HIF-1α激活的长链非编码RNA-ANRIL与肺腺癌的关系的研究

目的:现已经证实缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1,HIF-1α)与肺腺癌(lung adenocarcinoma,LA)侵袭性有关。INK4基因座中反义非编码RNA(CDKN2B antisense RNA 1,ANRIL)是目前确认的能够促进肿瘤发生发展的一种长链非编码RNA(long noncoding RNA,lnc RNA)。而本研究即探究在肺腺癌中HIF-1α与ANRIL之间是否存在一定的联系。方法:利用实时定量PCR技术(quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测人体肺腺癌组织和肺腺癌细胞系A549中HIF-1α和ANRIL的表达水平,然后利用小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)和基因过表达技术使HIF-1α低量和过量表达,再检测肺腺癌细胞系A549中ANRIL表达水平的变化。结果:ANRIL和HIF-1α在人体肺腺癌组织和肺腺癌细胞系A549中的表达水平呈现正相关,而且ANRIL和HIF-1α在癌组织中的表达水平均高于癌旁组织,并且通过HIF-1α的低量和过量表达,ANRIL亦呈现相应的变化。结论:ANRIL和HIF-1α在肺腺癌组织中的表达具有相关性,而且HIF-1α能够刺激激活ANRIL的表达,因此ANRIL-HIF-1α可能为肺腺癌的诊疗提供一个崭新的靶点。     

RNA干扰HIF-1α影响宫颈癌HeLa细胞上皮细胞间质变标记蛋白的研究

目的 通过RNA干扰技术沉默人宫颈癌HeLa细胞缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）的表达,在细胞水平研究HIF-1α对宫颈癌HeLa细胞上皮细胞-间质变标记蛋白（E-cadherin,N-cadherin,vimentin）表达的影响.方法 将人宫颈癌HeLa细胞株（H0细胞）、转染pGenesil-1空白质粒的HeLa细胞株（H1细胞）及转染HIF-1α-shRNA质粒的HeLa细胞株（H2细胞）分别行常氧及缺氧（150 μmol/L CoCl2培养12 h）培养,应用Western印迹、免疫细胞化学法检测每组HeLa细胞中HIF-1α、上皮标记蛋白E-cadherin、间质标记蛋白vimentin、N-cadherin的表达情况.结果 Western印迹分析各缺氧组HIF-1α、E-cadherin、vimentin及N-cadherin的平均光密度值,免疫细胞化学显示H0细胞、H1细胞缺氧时HIF-1α、N-cadherin、vimentin蛋白高表达,而E-cadherin低表达,H2细胞在乏氧时HIF-1α、N-cadherin、vimentin蛋白表达显著减弱,而E-cadherin高表达.结论 通过shRNA干扰抑制人宫颈癌HeLa细胞HIF-1α,可一定程度上抑制乏氧环境中宫颈癌HeLa细胞上皮细胞-间质变.     

MicroRNA-18a通过HIF-1-alpha调控缺氧引起的人肺动脉平滑肌细胞增殖

目的：研究microRNA-18a (miR-18a) 对缺氧引起的人肺动脉平滑肌细胞(human pulmonary artery smooth muscle cells, hPASMCs)增殖的调控作用及其可能机制。方法：体外培养hPASMCs,分为未转染组、miR-18a 模拟物对照组、miR-18a 模拟物组、 miR-18a 抑制剂对照组、miR-18a 抑制剂组、siRNAcontrol组、siHIF-1-alpha组、miR-18a 抑制剂和siHIF-1-alpha共转染组。分别于常氧(21% O2)和低氧(3%O2)作用24小时。采用CCK-8 法检测细胞的增殖情况,萤光素酶报告基因系统验证缺氧诱导因子-1-alpha(HIF-1alpha)是 否为miR-18a 的靶基因,并通过western-blot 以及实时荧光定量PCR 技术检测相关蛋白和基因的表达。结果：缺氧可促进 hPASMCs 增殖,使miR-18a 表达减少;miR-18a 模拟物可抑制hPASMCs 增殖,而miR-18a 抑制剂可促进hPASMCs 增殖;抑制 miR-18a 可使HIF-1-alpha的表达上调。同时抑制miR-18a 和HIF-1-alpha,可使miR-18a 对hPASMCs 增殖调控的能力消失。结论：缺氧通 过抑制miR-18a,上调HIF-1-alpha的表达,促进hPASMCs增殖。     

VEGF、HIF-1α、Vasohibin在子宫内膜腺癌血管生成中的作用及与预后的关系

目的通过研究血管内皮生长因子(vascular endometrial growth factor,VEGF)、缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)和vasohibin在正常子宫内膜(normal endometrium,NE)和子宫内膜样腺癌(endom-etrioid adenocarcinoma,EA)组织中的表达,探讨上述指标与间质微血管密度(microvessel density,MVD)、EA临床病理特性及预后的关系。方法采用免疫组化Envision二步法检测105例EA和20例NE组织中VEGF、HIF-1α、vasohibin和MVD的表达。分析各指标相互之间及与EA临床病理特性和预后间的关系。结果(1)EA组中,VEGF、HIF-1α和MVD的表达明显高于NE组(P0.05),vasohibin的表达明显低于NE组(P0.01)。(2)VEGF、HIF-1α和MVD的表达与EA的手术病理分期相关(P0.05)。(3)在EA组,除vasohibin外,VEGF、HIF-1α和MVD三者的表达量两两间均呈正相关(P0.05)。(4)98例有完整随访资料患者的5年生存率为87.8%,VEGF、HIF-1α及vasohibin表达阳性组与阴性组5年生存率无显著性差异;MVD高表达组5年生存率明显低于MVD低表达组(P0.05)。结论异常增生的微血管与EA发生、发展及预后有关。VEGF、HIF-1α、vasohibin三者间动态平衡的失调促进了EA组织中的微血管生成,重建三者间的正常调节关系,刺激vasohibin的表达,可能是EA治疗的一个靶点。     

缺氧条件下人脐带源性间充质干细胞增强缺氧诱导因子-1α表达促进肺腺癌细胞增殖

目的探讨缺氧条件下缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α, HIF-1α)在人脐带源性间充质干细胞(human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells, hucMSCs)促进肺腺癌A549细胞增殖过程中的可能机制。方法分离培养和鉴定hucMSCs,分别与肺腺癌A549细胞、干扰了HIF-1α基因的A549细胞在常氧或缺氧条件下进行共培养,荧光定量PCR和Western blot法分别检测HIF-1α和生存素(survivin)表达水平,MTT法检测细胞增殖力,划痕实验分析细胞迁移力。结果 MTT和划痕实验检测显示,常氧条件下,hucMSCs共培养的A549 细胞增殖能力、迁移能力较无hucMSCs共培养的细胞明显减弱;缺氧条件下,A549 细胞增殖力和迁移力较常氧培养的A549 细胞明显增强,hucMSCs共培养使二者进一步增强,沉默HIF-1α则使二者减弱,hucMSCs共培养不改变沉默HIF-1α对细胞增殖力和迁移力的影响。荧光定量PCR和Western blot检测显示,缺氧培养时,A549 细胞内HIF-1α和survivin表达明显上调,hucMSCs共培养明显增强缺氧对HIF-1α和survivin表达的上调作用;沉默HIF-1α抑制缺氧对A549细胞HIF-1α和survivin表达的上调,hucMSCs共培养不改变沉默HIF-1α对HIF-1α和survivin表达上调的抑制。结论缺氧条件下,hucMSCs共培养导致肺腺癌A549细胞HIF-1α和survivin表达上调,从而使A549细胞的增殖和迁移能力增强。     

缺氧诱导因子-1在非小细胞肺癌胸水中的表达及其与肿瘤血管生成的关系

目的探讨缺氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)在非小细胞肺癌胸水细胞中的表达及其与肿瘤血管生成的关系。方法利用免疫组织化学、免疫细胞化学分别检测1180例非小细胞肺癌标本中HIF-1α和HIF-1β蛋白的表达以及非小细胞肺癌胸水细胞中血管生成标记物CD34和VEGF的表达情况,其中包括1060例非小细胞肺癌胸水标本以及用于对照的120例肺穿刺非小细胞肺癌组织标本。结果 HIF-1α在非小细胞肺癌穿刺组织中的表达率72.50%(87/120)明显高于非小细胞肺癌胸水中表达率17.55%(186/1060),差异有统计学意义(P0.05);HIF-1β在非小细胞肺癌穿刺组织中的表达率为77.50%(93/120),而在非小细胞肺癌胸水中表达率为81.42%(863/1060),差异无统计学意义(P0.05);CD34、VEGF在非小细胞肺癌胸水细胞中阳性表达率分别为77.92%(826/1060)、82.92%(879/1060)。HIF-1α与HIF-1β的表达呈显著正相关(r=0.093,P=0.002),HIF-1α与VEGF的表达呈显著正相关(r=104,P=0.001),HIF-1β与VEGF的表达无相关性(P0.05)。结论 HIF-1α在非小细胞肺癌穿刺组织与非小细胞肺癌胸水中的差异性表达,可能与非小细胞肺癌胸水细胞缺氧适应性调节有关,HIF-1与肿瘤血管生成密切相关。     

缺氧诱导因子-1 α（HIF-1α）与卵巢癌多药耐药的关系

卵巢癌是常见的妇科恶性肿瘤,其死亡率居妇科肿瘤之首。化疗是其重要的治疗手段,而随之产生的肿瘤细胞多药耐药成为治疗失败的主要原因。低氧是所有实体肿瘤的特征,缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)是介导细胞低氧反应最关键的核转录因子,对卵巢癌多药耐药的形成起到多方面的作用,本文就近年来以HIF-1α为靶点研究卵巢癌耐药的研究进展作一综述。     

小干扰RNA干扰缺氧诱导因子-1α增强口腔鳞癌细胞株化疗敏感性

目的:探讨针对缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的小干扰RNA(siRNA)对口腔鳞癌细胞(OSCC)化疗敏感性的影响。方法:用Western印迹检测OSCC和针对HIF-1α基因的siRNA导入OSCC后的HIF-1α蛋白表达水平;用MTT法检测细胞对化疗敏感性的影响;用流式细胞术检测化疗诱导细胞凋亡的凋亡率。结果:HIF-1α在OSCC中高表达,HIF-1α-siRNA转染后HIF-1α表达水平明显下降,细胞对化疗敏感性明显提高,化疗诱导肿瘤细胞凋亡率明显增加。结论:针对HIF-1α基因的siRNA能明显降低HIF-1α的表达,增强化疗对OSCC的凋亡诱导作用,有效提高OSCC对化疗的敏感性。     

长链非编码RNA UCA1与肿瘤耐药

作为针对恶性肿瘤的有效治疗方式,化疗已被广泛用于治疗各种恶性肿瘤。虽然化学治疗提高了患者的存活率及预后水平,但肿瘤迅速形成的多药耐药会导致治疗失败。近年发现,作为促多药耐药基因的lncRNA UCA1介导多种肿瘤形成耐药。该文回顾了UCA1在肿瘤耐药中的研究进展,并展望了该领域未来的发展及面临的挑战。     

基于RNA干扰CMTM7 对肺腺癌A549细胞凋亡的影响

目的:探讨基于RNA干扰CMTM7对肺腺癌A549细胞凋亡的影响。方法:选择肺腺癌A549细胞株分为si RNA组、阴性对照组与空白对照组,在对数生长的A549细胞中转染RNA干扰CMTM7载体、脂质体空载体和不进行转染,观察A549细胞的生长、凋亡与细胞周期状况。结果:MTT实验显示si RNA转染组的抑制率明显高于阴性对照组和空白对照组(P0.05),阴性对照组与空白对照组的对比无明显差异(P0.05)。流式细胞术实验表明si RNA转染组的细胞凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组(P0.05),阴性对照组与空白对照组的对比无明显差异(P0.05)。流式细胞术实验表明si RNA转染组的G0/G1期细胞数目较阴性对照组和空白对照组增多明显(P0.05),同时si RNA转染组的S、G2/M期细胞数目较阴性对照组和空白对照组明显减少(P0.05),阴性对照组和空白对照组对比差异无统计学意义(P0.05)。结论:RNA干扰CMTM7能够促进肺腺癌A549细胞凋亡,抑制肿瘤细胞的生长,其作用机制可能通过干扰细胞周期而实现。     

Long Noncoding RNA Expression Profiling Reveals Upregulation of Uroplakin 1A and Uroplakin 1A Antisense RNA 1 under Hypoxic Conditions in Lung Cancer Cells

Hypoxia plays important roles in cancer progression by inducing angiogenesis, metastasis, and drug resistance. However, the effects of hypoxia on long noncoding RNA (lncRNA) expression have not been clarified. Herein, we evaluated alterations in lncRNA expression in lung cancer cells under hypoxic conditions using lncRNA microarray analyses. Among 40,173 lncRNAs, 211 and 113 lncRNAs were up- and downregulated, respectively, in both A549 and NCI-H460 cells. Uroplakin 1A (UPK1A) and UPK1A-antisense RNA 1 (AS1), which showed the highest upregulation under hypoxic conditions, were selected to investigate the effects of UPK1A-AS1 on the expression of UPK1A and the mechanisms of hypoxia-inducible expression. Following transfection of cells with small interfering RNA (siRNA) targeting hypoxia-inducible factor 1α (HIF-1α), the hypoxia-induced expression of UPK1A and UPK1A-AS1 was significantly reduced, indicating that HIF-1α played important roles in the hypoxia-induced expression of these targets. After transfection of cells with UPK1A siRNA, UPK1A and UPK1A-AS1 levels were reduced. Moreover, transfection of cells with UPK1A-AS1 siRNA downregulated both UPK1A-AS1 and UPK1A. RNase protection assays demonstrated that UPK1A and UPK1A-AS1 formed a duplex; thus, transfection with UPK1A-AS1 siRNA decreased the RNA stability of UPK1A. Overall, these results indicated that UPK1A and UPK1A-AS1 expression increased under hypoxic conditions in a HIF-1α-dependent manner and that formation of a UPK1A/UPK1A-AS1 duplex affected RNA stability, enabling each molecule to regulate the expression of the other.     

长链非编码RNA 在乳腺癌中的研究进展

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,且其发病率呈逐年上升的趋势,尽管随着诊疗技术的进步,乳腺癌的死亡率得到了实质性的降低,但它仍是女性肿瘤死亡的第二大原因,目前对乳腺癌的治疗还面临很大的挑战。长链非编码RNA(Longnon-codingRNA,LncRNA)是一类长度超过200个核苷酸的非编码RNA分子,缺乏开放的阅读框,无编码蛋白质的功能。近年来研究发现,LncRNA可能在多种恶性肿瘤的发生、发展、侵袭及转移过程中起调控作用,且目前对其与乳腺癌的关系研究较多,对LncRNA与乳腺癌相关性的研究有望为乳腺癌的诊治提供新思路。现就LncRNA在乳腺癌中的研究进展做一综述。     

p53 Activates the Long Noncoding RNA Pvt1b to Inhibit Myc and Suppress Tumorigenesis

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基于在线数据库和真实世界样本探讨肺腺癌患者POLE/POLD1突变的临床意义

摘要 目的：POLE和POLD1突变导致DNA聚合酶校对功能丧失可能会影响基因组稳定性并导致突变增加和肿瘤形成。本文结合在线数据库和真实世界样本进一步分析肺腺癌（LUAD）患者POLE和/或 POLD1 突变的临床意义。方法：纳入2021年1月～2021年8月徐州医科大学附属医院肺癌术后组织标本115例,利用二代测序技术（NGS）检测基因突变;从癌症基因组图谱（TCGA）数据库收集肺腺癌数据集,通过Cbioportal在线数据库获得肿瘤突变分布图,通过Cibersort法计算获得样本的免疫相关细胞浸润情况。结果：真实世界样本中POLE/ POLD1突变的比例为7.83%（9/115）。TCGA数据显示POLE/POLD1突变的LUAD患者总生存期（OS）减少（P=0.0359）。然而,携带该突变的患者并发其他基因改变的频率明显增加,尤其是与TP53突变存在正相关;同时,POLE/POLD1突变与LUAD组织浸润性免疫杀伤细胞呈正相关,与免疫抑制细胞呈负相关,提示这部分患者对免疫检查点抑制剂（ICI）敏感。结论：LUAD患者POLE/POLD1突变预示较高的肿瘤突变负荷和免疫微环境改变,可作为ICI疗效预测的潜在生物标志物,值得临床关注。     

溶瘤腺病毒转染内皮祖细胞抑制肺腺癌的研究

目的:利用溶瘤腺病毒CNHK500体外转染内皮祖细胞,评估其在体外对肺腺癌细胞的特异性杀伤作用。方法:通过溶瘤腺病毒CNHK500转染内皮祖细胞,构建携带CNHK500的内皮祖细胞,并将内皮祖细胞和CNHK500分为三组,即CNHK500组,转染CNHK500的内皮祖细胞组和内皮祖细胞组,分别感染肺腺腺癌细胞A549,用MTT法检测不同肺腺癌细胞A549的生长抑制情况。结果:成功的分离并培养、鉴定内皮祖细胞,并完成CNHK500对内皮祖细胞的转染,CNHK500滴度为2.0×107 pfu/m L,其中CNHK500组肺腺癌细胞A549的存活率为(75.54±5.46)%,转染CNHK500的EPCs组肺腺癌细胞A549的存活率为(80.81±3.69)%,EPCs组肺腺癌细胞A549的存活率为(98.13±2.98)%。结论:本实验首次成功的将CNHK500转染内皮祖细胞,并应用于肺腺癌细胞的生长抑制中,这将有助于为肺腺癌的生物治疗提供一个崭新的策略。