硫酸化茯苓多糖对人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的影响

为了探讨硫酸化茯苓多糖(SP)对人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的影响,采用MTT法检测不同浓度、作用时间SP对乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用,倒置显微镜观察MCF-7细胞的形态学变化,RT-PCR检测SP处理MCF-7细胞凋亡相关基因(Bcl-2,Bax)的表达;Western blotting技术检测SP对乳腺癌细胞凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达变化。结果表明,SP对MCF-7细胞增殖有抑制作用,且在一定范围内呈剂量效应;细胞贴壁能力减弱,细胞间隙增大,胞膜褶皱;Bcl-2基因表达水平和蛋白表达水平明显降低(p0.05),Bax基因表达水平和蛋白表达水平明显升高(p0.05)。基于以上研究,SP通过促凋亡基因Bax的表达,抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达来下调Bcl-2/Bax比值,激活凋亡途径,诱导MCF-7细胞的凋亡。     

山柰酚通过线粒体凋亡通路诱导三阴性乳腺癌细胞凋亡的机制研究

本文旨在探讨山柰酚对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的抑制作用及其可能的分子机制。用不同浓度的山柰酚处理细胞,CCK-8法检测山柰酚对MDA-MB-231和人正常乳腺上皮细胞MCF-10A活力的影响,倒置显微镜观察各组细胞形态变化,克隆形成法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位的改变,Western blot检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C(Cyt C)和细胞周期蛋白D1(CyclinD1)的蛋白表达,比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)以及半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-9(Caspase-9)的活性。结果显示,山柰酚体外可显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖,诱导细胞凋亡,且对正常乳腺上皮细胞活力无影响,降低细胞线粒体膜电位,上调Bax、Cyt C的表达,下降Bcl-2和Cyclin D1的表达,增强Caspase-3、Caspase-9活性。结果表明,线粒体凋亡信号通路的激活是山柰酚诱导MDA-MB-231细胞凋亡的途径之一。     

九香虫血淋巴对肿瘤细胞凋亡相关蛋白表达的影响

探索九香虫血淋巴诱导肿瘤细胞凋亡的作用通路。利用Bradford法检测九香虫血淋巴浓度并将其作用于体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞、人胃癌SGC-7901细胞,Western blot法检测经九香虫血淋巴干预后肿瘤细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2、Bax等的表达。结果显示,九香虫血淋巴作用的SGC-7901、MCF-7细胞中Caspase-3、Caspase-9、Bax蛋白的表达较对照组细胞明显上调;两种细胞的Bcl-2蛋白,较对照组细胞表达明显下调;两种细胞的Caspase-8蛋白,较对照组细胞表达无明显差异。结果表明,经九香虫血淋巴诱导的SGC-7901、MCF-7细胞可能通过触发其线粒体凋亡途径使肿瘤细胞发生不可逆的凋亡。     

脱氧核酶抑制Akt1基因对MCF-7乳腺癌细胞生长的影响

目的应用脱氧核酶抑制Akt1的表达,观察MCF-7乳腺癌细胞生长及凋亡情况。方法采用噻唑蓝比色法（MTT）检测脱氧核酶抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖作用;DAPI染色法分析细胞凋亡形态学的变化;流式细胞术检测脱氧核酶对MCF-7乳腺癌细胞凋亡的影响;运用蛋白免疫印迹检测分析Akt1、pro—caspase-3、pro-caspase-9的变化。结果Aktl脱氧核酶对MCF-7乳腺癌细胞在体外的生长具有抑制作用;DRz1组的细胞早期凋亡率显著高于未处理组;荧光显微镜下可见典型的凋亡形态学变化;脱氧核酶作用后,免疫印迹检测Aktl蛋白表达降低,pro—caspase-3、9均被活化。结论AktlDRzl能有效下调MCF-7乳腺癌细胞Akt1的蛋白表达水平,抑制MCF-7细胞的生长,且凋亡途径可能依赖于caspase-3、9的相关的线粒体凋亡途径。     

软骨多糖诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡的实验研究

研究软骨多糖诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡及其作用机理。方法:选用MCF-7人类乳腺癌细胞系体外培养,应用MTT法检测细胞生长抑制率,TUNEL法检测细胞凋亡率,HE染色法观察细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞周期的变化,免疫荧光方法检测BCL-2BAD及波形蛋白Vimentin的表达率。结果:软骨多糖对MCF-7细胞体外生长具有明显的抑制作用,且呈时间和浓度依赖性;软骨多糖可诱导MCF-7细胞发生凋亡并伴随有凋亡小体出现等形态学变化;软骨多糖促进BCL-2蛋白的表达水平下降,BAD表达水平上升,及Vimentin的降解。结论:软骨多糖能够在体外诱导MCF-7细胞凋亡,是一种新型的抗乳腺癌活性物质。     

miR-486-3p对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的调控作用研究

为探讨miR-486-3p对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的调控作用,采用qRT-PCR法和Western blot法测定24例乳腺癌组织和癌旁正常组织miR-486-3p和凋亡相关蛋白的表达水平;采用qRT-PCR法测定乳腺癌细胞MCF-7、HBL101和正常乳腺细胞MCF10A中miR-486-3p的表达水平。将MCF-7、HBL101和MCF10A细胞分为正常对照组、模拟物对照组、miR-486-3p模拟物组、抑制物对照组和miR-486-3p抑制物组,各组细胞转染后进行培养,采用CCK-8法测定各组细胞增殖情况,采用细胞划痕法测定MCF-7和MCF10A细胞的迁移情况,采用Transwell法和流式细胞术测定各组细胞侵袭和凋亡情况,采用qRT-PCR和Western blot法测定凋亡相关蛋白mRNA和蛋白的表达水平。该研究得出乳腺癌组织中miR-486-3p表达水平较癌旁正常组织显著降低(P0.05),乳腺癌组织中Bcl-2蛋白表达水平较癌旁正常组织显著增加(P0.05),而Bax和Caspase-3蛋白表达水平较癌旁正常组织显著降低(P0.05)。乳腺癌细胞MCF-7和HBL101中miR-486-3p表达水平较正常乳腺细胞MCF10A显著降低(P0.05),其中以乳腺癌细胞MCF-7中miR-486-3p表达水平最低。miR-486-3p模拟物组乳腺癌细胞MCF-7和HBL101中miR-486-3p的表达水平较模拟物对照组显著升高(P0.05),miR-486-3p抑制物组miR-486-3p的表达水平较抑制物对照组显著降低(P0.05)。miR-486-3p模拟剂组乳腺癌MCF-7和HBL101细胞在24 h、48 h和72 h时的吸光度值较模拟物对照组显著降低(P0.05),而miR-486-3p抑制物组在24 h、48 h和72 h时吸光度值较抑制物对照组显著升高(P0.05)。miR-486-3p模拟剂组乳腺癌MCF-7细胞划痕宽度显著宽于模拟物对照组(P0.05),而miR-486-3p抑制物组乳腺癌MCF-7细胞划痕宽度显著窄于抑制物对照组(P0.05)。miR-486-3p模拟剂组乳腺癌MCF-7细胞穿膜细胞数量较模拟剂对照组显著降低(P0.05),而miR-486-3p抑制物组穿膜细胞数量较抑制物对照组显著升高(P0.05)。miR-486-3p模拟剂组乳腺癌MCF-7细胞凋亡数量较模拟物对照组显著升高(P0.05),而miR-486-3p抑制物组细胞凋亡数量较抑制物对照组显著降低(P0.05)。miR-486-3p模拟剂组乳腺癌MCF-7细胞中Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平较模拟物对照组显著降低(P0.05),Bax和Caspase-3表达水平显著升高(P0.05),miR-486-3p抑制物组Bcl-2表达水平较抑制物对照组显著升高(P0.05),Bax和Caspase-3表达水平显著降低(P0.05)。总之,miR-486-3p是乳腺癌的抑癌基因,可能通过调节凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA及蛋白的表达,而对乳腺癌细胞的凋亡起促进作用。     

二烯丙基二硫诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及机制的研究

目的:研究二烯丙基二硫(DADS)诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其分子机制。方法:AO／EB荧光染色法、流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测DADS对caspase-3剪切片断的影响,及对MAPKs通路相关蛋白,包括p-JNK、JNK表达的影响。结果:DADS对乳腺癌细胞株MCF-7生长具有明显的抑制作用,经AO／EB形态变化分析,可见明显的细胞凋亡特征;DADS处理MCF-7细胞6、12、24、48 h,流式细胞仪检测细胞的凋亡率分别为3．74％、9．22％、20.2％、42％,而对照组细胞的凋亡率仅为3．03％(P<0．05);不同浓度的DADS作用于MCF-7细胞24 h后,Western blot法检测发现caspase-3出现断裂片断,并随着浓度的增加断裂更明显。进一步研究发现,DADS处理MCF-7细胞后,JNK磷酸化水平明显升高。结论:DADS能诱导乳腺癌细胞株MCF-7细胞凋亡,JNK信号通路抑制可能是DADS诱导其调亡的分子机制之一。     

Caveolin-1对乳腺癌细胞系MCF-7增殖和存活的影响

该文研究窖蛋白(Caveolin-1)对乳腺癌细胞系MCF-7细胞增殖与存活的影响。运用蛋白质印迹方法(Western blot)检测发现,caveolin-1在5株不同细胞系均只有低表达。运用电穿孔转染方法在乳腺癌细胞系中高表达Caveolin-1,运用Western blot检测转染后Caveolin-1表达情况发现,转染后细胞内Caveolin-1表达上升,并具有生物活性。运用单核细胞直接细胞毒性测定法(MTT)检测发现,转染后乳腺癌细胞系MCF-7增殖速度降低。运用Western blot方法和免疫荧光(immunofluorescence)方法检测转染后细胞凋亡途径的变化,磷酸化的P38蛋白含量上升,Bax表达量明显上升。据此推测Caveolin-1抑制MCF-7细胞的增殖和存活,并诱导基于Bax途径的细胞凋亡。     

左旋咪唑抑制乳腺癌细胞MCF-7生长的作用机制

左旋咪唑可作为乳腺癌治疗的辅助药物,然其抑制乳腺癌细胞MCF-7生长的作用机制仍未清楚。为探究左旋咪唑抑制乳腺癌细胞生长的分子机制,该研究通过CCK-8法检测左旋咪唑对MCF-7细胞活力的影响,细胞划痕检测细胞迁移变化,显微镜下观察细胞形态学变化,吖啶橙/溴化乙啶双荧光染色法(AO-EB)检测细胞凋亡,免疫印迹法(Western blot,WB)检测PI3K/Akt、Bcl-2/Bax、Caspase-9/3相对表达变化。结果显示,与对照组相比,加药组细胞增殖受到显著抑制,其效应与药物浓度和作用时间均呈正相关;与对照组相比,加药组细胞形态发生皱缩,趋于圆形,胞内出现大量空泡;细胞划痕结果显示,加药组细胞迁移能力受到显著抑制;AO-EB结果表明,加药组细胞凋亡小体增加,细胞凋亡率显著上升;免疫印迹法结果表明,与对照组相比,加药组PI3K/Akt、Bcl-2相对表达量显著下降(P0.01),Bax、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达显著上升(P0.001)。结果表明,左旋咪唑可通过抑制PI3K/Akt、Bcl-2/Bax信号途径来抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖、迁移,从而促进细胞凋亡,抑制细胞的生长。     

抑制survivin表达对软骨多糖诱导乳腺癌细胞凋亡的增敏作用

目的:研究靶向抑制survivin表达对软骨多糖诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响.方法:将survivin-siRNA转染乳腺癌MCF-7细胞.用定量PCR和Western-blotting检测转染后细胞内survivin基因表达水平,流式细胞仪和Hochest染色检测细胞凋亡的改变.结果:软骨多糖可抑制MCF-7细胞的生长,其生长抑制率与药物浓度和作用时间呈依赖关系;软骨多糖作用MCF-7细胞后,survivin表达降低;转染survivin-siRNA能促进软骨多糖诱导MCF-7细胞凋亡.结论:靶向抑制survivin表达对软骨多糖诱导乳腺癌细胞凋亡具有增敏作用.     

甲基莲心碱抗乳腺癌 MCF-7细胞的研究

目的:观察甲基莲心碱对乳腺癌细胞系MCF-7增殖和凋亡的影响,并探讨其诱导乳腺癌细胞系MCF-7凋亡的可能作用机制。方法:采用体外培养人乳腺癌细胞系MCF-7,CCK-8实验检测不同浓度甲基莲心碱对MCF-7细胞增殖抑制作用;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒(微板法)检测细胞上清液LDH含量;流式细胞术分析甲基莲心碱对MCF-7细胞周期及凋亡的影响;实时定量PCR(RT-PCR)检测线粒体凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达水平。结果:CCK-8、LDH结果显示甲基莲心碱以时间、浓度依耐性的方式抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖及促进细胞毒性的增加;流式细胞术结果表明不同甲基莲心碱作用下MCF-7的平均凋亡率分别为(15.44±0.52)、(18.81±2.24)、(24.26±2.84)、(36.90±3.15)、(59.27±5.86),且使其周期阻滞于G0/G1期;RT-PCR检测结果证明甲基莲心碱可上调乳腺癌细胞中促凋亡基因Bax的表达,而下调抑制凋亡基因Bcl-2。结论:甲基莲心碱以时间和浓度依赖的方式抑制乳腺癌细胞增殖、细胞毒性增加,导致细胞周期于G0/G1阻滞并促进癌细胞凋亡。甲基莲心碱抗乳腺癌的可能作用机制是激活线粒体凋亡途径。     

不同浓度桦木酸对人胃癌MGC-803细胞凋亡的影响

目的: 以人胃癌MCG-803细胞为实验材料,探讨不同浓度桦木酸(BA)对人胃癌MGC-803细胞凋亡的影响,为其临床应用提供依据。方法: 将人胃癌MGC-803细胞分成 4 组,每组设置 3 个复孔,对照组为未加入桦木酸的 MGC-803 细胞,3 组实验组分别加入终浓度为10、20、30 μg/ml桦木酸处理细胞48 h后,通过激光共聚焦显微镜观察各组细胞形态变化;检测桦木酸对细胞Caspase-3和Caspase-9活性的影响;利用流式细胞术检测细胞线粒体膜电位变化;qRT-PCR和Western blot检测凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-9和Cytochrome C(Cyt c)mRNA及蛋白水平的表达变化。结果: 与对照组比较, 各处理组Caspase-3和Caspase-9活性显著升高(P＜0.01),线粒体膜电位显著下降(P＜0.01),Caspase-3、Caspase-9和Cyt c mRNA及蛋白表达均显著上调(P＜0.01)。结论: 在终浓度为10 ~30 μg/ml浓度范围内,桦木酸通过调节Caspase-3、Caspase-9和Cyt c的表达诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡。     

SCE诱导MCF-7细胞凋亡及其相关基因表达的研究

目的观察鲨鱼软骨提取物(SCE)对MCF-7细胞凋亡的诱导作用,并进一步研究在此过程中BCL-2和Caspase-3的表达.方法将不同浓度的SCE作用于MCF-7细胞,观察其作用的时间效应及剂量效应;在光镜和电镜下观察其形态变化;用流式细胞术分析细胞DNA含量的改变;用免疫组织化学法观察在此过程中BCL-2和Caspase-3的表达.结果 SCE 能抑制MCF-7细胞生长,在一定剂量和时间范围内引起细胞凋亡,并显示剂量和时间效应, 在此过程中BCL-2蛋白表达减弱.结论 SCE 能明显抑制MCF-7细胞体外生长,并可诱导MCF-7细胞凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2蛋白的表达水平有关.     

紫丁香苷调控PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导乳腺癌细胞凋亡的研究

目的 研究紫丁香苷的抗乳腺癌作用及分子机制，为紫丁香苷的临床应用提供理论依据。方法 MTT检测紫丁香苷对乳腺癌细胞增殖的抑制作用；台盼蓝、TUNEL和Annexin V-FITC/PI染色检测细胞的凋亡状况，Western bolt检测Caspase-3的活化情况，判断细胞凋亡是否发生；检测凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤2（Bcl-2）的表达，结合JC-1染色探讨紫丁香苷对线粒体凋亡途径的影响；运用PI3K激动剂Recilisib做对比，qRT-PCR和Western bolt检测紫丁香苷调控PI3K/Akt/mTOR通路诱导癌细胞凋亡的作用。结果 紫丁香苷对乳腺癌细胞的增殖具有时间和剂量依赖的抑制作用，能诱导癌细胞发生凋亡。进一步研究发现，紫丁香苷处理后，细胞内Caspase-3被激活，Bcl-2表达下降，线粒体膜电位明显丧失，PI3K、Akt和mTOR的mRNA与蛋白质水平表达无明显变化，但蛋白质磷酸化水平明显下降；Recilisib处理后部分抵消了紫丁香苷对乳腺癌细胞凋亡的作用。结论 紫丁香苷对乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7具有良好的抑制作用，其通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路的活化来抑制细胞增殖并诱导细胞发生线粒体途径的凋亡。紫丁香苷是具有开发潜力的抗乳腺癌药物。     

三氧化二砷对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用及其FOXO1表达的影响

本研究探讨三氧化二砷对人乳腺癌MCF-7细胞的生长及迁移等作用的抑制作用以及对FOXO1的表达的影响。不同浓度三氧化二砷作用人乳腺癌MCF-7细胞后,利用MTT法检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡的变化;通过划痕实验和transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力的变化;通过荧光定量PCR和Western blotting检测FOXO1基因和蛋白水平表达的变化。结果显示不同浓度的三氧化二砷能够抑制细胞生长、迁移及侵袭,诱导细胞发生凋亡,且具有浓度依赖性;并且三氧化二砷可以上调FOXO1基因和蛋白水平的表达。因此三氧化二砷对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用可能与上调抑癌基因FOXO1表达有关。     

Surfactin对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及细胞骨架的影响

以体外培养的人乳腺癌细胞株MCF-7为研究对象,探讨surfactin对肿瘤细胞增殖、凋亡及细胞骨架的影响。MTT实验表明,surfactin能抑制MCF-7的增殖,并且呈现出浓度和时间的依赖关系,作用48h时的IC50是27.3μmol/L。AO/EB荧光染色法及流式细胞术检测发现,surfactin可诱导MCF-7发生典型的凋亡形态学改变和G2/M期阻滞。免疫荧光和免疫印迹结果表明,surfactin显著抑制了细胞内vimentin的表达,诱导了α-tubulin的解聚和重排,使细胞的骨架系统发生了剧烈的变化。可见,surfactin具有抑制MCF-7细胞增殖,诱导细胞凋亡的作用,其机制可能与细胞骨架蛋白的表达水平有关。     

合胞素通过促进线粒体去极化诱导小鼠淋巴瘤细胞EL4细胞凋亡

目的探讨人类内源性病毒W家族囊膜蛋白合胞素(syncytin)对白血病细胞凋亡的影响及其信号机制。方法对小鼠淋巴瘤细胞EL4细胞稳转表达合胞素,显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期及线粒体膜电位情况,用试剂盒检测PKC和Caspase-3活性。结果合胞素稳定过表达后,EL4细胞形态和PKC活性无明显改变,细胞凋亡明显增加,线粒体膜电位去极化增加,Caspase-3活性增强。结论合胞素可诱导小鼠淋巴瘤细胞EL4细胞线粒体途径细胞凋亡,在白血病的发生发展过程中发挥重要作用。     

去氢木香内酯干预人乳腺癌MCF-7细胞机制的探究

目的:探讨去氢木香内酯对乳腺癌MCF-7细胞凋亡、线粒体跨膜电位及代谢物的影响,为研究去氢木香内酯诱导MCF-7细胞凋亡的作用机制提供新的视角。方法:采用流式细胞仪测定不同浓度去氢木香内酯(0、2、4、8μg/m L)对MCF-7细胞凋亡及线粒体跨膜电位的影响;GC-TOFMS测定去氢木香内酯作用前后,MCF-7细胞内具有显著性变化的代谢差异物。结果:研究结果表明,去氢木香内酯能诱导MCF-7细胞的凋亡、促进线粒体跨膜电位的降低;正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)多维统计方法对代谢组学数据分析得到柠檬酸、D-核糖、脯氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸等16种代谢差异物。结论:推测去氢木香内酯通过引起线粒体跨膜电位降低而破坏了线粒体的结构,进一步阻碍了线粒体的功能,导致了细胞内代谢物的紊乱,最终诱导了细胞的凋亡。     

华蟾素对MDA - MB -231细胞线粒体膜电位及活性氧的影响

目的:研究华蟾素诱导乳腺癌MDA - MB - 231细胞凋亡过程中,细胞内活性氧(ROS)及线粒体膜电位(△Ψm)的变化,探讨华蟾素对乳腺癌细胞的作用机制.方法:用不同浓度的华蟾素作用于MDA - MB - 231细胞24h后,分别用荧光探针罗丹明123和荧光探针DCFH-DA进行荧光染色,用流式细胞仪检测细胞内线粒体膜电位和活性氧的变化.结果:不同浓度的华蟾素作用于MDA - MB - 231细胞后,随着药物浓度的增加(0、12.5、25、37.5、50μg/ml),细胞内的ROS水平显著升高,荧光强度从3 609±24上升为6 263±35;同时,线粒体膜电位(△Ψm)显著下降,荧光强度从242±6降低到173±4.结论:华蟾素作用细胞后,使得细胞内活性氧水平显著升高,同时,线粒体膜电位显著下降,推测华蟾素对MDA - MB - 231细胞通过线粒体途径诱发细胞凋亡.     

KDR靶向RNA干扰对MCF一7细胞凋亡的影响

目的：研究KDR靶向RNA干扰对MCF-7细胞凋亡的影响,探讨其可能的机制。方法：采用阳离子脂质体Lipofecta．mine2000TM作为转染试剂将人KDR基因的siRNA转染人类乳腺细胞株MCF-7,诱RNAi,采用Hoechst33258染色和半定量RT—PCR检测Caspase-3、survivin的mRNA表达及细胞凋亡变化;比色法检测Caspase．3的活性;利用免疫组织化学方法检测survivin的表达,并用图像分析仪分析蛋白表达强度。结果：靶向KDR的siRNA转染MCF-7后,Caspase-3的mRNA表达上调,survivin基因mRNA及蛋白表达水平下调（P〈0．05）。结论：KDRsiRNA通过减少乳腺癌细胞survivin的表达,增加Caspase．3表达来促进肿瘤细胞凋亡,发挥其抗肿瘤作用。