鉴别脑膜炎球菌用的半固体糖发酵管

我们曾将黄豆浸液玉米淀粉抗菌素培养基用于脑膜炎球菌的培养,效果很好。在1976和1983年对健康人群脑膜炎球菌带菌调查时,将黄豆浸液玉米淀粉配制成半固体糖发酵管,鉴别脑膜炎球菌结果仍较满意。半固体糖发酵管的培养基制备方法是:(1)基础培养基(g):胰胨6,脉胨6,氯化钠3,牛肉膏3,琼脂3,蒸馏水800 ml,加热溶化。(2) 玉     

脑膜炎球菌多糖疫苗培养基的优化研究

目的探索A群、C群脑膜炎球菌多糖疫苗培养基的适宜配方。方法通过筛选改良培养基(配方2)中酸水解酪蛋白替代培养基配方1中原50%盐酸酪蛋白水解液制备相应的培养基,培养A群、C群脑膜炎球菌一定时间后,以收获的细菌浓度和复合多糖量来确定培养基的配比,并比较该培养基在不同温度条件下培养细菌的结果。结果在A群、C群脑膜炎球菌多糖疫苗不同培养基的细菌培养过程中,用酸水解酪蛋白制备的改良培养基(配方2)培养的细菌浓度和多糖收获量均高于其他培养基(配方1和配方3),用酸水解酪蛋白培养基能提高脑膜炎球菌的产量。结论以酸水解酪蛋白为主要原料(配方2)的改良培养基能作为流脑A群、C群细菌的最适培养基,且细菌在(37±0.2)℃培养情况良好。     

戊糖乳杆菌31-1菌株产细菌素发酵条件优化*

对戊糖乳杆菌31-1产细菌素的条件进行了优化,分别研究了培养温度,培养基起始pH值,培养基碳源、氮源,刺激因子等因素对细菌素产量的影响。组合因素优化结果得到最佳培养基与培养条件为:乳糖30g、胰胨15g、豆胨20g、牛肉膏30g、蛋白胨20g、吐温80 1mL、磷酸氢二钾2g、乙酸钠5g、柠檬酸铵2g、硫酸镁0.58g、硫酸锰0.25g,蒸馏水定容至1000mL,30℃培养24h,培养起始pH为6.5。在此条件下培养细菌素效价可达到640AU/mL,与起始培养基相比细菌素产量提高了8倍。     

戊糖乳杆菌31-1菌株产细菌素发酵条件优化

对戊糖乳杆菌31-1产细菌素的条件进行了优化,分别研究了培养温度,培养基起始pH值,培养基碳源、氮源,刺激因子等因素对细菌素产量的影响。组合因素优化结果得到最佳培养基与培养条件为：乳糖30g、胰胨15g、豆胨20g、牛肉膏30g、蛋白胨20g、吐温801mL、磷酸氢二钾2g、乙酸钠5g、柠檬酸铵2g、硫酸镁0．58g、硫酸锰0．25g,蒸馏水定容至1000mL,30℃培养24h,培养起始pH为6．5。在此条件下培养细菌素效价可达到640AU／mL,与起始培养基相比细菌素产量提高了8倍。     

分光光度法标定酵母超滤液浓度及其在脑膜炎球菌培养基优化过程中的应用

目的:建立检测酵母超滤液浓度的方法,并探索适合A、C群脑膜炎球菌生长的无动物源性培养基中酵母超滤液的浓度。方法:通过全波长扫描及不同波长吸光度值的比较确定检测酵母提取物浓度的最佳波长;用3000 Da超滤膜超滤酵母提取物溶液,制备酵母超滤液并检测其性质;观察脑膜炎球菌在含不同批次酵母超滤液的半综合培养基中的生长情况,验证不同批次标化的酵母超滤液的稳定性;配制含不同浓度酵母超滤液的半综合液体培养基,观察A、C群脑膜炎球菌的生长情况。结果:通过全波长扫描及不同波长吸光度值的比较,确定了检测酵母提取物浓度的最佳波长为405 nm;采用3000 Da超滤膜超滤后的酵母超滤液不与CTAB产生沉淀,通过检测其D_(405nm)值,可以确定酵母超滤液的浓度;从生长情况考虑,A、C群脑膜炎球菌半综合培养基中最优酵母超滤液浓度分别为4、2 mg/L。结论:建立了制备酵母超滤液及分光光度法标定酵母超滤液浓度的方法,确定了培养A、C群脑膜炎球菌半综合培养基中最优酵母超滤液浓度。     

大半边旗孢子的组织培养

1 植物名称 大半边旗(Pteris dissitifolia Bak.),又名疏羽半边旗. 2 材料类别成熟孢子. 3 培养条件(1)孢子萌发培养基:1/2MS大量元素 10 g·L-1蔗糖;(2)原叶体增殖培养基:1/2MS大量元素 NAA 0.5 mg·L-1(单位下同) 6-BA 0.5 30 g·L-1蔗糖;(3)愈伤组织诱导培养基:1/2MS 2,4-D 1 6-BA 0.5 10 g·L-1蔗糖;(4)孢子体诱导培养基:1/2MS大量元素 GA30.1 30 g·L-1蔗糖.     

利用响应面法优化红谷霉素发酵培养基*

在摇瓶条件下,对链霉菌702发酵生产过程中的主要培养基组成对产红谷霉素影响进行的研究。试验采用响应面法优化摇瓶发酵培养基,利用全因子实验设计筛选出对链霉菌702产红谷霉素重要影响因子黄豆饼粉和工业蛋白胨,应用最陡爬坡实验法接近重要因子的最优水平,然后应用中心复合设计确定重要因子的最优水平。优化后的培养基组成为：玉米淀粉20g,玉米粉20g,葡萄糖20g,磷酸二氢钾0．3g,蛋白胨9g,黄豆饼粉23g,硝酸钾2．5g,硫酸铵2．5g,豆油5mL,氯化钠3g,碳酸钙6g,定容至1L。实验结果表明,采用优化后的培养基,其发酵液红谷霉素效价达到1,500μg／mL,比优化前提高了3.08倍。     

脑膜炎球菌多糖疫苗培养基的标准化研究

目的用干粉原料完全替代以消化液为主要原料的培养基配方,实现脑膜炎球菌多糖疫苗培养基的标准化生产。方法用筛选改良的酪蛋白酸水解物干粉替代50%盐酸酪蛋白水解液,以改良酵母浸出粉替代酵母透析液和酵母浸出粉,适当调整培养基配方,改进并稳定培养基制备工艺,确定适宜质量指标,并对各项质量指标数据进行分析。结果改进后的脑膜炎球菌多糖疫苗干粉培养基有效地降低了批间差异,各项质量指标均符合脑膜炎球菌培养要求,培养基的各项质量指标更加稳定可控,在生产中得到了良好、稳定的生长结果。结论用干粉原料完全替代脑膜炎球菌多糖疫苗培养基中的消化液和酵母透析液是成功的,同时改良的干粉培养基进一步明确了配方标准,使原料准备、制备工艺、质量指标控制更加标准化,有效提高了培养基质量,有利于规模化生产,促进了脑膜炎球菌多糖疫苗生产用培养基的标准化工作。     

不同酸水解酪蛋白对W135群和Y群脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖产量的影响

目的 探索不同酸水解酪蛋白对W135群与Y群脑膜炎奈瑟菌(脑膜炎球菌)荚膜多糖产量的影响。方法 分别以NaCl质量分数为37%和14%的酸水解酪蛋白作为有机氮源配制改良半综合高盐培养基和低盐培养基,利用全自动细菌发酵罐分别在两种培养基里培养W135群和Y群脑膜炎球菌,比较这两种菌株在两种培养基中的生长时间、收获液菌密度( A 600 nm 值)、收获液去菌体后与去复合多糖后上清中的荚膜多糖含量,以及纯化后的精糖产量;比较高盐培养基收获液及其2倍稀释液中不同终含量的十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammonium bromide, CTAB)溶液对多糖沉淀效果的影响。结果 W135群与Y群脑膜炎球菌在两种培养基中的培养时间差异无统计学意义( P >0.05),但高盐培养基收获液的菌密度、收获液去菌体后上清液中的多糖含量均高于低盐培养基收获液,差异有统计学意义( P < 0.05),而高盐培养基收获液纯化后的精糖产量低于低盐培养基,差异有统计学意义( P <0.05)。高盐培养液2倍稀释后,在CTAB终体积分数为0.04%时,W135群与Y群脑膜炎球菌多糖全部沉淀,而未稀释高盐培养液即使CTAB终体积分数提高到0.14%,依然也不能完全沉淀 W135群与Y群脑膜炎球菌多糖。结论 不同酸水解酪蛋白对W135群和Y群脑膜炎球菌的生长密度和荚膜多糖产量有影响,用CTAB溶液沉淀荚膜多糖时需控制收获液盐含量。     

离子色谱法测定ACYW135群脑膜炎球菌结合物中Y群及W135群多糖含量

目的利用离子色谱法即高效阴离子交换柱层析—脉冲安培检测法(HPAEC-PAD),测定ACYW135脑膜炎球菌多糖蛋白结合物中Y群和W135群多糖含量的方法,并加以验证。方法将ACYW135脑膜炎球菌多糖蛋白结合物中Y群和W135群多糖用三氟乙酸(TFA)水解为特异性单糖(葡萄糖、半乳糖),并去除水解液中残留的TFA,用HPAEC-PAD分析检测,用PA10糖分析柱分离单糖,电化学检测器测定葡萄糖及半乳糖含量,用Chromeleon色谱工作站记录并分析数据。对上述方法进行专属性、准确性、重复性验证,确定该方法的检出限和定量限。结果 Y群和W135群多糖在TFA2.5 mol/L(终浓度)、90℃、4 h可完全水解为葡萄糖、半乳糖。对照品葡萄糖及半乳糖在0.10~60.00μg/m L范围内,质量浓度和色谱峰面积呈较好的线性关系,r均大于0.99,回收率为87.94%~109.80%,相对标准偏差(RSD)为1.00%~2.00%,检出限为0.05μg/m L(信噪比3∶1),定量限为0.10μg/m L(信噪比10∶1)。结论离子色谱法可同时检测脑膜炎球菌多糖蛋白结合物中Y群和W135群糖含量,该方法操作简便、灵敏、快速,干扰小,重现性好,适用于对相关疫苗生产过程中的质量控制。     

海洋枯草芽孢杆菌产纤溶酶的诱变育种与发酵工艺优化*

目的:对海洋来源的具有产纤溶酶能力的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)LC6-1进行紫外诱变,得到高产且稳定的突变株PW6-3,对该突变株发酵产酶的条件进行优化。方法:采用单因素和正交试验进行发酵培养基组分和培养条件的优化。结果:突变株PW6-3的酶活力为(6 960.21 ± 85.51)U/mL,较原始菌株提高了30.48%。以PW6-3为出发菌株,采用单因素及正交试验的方法对菌株进行发酵培养基组分与培养条件优化,最终得到的最佳培养基组分是:玉米淀粉30 g/L,玉米浆干粉40 g/L,CaCl₂ 3 g/L;最佳发酵培养条件是:32℃,转速200 r/min,接种量3%,pH 6.5,种龄18 h,发酵培养时间66 h,最终菌株的酶活力稳定在(9 203.63 ± 67.85)U/mL。结论:发酵工艺优化后,菌株PW6-3纤溶酶产量较诱变之前的菌株LC6-1提高72.53%,且发酵工艺成本较低,具有较好的经济效益。     

格特隐球菌在河北地区引起1例脑膜炎的临床与实验研究

目的报道1例我国河北地区由格特隐球菌引起的脑膜炎,并对该菌进行试验研究。方法将分离自患者脑脊液中的隐球菌分别接种于Chromagar显色培养基和刀豆氨酸-甘氨酸-溴麝香草酚蓝(CGB)培养基35℃培养,使用API 20C AUX、全自动微生物鉴定仪Vitek 2 Compact、生物梅里埃基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析(MALDI-TOF MS)、r DNA ITS和IGS序列分析等方法对该菌进行菌种鉴定,并使用ATB FUNGUS 3进行抗真菌药敏试验。结果该菌在显色培养基上35℃培养48 h后为白色略带粉色菌落,在CGB培养基35℃培养5 d后使CGB培养基由黄色变为蓝色。API 20C AUX、Vitek 2 Compact和MALDI-TOF MS的鉴定结果均为新生隐球菌,r DNA ITS和IGS序列分析均提示该菌为格特隐球菌。5-氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑对该菌的最小抑菌浓度分别是≤4μg/m L、≤0.5μg/m L、≤1μg/m L、≤0.125μg/m L、≤0.06μg/m L。结论 CGB培养基、r DNA ITS和IGS序列分析能够区分新生隐球菌和格特隐球菌,应重视格特隐球菌的分离鉴定。     

隐球菌性脑膜炎小鼠模型脑组织中VEGFR表达变化的研究

目的探寻隐球菌性脑膜炎小鼠模型中脑组织血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor recepter,VEGFR)在感染隐球菌后的变化规律。方法通过尾静脉接种隐球菌菌悬液的方法构建中枢神经系统隐球菌感染小鼠模型(n=30)为实验组,根据模型建立后5个时间点(6h、12h、24h、48h、72h)分为5组,每组6只;对照组(n=6)尾静脉接种等量生理盐水。采用Western blotting技术测定小鼠脑组织中VEGFR1和VEGFR2蛋白。结果实验组小鼠脑组织中VEGFR1和VEGFR2蛋白测定结果与对照组相比有下降,差别有统计学意义。结论隐球菌性脑膜炎小鼠感染隐球菌后脑组织VEGFR表达下调,可能是隐球菌感染致脑水肿的继发保护机制。     

一种新的猪蛔虫横切片的制作方法

蛔虫是线形动物门的代表动物 ,是学习和观察线虫动物最好的实验材料。我们在借鉴前人经验的基础上 ,经多次实验与反复比较 ,探索出了用正丁醇脱水透明 ,整染制片的新方法。现将具体操作步骤介绍如下 :1　取材　到肉联厂采集新鲜猪蛔虫 ,鉴别雌雄后 ,分别入生理盐水。2　固定　将标本取中段剪成 4～ 5cm入 1 0 %福尔马林液固定 4 0 h。自来水冲洗 2 4 h后 ,用锋利刀片将已剪成 4～5cm的标本进一步切成 4～ 5mm,入蒸馏水 1～ 2 h。3　染色　采用 Mayers苏木精液 (苏木精 2 5mg,钾明矾1 .2 5g,碘酸钠 5mg,蒸馏水 75ml) ,染 3 6～ 4 8h,染液在…     

白花独蒜兰的组织培养和快速繁殖

1植物名称白花独蒜兰(Pleione allbiflora). 2材料类别种子、原球茎. 3培养条件种子播种培养基:(1)KC[1] CM 100mg·L-1(单位下同) AC 2 g.L-1.拟原球茎诱导培养基:(2)MS NAA 1.0;(3)MS 6-BA 1.0;(4)MS NAA 1.0 6-BA 0.2;(5)MS NAA 0.2 6-BA 1.0.生根壮苗培养基:(6)Hypenox2号(N:P:K=20:20:20,美国Hyponex化学公司产品)2 g.L-1 NAA0.5 香蕉匀浆100 ml.L-1 AC 2 g.L-1.以上培养基分别附加1.5%蔗糖、0.8%琼脂,pH5.4.培养温度(25±1)℃,光照度1 000～1 500lx,光照时间14 h·d-1;种子播种后暗培养2周,再转入光下培养.     

高活力β-淀粉酶菌种的选育和发酵条件的研究

产β一淀粉酶的腊状芽孢杆菌(Bacillus cereus)Asl．447,通过紫外线、亚硝基胍和利福平的反复处理诱变,获得一株具有高活力β-淀粉酶的变异菌株M一3,产酶活力从74u／ml提高到5000—7000u／ml。牛肉汁液体培养基成分为：每100ml牛肉汁中加人蛋白胨1g,可溶性淀粉1g,酵母膏0．5g,NaCl 0．5g pH6．0。该变异菌的最适培养条件是：pH6—6．5 30℃48小时。酶的最适反应条件是：温度40℃,pH7 0,pH稳定范围是6—9,酶的抗热性较差,对可溶性淀粉水解率达85％以上。     

在烟草中酵母脯氨酸基因B的转化(英文)

重组质粒PYP22带有一从酵母基因文库分离到的4.6 kb DNA片段,此片段含有脯氨酸(Pro)合成途径必须的基因B(ProB)。用BamHⅠ酶解PYP22,回收ProB基因,重组入pGA471的Bg Ⅲ切口,形成含有ProB的双质粒载体PBYU4。pBYU4含有能在植物中表达的新霉素磷酸转移酶基因Ⅱ(NPT—Ⅱ),可做转基因植株的筛选标记。借助于辅助质粒pRK2013,pBYU4经过三亲结合转移到农杆菌LAB4404,在含有四环素12.5μg/ml、链霉素100μg/ml和利福平50μ/ml加的AB培养基上筛选出转接合子。提取筛选得到的农杆菌总DNA,用ECoR 1酶解,1％琼脂糖电泳,Southern转移DNA到硝酸纤维素膜上。用α—~(32)P-dCTP标记的ProB片段,与转移好的硝酸纤维素进行Southern杂交。Southern杂交证明含有ProB基因的农杆菌,在加有乙酸丁香酮(acetosyringone)125μg/ml和章鱼碱(octopine)125μg/ml的MS液体培养基中,诱导过夜。用叶圆片法转化革新1号烟草(Nicotana tabacum var.Gexin No.1),叶片与菌液共培养2～5d。从叶片分化再生出的芽转移到含有卡那霉素(K_m)80μg/ml、6—苄基腺嘌呤(6BA)1μg/ml和头孢氨噻腭钠(Cef)500μg/ml的MS培养基,筛选3周,将绿色的芽转移到含l％NaCl,6BA 1μg/ml和Cef 500μg/ml的MS培养基,进行复筛。测定经过这样筛选的再生芽的NPT—Ⅱ活性。     

芙蓉鲤鲫幼鱼饲料适宜淀粉含量

实验以鱼粉和酪蛋白为主要蛋白源、以鱼油和豆油为主要脂肪源(鱼油/豆油, 1/1), 设计了7组不同玉米淀粉水平(6%、12%、18%、24%、30%、36%和42%)的等氮(35%)等脂(8%)饲料来饲喂芙蓉鲤鲫(Carassiusauratus var Furong carp ♀Cyprinus carpio red crucian carp ♂)幼鱼(8.940.59) g以确定其最适饲料淀粉水平。实验周期为61d。结果表明, 随饲料玉米淀粉水平的增加实验鱼增重率、特定生长率和饲料效率先上升(P0.05)而后趋于稳定, 18%42%饲料玉米淀粉组之间差异不显著(P0.05)。鱼体蛋白沉积率随饲料玉米淀粉水平的增加而增加, 30%和42%处理组显著高于6%和12%处理组(P0.05)。血浆葡萄糖没有受饲料玉米淀粉水平的影响(P0.05), 血浆总胆固醇含量在30%处理组最高(P0.05), 血浆甘油三酯随饲料玉米淀粉水平的增加而上升(P0.05)。肝糖原随饲料玉米淀粉水平的增加而上升, 36%处理组显著高于6%和12%处理组(P0.05)。肌糖原和肠道淀粉酶活性随饲料玉米淀粉水平增加而显著上升(P0.05)。通过特定生长率和饲料淀粉水平的折线法分析表明, 芙蓉鲤鲫幼鱼达到最大生长时饲料淀粉水平为27.47%。     

五桠果的组织培养和快速繁殖

1植物名称五桠果(Dillenia indica). 2材料类别实生苗茎尖. 3培养条件无菌播种培养基:(1)MS 6-BA 0.2 mg·L-1(单位下同);(2)MS NAA 0.01;(3)MS.不定芽诱导及增殖培养基:(4)MS 6-BA 2.0 NAA 0.2 椰子汁10 mL·L-1;(5)MS 6-BA 1.0 NAA 0.1 椰子汁10 mL·L-1;(6)MS 6-BA 0.5 NAA 0.1 椰子汁10 mL·L-1.壮苗培养基:(7)MS 6-BA 0.3 NAA0.01 椰子汁10 ml·L-1.生根培养基:(8)MS NAA0.2 IBA 2.0:(9)MS NAA 0.1 IBA 0.1;(10)MS IBA 0.5.以上培养基均含30 g·L-1蔗糖、琼脂6.7 g·L-1,pH 5.5～5.8.培养温度(28±2)℃,光照度1 500～2 000 lx,光照12 h·-1.     

雪里蕻的组织培养和植株再生

1植物名称雪里蕻(Brassica juncea var.multicepsTsen et Lee). 2材料类别无菌苗的下胚轴. 3培养条件培养基:(1)1/2MS;(2)MS AgNO30.8 mg·L-1(单位下同) 6-BA 0.5 2,4-D 0.25;(3)MS AgNO3 0.8 6-BA 0.5 2,4-D 0.5;(4)MS AgNO3 0.8 6-BA 1 2,4-D 0.25;(5)MS AgNO30.8 6-BA 1 2,4-D 0.5;(6)MS 6-BA 0.25 IAA 0.1;(7)MS 6-BA 0.25 IAA 0.5;(8)MS 6-BA 0.5 IAA0.1;(9)MS 6-BA 0.5 IAA 0.5;(10)MS 6-BA1 IAA 0.1;(11)MS 6-BA 1 IAA 0.5;(12)1/2MS IAA 0.2.上述MS培养基中加30 g·L-1蔗糖,1/2MS培养基中加15 g·L-1蔗糖.固体培养基的胨力强度均为160 g·cm-2,pH 5.8.种子萌发于光照培养箱中26℃恒温培养,光照12 h·d-1,光强60μmol·m-2·s-1;其它培养温度为15～26℃,光照13 h·d-1,光强60～80μmol·m-2·s-1.