Enzymhistochemie menschlicher Hirntumoren und ihrer Gewebekultur

Zusammenfassung Aus einem Biopsiematerial von etwa 560 Hirntumoren wurden 10 Ependymome, von denen 7 in vitro erfolgreich gezüchtet werden konnten, histologisch und histochemisch untersucht. In vitro war es unter günstigen Wachstumsbedingungen zu einer Proliferation uniformer epithelähnlicher Zellen gekommen, die an Größe zur Peripherie des Explantates hin gleichmäßig zunahmen und mitunter zu Rosettenbildung neigten. Für die untersuchten oxydativen Enzyme ließ sich nach Reaktionsintensität geordnet im Schnittpräparat und in der Kultur folgende Reihenfolge aufstellen: NADH-R, LDH, NADPH-R, GADH, SDH, Zyt.-Ox.Im Schnittpräparat wiesen die Tumorzellen annähernd die gleiche relative Enzymaktivität auf (enzymatische Isomorphie). In der Gewebekultur nahm sie mit zunehmender Zellgröße peripheriewärts deutlich ab. Photometrische Untersuchungen zeigten jedoch, daß die Gesamtaktivität pro Zelle in allen proliferierten Tumorzellen verhältnismäßig konstant blieb.Hierin unterscheiden sich die differenzierten Hirntumoren von den Glioblastomen und Sarkomen. Diese lassen nämlich zwischen den einzelnen Tumorzellen erhebliche zellindividuelle Unterschiede der Enzymaktivität erkennen (enzymatische Pleomorphie).

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Summary In a series of 560 intracranial tumors we found 10 ependymomas, 7 of which were succesfully cultured in vitro. Under optimal conditions the tumors grow in tissue culture as epithelial-like monolayers of polygonal uniform cells. The cells showed a gradation in distribution according to size: small cells near the expiant, larger cells in the outer proliferation zone. In those cases where mesenchymal cells interfered with the proliferation of the tumor cells a different growing pattern was observed. Isolated cells showed atypical processes and a tendency to form multinucleated cells.The histochemical investigation demonstrated a constant pattern of the enzyme activities. NADH-tetrazolium-reductase and lactic dehydrogenase were strong, NADPH-tetrazoliumreductase medium and glutamic acid dehydrogenase, succinic dehydrogenase and cytochrome oxidase were weak. The activity did not change significantly during the observation period of 3–4 weeks. The enzyme activity per cell as demonstrated by the formazan deposits was uniform in the kryostat sections. However in tissue culture the large cells show very weak activity when compared to the small tumor cells. Yet by means of photometry the formazan content per cell turned out to be in the same order. Conclusion were made that each individual tumor cell possesses about the same enzyme activity. This is in contrast to the earlier observations in anaplastic gliomas, where individual differences between the tumor cells were found to be extremely high, reflecting a disorder in control of enzyme activity or production.

     

Virosen von Forstinsekten in Europa

Ohne Zusammenfassung     

Über die Einwirkung von Nucleasen und Proteasen auf die Morphologie menschlicher Chromosomen

Zusammenfassung Nach den üblichen Techniken präparierte ungefärbte Chromosomen wurden unter mikroskopischer Kontrolle mit Hilfe einer Durchströmungsmethode dem Einfluß verschiedener Enzyme ausgesetzt. Diese Durchströmungsmethode garantiert einen vollständigen Austausch des Milieus und eine vollständige Elution der Spaltprodukte.DNase-Einwirkung führt zu feulgennegativen Chromosomenreststrukturen unter Erhaltung der äußeren Chromosomenform. Trypsin führt je nach Konzentration bis zu Strukturverlust der feulgenpositiv verbleibenden Chromosomen. Pepsin hat keinen wesentlichen Einfluß auf die Morphologie und Färbbarkeit.Die nach DNase-Behandlung entstehenden Reststrukturen lassen sich mit Trypsin und Pepsin konzentrationsabhängig jeweils verschieden stark abbauen; die Einwirkung beider Proteasen nacheinander führt zu völligem Verschwinden der Chromosomen. Damit ist ein Proteinanteil am Aufbau der Chromosomen nachgewiesen.Über orientierende Versuche mit RNase-Einwirkung auf Chromosomen und osmotische Versuche an den Reststrukturen wird ebenfalls berichtet. Es folgt eine Diskussion des chemischen und strukturellen Aufbaus der Chromosomen.

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Unstained human chromosome preparations were exposed to various enzymes by suffusion under microscopic control. With the method used, a complete elution of enzyme-treated soluble compounds as well as an exchange of the medium becomes possible.DNAse treatment renders Feulgen-negative chromosome residues with unchanged shape. Trypsine, on the other hand, leads depending on concentration to a complete loss of structure, whereas the Feulgen reaction remains positive. Pepsine does not influence shape or staining.Chromosome residues produced by DNAse suffusion are broken down partially by trypsine as well as pepsine; the degree of decomposition depends on enzyme concentration. Both proteases used one after the other lead to complete disappearance of chromosomes. This result points to an essential roll of proteins in chromosome structure.Additional pilot experiments using RNAse and changing of the osmotic pressure were carried out with the chromosome residues. The consequences of the results mentioned for the problems of chemical composition and structure of chromosomes are discussed.

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Direktor: Prof. Dr. med. Dr. H. Baitsch

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Wesentliche Teile der vorliegenden Arbeit werden von Herrn Ali Bustani als Dissertation der Medizinischen Fakultät der Universität Freiburg i. Br. vorgelegt.     

Das Elektronenmikroskop als Hilfsmittel bei der Diagnose pflanzlicher Virosen

Ohne Zusammenfassung     

Elektronenmikroskopische Untersuchungen menschlicher Metaphasen-Chromosomen

Zusammenfassung Chromosomen von Mitosen im Metaphasestadium nach Colchicinbehandlung normaler menschlicher Fibroblastenkulturen wurden mit dem Elektronenmikroskop untersucht.Nach Fixierung in Glutaraldehyd und Einbettung in Epon zeigen Schnittpräparate nach Kontrastierung mit Uranylacetat als feinste erkennbare Elemente etwa 30 Å dicke, schraubig gewundene Fibrillen, die dickere, vielfach und unregelmäßig gefaltete Fibrillen von 100–150 Å Durchmesser aufbauen.Isolierte ganze Chromosomen, die zur Präparation mit hypotoner Salzlösung vorbehandelt, in Alkohol-Essigsäure fixiert und luftgetrocknet wurden, lassen stark gewundene dicke Fibrillen von 200–300 Å durchmesser erkennen, die aus schraubig gewundenen 30 Å dicken Fibrillen bestehen. In Schnittpräparaten von ähnlich vorbehandelten Chromosomen finden sich ebenfalls 200–300 Å dicke Fibrillen, die aus 30 Å dicken feineren Fibrillen in lockerer Anordnung aufgebaut sind. Der größere Durchmesser der dicken Fibrillen in hypoton vorbehandelten Präparaten könnte durch Auflockerung der feinen Fibrillen hervorgerufen sein.In allen Präparaten sind die auch lichtmikroskopisch sichtbaren primären Windungen der Chromatiden angedeutet. Die dickeren Fibrillen lassen sonst keine regelmäßige Anordnung erkennen. Längsunterteilungen im Sinne von Halb- oder Viertelchromatiden sind nicht zu sehen. In Totalpräparaten erscheint die Region des Zentromers weniger dicht, und Kinetochoren sind nicht erkennbar.Es wird die Frage diskutiert, ob nur eine kontinuierliche und vielfach gewundene Fibrille oder mehrere miteinander verflochtene Fibrillen und Stränge ein Chromatid aufbauen.

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Metaphase chromosomes of colchizinized normal human fibroblast cultures were investigated with the electron microscope.Sections of glutaradehyde fixed and epon embedded chromosomes show 30 Å thick coiled fibrils building up folded thicker fibrils of 100–150 Å diameter.Isolated total chromosomes pretreated in hypotonic salt solution, fixed in alcohol-acidic acid and air dried, show also 30 Å thick fibrils coiled into thicker fibrils of 200–300 Å diameter. Sections of similarly treated and epon embedded chromosomes show fibrils of similar dimensions but more loosely coiled than in glutaraldehyde fixed sections.Major coils also seen by light microscopy are noticeable in all preparations. No signs of longitudinal subdivisions of the chromatids are detectable. In whole mount preparations the centromere region appears as less dense and kinetochores cannot be seen.The question is discussed whether one single continuous fibril coiled to a thicker fibril which in turn is irregular folded to a strand laid into the major coils builds up a chromatid, or if many thin fibrils join together to thicker fibrils which again form thicker strands which are finally twisted together to a chromatid.

     

Ergebnisse von Bestimmungen menschlicher Serum-Transferrin-Typen

Zusammenfassung Es wird über die Ergebnisse der in Ungarn erstmals durchgeführten Serum-Transferrin-Typen-Bestimmungen an 1007 Personen berichtet. Die Untersuchungen wurden mit der horizontalen Stärkegelelektrophorese durchgeführt. In 5 Fällen wurden Varianten gefunden, die sich als Typ B_0-1C bzw. B₀C erwiesen. Weiterhin wird über die Ergebnisse von Tf-Untersuchungen in Fällen strittiger Vaterschaft berichtet. In einer 2-Männer-Sache gelang es, eine Zuordnung höchstwahrscheinlich zu machen.

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Distribution of serum transferrin groups in Hungrary and their application in paternity proceedings

Summary Results of human serum transferrin-type determinations carried out on 1007 persons the first time in Hungary are reported. The determinations were carried out by way of the horizontal starchgel electrophorese according to Smithies modified by Ashton. In 5 cases variants were found migrating faster than the common type Tf C proving at the identification as type B_0-1 respectively B₀. That is, the frequency of the Tf-variants in Hungary are estimated about 0.5%. The significance of Tf-type determinations in clearing up disputed paternity is discussed. Also the results of determinations of this kind in a juridicial case are reported. It was about a 2-men case. Paternity of the witness was disclosed by way of Tf-type determination, that of the defendant, however, proved.

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Vorstand: Prof. Dr. med. E. Somogyi

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Vorstand: Prof. Dr. J. Márkus     

Familienuntersuchungen zum Glutathionreduktasemangel menschlicher Erythrocyten

Zusammenfassung Wir berichten über formalgenetische Untersuchungen zur Glutathionreduktase menschlicher Erythrocyten. Durch Aktivitätsbestimmung des Enzyms in den Erythrocyten, durch Enzymelektrophorese und durch den Heinzkörpertest lassen sich heterozygote Merkmalsträger des Glutathionreduktasemangels von gesunden Normalpersonen unterscheiden. Wahrscheinlich liegen qualitativ und quantitativ veränderte Enzymproteine vor (enzymkinetische Daten und elektrophoretische Eigenschaften). Wir verfügen über Beobachtungen in insgesamt neun Familien, bei denen formalgenetische Untersuchungen vorgenommen wurden. Der auf Grund früherer Untersuchungen vermutete autosomal dominante Erbgang wird bestätigt.

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Family studies on glutathione reductase from red blood cells

Summary We report on formal genetical studies of glutathione reductase from human red blood cells. Heterozygotes can he distinguished from normals by determination of glutathione reductase activity, electrophoresis of this enzyme, and Heinz-body-test. Probably the enzyme protein are qualitatively and quantitatively different (biochemical data and electrophoretic behaviour). The mode of inheritance of glutathione reductase deficiency is autosomally dominant.

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Mit dankenswerter Unterstützung durch die Deutsche Volkswagen-Stiftung.

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Herrn Professor Dr. H. E. Bock, Tübingen, zum 65. Geburtstag gewidmet.     

Beitrag zur Populationsgenetik der Pyruvatkinase menschlicher Erythrocyten

Summary In 214 healthy young Germans the activity of Pyruvatekinase from red blood cells has been determined. Three persons had values in the heterozygote range between 10.0 and 20.0 U. Suggesting a 2-allele-model the frequency of the three phenotypes in the German population can be calculated as followed: PK(A)=98.6%, PK(AB)=1.4%, PK(B)=0.005%.No correlation could be found between the distribution of blood-and serum-groups and the enzyme-activity.

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Direktor: Prof. Dr. med. G. W. Löhr

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Direktor: Prof. Dr. med. G. G. Wendt

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Mit dankenswerter Unterstützung durch die Deutsche Volkswagen-Stiftung.

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Herrn Professor Dr.H. E. Bock, Tübingen, zum 65. Geburtstag gewidmet. Wesentliche Teile dieser Arbeit werden von Olaf Praetsch der Medizinischen Fakultät als Dissertation vorgelegt.