我国部分地区土壤中的苏芸金芽孢杆菌和球形芽孢杆菌

从云南、贵州、四川和陕西4省的土壤中分离到大量苏芸金芽孢杆菌(Bacillus thuringie—nsis)和球形芽孢杆菌(Bacillus sphaeticus)菌株。血清型分析表明,苏芸金芽孢杆菌分离株分属于23个血清型中的13个血清型,另有近20％的自凝型菌株及部分与所有标准菌抗血清无反应的菌株。对该两种昆虫病原细菌的生态分布规律进行了分析。研究了全部苏芸金芽孢杆菌分离株对鳞翅目、鞘翅目及双翅目的6种昆虫的毒力特性、伴孢晶体与芽孢的形态,以及晶体蛋白质成分。观察和测定了球形芽孢杆菌分离株的形态和毒力,并分析了部分菌株的晶体蛋白质成分。得到22株高效苏芸金芽孢杆菌和2株高效球形芽孢杆菌。证明苏芸金芽孢杆菌是典型的土壤微生物类群,我国西南地区土壤中的苏芸金芽孢杆菌资源十分丰富。     

球形芽孢杆菌(Bacillus sphaericus)对抗生素的抗性

考查了27株球形芽孢杆菌有毒株对青霉素、链霉素、四环素、氯霉素、红霉素、卡那霉素、庆大霉素、麦迪霉素、核糖霉素、利福平、吖啶黄、磺胺和迭氮钠的自然抗性。结果表明,所有菌株对高浓度的链霉素和迭氮钠及低浓度的氯霉素有抗性,大部分菌株对四环素有抗性。所有菌株对所考查的其它几种抗生素敏感。     

球形芽孢杆菌(Bacillus sphaericus)对抗生素的抗性

考查了27株球形芽孢杆菌有毒株对青霉素、链霉素、四环素、氯霉素、红霉素、卡那霉素、庆大霉素、麦迪霉素、核糖霉素、利福平、吖啶黄、磺胺和迭氮钠的自然抗性。结果表明,所有菌株对高浓度的链霉素和迭氮钠及低浓度的氯霉素有抗性,大部分菌株对四环素有抗性。所有菌株对所考查的其它几种抗生素敏感。     

苏芸金杆菌的一个新血清型

从土壤中分离出一株产生伴孢晶体的芽孢杆菌。该菌株具有苏芸金杆菌的典型特征,严生不规则型晶体,鞭毛抗原及生化反应与已知的苏芸金杆菌21个血清型不㈤,不产生β-外毒素。对棉铃虫、粘虫、大蜡螟及尖音库蚊幼虫均无毒性,是一个新血清型(H22),定名为苏芸金杆菌山东变种(Bacillus thuringiensis serovar shandongiensis, H22)。     

我国西南地区和陕西省土壤中苏芸金杆菌和球形芽孢杆菌资源调查简报

为考察我国土壤中苏芸金杆菌和球形芽孢杆菌的种类和分布状况,并从中获得高效和特异菌株,丰富我国杀虫微生物种质库,1988年6—8月,我们从云南、贵州、四川及陕西省采取土样3160份,从中分离出苏芸金杆菌88株,球形芽孢杆菌87株,还有部分菌株尚待确认。两种细菌的分出率(分离菌株数占土样数的百分率)皆为2.8％左右。由于在进行分离时,同一平板挑取的目标菌落一般不超过2个,因此这一分出率要低于土壤中的实际含有率。按常规免疫血清学方法进行初步血清型分析,结果表明,苏芸金杆菌分离     

苏芸金杆菌生长的氨基酸需求

苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis)在葡萄糖无机盐合成培养基上生长不好,很少形成芽孢。Angus和Norris Dulmage发现,苏芸金杆菌在不同培养基上获得的苏芸金杆菌制备物的杀虫活性不同,表明营养条件对苏芸金杆菌生长、芽孢晶体合成有重大影响。本研究用苏芸     

南昌霉素高产菌株的链霉素抗性基因突变诱变筛选研究

通过对链霉素对南昌霉素（Nanchangmycin)产生菌NS－41－80菌株孢子的致死浓度测定基础上,采用诱变剂甲基磺酸乙酯（EMS）的不同诱发剂量对菌株孢子进行诱变处理,诱变处理的孢子涂布在含链霉素（10ug/mL)致死浓度的高氏平板上,获得了大量的链霉素抗性基因（str)突变株。然后从3,000株链霉素抗性基因（str)突变株中通过初筛获得比诱变出发菌株产素能力提高20％以上的菌株202株,再进一步通过摇瓶复筛,获得比出发菌株产素能力分别提高100％,200％,300％高产菌株为48株,7株和1株,分别为复筛菌和初筛菌株的23．76％和1．60％,3．46％和0．23％,0．5％和0．03％,将产素能力提高240％以上5个菌株连同出发菌株连续3批次进行摇瓶发酵结果,5个突变株的产素能力均比出发菌株的产素能力提高57％－96．4％,其中突变株80－5．3－165菌株摇瓶发酵单位达6,000ug/mL以上,3批次摇瓶平均发酵单位达5,855ug/mL,建立了南昌霉素高产菌株的链霉素抗性基因突变诱变快速高效的筛选方法。     

在国内初次发现的四个苏芸金杆菌亚种

本文报道的五个菌株均是能形成伴孢晶体的芽孢杆菌。从形态与培养性状上看,具有苏芸金杆菌的典型特征。经生化反应与鞭毛抗原的血清反应,证明这五个菌株分属于国内未报道过的四个亚种:菌株L_1为加拿大亚种(B.     

苏芸金杆菌戈尔斯德变种产色素的研究

苏芸金杆菌的变种在某些产色素培养基上能形成非水溶性红色色素。这个类群的标准菌株是苏芸金杆菌阿莱变种。但该变种均需在某些产色素培养基上才形成色素,着色部位仅是菌落。我们用亚硝基胍(MNNG)处理该变种时,得到一株能在非色素培养基上产生水溶性色素的新品系。我们对这株菌进行了分类地位、生产性能、杀虫活性及伴孢晶体数量的研究,现报道如下。     

苏芸金杆菌伴孢晶体和芽孢孢衣的蛋白质组分及其与毒力的关系

研究了苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis)3个变种6个菌株的提纯伴孢晶体和芽孢对大蜡螟(Galleria mellonella)和大菜粉蝶(Pieris brassicae)的毒力、晶体的蛋白质和多肽成分及芽孢衣中的类晶体蛋白质成分.生物测定表明,晶体毒力高于芽孢,在总数量相同的情况下,晶体和芽孢近1:1的混合物的毒力高于单独的晶体或芽孢.芽孢衣中存在一种类似晶体蛋白质的成分,无晶体突变株及无效野生株的芽孢则无此种蛋白质且对两种昆虫无毒.变种wuhanensis和变种galleriae的晶体含MW138000的主要蛋白质和63000的次要蛋白质,经碱性缓冲液溶解后,上清液含MW138000的蛋白质,沉淀中含MW63000的蛋白质;变种aizawai的晶体中仅含138000的蛋白质.对大蜡螟无毒的HD-11(var.aizawai)晶体的蛋白质成分有别于上述晶体,其胰蛋白酶消化物的SDS凝胶电泳图型显示少2条多肽带,但对大菜粉蝶仍有效.结果表明,苏芸金杆菌的芽孢在昆虫病理中有重要作用,伴孢晶体的蛋白质和多肽成分与它们对昆虫的毒力特性之间有密切关系.     

四株昆虫病原芽孢杆菌的鉴定和毒效测定

1973年,我们在广州市郊区、广东省德庆县、高要县等地进行马尾松毛虫(Dendrolimus punctatus)的天敌调查吋,从分离到的50余个菌株中,得到4株含伴孢晶体的芽孢杆菌,编号为1-(1)、6-(2)、11-(5)、9-(2)。经生化鉴定初步表明:1-(1)菌株属于苏芸金杆菌蜡螟变     

中药源芽孢杆菌抗病原真菌菌株的筛选与鉴定

从20种中药中分离纯化得到48株芽孢杆菌,其中25株对10种植物病原菌中至少一种具有拮抗作用,7株抗菌谱较广,其中1株广谱抗菌能力极强。25株有抗性菌株经纯化培养对其进行菌体菌落形态观察和生理生化特征鉴定,其中8株芽孢杆菌被初步鉴定为枯草芽孢杆菌,3株被初步鉴定为蜡样芽孢杆菌,1株被初步鉴定为纳豆芽孢杆菌,1株被初步鉴定为地衣芽孢杆菌,发现两种可能对芽孢杆菌有抑制作用的中药。     

MS07A菌株生物学特性

1981年从松毛虫(Dendrolimus)的死蛹体内分离出一株能形成拌孢晶体的芽孢杆菌。该菌具有苏芸金杆菌(Bacillus thuningiensis)的典型特征,血清型属于H_3a_3b,又根据其生化特性和培养特征,被确认为属于B.teuringiensis var.Kurstaki中的一个菌株,代号MS07A简称7A。     

苏芸金杆菌的质粒检测及载晶体蛋白合成基因的质粒在不同菌株间的传递

分析了苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis)7个变种19个野生菌株及无晶体(sp+cr-)和无芽孢(sp-cr+)突变株的质粒图型,证实了苏芸金杆菌的质粒组成既有变种的特异性,亦有菌株的特异性。载有晶体蛋白质合成基因的质粒,B. thuringiensis var．Kurstaki HD-191 菌株可能为42和50Mdal,B．Thuringiensis var. aizawai HD-282菌株为47Mdal, B．Thuringiensis var．Israelensis IPS-82菌株为57Mdal的质粒,而B．Thuringiensis var. wuhanensis 140 菌株的此种基因则可能不在质粒上而在染色体中。HD-191载晶体蛋白合成基因的质粒以很高频率被传递给其无晶体突变株HD-1并在后者细胞中表达。B. thuringiensis var. israelensisIPS-82菌株和 B．Thuringiensis var. kurstaki 无晶体突变株HD—1之间载晶体蛋白合成基因质粒的传递未能成功,提示可能存在着不相容性的障碍。     

两株高效相思根瘤菌的抗药性研究及其质粒组成分析

目的:研究相思根瘤菌质粒与其抗药性之间的关系。方法:研究了相思根瘤菌MZ和AJ018在含不同浓度的抗生素的固体培养基和液体培养基的生长情况,并用碱裂解方法对其质粒组成进行检测。结果:两菌株对链霉素和卡那霉素均无抗性,而对其它抗生素都有不同程度的抗性。MZ菌株对实验中的氯霉素、氨苄青霉素、四环素三种抗生素的耐受范围与最大耐受值都比AJ018强,当平板培养基中氨苄青霉素、四环素、氯霉素的终浓度分别为250μg/ml、75μg/ml、150μg/ml时,AJ018在平板上无菌落生长,当三种抗生素终浓度分别为800μg/ml1、50μg/ml、400μg/ml时无菌落生长。两菌株都含有一个大约50kb的质粒。     

苏芸金杆菌的一个新变种——云南变种

113菌株是从罹病致死的斜纹夜娥(prodenia litura Fabrieius)幼虫体上分离出来的产晶体芽孢杆菌,其形态、生理、生化及血清学反应与现在已知的苏芸金杆菌的各个对比菌株有别,是一个新变种,定名为苏芸金杆菌云南变种(Bacillus thuringiensis Var·yunnanensis)。     

苏芸金杆菌高毒力菌株筛选方法研究

通过对36株苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis)菌株孢晶混合物的蛋白图谱和其对小菜蛾(Plutella xylostella)。致倦库蚊(culex pipens)二十八星瓢虫(Epjlachna vigintioctopunctata)三种昆虫幼虫的致死率研究,我们建立了一套快速高效的苏芸金杆菌内毒素高毒力菌株筛选程序。该程序是将蛋白电泳方法引入苏芸金杆菌菌株筛选,经过一个简单的苏芸金杆菌孢品混合物的蛋白电泳后,可以迅速辩别出对所有试虫毒力均很低的菌株,这一类菌株在苏芸金杆菌分离物中的比例可高达80％以上。除此之外,根据电泳的结果还可以预测该菌株大概的宿主范围和发现新的杀虫晶体蛋白类型。运用该方法,可以大大提高苏芸金杆菌菌株筛选的效率并降低筛选所需的费用。     

多粘芽孢杆菌质粒的研究——Ⅱ.多粘芽孢杆菌原生质体形成、再生与转化

多粘芽孢杆菌P250-2完整菌体不能作为质粒DNA的转化受体,但其质粒消除菌株P_0250-5制成的原生质体,可接受多粘芽孢杆菌的pBD2502及枯草杆菌的pUB110质粒DNA转化。在高渗蔗糖再生培养基上,原生质体再生率为20％左右,形成率在95％以上。在含新霉素(10μg/ml)、青霉素(25μg/ml)、四环素(12.5μg/ml)的高渗蔗糖再生培养基上分别获得了转化子。多粘芽孢杆菌的转化频率为3.29×10~(-3),枯草杆菌为4.4×10~(-4)。转化子的形态表现、生化特性和抗菌谱与给体菌株一致,表明多粘芽孢杆菌株间及多粘芽孢杆菌和枯草杆菌种间的质粒可以进行转化。     

苏芸金杆菌天门变种——“7216”菌的研究

1972年从棉花红铃虫(Pectinophora gossypiella Saunders)中分离出一株能形成伴孢晶体的芽孢杆菌“7216”。该菌具有苏芸金杆菌(Bacillus tkuriniientis)的典型特征[1]。血清型属Hsasb,但培养特征、生化特性有别于H,中的阿莱变种和戈尔斯德变种,认为是苏芸金杆离的一个新变种,定名为苏芸金杆菌天门变种Bacillua thuriniensit var．Tianmentig(7216)。     

在不同昆虫体内连续传代对苏芸金杆菌晶体形成的影响

苏芸金杆菌“7216”菌株在人工培养基上连续转接,会产生衰退现象。产晶体的苏芸金杆菌,衰退主要表现在晶体的变化上,严重者会使晶体消失。幸兴球等发现将6个菌株连续通过粘虫虫体转接后,晶体大小发生变化,并可使其最后失去产生晶体的能力。但从中却分离到