非编码RNA的功能以及和疾病的关系

正分子生物学中心法则描述了从DNA到蛋白质的遗传信息流,DNA是编码遗传信息的分子,蛋白质是行使具体生物学功能的分子,而RNA则被认为是联系DNA和蛋白质的桥梁。因此,长期以来分子生物医学是以蛋白质为中心的。而人类基因组计划让人们感到吃惊的一个发现是能够编码蛋白质的DNA只占全部人类基因组DNA的2%左右,这和人们的传统认识大相径庭,因为按照中心法则,98%的     

一种冬虫夏草全基因组DNA的提取方法

冬虫夏草是真菌与昆虫形成的复合生物体,本研究建立了一种可同时提取冬虫夏草真菌子座和虫体全部基因组DNA的方法。该方法稳定高效,简便易行,提取纯度高,适用于冬虫夏草多重PCR、Realtime-PCR和DNA指纹图谱等分子水平的研究。     

人基因组YAC分子克隆库的构建及DMD基因YAC克隆的筛选

以pYAC4为载体,以正常人白细胞和含4条X染色体的细胞株GM1414为DNA源构建成人基因组YAC(Yeast Artificial Chromosome,酵母人工染色体)分子克隆库,已得到原始克隆近2万个,插入DNA片段长度在400—1000kb,从其中选出一组YAC克隆,它们含有DMD基因全部DNA顺序。     

萘降解质粒ND1.860和NAH7的DNA同源性研究

通过DNA:DNA杂交技术,用NAH7质粒的全部EcoR Ⅰ片段或ECOR Ⅰ A片段作为~(32)P标记的DNA探针,研究了萘降解质粒ND1.860和NAH7之间的DNA同源性。在ND1.860的9个HindⅢ片段中,5个与NAH7有同源性,其中3个与NAH7的编码萘降解途径的EcoR Ⅰ A片段有同源性。     

克隆花椰菜花叶病毒离体繁殖突变体在感染植物中的营救

花椰菜花叶病毒(CaMV)DNA作为把外来DNA引入植物的一种候选载体而引起人们的注意,因为它只要擦在叶子上就能引入植物。CaMV基因组为环状双链DNA,长约8kb,全部按顺序排列。从该病毒分离出来的DNA有一     

天麻特异DNA序列的克隆及其在天麻鉴定中的应用

应用改进的RAPD方法测定了名贵中药材天麻基因组DNA指纹图谱;通过选择和回收各种天麻种群共有和优良种群特有的DNA片段,加以克隆、测序和生物信息学分析,证明其中5个DNA序列是未报道的,已被美国基因数据库收录,并运用高效液相色谱技术测定了天麻样本的有效成分天麻素含量。运用PCR技术研究了这些DNA序列在9个天麻种群中的分布及其与天麻素含量的关系。结果表明这5个DNA序列在这些天麻种群中的分布各不相同,其中DNA序列1是所研究的全部天麻种群共有、而其伪品没有的特异DNA分子标记;DNA序列2可能与天麻的天麻素含量高有关。这些DNA标记序列可用于天麻的真伪鉴别、品种鉴定和优选优育等。     

基因分子扩增的操作方法(续二)

<正> D.扩增用 DNA的分离和提取 绝大部分DNA的纯化提取,可用去污剂使细菌溶解,用石炭酸和/或旦白水解酶处理除去旦白,用核糖核酸酶除去RNA以及乙醇沉淀等操作进行。许多来源的SDS去污剂含有能破坏DNA生物学活性的物质。 Matheson、 Coleman 和 Bell的 SDS质量合乎要求。能破坏DNA或带有颜色的SDS在使用前应通过炭柱或用乙醇再沉淀。用Marmur 法在有机溶媒中振摇,能引起DNA的极大破坏,应防止。 提取细胞质中细胞器的DNA,应从提纯过的细胞器中分离以防染色体DNA的污染。超螺旋DNA如细胞器中存在的或许多病毒的中间复制体,可用染料浮力密度离心法提取。和提取全部DNA或细胞器DNA不同,从混合DNA中分离特异基因则较为困难。 1.藉物理学上的差异从混合DNA中分离特异基因 有些基因的硷基组成与混合DNA存在     

乙型肝炎病毒DNA在患者血清及肝组织中存在状态的研究

对29例肝炎,1例尸检肝组织和血清中乙型肝炎病毒的DNA(HBV DNA)进行了研究,发现HBsAg( )/HBeAg( )患者中,有9/17(52.94％)血清HBV DNA阳性;HBsAg( )/抗-HBe( )患者中,2/6(33.33％)也为阳性。从30例肝组织中提取DNA经琼脂糖电泳,Southern吸印转移及分子杂交试验结果表明,27例HBV DNA阳性,全部有游离型HBV DNA。27例中有5例经用标记pBR322探针杂交排除非特异杂交带后,在高分子量区有HBV DNA特异的杂交带,提示有HBV DNA整合。     

人基因组转录图研究技术

人类基因组研究的主要任务是二个:第一是读出人基因组全部ATCG“语言”,即全基因组DNA核苷酸顺序分析;第二是读懂人基因组全部ATCG“语言”,即全部基因的DNA顺序及功能研究。无疑第二项任务有赖于第一项任务完成的基础。在进行第一项研究任务时,由于人基因组十分巨大和复杂,不可能直接进行顺序分析,所以通常总要先进行染色体DNA的大片段克隆,并借助于某些物理标志把克隆在染色体上排序,这样就形成了某种物理图谱。现在已在进行的人基因组的图谱分析有以下几种:遗传连锁图(Linkage Map),分辨率在     

细胞DNA低甲基化是否为化学致癌启动过程的必经途径?

利用限制性内切酶分析技术研究化学致癌物对人羊膜FL细胞新合成DNA甲基化水平的影响,发现弱遗传毒性致癌物5-杂氮胞苷和L-乙硫氨酸可抑制HpaⅡ识别位点的甲基化,但是强诱变剂/致癌剂MNNG和黄曲霉素B_1对同一顺序DNA的甲基化却没有作用。所以抑制哺乳类DNA的胞嘧啶甲基化是部分而非全部致癌剂的特殊致癌启动机制。     

Reverse ChIP:研究DNA-蛋白质相互作用的新方法

反向染色质免疫共沉淀技术(reverse chromatin immunoprecipitation assay,Reverse ChIP)是一种在体内状态下分析DNA-蛋白质相互作用的新方法.它用特异的核酸探针捕获靶DNA片段及与其相结合的蛋白质,蛋白质用质谱仪检测,以达到确定靶DNA位点全部相关蛋白质的目的.其可对靶DNA位点相关蛋白质进行全面、系统地鉴定,特别是寻找已知DNA元件相应的调节蛋白.在发现、鉴定靶DNA位点相关蛋白质和研究DNA-蛋白质相互作用中有重要应用价值.     

科学家解析DNA损伤分子机理

来自希伯来大学的研究人员近日在Molecular Cell杂志上报道发现了DNA损伤的新的分子机制.众所周知,DNA储存了细胞所需全部蛋白的遗传信息.因此,DNA损伤会扰乱蛋白生成、影响细胞功能,甚至使细     

脱氧核糖核酸纤维素的简易制备法

脱氧核糖核酸(DNA)纤维素可用化学方法和紫外线照射法制备。此种生物化学制剂,作为一类亲和层析的介质,用途广泛,可分离DNA结合蛋白,同类介质尚可分离与核酸有关的酶,如DNA聚合酶等。DNA纤维素目前已有商品出售,但其价格昂贵,且需进口。本文制备DNA纤维素采用Litman氏介绍的紫外线照射法,并加以改良,使适合我国的现有条件。改良后,全部选用国产原料。产品的单位重量DNA含量(10mg/g)远高于目前市售的同类制品(4mg/g,Sigma试剂公司),达到现代文献要求的水平,而成本仅为上述进口试剂价格的百分之一。所用的脱氧核糖核酸(DNA)产自上海市牛奶公司综     

菜豆花粉发育中质体和线粒体及其DNA存在的状况——着重阐明质体遗传的细胞学基础

应用电镜和DNA的DAPI荧光检测技术研究了菜豆(Phaseolus vulgaris L.)小孢子/花粉发育中质体和线粒体及其DNA存在的状况。观察表明:在小孢子分裂时质体全部分配到营养细胞中,初形成的生殖细胞已不含质体。线粒体和质体的DNA在花粉发育中也先后降解,生殖细胞从刚形成时发育至成熟花粉时期这两种细胞器DNA均不存在。研究结果为菜豆质体母系遗传提供了确切的细胞学证据。遗传分析的研究曾确定菜豆质体为双亲遗传,对与本研究结论不同的原因进行了讨论。     

医学分子遗传学 第一讲人体基因组的结构解剖

一个细胞的全部遗传信息都编码在长长的线状 DNA分子上，构成一个基因组（Genome)。在DNA分 子上排列着各种不同的基因，基因携带着产生所有蛋 白质的遗传信息。在人体基因组内，有些基因是一个个 单独分布的，在基因与基因之间隔着较长的非编码区 域，这些DNA称为间隔DNA (spacer DNA)。有些 基因则紧密排列在一起，形成基因簇(gene clusters), 或称为基因复合体（gene complexes).     

DNA数进制与酶催化的信息传递

通过对DNA中四种碱基进行排列组合的计算,发现DNA是一个多种的数进制系统;20进制信息约占全部数进制信息的4.515%;每种数进制信息由它的产生方式而表现出不同的调控功能;相同的DNA片段用不同的读取方式,可以得到不同的数进制信息.从能量守恒定理和小分子RNA具有酶催化功能推断,酶的催化机制是一个信息传递的过程.     

哺乳动物转录因子DNA结合谱

基因差异表达是生物发育和对刺激作出应答的分子基础,转录因子在这种基因差异表达中发挥着重要的调控作用。因此,要弄清楚转录因子调控基因差异表达的机理,就必须鉴定出它们全部的靶基因并构建其操纵的转录调控网络。对基因组DNA的序列特异性结合是转录因子调控基因转录的关键环节,因此,要鉴定转录因子的靶基因,就必须从它们与DNA相互作用的分子水平,鉴定它们能够识别并结合的全部DNA序列,即转录因子DNA结合谱。近年来随着DNA微阵列芯片和高通量DNA测序技术的产生和快速发展,出现了建立转录因子体内及体外DNA结合谱的一系列革命性的新技术,对该领域的研究带来重大影响。这些新技术主要包括建立转录因子体内DNA结合谱的染色质免疫沉淀-芯片技术(ChIP-chip)和染色质免疫沉淀-测序技术(ChIP-Seq),以及建立转录因子体外DNA结合谱的双链DNA微阵列芯片技术(dsDNA microarray)、指数富集配体系统进化-系列分析基因表达技术(SELEX-SAGE)、结合-n-测序技术(Bind-n-Seq)、多重大规模并行SELEX技术(MMP-SELEX)、凝胶迁移实验-测序技术(EMSA-Seq)和高通量测序-荧光配体互作图谱分析技术(HiTS-FLIP)。文章将对这些新技术做一综述。     

人类Y染色体常染色质部分DNA YAC重叠克隆构建

人类基因组研究的目标在于人类基因组全部DNA的核苷酸顺序的测定,及在此基础上的对所有基因的编码及其生化功能的研究。全基因组DNA的完全的物理图谱构成,包括全基因组DNA的大片段克隆,及覆盖完整基因组的克隆重叠排序是达成这一目标的首要步骤。     

体重差异双胎新生儿 粪便样本DNA提取的优化及分析

摘要：目的 优化新生儿粪便样本DNA提取方法,提取及分析体重差异双胎新生儿粪便样本DNA。方法 从7种DNA提取试剂盒方法中选择对成人粪便样本DNA提取效果最佳的QIAamp DNA Stool Mini Kit法为基准方法,通过钢珠打断前处理、DNA吸附柱收集全部裂解液上清和洗脱液重复洗脱的优化,建立了用于新生儿粪便样本DNA的提取方法。结果 该优化方法用于婴儿（出生1个月）粪便样本,结果显示DNA提取浓度平均提高了2.4倍。用于48对双胞胎新生儿出生第1天和第3天粪便样本DNA的提取,经酶标仪及PCR扩增检测,结果显示出生第1天粪便样本DNA提取率为32%,出生3天提取率达83%。RT-PCR显示新生儿第1天到第3天肠道微生物量呈现增长趋势。结论 优化的QIAamp DNA Stool Mini Kit法适用于新生儿粪便样本DNA的快速提取,为后续扩增子高通量测序和研究体重差异双胎新生儿肠道菌群构成规律奠定基础。     

第一讲 人体基因组的结构解剖

一个细胞的全部遗传信息都编码在长长的线状DNA分子上,构成一个基因组(Genome)。在DNA分子上排列着各种不同的基因,基因携带着产生所有蛋白质的遗传信息。在人体基因组内,有些基因是一个个单独分布的,在基因与基因之间隔着较长的非编码区域。这些DNA称为间隔DNA(spacer DNA)。有些基因则紧密排列在一起,形成基因簇(gene clusters),或称为基因复合体(gene complexes)。 不同的细胞类型具有不同的功能。但是,除精子细胞和卵子细胞外,所有的细胞都具有相同的遗传信息。细胞类型的不同是由于基因表达不同所致。 过去认为,基因组只是由一串基本遗传单位通过