖性。此外，富硒灵芝菌丝体其硒多糖对肿瘤细胞的抑制增殖效果较好，对HCCLM、A549和HSC-3肿瘤细胞的IC₅₀值分别为3.765、3.23和2.267 mg/mL;但其硒蛋白对上述三种癌细胞的增殖抑制效果较差，其IC₅₀值分别为636.987、506.97、555.598μg/mL。     

四川灵芝液体发酵样品两种异黄酮的结构鉴定和生源初探

在明确四川灵芝发酵液中高含量的黄豆苷元和染料木素结构的基础上,建立了HPLC方法检测比较四川灵芝、亮盖灵芝发酵过程中各样品中此类黄酮类成分的含量。结果表明:两种菌丝体中黄豆苷元和染料木素的含量无明显差异;然而在加豆粕粉的四川灵芝发酵液中黄豆苷元和染料木素的含量显著高于加豆粕粉的亮盖灵芝发酵液和不加豆粕粉的四川灵芝发酵液。进而推测,与亮盖灵芝相比,四川灵芝在发酵过程中可能会产生大量的苷键水解酶促进大豆苷和染料木苷的水解,为进一步研究在四川灵芝发酵过程中高含量异黄酮类成分产生的原因打下了基础。     

菌草灵芝孢子油与段木灵芝孢子油中脂肪酸组成的比较研究

利用气相色谱法,对菌草灵芝孢子油与段木灵芝孢子油中脂肪酸组成、不饱和脂肪酸含量等进行了比较研究。结果发现两者脂肪酸GC指纹图谱极为相似(脂肪酸组成基本相同),说明了菌草灵芝孢子油与段木灵芝孢子油一样有同样的开发价值,但是脂肪酸含量不同,菌草灵芝孢子油中亚油酸和油酸占55.61%,不饱和脂肪酸占61.15%;段木灵芝孢子油中亚油酸和油酸占49.87%,不饱和脂肪酸占54.88%。而且两者的外观、气味略不同。     

灵芝三萜类成分与药理学研究进展

灵芝的化学成分有三萜类、多糖、生物碱、有机酸、核苷、氨基酸、酶类及微量元素等 ,其主要成分是三萜类化合物中的灵芝酸。由于灵芝化学成分的多样性 ,使灵芝具有较广泛的药理活性 ,主要包括抗肿瘤作用 ;调节免疫系统、心血管系统、神经系统、呼吸系统的作用 ;保肝、抗衰老、抗病毒、消炎抗菌、放射保护作用 ;清除氧自由基和抗氧化、致突变、活血化淤作用 ;对学习和增强记忆有良好的影响。     

灵芝发酵液的营养保健成分及其在化妆品中的应用

用液体发酵法制取的灵芝发酵液至少含有17种氨基酸、多种矿物质、维生素B_2和多糖,用于生产灵芝洗发剂,对脂溢性皮炎主要临床症状的治疗效果总有效率均在84％以上。     

氨基酸定点突变提高灵芝蛋白LZ-8热稳定性的研究

通过氨基酸定点突变技术提高灵芝免疫调节蛋白LZ-8的热稳定性。通过分子动力学模拟结合温度因子预测对LZ-8氨基酸突变位点进行理性设计,在毕赤酵母X33菌株内构建并表达LZ-8突变体蛋白,采用HeLa细胞生长抑制实验和差示量热扫描分析检测并比较了LZ-8突变前后生物学活性及热力学参数。结果显示,LZ-8 N-端α螺旋为理论预测的温度敏感区域,在该区域进行F8W和R9K氨基酸双位点突变,突变后的LZ-8热稳定性提高,相变温度Tm上升0.92℃,相转变焓值ΔH提高23.14 kJ/mol,但突变后LZ-8生物学活性基本不变,LZ-8和LZ-8突变体对HeLa细胞生长抑制的IC50值分别是2.238μg/mL和2.407μg/mL。通过理性设计氨基酸突变位点,获得了稳定性提高但生物学活性不变的灵芝免疫调节蛋白LZ-8的突变体。     

灵芝转化苦参水提物的3个新生成分体外抗乙型肝炎病毒作用

先在基础培养基中添加苦参水煎汁,然后培养灵芝,得到灵芝培养液,再按乙醇氯仿-5%碳酸氢钠溶液-氯仿的顺序提取培养液中的有机酸成分,用制备高效液相色谱分离,得到6个新组分,用这些组分分别作用于转染了乙型肝炎病毒DNA的2.2.15细胞,用固相放射免疫法测定细胞培养上清液中的乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)的含量,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞的存活率。结果表明,其中的3个组分对2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg有抑制作用,提示可能具有抗乙肝病毒的作用。     

灵芝孢子油脂肪酸组分的分析

采用气相色谱与质谱(GC-MS)联用分析,从超临界CO2萃取孢子油中鉴定出18种脂肪酸成分,包括6种不饱和脂肪酸、7种饱和脂肪酸、2种环链脂肪酸,以及己酸、辛酸、壬酸等短链脂肪酸。GC定量分析结果表明:灵芝孢子油中检出9种已知脂肪酸,不饱和脂肪酸总量为73.6%;其中,主体成分油酸(C18∶1)、亚油酸(C18∶2)和棕榈酸(C16∶0)等含量分别为57.5%、13.4%、19.6%;此外,不饱和脂肪酸十六碳烯酸(C16∶1)、亚麻酸(C18∶3)等不饱和脂肪酸含量为2.2%、0.5%。     

灵芝(Ganoderma lucidum)漆酶基因的克隆及其序列分析

漆酶(laccase EC1·10·3·2)是一种含Cu的多酚氧化酶,自从1883年日本学者吉田首次从漆树汁液中发现以来,漆酶特别是真菌漆酶一直是生物学、化学和环境科学等领域十分活跃的研究热点,在纸浆的生物漂白[1,2],有毒污染物的降解[3~5]等方面有较大的应用价值.根据其来源主要分为漆树漆酶和真菌漆酶两大类,由一个结构相似的基因家族所编码,目前,至少有40个以上的真菌漆酶基因被克隆和测序[6~9],最近也有从细菌中克隆到漆酶基因的报道[10~12].我国幅员辽阔,具有十分丰富的真菌资源,但是我国对漆酶的研究与发达国家相比还十分落后,对于漆酶基因资…     

Cloning and sequence analysis of a glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase gene from Ganoderma lucidum

A cDNA library of Ganoderma lucidum has been constructed using a Zap Express cloning vector. A glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase gene (gpd) was isolated from this library by hybridization of the recombinant phage clones with a gpd-specific gene probe generated by PCR. By comparison of the cDNA and the genomic DNA sequences, it was found that the complete nucleotide sequence encodes a putative polypeptide chain of 338 amino acids interrupted by 6 introns. The predicted amino acid sequence of this gene shows a high degree of sequence similarity to the GPD proteins from yeast and filamentous fungi. The promoter region contains a CT-rich stretch, two CAAT boxes, and a consensus TATA box. The possibility of using the gpd promoter in the construction of new transformation vectors is discussed.     

Cloning and characterization of squalene synthase (SQS) gene from Ganoderma lucidum

This report provides the complete nucleotide sequences of the full-length cDNA encoding squalene synthase (SQS) and its genomic DNA sequence from a triterpene-producing fungus, Ganoderma lucidum. The cDNA of the squalene synthase (SQS) (GenBank Accession Number: DQ494674) was found to contain an open reading frame (ORF) of 1,404 bp encoding a 468-amino-acid polypeptide, whereas the SQS genomic DNA sequence (GenBank Accession Number: DQ494675) consisted of 1,984 bp and contained four exons and three introns. Only one gene copy was present in the G lucidum genome. The deduced amino acid sequence of Ganoderma lucidum squalene synthase (Gl-SQS) exhibited a high homology with other fungal squalene synthase genes and contained six conserved domains. A phylogenetic analysis revealed that G. lucidum SQS belonged to the fungi SQS group, and was more closely related to the SQS of U. maydis than to those of other fungi. A gene expression analysis showed that the expression level was relatively low in mycelia incubated for 12 days, increased after 14 to 20 days of incubation, and reached a relatively high level in the mushroom primordia. Functional complementation of Gl-SQS in a SQS-deficient strain of Saccharomyces cerevisiae confirmed that the cloned cDNA encoded a squalene synthase.