小鼠Hep.A肝癌染色质磷酸化非组蛋白的研究——Ⅰ.正常小鼠肝和Hep.A腹水肝癌染色质磷酸化非组蛋白的比较

研究了Hep.A腹水肝癌染色质磷酸化非组蛋白的变化。Hep.A肝癌染色质非组蛋白,磷酸化非组蛋白的含量以及非组蛋白被磷酸化的比例都较正常小鼠肝增加,分别达到正常肝的2.2,4.4和2.0倍。非组蛋白含磷量也增加,达到正常肝的1.36倍。结果表明HeP.A肝癌染色质非组蛋白磷酸化比例增加。但单位重量非组蛋白及磷酸化非组蛋白所含磷酸基团反而下降,仅分别为正常肝的65%和32%。Hep.A肝癌染色质磷酸化非组蛋白的SDS-凝胶电泳图谱显示分子量为69,000道尔顿的蛋白部份明显增加,此外还有一正常细胞缺乏的分子量为47,000道尔顿的蛋白部份出现。等电聚焦电泳表明等电点偏低的蛋白部份增加。氨基酸组成分析证明两种细胞磷酸基团的接受体基本相同。实验结果表明Hep.A肝癌染色质磷酸化非组蛋白与正常小鼠肝有质与量的差别。     

小鼠Hep.A肝癌染色质磷酸化非组蛋白的研究——Ⅱ.染色质结合的蛋白激酶和核内磷蛋白磷酸酶的研究

建立了简易的制备~(32)P-酪蛋白和测定核内磷蛋白磷酸酶的方法。测定了Hep.A腹水肝癌染色质结合的蛋白激酶和核内磷蛋白磷酸酶活性。Hep.A肝癌染色质结合的蛋白激酶比活性大于正常肝,但核内磷蛋白磷酸酶的比活性反低于正常。这是引起Hep.A肝癌染色质总磷酸化修饰程度增加,非组蛋白含磷总量增加的重要原因。Hep.A肝癌染色质磷酸化作用的增长低于非组蛋白量的增加,可能是引起单位重量磷酸化非组蛋白所含磷酸基团低于正常肝的原因之一。     

小鼠Hep.A肝癌染色质磷酸化非组蛋白的研究——Ⅱ.染色质结合的蛋白激酶和核内磷蛋白磷酸酶的研究

建立了简易的制备~(32)P-酪蛋白和测定核内磷蛋白磷酸酶的方法。测定了Hep.A腹水肝癌染色质结合的蛋白激酶和核内磷蛋白磷酸酶活性。Hep.A肝癌染色质结合的蛋白激酶比活性大于正常肝,但核内磷蛋白磷酸酶的比活性反低于正常。这是引起Hep.A肝癌染色质总磷酸化修饰程度增加,非组蛋白含磷总量增加的重要原因。Hep.A肝癌染色质磷酸化作用的增长低于非组蛋白量的增加,可能是引起单位重量磷酸化非组蛋白所含磷酸基团低于正常肝的原因之一。     

肝癌中丙酮酸激酶同工酶的研究——Ⅲ.正常小鼠肝和Hep A腹水肝癌中K型丙酮酸激酶同工酶的比较研究

从正常小鼠肝和Hep A 腹水肝癌中纯化了K 型丙酮酸激酶(PyK)。当比较这两种不同来源的PyK 时,发现下列各项指标均极为接近或完全相同。这些指标是:1.在磷酸纤维素柱上被相近浓度的KCl 洗脱下来。2.聚丙烯酰胺凝胶电泳迁移率完全一致,两者混合样品在不同的电泳条件下均不能分开。3.两酶在50℃保温时的失活速度基本相同,半失活时间均为11.5分。4.两酶的pH 活性曲线几乎完全重合,其最适pH 均为7.4。5.六种氨基酸中的每一种对两酶的抑制百分率十分接近。Mg~( )或丝氨酸对两酶的激活也基本一致。6.两酶对底物PEP 和ADP 均呈正协同别构效应,不论PEP 或ADP 的Hill 氏系数(η_H)S_(0.5)和K_(0.5s)也十两分接近。7.苯丙氨酸对两酶均呈别构抑制效应,其η_H或表观Ki 也基本相同。8.ATP 对酶均呈别构抑制效应,两酶的Hill 氏曲线互相平行,且几乎重合。(9)用葡聚糖G-200凝胶过滤法测得正常小鼠肝和Hep A 中K 型PyK 的分子量分别为224,000及210,000道尔顿,其差别在实验误差范围内。(10)用双相免疫扩散鉴定,两酶都能和兔抗大鼠M 型PyK 抗体起沉淀反应,且沉淀线完全吻合。总结上述结果,证明肝癌细胞中K-PyK 与正常小鼠肝脏中的K-PyK 具有相同的性质,表现相似的动力学,提示它们很可能具有相同的结构,也即可能是同一种酶。癌细胞的基因表达产物既与正常相同,说明癌细胞中PyK 同工酶活性的改变可能是由于基因调控的失常而不是结构基因本身DNA 中碱基顺序的改变。     

肝癌中丙酮酸激酶同工酶的研究——Ⅲ.正常小鼠肝和Hep A腹水肝癌中K型丙酮酸激酶同工酶的比较研究

从正常小鼠肝和Hep A腹水肝癌中纯化了K型丙酮酸激酶(PyK)。当比较这两种不同来源的PyK时,发现下列各项指标均极为接近或完全相同。这些指标是:1.在磷酸纤维素柱上被相近浓度的KC1洗脱下来。2.聚丙烯酰胺凝胶电泳迁移率完全一致,两者混合样品在不同的电泳条件下均不能分开。3.两酶在50℃保温时的失活速度基本相同,半失活时间均为11.5分。4.两酶的pH活性曲线几乎完全重合,其最适pH均为7.4。5.六种氨基酸中的每一种对两酶的抑制百分率十分接近。Mg~( )或丝氨酸对两酶的激活也基本一致。6.两酶对底物PEP和ADP均呈正协同别构效应,不论PEP或ADP的Hill氏系数(η_H)S_(0.5)和K_(0.5s)也十两分接近。7.苯丙氨酸对两酶均呈别构抑制效应,其η_H或表观Ki也基本相同。8.ATP对酶均呈别构抑制效应,两酶的Hill氏曲线互相平行,且几乎重合。(9)用葡聚糖G-200凝胶过滤法测得正常小鼠肝和Hep A中K型PyK的分子量分别为224,000及210,000道尔顿,其差别在实验误差范围内。(10)用双相免疫扩散鉴定,两酶都能和兔抗大鼠M型PyK抗体起沉淀反应,且沉淀线完全吻合。总结上述结果,证明肝癌细胞中K-PyK与正常小鼠肝脏中的K-PyK具有相同的性质,表现相似的动力学,提示它们很可能具有相同的结构,也即可能是同一种酶。癌细胞的基因表达产物既与正常相同,说明癌细胞中PyK同工酶活性的改变可能是由于基因调控的失常而不是结构基因本身DNA中碱基顺序的改变。     

正常小鼠肝和腹水型肝癌细胞核内酸溶性蛋白质磷酸化的比较研究

染色质的组成成分,组蛋白和非组蛋白在特异的蛋白激酶作用下可以发生磷酸化修饰,组蛋白和非组蛋白的磷酸化和脱磷酸化可能在染色质的结构,基因表达以及DNA复制中起着重要的作用。本文比较是小鼠腹水型肝癌细胞核和正常小鼠肝细胞核内酸溶性蛋白质及其磷酸化的差异。正常小鼠肝细胞核酸溶性蛋白质的电泳染色图谱有一条明显可见的组蛋白H_1~0蛋白带,而对小鼠腹水型肝癌来说,此带极浅,但在腹水型肝癌细胞核酸溶性蛋白质的电泳染色图谱上可见到表观分子量约为68K的一条蛋白带,而正常小鼠肝未见此带。此外,从电泳胶片~(32)P放射自显影图谱可见腹水型肝癌组蛋白H_1,H_2A和非组蛋白带Ⅱ(MW43K),带Ⅲ(MW.67K)带Ⅳ(M.w.97K)磷酸化程度明显高于正常小鼠肝。     

小鼠再生肝、Hca腹水型肝癌与正常肝组织核内非组蛋白的电泳比较研究

核内非组蛋白蛋白质(简称NHP)是一类极不均一的蛋白质,代谢上不稳定,转换率较快。有人认为 NHP 与基因表达的调控有关,而癌变过程可能是基因表达的调控失常所致,因此当正常细胞转化为癌细胞时,NHP会发生改变。据文献报道,某些分化旺盛的组织,其NHP亦会发生变化,那么,癌变过程中NHP的变化是否与组织增殖者相同。换言之,癌细胞中NHP的变化是特异的,还是非特异的,似有研究的必要。本文以小鼠 Hca 腹水型肝癌为模型,小鼠正常肝为本底,小鼠再生肝为对照,用十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳——等电聚焦双向电泳为手段,观察比较了三组 NHP 的异同。同时还作了三组     

大鼠肝癌和正常肝染色质非组蛋白(HAP_2)的双向凝胶电泳比较~*

利用等电点聚焦(IEF)和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)的双向电泳以及高度灵敏的银染色相结合的方法,对大鼠肝癌和正常肝染色质非组蛋白进行了对比分析。结果指出,在两个样品中均可看到五百个左右的蛋白点。关于这些蛋白点的分布,正常肝在较大分子量和较高等电点区域有较高的相对百分率,而肝癌在较低分子量和较低等电点区域有较高的相对百分率。与正常肝制品比较,肝癌制品中出现了一些独有的蛋白质点子,而在正常肝中原有的一些点子却消失了。     

HMG非组蛋白在基因表达调节中的作用——Ⅱ.正常大鼠肝和大鼠移植性BERH-2肝癌HMG非组蛋白比较研究

本实验通过5%过氯酸抽提、丙酮分级分离以及CM-Sephadex离子交换层析等步骤分别从正常大鼠肝和大鼠移植性肝癌(BERH-2)细胞核中获得了HMG蛋白,并且比较了它们的电泳和层析行为以及生物学作用,发现正常鼠肝和肝癌HMG没有明显的质的差别。比较了正常大鼠肝细胞核和BERH-2肝癌细胞核体外转录活性,并比较了DNA酶Ⅰ消化这两种细胞核的动力学和有限消化时释放出来的HMG和组蛋白H_1相对量的变化。发现肝癌细胞核转录活性明显高于正常大鼠肝细胞核;肝癌细胞核对DNA酶Ⅰ消化的敏感性大于正常肝细胞核;肝癌细胞核在DNA酶Ⅰ有限消化时HMG的释放较正常大鼠肝细胞核多。实验结果说明,在肝癌的细胞中HMG与正常肝细胞的HMG可能没有明显的质的差别,但与活性核小体结合的HMG量有所增加。这可能是肝癌染色质结构的改变,基因转录失常原因之一。     

核酸分子杂交技术的应用——比较小鼠腹水肝癌和正常肝RNA

核酸分子杂交技术是近十几年来发展起来的一个灵敏度高、应用面广的研究工具。除了应用于细菌和病毒方面的研究外,已广泛应用于研究细胞分化以及演化发展规律等方面的生物学问题。近些年来,有些工作者应用核酸分子杂交技术,研究人体肿瘤病毒病因及探讨肿瘤发病机理等问题。在一些资料中应用核酸分子杂交技术来研究动物肿瘤或肿瘤发生过程,初     

小鼠正常肝、再生肝和腹水型肝癌H22a细胞酪氨酸蛋白磷酸酶的比较研究

小鼠肝在再生过程中,胞浆酪氨酸蛋白磷酸酶(PTPP)活力比正常肝有明显升高,并且伴有时相变化,,手术后24—48h活力达到最高,而H22a细胞各组分的活力都比正常肝低。PTPP在正常肝细胞的溶酶体中分布最高;再生肝中则在细胞核、胞浆和微粒体中更集中;在H22a细胞中,PTPP的活力分布趋于平均化。再生肝和H22a细胞胞浆中都缺少正常肝的a、b两个PTPP活力峰,其它五个主要PTPP峰与正常肝无根本的差别。     

蟾蜍红细胞与网织红细胞染色质蛋白的比较研究——Ⅰ、非组蛋白蛋白质

从亚洲蟾蜍(Bufo bufo asiaticus)的成熟红细胞与网织红细胞中分离纯化了染色质非组蛋白(NHP),并在体外转录系统中比较了两类细胞的NHP对RNA合成的激活作用。实验结果表明:从网织红细胞中分离获得的NHP只能部份恢复被网织红细胞组蛋白抑制的模板活力,而成熟红细胞的NHP不仅能恢复被成熟红细胞组蛋白抑制的模板活力,而且还能恢复被网织红细胞组蛋白抑制的模板活力。此外,从聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱中也观察到这两类细胞的NHP的差异。     

缺血与正常小鼠脑内蛋白磷酸化脱磷酸化的比较研究

以小鼠断头脑缺血为模型,研究缺血小鼠脑内蛋白磷酸化脱磷酸化的改变,对缺血１ｍｉｎ,５ｍｉｎ,１５ｍｉｎ和３０ｍｉｎ及对照小鼠脑内蛋白磷酸化脱磷酸化的研究表明,有些磷蛋白如１４５ｋＤ,８４ｋＤ,５９ｋＤ和５０ｋＤ 的磷酸化随缺血时间延长而减弱,还有些磷蛋白和如１１９ｋＤ,１０５ｋＤ,７８ｋＤ,５５ｋＤ的磷酸化随缺血时间延长而增加,对磷酸化程度变化显著的缺血１５ｍｉｎ小鼠脑内胞浆及膜上ＰＫＡ、ＰＫＣ、     

缺血与正常小鼠脑内蛋白磷酸化脱磷酸化的比较研究

以小鼠断头脑缺血为模型,研究缺血小鼠脑内蛋白磷酸化脱磷酸化的改变。对缺血１ｍｉｎ、５ｍｉｎ、１５ｍｉｎ和３０ｍｉｎ及对照小鼠脑内蛋白磷酸化脱磷酸化的研究表明,有些磷蛋白如１４５ｋＤ、８４ｋＤ、５９ｋＤ和５０ｋＤ的磷酸化随缺血时间延长而减弱,还有些磷蛋白如１１９ｋＤ、１０５ｋＤ、７８ｋＤ和５５ｋＤ的磷酸化随缺血时间延长而增加。对磷酸化程度变化显著的缺血１５ｍｉｎ小鼠脑内胞浆及膜上ＰＫＡ、ＰＫＣ、Ｃａ~（２＋）／ＣａＭＰＫ底物的磷酸化进行了研究,发现胞浆组分中与钙相关的ＰＫＣ、Ｃａ~（２＋）／ＣａＭＰＫ底物磷酸化在缺血鼠脑中明显减弱。同时研究了脑内唯一依赖于Ｃａ~（２＋）／ＣａＭ的钙调神经磷酸酶（Ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ,ＣａＮ）底物的变化,发现缺血小鼠脑内ＣａＮ的某些底物磷酸化降低。     

HMG非组蛋白在基因表达调节中的作用——Ⅰ.HMG非组蛋白对小鼠肝细胞核转录活性和DNA酶Ⅰ消化动力学的影响

本文观察了外加的HMG对体外核转录和DNA酶Ⅰ消化不同状态细胞核的影响,并与功能已经比较清楚、组成和结构较为相似的组蛋白H_1进行比较,发现:(1)外加的HMG与组蛋白H_1均能抑制肝细胞核的转录活性,但它们的抑制作甩以组蛋白H_1最强,磷酸化组蛋白H_1其次,HMG最弱。(2)组蛋白H_1能抑制DNA酶Ⅰ对肝细胞核的消化,而外加的HMG对小鼠肝细胞核消化的影响呈双相:短暂消化时HMG能降低细胞核对DNA酶Ⅰ的敏感性,但其抑制作用较H_1弱;延长消化时反而能增加核对DNA酶Ⅰ的敏感性。(3)组蛋白H_1对DNA酶Ⅰ有限消化后的残核消化无明显的影响而HMG能促进残核的消化。(4)组蛋白H_1能抑制DNA酶Ⅰ消化去组蛋白H_1细胞核,而HMG能促进去组蛋白H_1的细胞核的消化。实验结果启示HMG非组蛋白与组蛋白H_1相对置的变化会引起染色质结构的改变,从而影响转录的进行,这可能是基因表达粗调节的一种方式。HMG能增加非活性核小体对DNA酶Ⅰ的敏感性说明HMG很可能与活性核小体结构的形成有关。     

蟾蜍红细胞与网织红细胞染色质蛋白的比较研究 Ⅱ.组蛋白

从蟾蜍成熟红细胞与网织红细胞分离纯化了总组蛋白,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定证明在正常或贫血的蟾蜍红细胞内都具有细胞特异的组蛋白H_(50)。在蟾蜍贫血后,网织红细胞内的组蛋白H_1有显著增加。用Bi0-gel P60将总组蛋白进一步柱层分离,并对组蛋白H_1与H_5含量的比值作了分析,证明蟾蜍成熟红细胞与网织红细胞内组蛋白H_1与H_5在量的比例上有明显的变化。     

老年大鼠与断奶大鼠脑细胞核染色质的非组蛋白研究

用不连续盘状SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析并比较了老年大鼠与断奶大鼠脑细胞核NHCP,也比较了二者的组蛋白与DNA、NHCP与组蛋白、NHCP与DNA之比值。发现老年大鼠NHCP含量明显减少;断奶大鼠的NHCP与DNA、NHCP与组蛋白之比值明显高于老年大鼠,而组蛋白与DNA之比值却近于1。从二者的NHCP电泳图谱可见,老年大鼠丢失了表观分子量10万以上的两条蛋白区带及表观分子量3万以下的一条蛋白区带;老年大鼠与断奶大鼠比较,表观分予量6—9万的蛋白区带杂色浅,而表观分子量4.3万的蛋白区带染色深。总之,老年大鼠脑细胞核NHCP发生质与量的变化。