糖类和植物生长调节剂对冬虫夏草子实体人工培养的影响

为提高人工培养冬虫夏草子实体的产量,需要优化其培养参数。本实验测定培养基中糖类和植物生长调节剂对冬虫夏草子实体产量的影响。于大米小麦作为主要组分的培养基中接入冬虫夏草菌,在9~13℃下培养60 d,转入4℃培养。葡萄糖培养基中,冬虫夏草子实体干重是麦芽糖培养基中的7.6倍,出现菌丝和收获子实体的时间也比麦芽糖培养基中至少快2个月;蔗糖培养基中未获得子实体。不同种类和浓度植物生长调节剂对冬虫夏草子实体产量影响显著。于菌液中加入环磷腺苷、三十烷醇和玉米素的培养瓶均未发现菌丝生长。加入100μg/mL 6-苄氨基腺嘌呤的培养瓶可见菌丝生长,但未见原基分化。转入4℃下6个月后,与对照相比,加入100μg/mL吲哚乙酸、1μg/mL和100μg/mL吲哚丁酸、10μg/mL赤霉素、1μg/mL和10μg/mL乙烯利,以及1μg/mL 2,4-D的培养瓶中子实体干重均显著提高,其中加入1μg/mL吲哚丁酸和1μg/mL 2,4-D的培养瓶的子实体干重是对照的15倍。实验结果为优化冬虫夏草子实体人工培育提供了支撑。     

不同温度对麻醉后小鼠晶状体浑浊的影响

目的:探讨不同温度对麻醉后小鼠晶状体出现突发性浑浊的影响。方法:用10%水合氯醛(400mg/kg)腹腔注射麻醉40只雄性C57/BL6小鼠,分别置于4℃、15℃、23℃、37℃,扩瞳后,于麻醉后10min、20 min、30 min、45 min、60 min裂隙灯观察小鼠晶状体浑浊状态,60 min后小鼠断颈处死,冰冻切片行HE染色检测晶状体形态学改变。结果:麻醉后,4℃下所有小鼠在麻醉10min后出现晶状体浑浊,15℃中8只小鼠在麻醉10min后开始出现晶状体浑浊,60min后全部小鼠晶状体浑浊,在23℃中1只小鼠在麻醉10min后开始出现晶状体浑浊,60min后8只小鼠晶状体浑浊,37℃中,麻醉20min后才开始出现晶状体浑浊,60min后,共5只出现晶状体浑浊。HE染色显示晶状体重度浑浊时,晶状体前膜囊增厚,上皮细胞增多,排列紊乱,层次增多。结论:低温可诱导麻醉后小鼠晶状体更早出现浑浊,并使浑浊程度加重,在进行晶状体等眼科相关动物实验中,麻醉后应注意给小鼠保温,避免出现严重的晶状体浑浊,干扰实验结果。     

促进CHO细胞生长及其产物hNGF表达的培养条件的初步研究

以稳定表达人神经生长因子（hNGF）的重组工程CHO细胞株为对象,采用无血清流加悬浮培养（Fed batch culture）方式,考察使用基础培养基(无特殊添加物),分别添加丁酸钠、DMSO、KH2PO4的培养基及不同培养温度（32℃和37℃）对细胞生长和重组蛋白表达的影响。每日取样检测细胞密度、细胞活率、葡萄糖浓度、重组蛋白浓度。结果表明细胞培养温度由37℃下降至32℃,细胞生长周期明显延长,重组蛋白产量增加。5mmol/L丁酸钠和2% DMSO的加入虽然提高了重组蛋白的表达量,但严重抑制细胞生长。最大的蛋白比生成速率（qNGF）出现在37℃培养且添加2% DMSO的培养条件下,而最高蛋白表达量则出现于32℃培养添加3.65mmol/L KH2PO4的培养条件下。研究表明,将培养温度设为32℃,在基础培养基中添加3.65mmol/L KH2PO4或1% DMSO是提高hNGF表达水平的有效方法。     

双色豆瓣绿的快速繁殖

植物名称:双色豆辦绿(Peperomia obtusifoliavariegeta)。材料类别:叶片及叶柄。培养条件:MS培养基加入不同浓度DA(0.1mg/L～2mg/L)及不同浓度IAA(0.1mg/L～1mg/L)诱导芽的分化;MS培养基加入1mg/LIAA诱导生根。试管苗移栽于20℃人工气候室内。组织培养温度24～26℃,每天光照10小时。生长与分化情况:盆栽黄、绿相间的叶片及紫色叶柄为试验材料。表面常规消毒后,切成0.7cm见方的小块于不同诱导培养基上。约经2～3个月可见外植体上出现绿色小点,继之形成芽。从不同浓度BA及IAA配比看出,每升培养基中BA浓度     

最新发现的细菌

<正> Legionella pneumophila系“退伍军人病”(Legionnaires disease)的病原体,是以新型肺炎的病原菌而发现的细菌。所谓“退伍军人病”是由于1976年7月美国退伍军人会在弗城召开时,与会者中很多人得了此病而得名。病原体的发现是根据美国疾病控制中心(CDC)的人们从感染豚鼠的脏器分离病原体以及冷冻保存,患者血清的抗体滴度测定的结果得到证实的。 该菌是革兰氏阴性杆菌。无芽胞、鞭毛、和荚膜,不抗酸,据说用一般的培养基和培养方法是不能够检查出来的。培养此菌可用Mueller-Hinton琼脂培养基为基础,加入血红蛋白粉,灭菌后再加入lsovitaleX或无菌的半胱氨酸盐酸盐水溶液的培养基;也可用F-G琼脂培养基(基础培养基同前)。     

夏季蛇场降温技术

人工养殖蛇类,无论是室内养殖还是蛇场养殖,其饲养密度一般都比较大。夏季蛇场出现的高温、高湿及不通风现象,均会造成蛇类不活动、不吃食、不蜕皮,有的甚至采取消极的御热方式而进入“夏眠”,这样会减缓蛇类的正常生长发育。因此,在夏季来临之前,应提前做好蛇场的以下几项工作。1　栽花种草　　在蛇场内的适宜位置栽种花草或矮生树木,但不能栽种带刺的植物,以免刺伤蛇类。2　洒水降温　　当场内温度达到32℃～34℃以上时,应及时于清晨或傍晚洒水降温,并在蛇的饮用水中加入5%～10%的葡萄糖和维生素C,还可加入盐酸氯丙嗪,用量为成年蛇300mg/…     

支原体新培养基的效果观察

既往常规使用的支原体培养基主要成份为盐酸消化猪胃胨,牛肉浸液,马血清及酵母浸液。近几年采用猪肺消化液代替猪胃胨和牛肉浸液,卵黄液代替马血清组成新培养基。用上述两种培养基对四种支原体进行多次定性和定量的生长效果对照观察。结果表明新培养基的培养效果与常规培养基一致,而且较常规培养基来源方便,价格便宜。用新培养基制备的抗原质量更为理想。     

脑膜炎球菌多糖疫苗培养基的优化研究

目的探索A群、C群脑膜炎球菌多糖疫苗培养基的适宜配方。方法通过筛选改良培养基(配方2)中酸水解酪蛋白替代培养基配方1中原50%盐酸酪蛋白水解液制备相应的培养基,培养A群、C群脑膜炎球菌一定时间后,以收获的细菌浓度和复合多糖量来确定培养基的配比,并比较该培养基在不同温度条件下培养细菌的结果。结果在A群、C群脑膜炎球菌多糖疫苗不同培养基的细菌培养过程中,用酸水解酪蛋白制备的改良培养基(配方2)培养的细菌浓度和多糖收获量均高于其他培养基(配方1和配方3),用酸水解酪蛋白培养基能提高脑膜炎球菌的产量。结论以酸水解酪蛋白为主要原料(配方2)的改良培养基能作为流脑A群、C群细菌的最适培养基,且细菌在(37±0.2)℃培养情况良好。     

中药合剂CB在晶状体白内障形成中对巯基及二硫键的作用

用白内障诱发剂三硝基甲苯、平阳霉素、亚硒酸钠和半乳糖分别加入大鼠晶状体培养基中,共同培养２４ｈ,同时在各培养基中分别加入中药合剂ＣＢ,以观察其药效,用维生素Ｃ作对照。结果表明中药合剂ＣＢ能够保护非蛋白质巯基免致氧化,抑制蛋白质巯基交联,降低晶状体不溶性蛋白质中二硫键含量,故中药合剂ＣＢ有可能作为抗白内障药物应用于临床。     

原生质体来源的大白菜悬浮细胞系的超低温保存

原生质体来源的大白菜 Brasstca campessris var.pekinsis 悬浮细胞系在二甲亚砜的保护下,能在液氮中(-196℃)长期冻存。加入山梨醇能增强保护作用;而加入甘露糖则降低保护作用。培养基对冻存也有明显的影响。在液氮中存放的时间长短对细胞存活率没有多大影响。冻后相对活性最高可达75.4％,恢复生长快,化冻后重新悬浮培养6天,生长量可达300-500％。遮光比不遮光对恢复更有利。冻存后恢复生长的悬浮细胞,能与未经冰冻的对照一样进行原生质体分离和培养。     

大肠杆菌角鲨烯合成途径的构建与调控

角鲨烯因其具有良好的抗氧化功能而被广泛应用于食品、医药、化妆品、工业应用等领域。本实验在大肠杆菌中构建角鲨烯合成途径,通过对其合成途径中关键限速酶(1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶和异戊烯基二磷酸异构酶)过表达的方法进行初步调控,使角鲨烯的产量提升了近三倍。之后采用单因素试验对其发酵培养基和培养条件进行优化,以此来提高角鲨烯的产量。优化发酵条件后,使用最优发酵培养基——TB培养基,在最佳发酵条件:37℃,220r/min培养至OD600约为1.2时加入终浓度为0.1mmol/L的IPTG诱导剂,25℃条件下诱导48h,角鲨烯产量可达73.88mg/L。     

硫代硫酸钠对蓝细菌Synechocystis sp．PCC 6803生长在含葡萄糖培养基中所产生的一种新糖脂的影响

当蓝细菌Synechocystis sp.PCC 6803在添加葡萄糖的BG—11培养基中培养时,细胞出现了一种新脂。这种脂经浓硫酸／α—萘酚染色反应证实为糖脂,记为糖脂—x。这一糖脂的出现伴随着其他脂、尤其是双半乳糖甘油二酯含量的下降。此外,在添加果糖、麦芽糖、乳糖等其他碳源的培养基中生长的细胞中也检测到这一糖脂。活性氧猝灭剂硫代硫酸钠加入到培养基中能有效地抑制糖脂x的出现。当在BG—11培养基中加入0．3％硫代硫酸钠后,糖脂x仅能在培养基中添加高浓度(100mmol／L)的葡萄糖且细胞生长处于后指数期时检测到。这些结果表明蓝细菌Synechocystis sp．PCC 6803细胞在含葡萄糖的培养基中生长出现的一种新糖脂可能与活性氧有关。     

水稻单倍体不定芽超低温保存和植株再生及其遗传稳定性研究

通过水稻单倍体幼穗离体培养,诱导形成了大量的不定芽。将３ｍｍ左右的不定芽转入半固体继代培养基继代培养７ｄ,而后转入１．８ｍＬ的安瓿瓶中,冰浴条件下加入预冻了的冰冻保护剂淹没材料,在冰上平衡４５￣６０ｍｉｎ后,转入程序降温仪,以１．０℃／ｍｉｎ的速率从４℃降至－４０℃,在－４０℃停留１ｈ后,投入液氮保存。将液氮保存３０ｄ左右的不定芽于３８￣４０℃的水浴中快速解冻,随即转入半固体的再生培养基,以待恢复     

硫代硫酸钠对蓝细菌Synechocystis sp. PCC 6803生长在含葡萄糖培养基中所产生的一种新糖脂的影响

当蓝细菌Synechocystis sp. PCC 6803在添加葡萄糖的BG-11培养基中培养时,细胞出现了一种新脂.这种脂经浓硫酸/α-萘酚染色反应证实为糖脂,记为糖脂-x.这一糖脂的出现伴随着其他脂、尤其是双半乳糖甘油二酯含量的下降.此外,在添加果糖、麦芽糖、乳糖等其他碳源的培养基中生长的细胞中也检测到这一糖脂.活性氧猝灭剂硫代硫酸钠加入到培养基中能有效地抑制糖脂x的出现.当在BG-11培养基中加入0.3%硫代硫酸钠后,糖脂x仅能在培养基中添加高浓度(100 mmol/L)的葡萄糖且细胞生长处于后指数期时检测到.这些结果表明蓝细菌Synechocystis sp. PCC 6803细胞在含葡萄糖的培养基中生长出现的一种新糖脂可能与活性氧有关.     

卵黄脂磷蛋白通过网格蛋白介导的内吞作用进入培养的人成纤维细胞

为了探究从斑马鱼(Danio rerio)胚胎裂解液中纯化的卵黄脂磷蛋白(lipovitellin, Lv)进入培养的人成纤维细胞的分子途径,该研究用Sephadex G-200色谱柱结合QAE-Sephadex A50阴离子交换色谱柱从斑马鱼0 h胚胎裂解液中分离纯化出Lv。FITC标记的Lv(FITC-Lv)预先分别与Hepes、牛组蛋白、鱼精蛋白、卵磷脂、0 h胚胎胰蛋白酶水解物或者斑马鱼胚胎裂解液孵育,再加入至opti-MEM培养基中培养人成纤维细胞,培养一定时间后,用荧光倒置显微镜观察,发现Hepes和组蛋白可以促进Lv进入细胞。制霉菌素是陷窝介导的内吞作用(caveolae-mediated endocytosis)的抑制剂,氯丙嗪和蔗糖是网格蛋白介导的内吞作用(clathrin-mediated endocytosis)的抑制剂,阿米洛利是巨胞饮作用(macropinocytosis)的抑制剂。为了证实Lv进入细胞的分子途径,在FITC标记Lv与人成纤维细胞的培养体系中,分别加入上述抑制剂。结果发现氯丙嗪和蔗糖可以抑制Lv进入细胞。该研究获得如下结论:纯化的斑马鱼Lv单独...     

从猩猩肠道中分离的一株毛滴虫

1984年1月10日从上海动物园的猩猩(Ponge pygmaeus)粪便中检获一种鞭毛虫,即取其新鲜粪便接种于洛克液琼脂血清培养基中,共接种两管,每一培养管各加入青霉素2500单位,链霉素2.5mg;培养于35℃±0.5℃,三天后第一次移种时,培养管不加抗菌素,此后每周转种二次,至10月份连续培养80余代,该虫生长良好,说明这种鞭毛虫可适应于体外培养,所用的这种培养基也较合适。     

实验9 λ噬菌体DNA的提取

一、平板扩增抽提法 1.LB培养基上划线接种宿主菌,37℃培养过夜。 2.挑取单菌落接种在LB培养液中,培养液含0.2％麦芽糖。37℃振荡培养过夜。 3.0.5毫升菌液;0.1毫升 Mg~++Ca~++溶液(10mM MgCl_2/10mM CaCl_2);噬菌体[10~5pfu(噬斑生成单位)],混和,37℃水浴中保温15分钟。 4.加入4毫升42—45℃含0.7％琼脂粉的LB培养液,迅速混匀,铺在直径为8.5厘米的含1.5％琼脂粉的LB培养基上。37℃培养过夜。铺有上层培养基的一面朝上培养。     

抗氧化剂和吸附剂对槲蕨外植体中几种与褐化有关生理指标的影响

槲蕨[Drynaria,fortunei(Kze)J.Sm.]采自本校校园。取其幼嫩走茎,去除表皮后,用自来水冲洗干净。在超净工作台上先用70%乙醇浸泡30 S,再用0.1%HgCl_2,表面消毒4min,用无菌水冲洗5～6次后,接种在以下培养基中:(1)MS(对照);(2)MS 10mg·L~(-1)抗坏血酸(VC);(3)MS 1000 mg·L~(-1)聚乙烯吡咯烷酮(PVP);(4)MS 1000mg·L~(-1)活性炭(AC)。各培养基均加入1mg·L~(-1)6-BA、0.2 mg·L~(-1)NAA、3%蔗糖和0.8%琼脂。每种培养基接种18瓶。培养温度(25±2)℃,每天光照12 h,光照强度20～40μmol·m~(-2)·s~(-1)。培养1、3、     

腺苷高产菌株Bacillus subtilis DI4-24退化的遗传机制与控制研究

经人工诱变获得的腺苷高产菌株Bacillus subtilis DI4-24很容易发生退化,通过分析回变菌株的遗传性状和考察理化条件对回复突变的影响,研究退化的机制,找到控制的方法。在选择培养基上筛选回变菌株,生长谱法分析其遗传型;于743 nm条件下分光光度法测定回复突变细胞内积累的特有红色物质,研究各理化条件对回复突变的影响。退化原因是由于组氨酸缺陷型发生回复突变所致,突变菌株腺苷产量大幅度下降;降低保藏温度、减少传代次数可以有效地减缓菌种的衰退;种子制备过程中适当降低培养温度2℃~3℃、缩短培养时间(8 h)、降低培养基pH至中性偏酸性(6.5)以及加入胡萝卜素、叶酸等物质都可以有效降低回变率,在此条件下制备的种子生产性能得到提高,其腺苷产量可比对照提高9%。     

瓶栽蛹草子座的方法

蛹草(Cordyceps militaris),也称北冬虫夏草,其药性与传统中药材冬虫夏草(C.sinensis)相近。我们在罐头瓶内多次育成蛹草子座,现将方法介绍如下。 (一)培养基的制作与接种方法普通大米:高梁米=9:1,使含水量达到110-120％,其中含KH_2PO_40.1％,MgSO_4 0.05％,酵母粉0.5％,蛋白质少量。每瓶加入50-100克干重的培养基。灭菌时间:高压1.5-2小时,常压8-10小时。取斜面菌种一小片或米饭培养基菌种一小块,在无菌条件下接种在罐头瓶内。菌种特点:在斜面培养基上菌丝纯白色、粗壮浓密,紧贴培养基生长,边缘清楚;在米饭培养基上容易形成浅桔黄色的色素沉着。 (二)栽培管理菌株接种后,在15℃左右条件下培养。6-10℃生长缓慢,20-25℃有利于子座形成。培养基含水量低于100％以下,生长缓慢;湿度过