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人类人工染色体构建及其作为基因治疗载体的价值 总被引:5,自引:0,他引:5
人类人工染色体(HAC)作为基因治疗载体将解决基因治疗存在的一些关键问题。本文探讨了在不完全了解着丝粒、复制起始点、端粒等人类染色体基本功能单位的情况下构建HAC的三种策略。利用染色体基本功能单位在细胞内构建成功的第一代HAC,解决了HAC构建的一些难题,同时也带来了某些新的问题。HAC作为基因治疗载体具有很多优势,但第一代HAC离它作为基因治疗载体还相距很远。为此,作者正在进行解决这些问题的尝试。 相似文献
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应用腺伴随病毒(AAV)作基因治疗载体的研究取得了很大进展。与其他病毒载体比较,AAV载体具有不致病,在宿主染色体上有较特异的整合位点,宿主范围广泛,可感染非分裂细胞,无致癌性等优点,随着对重组病毒载体构建,载体在染色体上整合机制,外源基因表达调控以及该病毒安全性的深入研究,可望作为一种较为理想的病毒载体用于基因治疗。 相似文献
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将大肠杆菌HB101嗜碱转化子中质粒pGCA所携带的嗜碱基因亚克隆至双元载体pBI121质粒中,构建了植物表达载体pLGC重组质粒。用其转化大肠杆菌HB101获得了能在碱性和卡那霉素抗性平板上生长的转化子,再通过三亲交配法将亚克隆质粒pLGC转化进农杆菌LBA4404,又获得能在碱性平板和卡那霉素及利福平双抗平板上生长的转化子,Southern杂交结果表明HB101转化子亚克隆质粒pLGC是由来自于嗜碱芽孢杆菌NTT36染色体DNA和双元载体pBI121组成,且农杆菌LBA4404转化子含有来自大肠杆菌亚克隆转化子的pLGC质粒。 相似文献
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一种辅助病毒依赖型腺病毒载体的构建及其在小鼠体内 … 总被引:1,自引:0,他引:1
腺病毒载体具有在离体细胞和动物体内高效转移和表达外源基因的优点,但由于第一代腺病毒载体能在靶细胞内表达病毒结构蛋白,并诱导机体的细胞和体液免疫反应,影响了大体内的稳定表达。为了克服这一缺点,构建了一种辅助病毒依赖型腺病毒载体HAdI-hFVIII。该载体去除了病毒基因组的l3、L1、L2、VAIVAII、pTP等基因序列。在第一代重组病毒AdI-hFVIII辅助下,能在293细胞包装和扩增。经氯化 相似文献
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腺病毒(Ad)用作基因治疗载体近年来受到高度重视,成为高科技前沿领域的一大研究热点和重点,是基因治疗的新进展。本文重点介绍了Ad载体介导的基因治疗原理、操作步骤及研究现状,并指出了Ad用作基因治疗载体的优势、存在的问题及解决措施。 相似文献
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人工染色体研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
人工染色体是人工构建的含有天然染色体基本功能单位的载体系统总称。人工染色体是非常优良的载体,具有超大的接受外源片段能力。由于不用整合到宿主基因组中,因此不会引起宿主基因的插入失活,及抑制转基因表达的位置效应。人工染色体已经从最初的酵母人工染色体(Yeast artificial chromosome,YAC)发展到细菌人工染色体(Bacterial artificial chromosome,BAC),再扩展到人类人工染色体(Human artificial chromosome,HAC)和植物人工染色体(Plant artificial chromosome,PAC)。文章就这4种人工染色体,尤其是植物人工染色体的研究进展和应用局限进行综述。目前,YAC和BAC已经广泛应用于基因组图谱制作、序列测定和基因克隆;HAC和PAC在基因治疗、外源医用蛋白的生产、新型优质高产高抗转基因作物构建中显现出广阔的应用前景。随着合成生物学的高速发展,美国科学家报道合成了一个"人造生命"。但是,和人工染色体一样,所谓的"人造生命",都是应用最新的基因工程技术,将不同的生命基础元件拼接组装而成,脱离了细胞环境并不能够自由存在。 相似文献
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腺相关病毒 (AAV)属于病毒中最小、也是最简单的一种———细小病毒属 ,它是一种有缺陷的非致病性的人类细小病毒 ,重组的腺相关病毒 (rAAV)作为基因治疗的载体 ,对长期基因矫正和基因治疗具有优越性。新的生产工艺提高了rAAV的滴度 ,去除了腺病毒的污染 ,并构建了适用于不同靶细胞的可诱导载体。这些改进有望加速进一步的动物实验研究 ,使临床治疗人类疾病早日成为可能。1 .rAAV的制备方法在 1 989年 ,首次产生了没有野生型AAV帮助复制的重组的AAV ,这以后 ,为了增加病毒颗粒数 ,人们制造了许多AAV辅助质粒 ,其中… 相似文献
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FISH技术是80年代开始发展起来的一种新的定位技术,在人类基因组研究中得到了广泛的应用,通过中期染色体的FISH可以进行SCP,Cosmid和YAC的染色体定位,嵌合克隆的鉴别。通过间期核的FISH可能在50kb的分辨率下进行基因作图;最新的研究进展已可以进行伸展的染色质丝的FISH,直接测量基因的长度,从而达到高精度基因作图的目的。总之,随着FISH技术本身的发展,它将在人类基因组研究中发挥更 相似文献
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采用RTPCR方法合成小鼠MHCⅡ类分子ⅠAk基因α和β链cDNA,插入逆转录病毒载体pLSXN,构建ⅠAkα和ⅠAkβ表达载体,采用脂质体介导的重组质粒转移方法将ⅠAkα和ⅠAkβ基因导入EL4小鼠淋巴瘤细胞和P815小鼠肥大细胞瘤细胞,经流式细胞仪检测在细胞表面有ⅠAk表达.将以上两种细胞注射到同源小鼠C57BL/6(H2d)皮下,观察到肿瘤产生后又消退,证明在肿瘤细胞中单独导入同种异型MHCⅡ类分子基因也能激活肿瘤的细胞免疫,为进一步开展肿瘤的基因治疗奠定了基础. 相似文献
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腺病毒载体的应用及进展 总被引:4,自引:0,他引:4
腺病毒载体是近年来继逆转录病毒载体之后被广泛应用的一个基因运载系统。它具有宿主细胞广泛、繁殖滴度高、不整合及相对安全等特点,在基因治疗中发挥越来越大的作用。本介绍了E1区缺失为特征的第一代腺病毒载体应用的有效性、安全性等方面的研究情况,和旨在克服第一代腺病毒载体不足的第二代载体构建方面的进展。 相似文献
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phbB,phbC基因在大肠杆菌中的表达及对马铃薯植株的转化和检测 总被引:3,自引:0,他引:3
利用从真养产碱杆菌(Alcaligeneseutrophus)H16染色体DNA中克隆到的催化聚β羟基丁酸酯(polyβhydroxybutyrate,PHB)生物合成的两个关键酶基因:依赖NADPH的乙酰乙酰CoA还原酶基因(phbB)以及PHB合酶基因(phbC),同时利用大肠杆菌高效表达载体pKK2233,构建了嵌合有phbB和phbC基因的表达载体pKCB,转入大肠杆菌JM109,通过显微镜观察及气相色谱分析检测PHB的合成。在确证克隆基因正确的基础上构建了马铃薯块茎特异性表达载体pPSAGB(含phbB基因)、pBIBGC(含phbC基因)和pPSAGCB(含phbB和phbC双基因),转化5个马铃薯品种,经检测获得20个转基因阳性株系。 相似文献
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腺病毒载体具有在离体细胞和动物体内高效转移和表达外源基因的优点,但由于第一代腺病毒载体能在靶细胞内表达病毒结构蛋白,并诱导机体的细胞和体液免疫反应,影响了目的基因在体内的稳定表达。为了克服这一缺点,构建了一种辅助病毒依赖型腺病毒载体HAdI-hFVII。该载体去除了病毒基因组的l3、L1、L2、VAI-VAI、pTP等基因序列。在第一代重组病毒AdI-hFVII辅助下,能在293细胞包装和扩增。经氯化铯梯度超速离心后,能与辅助病毒有效分离。小鼠体内研究表明,该载体能在体内高效转移和表达hFVII基因。与笫一代腺病毒载体比较,外源基因表达稳定性明显提高,提示该载体在体内具有较低的免疫原性。 相似文献
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同时表达多种外源基因的非复制型重组痘苗病毒的构建 总被引:13,自引:5,他引:8
利用非复制型痘苗病毒载体,构建了能同时表达乙型肝炎(乙肝)病毒SS1、麻疹病毒HA和F及白细胞介素2(IL-2)的非复制型重组痘苗病毒VIHIL2△CKSS1,及其相应的复制型重组豇轩病毒VHFIL2SS1。这两株重组病毒在CEF细胞上连续传至第25代,经Southern,两株病毒均在A24、A27间稳定整合有SS1基因,非复制型重组病毒C、K间基因稳定缺失。经RIA、ELISA及Western 相似文献
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本文对我国云南南部的白须长臂猿(H.leucogenys)染色体的G带、C带、晚复制带及Ag-NORs进行了较为详细的研究。它的2n=52,核型公式为44(M或SM)+6(A),XY(M,A)。C带表明一些染色体着丝点C带弱化;有的染色体出现插入的和端位的C带;X染色体两臂有端位C带,Y染色体是C带阳性和晚复制的。Ag-NORs的数目,雌体有4个,雄体有5个,Y染色体上具NOR。本文对白颊长臂猿与其它长臂猿间的亲缘关系、核型进化的可能途径进行了讨论。 相似文献
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两种长臂猿染色体的C带和Ag-NORs的比较研究 总被引:1,自引:0,他引:1
本文对长臂猿属(Hylobates)中白眉长臂猿(H.hoolock)2n=38和白颊长臂猿(H.leucogenys)2n=52的染色体C带和Ag-NORs进行了比较研究。结果表明,两种长臂猿的C带核型中除多数染色体有着丝点C带外,一些染色体上还出现插入C带和着丝点C带弱化或减少现象;白眉长臂猿有全异染色质臂;白颊长臂猿有较多的端位C带。白眉长臂猿有两个Ag-NORs,而白颊长臂猿的Ag-NORs雌体有4个,雄体有5个,Y染色体上有NOR.本文对长臂猿的核型进化作了讨论。 相似文献
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人类YAC库PCR三维筛选体系的建立及质量考核 总被引:3,自引:0,他引:3
为了在知道某个区域、位点、基因或DNA片段的部分信息后,能从CEPHYAC库中筛选出与其对应的YAC克隆,为进一步研究奠定基础,需要建立一个筛选体系。本文概述了这一筛选体系的建立过程。随后,用两对与已知基因对应的引物进行了筛选验证工作,证明了这一体系的可用性,同时提出了以后筛选的途径,即首先筛选YAC库的MegaYAC部分,并以5块板为一组进行筛选。另外,运用荧光原位杂交技术(FBH),对CEPHYAC库的质量及其第一代人类基因组物理图谱进行了考察。我们取26个YAC克隆进行FISH定位,结果其中嵌合体13个,占50%。定位错误的克隆有6个,占23%。非嵌合体且定位正确的共9个,占35%。 相似文献
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苋菜凝集素基因的克隆及在转基因烟草中抗蚜性研究 总被引:27,自引:0,他引:27
通过PCR从苋属植物千穗谷(Amaranthus hypochondriacus)的总DNA中扩增出苋菜凝集素(AHA)的核基因片段。序列分析结果表明该基因为2453bp,含有-1538bp的内含子和两个分别为212bp和703bp的外显子。采取反向PCR的方法获得仅含该基因的编码区克隆。以此为基础与二元表达载体pBin438构建含内含子与不含内含子AHA基因的植物表达载体pBAHAg和pBAHAc并通过土壤农杆菌介导转了化烟草,转化再生植株的PCR和Southern blot分析表明,AHA基因已整合到烟草的染色体中,有单贝和多拷贝的整合。用与AHA蛋白高度同源的ACA蛋白的抗血清进行了免疫斑点(Immunodot blot)检测,结果初步表明转基因烟草有AHA蛋白的表达,虫试结果表明转pBAHAg和pBAHAc烟草对蚜虫的平均抑制率分别达57.2%和48.8%,有的高达90%以上,含内含子和不含内含子的AHA基因在转基因植株中的抗蚜性不同。 相似文献