"微生物的实验室培养"一节的教学设计

在生物新课标上对于选修1的专题2“微生物的培养与应用”中的课题1“微生物的实验室培养”有下列要求：具体内容标准为“进行微生物的分离和培养”,活动建议是“用大肠杆菌为材料进行平面培养,分离菌落”。为此笔者在教学中给学生提供了实验条件,并指导10个班的学生设计并进行了实验,取得了     

不同浓度外源乙酸钠对耐乙酸大肠埃希菌DA19代谢和关键酶酶活的影响

为研究外源乙酸钠对大肠埃希菌DA19生长代谢的影响,将该菌株在氮源限制基本培养基及添加不同浓度乙酸钠的氮源限制基本培养基中连续培养,测定稳态时生长代谢参数和胞内关键酶酶活。与MN培养基相比,葡萄糖比消耗速率和延胡索酸比生成速率随外源乙酸钠质量浓度增加而逐渐下降,丙酮酸比生成速率则随外源乙酸钠质量浓度增加而明显增加,而乙酸比生成速率则明显降低(除9 g/L乙酸钠外)。磷酸果糖激酶、异柠檬酸脱氢酶、异柠檬酸裂解酶、苹果酸脱氢酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶和乙酸激酶酶活随外源乙酸钠质量浓度增加而呈先下降后上升的趋势,而6-磷酸葡萄糖脱氢酶则随着外源乙酸钠质量浓度增加而逐渐降低。为了应对外源乙酸钠压力,大肠埃希菌DA19的生长代谢和中心代谢途径酶活都发生了明显改变。     

一种提取小鼠肠道中活体微生物的方法

目的 建立一种有效的肠道微生物提取方法,用于基于培养方法研究肠道微生物.方法 研究NaCl溶液体积、内容物振荡时间、离心转速和高速离心次数对肠道微生物提取数量、质量及其活性的影响.结果 在盛有适量玻璃珠的三角瓶中,将肠道内容物与0.85％的NaCl溶液按质量体积比(g∶mL)不大于1∶10进行混合,120 r/min漩涡振荡30 min,500 r/min离心5 min去除沉淀,将上清液分装于EP管中12 000 r/mim高速离心1次,弃去上清,在EP管中加入0.85％ NaCl溶液进行漩涡振荡使菌体充分分散,即可得到提取完全、质量高的小鼠肠道微生物.结论 该方法能够提取足够多的肠道微生物,并且保持其活性.     

临沂市肉鸡致病性大肠埃希菌的分离鉴定及耐药性研究

目的查清临沂市肉鸡大肠埃希菌的优势血清型及耐药情况,为研制疫苗和科学防治本病提供依据。方法对病料进行细菌分离培养,应用形态学检查、生化试验、致病性试验和血清学试验对大肠埃希菌及其血清型进行鉴定,通过药敏试验研究其耐药性。结果从365份病料中,分离出大肠埃希菌311株,分离率为85.2%。优势血清型为O78、O1、O11、O18、O15和O2;对链霉素、氨苄西林、利福平、庆大霉素、恩诺沙星、环丙沙星和左氧氟沙星等药物表现出很高的耐药性,耐药率分别为98.0%、87.3%、86.0%、77.3%、73.4%、70.0%和64.6%,而对大观霉素、头孢噻呋、多黏菌素、氟苯尼考和痢菌净高敏。结论临沂市肉鸡大肠埃希菌的优势血清型有O78、O1、O11、O18、O15和O2,分离菌株对大部分抗菌药物产生耐药性。因此,治疗鸡大肠埃希菌病应通过药敏试验,合理地选择药物。     

自然界中不可培养微生物的研究进展

尽管微生物培养技术已经发展了几十年,但是环境中可培养的微生物比例仍然较低。目前研究者对微生物不可培养的原因有了进一步的了解,其关键在于：高浓度的营养基质、无法实现原位培养、不明确环境中微生物之间的相互作用、缺乏尖端的微生物检测方法等。研究者为了克服这些培养障碍,不断研究出许多提高微生物培养效率的方法,简要介绍改进培养基、发展新的培养条件等提高微生物可培养性的方法。     

牛膝多糖抑制大肠埃希菌细胞粘附的实验研究

目的 :研究牛膝多糖能否影响大肠埃希菌对细胞的粘附。方法 :使用 Hela细胞进行了粘附试验及粘附抑制试验。结果 :发现牛膝多糖浓度为 0 .8mg/ml时 ,对细菌的细胞粘附抑制最为明显 ,粘附率由(2 5 7.0± 5 .2 )个细菌 /细胞 降低到 (63 .6± 3 .6)个细菌 /细胞 。结论 :牛膝多糖对大肠埃希菌的细胞粘附具有抑制作用 ,提示该多糖具有调节肠道微生态的潜在应用价值     

巴马小型猪大肠埃希菌的分离鉴定及耐药性试验

目的分离鉴定引起巴马小型猪腹泻的细菌并筛选出对其敏感的特效药物。方法通过常规细菌学检测、分子生物学鉴定、生化试验等方法对疑似细菌感染的巴马小型猪进行分析,同时选用呋喃妥因、美满霉素、庆大霉素等25种药物对分离的细菌进行药敏实验。结果通过以上实验判定巴马小型猪为大肠埃希菌感染引起的腹泻,血清型为O138;药敏试验分析结果表明,该菌株仅对青霉素、链霉素、头孢曲松和呋喃妥因4种药物敏感,对磷霉素、磺胺脒、左氟沙星等高度耐药。结论大肠埃希菌广泛存在耐药性,该研究结果为防治相关实验动物大肠埃希菌感染提供理论依据。     

2003年至2007年大肠埃希菌的临床分离及耐药趋势分析

目的了解2003年至2007年大肠埃希菌在临床标本中的分离情况及其耐药趋势,为临床感染的预防和治疗提供参考资料。方法回顾分析2003年至2007年间所有标本中大肠埃希菌的分离率、标本和病区的分布构成情况以及对17种抗菌药物的耐药率。结果五年间大肠埃希菌的总分离率变化不明显,但其阳性分离率呈上升趋势,从2003年的5.02%增至2007年的6.26%;其在泌尿生殖道标本（尿液标本和尿道分泌物标本）的分离率最高（50.5%）,其次是呼吸道标本（36.66%）;病区分布以重症监护室最高（20.7%）,其次是普外科（18.3%）,所有内科病区（不含ICU）占46.6%;大肠埃希菌对12种抗菌药的耐药率大于50%,仅对其中5种的耐药率每年均低于50%。结论大肠埃希菌的临床总分离率没有明显变化,但阳性分离率有呈上升趋势,其对多数抗菌药物有较高的耐药性,所以感染的治疗应当依据抗菌药物的体外敏感试验。     

超声波清洗杀灭微生物效果的实验研究

目的:观察超声波清洗在相等条件及不同的时间对微生物杀灭作用的影响。方法:采用悬液法在相同时间内分别对大肠埃希菌;白色假丝酵母菌及HBsAg阳性血清进行了杀灭效果测试。结果:超声波清洗1min-15min对大肠埃希菌杀灭率分别为18.2%-94.2%;对白色假丝酵母菌为1.4%-49.7%。而超声波清洗1min-15min对HBsAg阳性血清的抗原性无完全破坏性作用。结论:单一超声波清洗杀灭微生物的效果是随时间的延长杀灭微生物的效果越好。扫描电镜显示,随着超声时间的延长,细菌的细胞壁破坏越严重。而对HBsAg阳性抗原在短时间内不能被完全破坏。     

口腔未培养微生物分离培养策略的研究进展

口腔微生物是人体微生物组的重要组成部分,其群落组成丰富且独特。现有研究显示,口腔微生物与龋病、牙周炎等口腔健康问题有直接的联系,因而具有重要的研究价值。随着高通量测序技术的发展,人们对口腔中未培养微生物多样性的认识不断加深,这进一步催生对微生物分离培养技术需求的增加。为此,本文将围绕口腔未培养微生物及其分离培养策略的研究进展,首先介绍口腔中未培养微生物的研究现状;其次分析口腔微生物分离培养中可能的限制因素;最后综述微生物分离培养技术发展及其在口腔未培养微生物研究中的应用。全文旨在为口腔未培养微生物的分离培养提供思路和技术参考。     

“土壤微生物分离培养”实验的调整与应用

结合农业微生物学实验教学改革的实践,分析了制约实验教学的主要因素.通过调整“土壤微生物分离培养”的实验顺序与实验内容,拓展实验应用范围,寻找解决问题的途径.论证了实验调整的可行性与意义,对实验的各个环节提出了若干操作要点和注意事项,并对教学效果进行了评估与分析.     

1112例血培养结果及耐药性调查

目的了解血培养中检出的病原菌的菌群分布及耐药性情况,为临床合理选择抗生素提供科学依据。方法血培养使用Bact/ALERT3D(120)全自动血培养系统及其配套的培养瓶,病原菌鉴定及药敏试验采用法国BioMerieux公司的ATB Expression细菌鉴定仪及配套试剂条。结果从1 112例血培养中检出病原菌167株,阳性率为15.0%,检出的细菌以凝固酶阴性葡萄球菌、甲型副伤寒沙门菌、伤寒沙门菌、大肠埃希菌为主,凝固酶阴性葡萄球菌对苯唑西林耐药占69.8%。大肠埃希菌的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)发生率为10.0%。结论血培养检出病原菌种类复杂,耐药率高,临床医师应加强疑似败血症患者血液中病原菌的检测,合理使用抗生素。     

活的不可培养的细菌的研究进展

活的不可培养微生物(VBNC)即一些微生物明显地丧失了可培养的特性,但是保留了自身原有的代谢活力,并且在一定条件下,又可以回复到可培养的状态。从VBNC细菌的诱导条件、生物学特性和检测方法3个方面对VBNC细菌研究进展做一综述。     

“微生物的培养与分离”的教学组织

“微生物的培养和分离”是选修Ⅰ“生物技术实践”模块的课题内容之一,创造良好的实验室条件,进行合理的统筹安排,在有限时间内使学生动手与动脑相结合,是本课题教学组织的关键。     

自然界中难分离培养微生物的分离和应用

采用在分离培养基中添加自然来源的抽提液,或加入一些特殊化合物,使其中处于Viable but non-culturable（VBNC）状态的微生物恢复其生长繁殖能力,从而得到分离。实验结果发现甜菜碱、丙酮酸钠、SOD以及过氧化氢酶可使分离到的微生物种类及菌落总数明显增加。还采用固液结合的方法来分离那些在普通平板培养基上不能形成肉眼可见菌落的那些微小菌落的微生物。采用这几种方法从4份土壤样品中共分离得到52株放线菌,103株细菌,17株真菌。对其中的放线菌和真菌进行了生物活性的测定,得到多株具有抗菌活性的微生物,经过多次复筛的平均阳性率为4.325％,略高于用常规方法分离得到的微生物。因此证明有效的分离方法将为今后微生物药物的筛选和药用微生物菌种的保藏提供更丰富的来源。     

微生物絮凝剂产生菌的筛选及培养研究

从活性污泥中筛选出3株能产生高效絮凝活性的微生物,对其中1株TJ3进行其最佳培养条件及废水絮凝实验研究。结果表明TJ3的最佳培养条件为：以葡萄糖、蛋白胨作碳,氮源,初始pH值6～7,温度25～30℃,摇床转速120～160r/min,培养时间72h,可产生高絮凝活性的絮凝剂,对高岭土悬浊液絮凝率达92.4%,同时在最佳培养条件下,该菌所产絮凝剂对多种废水净化效果明显,尤其对净化分散兰染液,酵母菌菌液分离最为突出,絮凝率均在95%以上,具有较高的絮凝性能。     

兔肠道厌氧菌的分离培养条件研究

兔肠道厌氧菌的分离培养条件研究牛钟相朱瑞良张绍学常维山唐珂心徐海花柴家前（山东农业大学动物科学院,泰安２７１０１８）ＳｔｕｄｉｅｓｏｆｔｈｅＣｏｎｄｉｔｉｏｎｓａｂｏｕｔＳｅｐｅｒａｔｉｎｇａｎｄＣｕｌｔｕｒｉｎｇｏｆｔｈｅＡｎａｅｒｏｂｉｏｎｉｎＲ...     

053肠聚集性大肠埃希菌的聚集黏附性菌毛引起肠上皮细胞的炎性反应

肠聚集性大肠埃希菌（大肠杆菌）是导致腹泻的病原菌，在发展中国家儿童中常引起水样腹泻。最近，有学者认为肠聚集性大肠杆菌是引起旅行者腹泻的最主要原因。感染肠聚集性大肠杆菌后，最典型的症状是黏性水样便，同时伴有发热、恶心、呕吐等。肠聚集性大肠杆菌的发病机制包括3步：①黏附到肠黏膜；②诱导黏液生物膜的产生与沉积；③炎症反应和细胞因子的释放。肠聚集性大肠杆菌黏附在人的肠黏膜上需要聚集黏附性菌毛（AAf），     

零售食品中耐药性和肠外致病性大肠埃希菌的检测

美国有数百万泌尿道感染（UTI）是由大肠埃希菌（简称大肠杆菌）所致的肠外感染。由于肠外致病性大肠杆菌株（ExPEC）的耐药，其治疗变得更加困难，这种特殊的大肠杆菌还可产生导致肠外感染的特殊毒力因子（VF）。