不同单位保种的艾氏腹水癌细胞核型及DNA含量的比较研究

目的 比较研究三个单位保种的艾氏腹水癌细胞（EAC）染色体数目及DNA含量。方法 取腹腔接种EAC 6 d的KM小鼠,腹腔注射秋水仙碱,取腹水,经低渗处理,固定后涂片,染色,显微镜下染色体计数;腹水传代的EAC,用70%乙醇固定,流式细胞仪测DNA含量。结果 山东省医学科学院药物研究所（山东）、武汉大学典型培养物保藏中心（武汉）和北京市肿瘤研究所（北京）保种的艾氏腹水癌细胞株,其染色体均数分别为28.31±7.78、29.16±12.25、23.22±10.21条,方差分析表明,除北京与山东外,武汉与北京、武汉与山东两两比较有极显著差异（P<0.01）。直方图分析显示主流染色体范围分别为25-27、22-24、22-24条。北京艾氏腹水癌细胞 DNA含量最多,山东艾氏腹水癌细胞DNA含量最少。结论 三个单位的艾氏腹水癌细胞株在某些方面已出现差异。     

匙吻鲟的细胞遗传学分析

采用体内注射PHA和秋水仙素,肾细胞短期培养,常规空气干燥法制备匙吻鲟(Polyodon spathula)的染色体标本.对其肾细胞染色体数目统计分析表明,匙吻鲟染色体组南120条染色体所组成.以测得的核型参数和按Levan,et al.提出的染色体划分标准得出:具有22对中部着丝粒染色体(m),16对亚中部着丝粒染色体(sm),22对亚端部着丝粒染色体(st)和端部着丝粒染色体(t);染色体臂数(NF)为196,核型公式为44 m + 32am + 44st,t.再采用流式细胞仪分析系统测定匙吻鲟体细胞的DNA含量,与鸡血细胞标准对照相比为2.69±0.19,以鸡红细胞DNA含量2.3 pg/N测算.则匙吻鲟体细胞DNA含量为6.18 pg/N.根据所得到的结果并结合已发表的鲟鱼类DNA含量和染色体资料,判定匙吻鲟为四倍体物种.鲟形目伍类全部为多倍体起源的鱼类,在细胞水平的进化比较特殊,以染色体加倍的方式进行.染色体加倍及分化,可能是造成鲟形目鱼类种类较多及多倍体类型(4n、8n、12n等)丰富的主要原因.     

生物素标记的6种cDNA探针检测S180及其克隆细胞株mRNA的表达

目的检测S180及其克隆细胞株S1B11及S2D9mRNA的表达,对这些细胞株进行识别和质量控制.方法用生物素标记的6种cDNA探针,细胞玻片原位杂交的方法检测细胞中mRNA的表达.结果北京市肿瘤研究所(肿瘤所)保存的S180与生物素标记的P16、c-fos、c-myc及c-jun探针杂交阳性,克隆细胞株S1B11与c-fos及c-jun探针杂交阳性,克隆细胞株S2D9与c-fos、c-myc及c-jun探针杂交阳性.结论肿瘤所S180及其2株克隆细胞中mRNA的表达不同,c-myc基因的表达与否可以把S1B11及S2D9克隆细胞区别开;细胞株致瘤性与癌基因表达有关.     

对5个S180克隆细胞株RAPD特征的研究

目的运用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术建立S180的5个克隆细胞株的特异性图谱。方法运用23条引物对S180-S2D9、S180-S2D7、S180-S1F11、S180-S1H10、S180-S1B115个克隆细胞株的基因组DNA进行RAPD-PCR扩增,以琼脂糖电泳观察结果。结果筛选出3条在各克隆株扩增产物间有差异的引物。结论5个S180克隆细胞株的RAPD特征有明显区别。     

三单位保存的艾氏腹水癌细胞株及克隆细胞蛋白质表达

目的　比较三个单位保存的艾氏腹水癌 (EAC)细胞株及克隆细胞的蛋白质表达。方法　对北京市肿瘤研究所 (北京 )保存的EAC进行克隆培养 ,从中选出 5株克隆 ;对武汉大学保种中心 (武汉 )、山东省医学科学院药物研究所 (山东 )及北京保存的EAC细胞株及 5株克隆细胞的SDS PAGE电泳图谱及免疫组化蛋白质分布进行了对比。结果　武汉、山东及北京保存的EAC的电泳条带数分别为 2 2、2 5及 2 8条 ,而克隆细胞E2G8为 2 6条带。三单位EAC瘤细胞对 5种抗体做免疫组化染色 ,与 1株抗体反应的阳性细胞比例均较高 ,差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,与另 4种抗体反应的阳性细胞率差异有显著性 ;5株克隆细胞对 10种抗体作免疫组化染色 ,其中克隆细胞E2G8、E2F4与 7种抗体反应阳性 ,E2C6与 8种抗体反应阳性 ,E1G5、E2B5与 6种抗体反应阳性。克隆细胞一旦与某种抗体反应阳性 ,阳性细胞的比例即在 85 %以上。结论　不同单位保存的EAC细胞株及克隆细胞株蛋白质表达有差异     

S180克隆细胞株的选择及其细胞特性研究

目的 对北京市肿瘤研究所及本实验动物学部保存的S180进行了克隆培养,根据克隆细胞的腹水生长特性,从中选出8株克隆,对不同克隆S180细胞的特性进行研究。方法 免疫组化法测不同克隆细胞的蛋白质分布,流式细胞仪测定不同克隆细胞的DNA含量,扫描电镜观察克隆细胞表面结构,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测克隆细胞的电泳图谱。结果 其中3株克隆从可见腹水之日起,腹水即为血性;1株微显血性;4株在接种腹腔7日内腹水无血性。扫描电镜观察6株克隆细胞表面结构,各具特点,有所不同。流式细胞仪测定6株不同S180克隆细胞DNA含量,分别为8.5, 9.3,7.9,8.5,8.6,8.3pg。免疫组化染色显示不同克隆与11种抗体反应有所不同,一旦与某抗体反应阳性,则阳性细胞比率均在97%以上。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定克隆细胞S1H10及S2D9的电泳图谱,S1H10克隆细胞有33条带,S2D9克隆细胞有30条带。 结论 8株克隆细胞各具特点。     

应用荧光原位杂交(FISH)技术研究黑叶猴染色体易位

本文应用染色体荧光原位杂交(FISH)技术,利用人9号和14号染色体特异探针,对深低温冻存和长期传代的黑叶猴细胞株染色体畸变进行了分析.确定在长期冻存和传代过程中,一些黑叶猴细胞在No.12和No.17染色体之间发生了易位,一条 No.17染色体发生断裂,断裂点在17q13,断裂片段17q13-17qter易位到一条 No.12染色体长臂末端,形成一条小的中着丝粒的和一条具较长长臂的衍生染色体即 der(17) 和 der(12).结果表明,荧光原位杂交技术用人染色体特异探针不仅能检测出人类染色体畸变,也能有效地检测灵长类动物染色体畸变.     

施氏鲟的核型及DNA含量研究

采用体内注射小牛血清、肾组织细胞短期培养、常见空气干燥法制备了施氏鲟(Acipenser schrencki Brandt)的染色体,并进行了核型分析。施氏鲟二倍体的染色体为238±8条,其核型为78m+12sm+28st,t+120±mc,NF :328±。以外周血红细胞为样本,鸡的红细胞为对照,用美国产的FACStar Plus流式细胞仪测定了施氏鲟二倍体细胞核的DNA含量, 其DNA含量为鸡的5.06倍,绝对含量为11.73±0.68pg/N。 Abstract:Metaphase chromosome specimens of Amur Sturgeon,injected with fetalcalf serum,were prepared from short-term culture of kidney cells with air-drying technique.Its diploid chromosome number is 2n=238±8.Karyotype consists of 78m+12sm+28st,t+120±mc,NF:328±.Diploid nucleus DNA content was measured from the peripheral erythrocytes,using flow cytometer(FACStar Pus,made in USA)and erythrocytes of chick(Gallus sp)as internal standard.DNA content of the fish is 11.73±0.68pg/N and the ratio to that of chickens is 5.06.     

淡色库蚊幼虫在发育过程中唾液腺细胞核DNA变化的细胞化学研究

(1)应用DNA—孚尔根细胞光度术与。~3H-TdR放射自显术相结合的方法分析每一细胞,发现在库蚊幼虫早期发育中,唾液腺细胞核DNA含量基本上呈2~n倍数增加。但在各龄期中均有一定比例的U细胞,其DNA含量虽偏离2~n倍数,但并非正在合成DNA;四龄后期此种细胞可达60%以上,并相应地在染色体上不同区域观察到DNA的不同积累,表明在库蚊幼虫唾液腺细胞核内DNA存在不均等复制。(2)用细胞光度法测定了库蚊精原细胞,脑神经节细胞分裂中期染色体和精子DNA含量,算得每单倍体DNA含量0.568微微克。以此为确定倍数值的基数,显示一龄幼虫唾液腺细胞核DNA含量主要为16C,二龄居于16C—32C之间,三龄64C,四龄居于128C—256C之间,最高倍数值860C。(3)放射自显术显示,连续复制居于S期的前期和中期,合成染色体大部分DNA;不连续复制居于S期的后期,合成的DNA所占比例较低。     

615小鼠白血病(L615)细胞株的建立

利用血细胞进行连续传代培养,建立细胞株是比较困难的。但是,某些白血病,特别是病毒诱发的白血病,利用组织培养方法有可能建成悬浮式生长的细胞株。然而,这种细胞往往是不成熟的细胞。615小鼠白血病模型(L615)是我国建立的一株网织细胞型白血病实验模型(用津638病毒诱发产生的)。我们用这个材料体外培养14个月,细胞传代120代,建成了一个静置悬浮培养的白血病网织型细胞株。它除了包含有白血病615小鼠原Bj标记染色体之外翻,在第1对染色体中的一条丢失了一段,第6对染色体中的一条形成一个亚中着丝点染色体。我们将这株培养细胞定名为L615细胞株。