杂色鲍齿舌的显微与亚显微结构

为研究鲍的消化生理学、鲍的齿舌形态构造与鲍健康状况之间的关系,我们采用石蜡切片、Harris苏木素-伊红染色,光学显微技术及扫描和透射电镜技术,较全面地观察研究了杂色鲍的物理消化器官-齿舌的显微与亚显微结构。结果表明：“大龄幼鲍”和“成鲍”的齿舌齿式为：∞+5+1+5+∞,即齿舌由1列中央齿,每边5列侧齿和不定数的缘齿构成。随着鲍龄的增加,齿舌的长带状的基本形态保持不变,但长度和宽度都有所增加,长度的增加是由其齿舌横排数目的增加,舌齿大小的扩大及邻近横排舌齿的间距的增加造成;齿舌宽度的增加是由其舌齿宽度的扩宽,第3到第5侧齿的定期增加,缘齿数目的稳定线性增加造成。     

杂色鲍鳃的显微与亚显微结构

本文采用光镜和电镜方法,研究了杂色鲍（Haliotis diversicolor）鳃的显微和亚显微结构。结果表明,杂色鲍的鳃为一对不等大的双栉状鳃,各鳃由鳃轴和两侧列生的状鳃叶组成,鳃叶上皮为单层上皮组织结构,细胞类型主要为：纤毛细胞、立方细胞、腺细胞;鳃轴上皮为鳃叶上皮的延伸,亦是单层上皮组织,细胞类型主要有：纤毛细胞、微绒毛立方细胞和腺细胞等;鳃叶远轴端游离缘表皮之下,含有几丁质杆支撑的血腔,血腔内可见血细胞及未分化的间充质细胞,血腔之间有平滑肌纤维束和疏松结缔组织,疏松结缔组织内含胶原纤维、纤维细胞、成纤维细胞、脂肪细胞及未分化的间充质细胞等;鳃轴的皮下组织也含有几丁质杆、平滑肌纤维、疏松结缔组织及其间的血腔结构。     

杂色鲍足的显微与超微结构

杂色鲍（Haliotis diversicolor）隶属软体动物门、腹足纲、前鳃亚纲、原始腹足目、鲍科、鲍属。鲍的足是柔韧性很好的器官,它具有运动、支持、感觉与辅助捕获功能,是鲍生活中匍匐和吸附岩石等固着物的重要部位,因其首先接触环境而成为脓疱病、裂壳病、弧菌病等病病原体的主要侵袭部位,这些病可造成十分严重的鲍死亡现象。国内学者对鲍足的研究文献较少,仅有关于皱纹盘鲍（Haliotis discus hannai Ino）足的组织学（崔龙波等,1997）及皱纹盘鲍足的粘液细胞的片断研究（王宜艳等,2004）报道。     

杂色鲍溃疡症的显微及亚显微病理变化

杂色鲍溃疡症组织的病变主要在足部和外套膜 ,皮下结缔组织出现大量空泡变性 ,肌纤维紊乱直至断裂消失 ,细菌在组织间隙生长。发病后期消化系统出现病变 ,消化功能受阻。超微结构观察表明 ,足部、外套膜、消化道组织细胞均发生线粒体肿胀 ,内嵴变少甚至消失 ,存在不同程度的细胞内膜性空泡 ,内质网膨胀 ,核变形 ,提示本病致死原因可能为能量衰竭。     

鳜鱼外周血细胞显微和亚显微结构的观察

本文报道了鳜鱼外周血细胞的显微和亚显微结构。血涂片经过染色,可鉴别出红细胞、血栓细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜中性粒细胞;还见到幼稚的正在分裂的红细胞,提示红细胞亦可在外周血液中通过直接分裂产生。白细胞中,血栓细胞体积最小,嗜中性粒细胞体积最大;单核细胞数目最少,血栓细胞数目最多。电镜下,红细胞中可见线粒体和高尔基复合体;淋巴细胞线粒体中可见类似髓样体的板层状结构;血栓细胞和单核细胞与其它鱼类的基本     

松江鲈鱼皮肤的显微和亚显微结构

采用光学显微镜、扫描电镜和透射电镜,对松江鲈鱼(Trachidermus fasciatus)成体皮肤的显微和亚显微结构进行了观察。结果表明,松江鲈鱼体表不同部位皮肤的厚薄不一,但基本结构相似。皮肤由表皮和真皮层构成。松江鲈鱼的皮肤裸露无鳞,表皮层较薄,由约4～8层细胞构成,主要由复层上皮细胞和黏液细胞及基底细胞组成。表层细胞呈扁平、多边形,细胞之间主要靠桥粒紧密连接,连接处形成增厚的边缘嵴状突起。表皮细胞游离面向内凹陷,表面形成指纹状微嵴。黏液细胞呈圆形或卵圆形,散布在上皮细胞之间。黏液细胞内的黏原颗粒具有椭圆颗粒状、均匀致密的块状和疏松丝状3种不同形态。真皮通过基膜与表皮相连,由稀疏层和致密层构成。真皮结缔组织在腹部较厚而在其他部位较薄。表皮与真皮连接处有色素层,头部、背部、尾柄和体侧皮肤色素细胞分布多,色素层明显,而腹部和颏部皮肤缺少色素。松江鲈鱼黄河群体真皮层中有角质棘状突起,而滦河群体则无。头部、体侧和尾柄处皮肤上还分布有侧线孔和表面神经丘等感觉器官。     

日本白鲫外周血细胞显微及亚显微结构的研究

用光镜和电镜观察了日本白鲫外周血细胞的形态结构和过氧化物酶、糖原在血细胞内的分布。在日本白鲫外周血中，可见到红细胞、淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞和血栓细胞，未发现酸性粒细胞和碱性粒细胞，描述了上述各种血细胞在光镜和电镜观察下的形态和细微结构。对过氧化物酶，中性粒细胞呈阳性反应，对ＰＡＳ处理，淋巴细胞和中性粒细胞均呈阳性反应，中性粒细胞中有３种不同类型的特殊颗粒。     

松江鲈鱼皮肤的显微和亚显微结构观察

采用光学显微镜、扫描电镜和透射电镜,对松江鲈鱼（Trachidermus fasciatus）成体皮肤的显微结构和亚显微结构进行了观察。结果表明,松江鲈鱼体表不同部位皮肤的厚薄不一,但基本结构相似。皮肤由表皮和真皮层构成。松江鲈鱼的皮肤裸露无鳞,表皮层较薄,由约4～8层细胞构成,主要由复层上皮细胞和黏液细胞及基底细胞组成。表层细胞呈扁平、多边形, 细胞之间主要靠桥粒紧密连接,连接处形成增厚的边缘嵴状突起。表皮细胞游离面向内凹陷,表面形成指纹状微嵴。黏液细胞呈圆形或卵圆形,散布在上皮细胞之间。黏液细胞内的黏原颗粒具有椭圆颗粒状、均匀致密的块状和疏松丝状3种不同形态。真皮通过基膜与表皮相连,由稀疏层和致密层构成。真皮结缔组织在腹部较厚而在其他部位较薄。表皮与真皮连接处有色素层,头部、背部、尾柄和体侧皮肤色素细胞分布多,色素层明显,而腹部和颏部皮肤缺少色素。松江鲈鱼黄河群体真皮层中有角质棘状突起,而滦河群体则无。头部、体侧和尾柄处皮肤上还分布有侧线孔和表面神经丘等感觉器官。     

杂色鲍的胚胎发育

杂色鲍（Ｈaliotis diversicolor Reeve）的胚胎发育分为个阶段共３２个发育期,其中,卵裂阶段有１３个时期：受精期、第１极体放出期、第２极体放出期、２细胞分裂早期、２细胞期、４细胞期、８细胞期、１６细胞期、３２细胞期、６４细胞期、１２８细胞期、桑椹期和囊胚期。胚胎发育阶段有４个时期：原肠期、担轮幼体早期、担轮幼体晚期和担轮幼体孵化瞬期、胚后发育阶段有１３个时期：担轮幼体期、面盘幼虫早期、面盘幼体中期、面盘幼体后期、匍匐幼体中期、铺匐幼体后期、围口壳幼体早期、围口壳幼体中期、围口壳幼体后期、上足分化幼体早期、上足分化幼体中期和上足分化幼体后期。幼鲍阶段有２个时期：第１呼吸孔出现早期,和１呼吸孔出现,须适宜水温范围内,随着水温升高,孵化期相应缩短,在水温１８－３４℃条件下,受精卵不同程度都能孵化,但孵化率和孵化时间则有很大差别。在水温18℃时,鲍卵从受精至开始孵化需经历11hr32min,孵化率占2.5‰,平均孵化期为26hr15min,孵化速率为0.0381,周限增长率为1.0010/hr;而在水温22℃条件下,经过7hr30min才开始孵化,平均孵化期为23hr5min,孵化速率为0.0415,周限增长率为1.0202/hr。鲍卵受精后,在水温为23.7-28.5℃、盐度为32.8‰-34.5‰（比重10223-1.0229）的条件下,只需经23－24d能发育为幼鲍（为第一个呼吸孔出现期）。     

发菜的显微及亚显微结构的观察

通过光学显微镜、扫描电镜和透射电镜的观察、了解到一条发菜原植体大约由数十万计的念珠状细胞所组成,其藻丝多为单链,但也发现有分枝现象。整个原植体包被着厚薄不均的胶质鞘,外观粗糙,沟稜状起伏,且多裂隙。念珠状细胞为典型的原核细胞。细胞壁有三层结构,中央为色浅的核质区,四周为细胞质区其中散布着大量膜层薄而散乱的类囊体,膜上附有大量 rRNA 和藻胆体颗粒。还发现有膜层密集形如指纹的小类囊体。在细胞质中还分布着结构颗粒,多角体、聚磷酸体等嗜锇物质结构.一般细胞都具有分裂能力,方式多为横缢,先是细胞壁逐渐向中央扩展,最后将母细胞分成两个子细胞.从异形胞的结构特征来看,主要功能是渡过恶劣环境以保存物种。     

九孔鲍四倍体诱导的研究

采用二倍体鲍卵子,抑制其第一极体、抑制其第一极体和第二极体诱导四倍体,用三倍体鲍卵子与普通鲍精子受精并抑制其第一极体,以及用三倍体鲍的其它方法诱导四倍体。用倍体分析仪检测DNA相对含量以判别其倍性。实验结果,先后共培育出存活的四倍体鲍239个,个体大小为2.5～6.0cm;挑选性腺发育较好的四倍体鲍(包括雌雄),与普通鲍杂交繁育三倍体,先后共培育出10批次,培育出的苗量共计15.8万个。     

Development of 11 polymorphic microsatellite loci in the small abalone (Haliotis diversicolor Reeve)

Eleven polymorphic microsatellite loci for Haliotis diversicolor were isolated and characterized from (CT)(n) - and (AC)(n) -enriched library. They were tested in 24 individuals from a natural population. All of them were polymorphic, with the number of alleles varying between three and 10. The observed heterozygosities and expected heterozygosities ranged from 0.083 to 0.913 and from 0.159 to 0.856, respectively. The 11 isolated microsatellite loci, except SA-JMU6 and SA-JMU12, followed Hardy-Weinberg expectations. Seven sets of primers also amplify in closely related species, H. ovina and H. asinine. These 11 polymorphic microsatellites will be useful for analysing the population structure and genetic diversity in H. diversicolor.     

三丁基锡暴露条件下杂色鲍肝胰腺均一化cDNA文库的构建

用RDP试剂提取三丁基锡暴露诱导的杂色鲍肝胰腺总RNA,经Oligotex纯化得到 mRNA;应用SMART技术合成双链cDNA,双链特异核酸酶(DSN)进行双链cDNA的均一化,构建了杂色鲍三丁基锡暴露诱导下的均一化cDNA文库.原始文库的库容为4.3× 106 CFU/ml,重组率为 97.9%.从文库中随机挑选了3 288个克隆进行测序,得到3 048个高质量EST序列,其中有 370条 Contigs,2 103条 Singlets,Unigenes共 2 473条,冗余率为18.86%.以上结果说明该文库质量较好,为进一步筛选相关功能基因打下基础;较低的冗余率说明该文库值得继续使用大规模ESTs测序的方法寻找相关功能基因,并为进一步使用基因芯片技术研究相关功能基因的表达谱提供便利.     

耳鲍精子的超微结构

本文利用透射电子显微镜对耳鲍(Haliotis asinina Linnaeus)精子的形态及超微结构进行了研究.研究结果表明:耳鲍的精子由头部、中段和尾部三部分组成,全长 41.6 μm.精子头部长 1.8 μm,头部由顶体、顶体下腔和细胞核组成,顶体电子密度比较均匀,呈圆锥形,长 0.6 μm,基部宽度为 0.65 μm,占头部长的 1/3;顶体下腔长 0.03 μm,宽为 0.65 μm,腔中含有中等电子密度物质;细胞核圆棒状,长 1.17 μm,核中部的宽度为 1.0 μm.精子中段较短,长 0.51 μm,宽 1.2 μm,主要由 5 个线粒体包围一对中心粒构成.尾部是一根鞭毛,从前到后逐渐变细,鞭毛是由细胞质膜包被的轴丝组成,轴丝为典型的"9 2"微管结构,即轴丝是由两个中心微管及均匀分布在中心微管周围的 9 对双联体微管组成.因此,耳鲍与其它鲍类精子的基本结构相似,形态结构的主要差异表现在三个方面:一是耳鲍精子的头部似圆锥形,长 1.8 μm,是目前已研究的鲍类中头部最短的种类;二是耳鲍精子顶体长比其基部宽要小,顶体电子密度比较均匀,顶体与核的电子密度差异不明显;三是耳鲍精子中段线粒体的数量为 5 个,没有发现 6 个线粒体现象的存在[动物学报 53(3):552-556,2007].     

Genetic changes in muscle protein following hybridization between Haliotis diversicolor reeve Japan and Taiwan populations revealed using a proteomic approach

Protein expression patterns were compared in a Japan and Taiwan population of Haliotis diversicolor and in a hybrid between them using 2DE and MALDI‐TOF‐TOF analyses. Using the software PDQuest, 924 ± 7 protein spots were detected in the Japan population (RR), 861 ± 11 in the Taiwan population (TT), and 882 ± 9 in the F₁ hybrid (TR). RR and TR were clustered together, but the distance between RR and TT was the maximum using hierarchical cluster analysis. A total of 46 gel spots were identified and a total of 15 spots matched with abalone proteins (a 33.6% identification rate). Hybrid exhibiting additivity or overdominance accounted for 73.9% of these 46 identified proteins. The 46 differentially expressed proteins were shown to be involved in major biological processes, including muscle contraction and regulation, energy metabolism, and stress response. The proteins involved in energy metabolism included adenosine triphosphate (ATP) synthase β subunit, fructose 1, 6‐bisphosphate aldolase, triosephosphate isomerase, enolase, arginine kinase, and tauropine dehydrogenase. These proteins exhibited additivity in their offspring. The proteins involved in stress responses included HSP Hsp70 (exhibiting overdominance in the offspring) and Cu/Zn‐superoxide dismutase (exhibiting additivity). These results suggested that proteomic approach is suitable for analysis of heterosis and functional prediction of abalone hybridization.     

南方九孔鲍鲍苗掉板病原菌的药敏测定

为提高鲍鱼培苗的成活率,对分离自广东汕尾一养殖场鲍苗掉板池中(包括水、藻膜和变白鲍苗)的、经回归感染试验证明为致病菌的菌株进行了鉴定和药物敏感性测定。API鉴定表明,这些致病菌株由Vibrio alginolyticus,Vibrio cholerae,Vibrio parahaemolyticus等组成,其中弧菌17株,约占总分离菌株的50％,而溶藻弧菌则为弧菌的优势菌株,有11株,约占弧菌总数的70％。药敏结果显示,绝大多数菌株对链霉素、红霉素和庆大霉素敏感;相反,四环素和新生霉素则对它们没有作用或不敏感。     

斜带石斑鱼胸腺的显微和超微结构

本文通过解剖及组织切片技术、光学显微镜、透射和扫描电子显微镜技术,对斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)胸腺器官组织进行了观察研究。结果表明:斜带石斑鱼胸腺实质主要由胸腺细胞(淋巴细胞)和网状上皮细胞构成。鱼体从Ⅰ龄之后,其胸腺发生明显的变化,与幼鱼有所不同,主要是胸腺可明显区分为三个区域:胸腺外皮质区、内皮质区和髓质区。外皮质区主要由网状上皮细胞、黏液细胞、成纤维细胞和少量淋巴细胞构成,细胞排列疏松;内皮质区主要由密集的淋巴细胞和网状上皮细胞组成,以含有大量的淋巴细胞为特征;髓质区主要由淋巴细胞和较多的网状上皮细胞构成,总体特征是淋巴细胞数量比内皮质区的少,且细胞排列较疏松。外皮质区、内皮质区相当于高等脊椎动物的皮质;髓质区相当于高等脊椎动物的髓质。髓质区之下有结缔组织,在Ⅱ龄以上的成体出现胸腺小体(Hassall's corpuscles)或类似胸腺小体的结构,而且随着年龄的增加,胸腺外皮质区增厚,结缔组织增加,还表现在内皮质区和髓质区组织逐渐萎缩变薄,胸腺的细胞组成类型和淋巴细胞数量上有所变化等等。这些现象在Ⅱ龄鱼开始出现,即胸腺呈现退化迹象,在Ⅲ龄以上鱼体呈现明显的退化和萎缩。胸腺表面扫描电镜结果表明:其上皮细胞表面具有微嵴以及由微嵴组成的指纹状结构,有一些微孔分布。透射和断面扫描电镜的结果进一步表明:胸腺组织内的细胞成分复杂,除了淋巴细胞和网状上皮细胞外,还具有巨噬细胞、肥大细胞、肌样细胞、浆细胞、指状镶嵌细胞和纤维细胞等。