小鼠胚胎干细胞对黑色素瘤细胞体外生物学行为的影响

探讨体外共培养环境中小鼠胚胎干细胞对小鼠黑色素瘤B16细胞的影响。建立C57BL/6小鼠胚胎干细胞系,通过小鼠胚胎干细胞与肿瘤细胞体外共培养模型观察小鼠胚胎干细胞对肿瘤细胞的形态及生长行为的影响,MTT法与transwell小室法分别检测共培养后肿瘤细胞粘附性、迁移性及侵袭性的变化。共培养中小鼠胚胎干细胞能够侵入并推开小鼠黑色素瘤细胞形成自己的生长空间,与对照组比较共培养后肿瘤细胞的粘附性、迁移性及侵袭性均显著降低(P<0.05,P<0.01)。结果表明体外共培养体系中小鼠胚胎干细胞能够侵袭肿瘤细胞,并降低细胞粘附、迁移及侵袭相关恶性生物学行为。     

FAP和Rho家族蛋白在卵巢癌侵袭迁移中的作用

目的：明确FAP是否通过RhoA／ROCK、Racl-GTP通路发挥促增殖、侵袭和迁移作用。方法：用MTT实验,Transwell实验和迁移实验检测FAP、RhoA／ROCK、Racl-GTP对卵巢癌细胞系HO-8910PM的增殖,侵袭和迁移的影响。结果：1、MTT法,迁移和侵袭实验证实用Y-27632抑制RhoA／ROCK途径能够促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭,与FAP联合作用时促进作用增强。2、MTT法,迁移和侵袭实验证实NSC23766抑制Racl途径能够抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭,与FAP联合作用使FAP的促进作用减弱。结论：l、RhoA／ROCK通路抑制HO一8910PM细胞增殖、迁移和侵袭;Racl-GTP促进H0—8910PM细胞增殖、迁移和侵袭。2、FAP不是通过RhoA／ROCK而是通过Racl—GTP信号通路在HO．8910PM细胞发挥促增殖、迁移和侵袭作用的。     

FAP-alpaha在胞外信号传递中与整合素的关系

目的：研究成纤维激活蛋白（Fibroblast Activation Protein,FAP）在促进卵巢癌细胞发生侵袭、迁移、增殖过程中与整合素α3β1、尿激酶型纤溶酶原激活剂受体（uPAR）的关系。方法：1）．免疫共沉淀共同检测整合素α3β1、uPAR在HO-8910PM上是否为二聚体。2）．transwell侵袭实验、迁移实验检测抑制整合素α3β1、uPAR后,卵巢癌细胞系HO-8910PM的侵袭迁移能力;3）．抑制整合素α3β1、uPAR后,再给予FAPet对HO-8910PM侵袭、迁移和增殖的影响。结果：1）．整合素α3β1、uPAR在HO-8910PM细胞外同一个位置表达;2）．抑制整合素α3β1能够明显抑制HO-8910PM的侵袭、迁移、增殖能力,并且可以抑制FAP对肿瘤的作用。3）．PAI—1抑制uPAR后,HO—8910PM的侵袭、迁移、增殖无明显变化,同时对FAP也无明显作用。结论：整合素α3β1和uPAR在HO-8910PM是一个复合体,FAPα,在细胞外是通过整合素α3β1传递信号进入细胞内而不是通过uPAR,整合素α3β1是通过uPAR与肿瘤细胞相连接。     

FAP和Rho 家族蛋白在卵巢癌侵袭迁移中的作用

目的：明确FAP 是否通过RhoA/ROCK、Rac1-GTP 通路发挥促增殖、侵袭和迁移作用。方法：用MTT 实验,Transwell 实验 和迁移实验检测FAP、RhoA/ROCK、Rac1-GTP 对卵巢癌细胞系HO-8910PM 的增殖,侵袭和迁移的影响。结果：1、MTT 法,迁移和 侵袭实验证实用Y-27632 抑制RhoA/ROCK 途径能够促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭,与FAP 联合作用时促进作用增强。 2、MTT 法, 迁移和侵袭实验证实NSC23766 抑制Rac1 途径能够抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭,与FAP 联合作用使FAP 的 促进作用减弱。结论：1、RhoA/ROCK 通路抑制HO-8910PM 细胞增殖、迁移和侵袭;Rac1-GTP 促进HO-8910PM 细胞增殖、迁移 和侵袭。2、FAP不是通过RhoA/ROCK而是通过Rac1-GTP 信号通路在HO-8910PM细胞发挥促增殖、迁移和侵袭作用的。     

RhoA在上皮性卵巢癌细胞中的表达与侵袭性的相关性

培养上皮性卵巢癌细胞H08910PM、H08910及正常卵巢上皮细胞HOSEA 3种细胞.对3种细胞分别采用免疫细胞化学法检测RhoA的表达、Transwell小室体外侵袭试验测定体外侵袭能力、与人脐静脉内皮细胞HUVEC建立细胞共培养系统测定血管形成能力.结果表明,RhoA在H08910PM细胞中表达最强,在H08910中次之,在HOSEA中最弱;3种细胞的侵袭能力以H08910PM最强,H08910较弱,HOSEA无侵袭能力;H08910PM的血管形成能力最强,H08910其次,HOSEA无血管形成能力(P<0.01).Pearson相关分析结果显示,RhoA表达水平分别与细胞侵袭能力及血管形成能力呈正相关(P<0.05).RhoA在上皮性卵巢癌细胞中表达水平越高,细胞体外侵袭及血管形成能力随之更强.RhoA可能作为重要因子参与上皮性卵巢癌的侵袭转移过程.     

FAPα在胞外信号传递中与整合素的关系

目的:研究成纤维激活蛋白(Fibroblast Activation Protein,FAP)在促进卵巢癌细胞发生侵袭、迁移、增殖过程中与整合素α3β1、尿激酶型纤溶酶原激活剂受体(uPAR)的关系。方法:1).免疫共沉淀共同检测整合素α3β1、uPAR在HO-8910PM上是否为二聚体。2).transwell侵袭实验、迁移实验检测抑制整合素α3β1、uPAR后,卵巢癌细胞系HO-8910PM的侵袭迁移能力;3).抑制整合素α3β1、uPAR后,再给予FAPα对HO-8910PM侵袭、迁移和增殖的影响。结果:1).整合素α3β1、uPAR在HO-8910PM细胞外同一个位置表达;2).抑制整合素α3β1能够明显抑制HO-8910PM的侵袭、迁移、增殖能力,并且可以抑制FAP对肿瘤的作用。3).PAI-1抑制uPAR后,HO-8910PM的侵袭、迁移、增殖无明显变化,同时对FAP也无明显作用。结论:整合素α3β1和uPAR在HO-8910PM是一个复合体,FAPα在细胞外是通过整合素α3β1传递信号进入细胞内而不是通过uPAR,整合素α3β1是通过uPAR与肿瘤细胞相连接。     

Cosmc基因在卵巢癌中生物学功能的研究

目的:明确Cosmc基因在卵巢癌细胞中的生物学功能。方法:本研究采用慢病毒转染技术,在卵巢癌细胞A2780和SKOV3中过表达Cosmc基因,MTT实验、细胞凋亡实验以及Transwell侵袭实验对过表达Cosmc后卵巢癌细胞在生长、凋亡、侵袭等方面的影响。结果:慢病毒转染卵巢癌细胞A2780和SKOV-3后,Cosmc的蛋白表达显著提高;MTT结果显示,与空载体对照组相比,过表达Cosmc的卵巢癌细胞生长能力显著减弱;流式细胞术结果表明Cosmc过表达的卵巢癌细胞凋亡数较空载体对照组细胞显著增加;Transwell实验显示Cosmc过表达的细胞侵袭和迁移能力较空载体对照组显著减少。结论:卵巢癌细胞系中过表达Cosmc基因能抑制卵巢癌细胞的生长和侵袭并促进细胞凋亡。     

OPN对卵巢癌Hey细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:探讨骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)对卵巢癌Hey细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其可能涉及的分子机制。方法:选择卵巢癌细胞株Hey、HO8910、A2780和正常卵巢上皮细胞IOSE80,采用Western blot检测OPN蛋白的表达情况。对OPN表达量相对较高的Hey细胞株的OPN基因敲减或过表达,运用CCK-8、平板克隆实验、细胞划痕、Transwell侵袭实验等方法研究OPN对细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响,采用Western blot检测Wnt/β-catenin通路相关蛋白β-catenin、CyclinD1、c-myc的表达情况。结果:OPN在卵巢癌细胞株Hey、HO8910、A2780内均有表达,且表达量均高于正常卵巢上皮细胞IOSE80。si RNA-OPN转染卵巢癌Hey细胞沉默OPN表达,CCK-8和平板克隆实验显示沉默OPN能够降低Hey细胞的增殖能力,划痕实验和Transwell侵袭实验显示下调OPN可降低Hey细胞的迁移和侵袭能力,Wnt/β-catenin通路相关蛋白β-catenin、CyclinD1、c-myc表达下降。ex-OPN转染Hey细胞使OPN表达升高,与对照组相比,OPN过表达能够增强Hey细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并且Wnt/β-catenin通路相关蛋白β-catenin、CyclinD1、c-myc表达升高。结论:OPN能够促进卵巢癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力,该作用可能通过促进Wnt/β-catenin信号通路实现。     

VEGF-α诱导对卵巢癌血管生成拟态形成及侵袭、迁移能力的影响

目的探讨细胞因子VEGF-α诱导对卵巢癌SKOV-3和OVCAR-3细胞系血管生成拟态形成及侵袭、迁移能力的影响。方法采用不同细胞因子诱导卵巢癌SKOV-3和OVCAR-3细胞系,通过三维培养来观察卵巢癌细胞形成血管生成拟态的能力;以划痕实验和侵袭实验来判断细胞因子诱导对卵巢癌细胞侵袭、迁移能力的影响。结果三维培养结果表明在VEGF-α组SKOV-3和OVCAR-3细胞可观察到大量、明显的血管样网状结构;细胞划痕试验结果表明卵巢癌细胞系经细胞因子诱导后,其迁移能力明显增强;体外侵袭实验表明VEGF-α能够明显增强卵巢癌SKOV-3和OVCAR-3细胞的体外侵袭能力。结论 VEGF-α能促进卵巢癌细胞系血管生成拟态的形成,并明显增强卵巢癌细胞侵袭和迁移的能力。     

金葡菌L型感染在卵巢癌中检测的意义

目的探讨金葡菌L型感染在卵巢癌中检测的意义。方法应用革兰染色、免疫组织化学染色技术检测HO-8910PM细胞株以及97例卵巢乳头状癌、23例卵巢乳头状瘤石蜡包埋组织中细菌L型的感染情况。结果（1）HO-8910PM细胞与金葡菌L型体外共培养后在肿瘤细胞的胞浆及胞核中检测到L型的阳性表达。（2）卵巢乳头状癌和乳头状瘤组织中,细菌L型感染率分别为25.8%（25/97）和13.0%（3/23）。L型检出率与卵巢癌的临床分期、病理分级及腹腔淋巴结转移的差异均有显著性（P〈0.005）,与组织学类型无关（P〉0.05）。结论金葡菌L型可以进入细胞内,并能够在一定程度上促进卵巢癌的发生、发展。