硫酸西梭霉素微生物检定法研究

以短小芽孢杆菌为检定菌,比较了培养基原料对抑菌圈的影响,进行了检定菌的分离和敏感活性测定,标准曲线的可倍限率检测;一剂量和二剂量法的可靠性试验;样品效价测定和统计分析,确认我们建立的硫酸西梭霉素的生测方法是准确、可行的。＊ｐ＜０．００１）,试品间和偏离平行不显著（＊ｐ＞０．０５）,可倍限率小于５％,本实验成立。按ｎ次实验结果合并计算,处理２＃、３＃两批样品的实验结果,见表４。经统计分析,２＃样品标定效价为６２９ｕｇ／ｍｇ,可倍限率４．１９％。３＃样品标定效价５７９ｕｇ／ｍｇ,可倍限率３．７１％。３结论３．１硫酸西梭霉素生物效价测定,美国药典［１］以表皮葡萄球菌作检定菌。我们用短小芽孢杆菌作检定菌,抑菌圈清晰,菌液易于保藏,测定结果准确,复现性强。因此,短小芽孢杆菌可作为硫酸西梭霉素的检定菌,培养时间１４～１６小时,培养温度３５～３７℃。３．２采用标准曲线法和二剂量法进行生物效价测定。前者标准品溶液校正点为５ｕｇ／ｍｌ,后者标准品溶液浓度分别为１０ｕｇ／ｍｌ,５ｕｇ／ｍｌ,剂距比２：１。３．３试验结果表明,培养基的原料直接影响检定菌的生长和样品扩散,从而影响抑菌圈的大小和清晰程度。蛋白陈和琼脂的质量尤为重量。?     

西梭霉素产生菌斜面孢子培养条件研究

采用正交法设计斜面培养基,对西梭霉素产生菌的孢子生长所需要的碳源、氮源、生长因子、无机盐等作全面考察,确定了最佳斜面配方,其生物效价比原配方提高２６％。并考察了斜面孢子培养时间,冰箱保藏时间对孢子量和生物效价的影响。     

单组分妥布霉素产生菌的快速筛选

经多轮筛选获得了 1株妥布霉素耐药安普霉素敏感的芽孢杆菌。利用该菌与枯草杆菌 6 35 0 1混合作为检定菌 ,从妥布霉素和安普霉素二组分产生菌中快速筛选到了单组分妥布霉素产生菌。     

梅岭霉素产生菌抗药性突变标志诱变筛选模型的初步研究

本文通过梅岭霉素 (Meilingmycin)产生菌南昌链霉菌NS 4 1 80菌株孢子对 6种抗生素敏感性测定 ,采用诱变剂EMS四种不同诱变剂量对菌株孢子进行诱变处理 ,诱变处理的孢子涂布在含致死浓度链霉素的高氏平板上。然后从抗药性突变标志菌株中进一步筛选梅岭霉素高产菌株。在 150 0多个抗药性突变株中通过初筛获得了比诱变出发菌株的产素能力提高 50 %以上菌株。通过诱变剂量分别与抗药性突变率和突变株产素产量的变势统计分析表明 ,菌株抗药性突变与产素突变密切相关 ,产素突变的EMS诱变剂量高于抗药性突变诱变剂量 ,在 0 .0 3mol/LEMS剂量作用下 ,菌株致死率为 99.4 3% ,抗药性突变率为 0 .0 4 4 0 % ,建立了梅岭霉素产生菌抗药性突变标志诱变推理性筛选模型。为南昌链霉菌高产菌种选育研究作了有益的尝试 ,并有助于其它链霉菌属的抗生素产生菌育种研究。     

关于菌数测定的一些方法和问题

在细菌学工作中,细菌数量的测定对于研究细菌生长、繁殖、营养和代谢活动有着重要意义。生物制品各种菌苗的生产也广泛应用着菌数测定某些方法,它关系到工作中各项检定结果,任务数量的完成,而成品菌数的确定更将直接影响广大人民群众预防免疫效果。测定细菌数量方法很多,这些方法可以大略分为直接测定和间接测定两大类。本文主要是说明比浊法的实际应用,对测定菌数的其他一些方法也作了介绍。     

康乐霉素C产生菌的微波诱变

以物理因子微波对免疫抑制剂康乐霉不C的产生菌进行了菌种诱变,研究了微波处理的条件、照射的时间及剂量,获得康乐霉素C生产能力高于出发菌株180%的M-13-21。     

羊肚菌抗疲劳作用研究

通过观察服用了羊肝菌的小鼠负重游泳试验、血清尿素氮测定试验结果、肝糖原测定结果及血乳酸测定结果表明,肚菌粉在一定的剂量时,具有抗疲劳作用。     

放线菌素23-21微生物检定法及HPLC法比较

采用微生物检定法测定放线菌素２３－２１的抗菌活性,检定菌为枯草芽孢杆菌。当放线菌素２３－２１的浓度为０．９１～４．３７μｇ／ｍｌ时,其抑菌圈直径与反应剂量有线性关系。经生物学统计分析,实验结果可靠。并与高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）进行对照检测,实验结果基本吻合。     

一种妥布拉霉素产生菌初筛方法的建立

从金黄色葡萄球菌１００１出发,选育到一株对妥布拉霉素和卡那霉素耐药而对阿泊拉霉素敏感的突变株１００１－１１。以金黄色葡萄球菌１００１－１１和对上述三种抗生素均敏感的枯草杆菌６３５０１为测定菌,建立了一种能同时检测妥布拉霉素产生菌菌落琼脂柱总效价和组分相对含量的初筛方法。     

一株新分离巴氏杆菌的初步鉴定

对清洁级昆明小鼠常规监测中分离的一株可疑嗜肺巴氏杆菌进行了有关遗传学和生物表型特征的检定。该菌形态学及一般培养特性与嗜肺巴氏杆菌相似 ,与嗜肺巴氏杆菌参考血清发生凝集反应 ,生化试验不符合嗜肺巴氏杆菌典型特征 ,染色体DNA的G -Cmol%测定不能排除巴斯德氏菌属细菌的可能 ,进一步生化检定不符合国外报道的嗜肺巴氏杆菌Jawetz和Hey 1 .2个生物型 ,但与国外报道的Pasteurella .sp组细菌相似。     

钛离子注入井冈霉素生产菌株的诱变效应

探讨了利用金属Ti 离子注入井冈霉素生产菌的生物学效应,比较了不同的注入能量与注入剂量对菌株突变效果的影响.在注入能量为15 keV,剂量为1.5×1015 个/cm2离子的诱变条件下,筛选到一株井冈霉素高产菌株C3-6,其发酵生产井冈霉素A组分的效价为19 684 μg/mL,比出发菌株提高41.3%.经多次传代实验表明该菌株的遗传稳定性较好.     

以苯丙氨酰-tRNA合成酶为靶点的新型抗结核药物高通量筛选模型的建立和应用

【目的】建立结核分枝杆菌PheRS抑制剂高通量模型,并运用此模型筛选化合物和发酵液样品。【方法】克隆和表达结核分枝杆菌PheRS蛋白并优化其酶活测定方法,在此基础上建立结核分枝杆菌PheRS抑制剂高通量筛选模型,并通过耻垢分枝杆菌作为检定菌对筛选到的样品进行抗菌活性测定及细胞毒性评价。【结果】运用此模型筛选了化合物样品11 600个,发酵液样品5 200个,筛选得到阳性化合物9个,阳性发酵液37个。而后通过耻垢分枝杆菌作为检定菌的抗菌活性测定及细胞毒性评价后,得到了6个发酵液阳性样品。【结论】建立的PheRS抑制剂模型可成功用于化合物和微生物发酵液的高效筛选,得到的6个发酵液阳性样品在酶水平和抗分枝杆菌方面均具有良好活性且毒性较低,值得进一步研究。     

人绒毛膜促性腺激素(HCG)的放射免疫测定法

六十年代初期,出现了利用同位素技术和免疫反应以测定痕量蛋白质激素的一种新方法,这就是放射免疫测定法。大家知道,在这以前,要测定蛋白质激素的活力或效价,唯一的方法只有通过生物检定:选择相当数量的某种动物,注射一定剂量的某一蛋白质激素,看它对动物靶器官的效应怎样?比方说,测定促滤泡激素(FSH),可用未成年雌大鼠的子宫或卵巢重量     

南昌霉素高产菌株的链霉素抗性基因突变诱变筛选研究*

通过链霉素对南昌霉素 (Nanchangmycin)产生菌NS 41 80菌株孢子的致死浓度测定基础上 ,采用诱变剂甲基磺酸乙酯 (EMS)的不同诱变剂量对菌株孢子进行诱变处理 ,诱变处理的孢子涂布在含链霉素 ( 1 0 μg/mL)致死浓度的高氏平板上 ,获得了大量的链霉素抗性基因 (str)突变株。然后从 3,0 0 0株链霉素抗性基因 (str)突变株中通过初筛获得比诱变出发菌株产素能力提高 2 0 %以上的菌株 2 0 2株。再进一步通过摇瓶复筛 ,获得比出发菌株产素能力分别提高 1     

一株有争议的志贺氏菌的抗原分析与血清型检定

对中国医学细菌保藏管理中心所存,1935年国外分离,国内检定结果不一的一株志贺氏菌51331进行了详细的抗原分析,确定为福氏志贺氏菌X变种。 该菌能与国内外出品的福氏3型特异血清发生交叉凝集的原因,主要是由于上述诊断用血清中交叉反应性抗体尚未吸收纯净,至少没用类似51331这样的菌株参与成品血清检定的缘故。因此,建议在生产福氏3型特异血清时,应用本菌种参与检定以提高制品质量。本菌种作为诊断血清检定时用的菌种是十分有价值的。     

梅岭霉素高产菌株链霉素抗性基因突变株筛选

通过链霉素对梅岭霉素 (Meilingmycin)产生菌南昌链霉菌NS 41 80菌株孢子致死浓度的测定 ,采用诱变剂EMS 4种不同剂量对菌株孢子进行诱变处理 ,然后涂布在含链霉素致死浓度的高氏平板上 ,获得了大量的链霉素抗性基因 (str)突变株。并进一步筛选到梅岭霉素高产菌株 80 5 1 1 2 2 1 ,在摇瓶条件下 ,只产梅岭霉素不产南昌霉素 ,梅岭霉素活性单位达 1 ,52 1 μg/mL,比NS 41 80的摇瓶发酵单位 855μg/mL提高了 77 9% ,该菌株连续传 6代进行摇瓶发酵     

布氏菌104M变异株毒力及保护力研究

目的研究皮上划痕人用布氏菌活疫苗104M变异株的残余毒力及保护力。方法对布氏菌104M变异株进行菌种检定。通过测定布氏菌104M变异株与未变异株的半数致死量(50%lethal dose,LD50),比较两者的残余毒力;用布氏菌104M变异株与未变异株分别免疫小鼠,4周后用羊型弱毒或强毒布氏菌皮下攻击,4周后测定脾脏细菌数,比较布氏菌104M变异株与未变异株的保护效果。结果菌种检定结果显示,布氏菌104M变异株与未变异株分别符合变异及未变异布氏菌株特征。104M未变异株LD50为1.1×109,变异株LD50为2.2×1010。用羊型弱毒及强毒布氏菌攻击后,布氏菌104M变异株与未变异株均具有较好的保护效果,但104M变异株保护力低于未变异株,差异具有统计学意义(P0.05)。结论布氏菌104M变异株残余毒力比未变异株明显降低,保护力略低于未变异株。     

溶葡球菌酶的比色测定及某些性质的研究

溶葡球菌酶是一种专一地溶解葡萄球菌的溶菌酶。和蛋清溶菌酶一样,通常采用比浊法进行测定,底物或为葡萄球菌、或为该菌的细胞壁、或为该菌细胞壁的肽聚糖。本文报道一种简便灵敏的溶葡球菌酶比色测定法,以偶联了KNR艳蓝染料的葡萄球菌(死)细胞或偶联了KNR艳蓝染料的该菌细胞壁肽聚糖为色源底物,根据酶作用后释放出的可溶性KNR生成物计算酶活性。本文采用该比色测定法检定了溶葡球菌酶的某些动力学性质。     

无细胞百日咳疫苗效价检定用攻击菌液氮保存的稳定性

为了考察无细胞百日咳疫苗效价检定用攻击菌在液氮中保存的稳定性,对液氮保存1~7年的4~9代百日咳攻击菌随机抽取7~11批次样品,采用LD50检测并经统计学处理,分析其样品的毒力变化。试验结果显示,4~9代的百日咳攻击菌液氮保存5年,毒力仍能达到《中华人民共和国药典》三部(2005版)的要求;保存6年和7年,4~7代的百日咳攻击菌毒力仍符合上述要求,8、9代的攻击菌毒力的合格率分别为84%和40%。试验证实,无细胞百日咳效价检定用攻击菌液氮保存5年具有良好的稳定性,可用于无细胞百日咳疫苗的效价检定。     

发酵液内氨甲酰妥布拉霉素的定量测定

报道了应用一种以测量图象面积为指标的Ｚｙ－３００Ａ多功能抑菌圈测量仪,能够精确、稳定、快速地测定发酵液经薄层层析生物显迹后单组分氨甲酰妥布拉霉素的抑菌斑面积,然后从绘制的标准曲线中直接读取氨甲酸妥布拉霉素在发酵液中的含量,从而排除了其他组分对测定的干扰。试验证明,用Ｚｙ－３００Ａ多功能抑菌圈测量仪测定抗生素薄层层析生物显迹的抑菌斑,具有线性宽、精密度高、重复性强、操作简单方便等优点．本方法的建立为抗生素的纯品检定和多组分抗生素发酵、分离和纯化提供了准确的定量数据．