柽麻根瘤菌在非豆科作物体内的存活与繁殖

以根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)的DNA转化根瘤菌,使根瘤菌能在非豆科植物上形成肿瘤,早有报道;通过接合途径使根瘤菌获得根癌农杆菌的Ti质粒,进而在非豆科植物上形成肿瘤,近来也有报道。但一般     

南洋楹根瘤菌的分离和特性

从南洋楹新鲜根瘤中分离得到根瘤菌菌株8638,再经稀释分离,挑取不同形态的菌落,经连续单菌落纯化,获得8638L、8638M和86385三株菌落型．对它们的形态特征、培养性状、生长速度、生理生化特性进行观测．并对它们回接南洋楹后的结瘤状况和共生固氮活性,以及在自生条件下固氮酶和吸氢酶活性作了测定．     

异叶银合欢根瘤菌的分离和特性

从异叶银合欢K(164)和K(794)的根瘤中各分离到一株根瘤菌,并且,对K164根瘤菌的形态特征和生理生化特性进行了研究。K(164)根瘤菌在平板上培养2天,菌落呈圆形,灰白色,直径约1．2mm;革兰氏染色呈阴性,无芽孢,有美膜,两根极生鞭毛;杆菌大小为2．2×0．89μm,增代时间为1．69小时,属快生型;最适生长温度为30℃,在39℃持续2天不能存活,在20℃以下不能生长;不耐盐,较耐酸,在pH4.5～6．6范围内均能生长,但不耐碱;对庆大霉素和青霉素敏感;对供试的10种糖都能利用,不液化明胶,不利用淀粉,B．T．B试验未变色,不能进行3-酮基乳糖反应,硝酸盐反应呈阳性,石蕊牛奶试验能胨化、还原、产碱,牛肉膏蛋白胨培养生长差,能利用柠檬酸盐;在自生条件下具有吸H2酶活性;回接后结瘤率达100％,根瘤具有固氮酶和吸H2酶活性。     

荷兰豆根瘤菌的分离、鉴定及其菌剂的研制和应用

本文对南方出口蔬菜-荷兰豆的根瘤菌进行分离、鉴定及其菌剂的研制和应用的研究．结果表明,所分离的菌株能适应本省的不同类型的土壤环境,与荷兰豆中的多个品种结出有效根瘤,盆栽试验结瘤率达到100％,大田应用在90％以上;接种了该菌株,能使荷兰豆植株较高大粗壮、分枝多、有效花多、结荚数增加、产品的质量提高,大田应用的增产率可达14％,产品一级率可提高10％左右。大田试验结果表明,施用该菌剂,可减少氮肥的施用量,降低生产成本,从而提高荷兰豆生产的经济效益．     

四棱豆根瘤菌的分离及特性

从四棱豆根瘤上分离出一株慢生型根瘤菌(Rhizolia Ps)。在显微镜下,该菌株为革兰氏阴性,有一根亚极生鞭毛,大小为0.59×1.49微米。其增代时间为15.52小时,在39℃和含1.5％NaCl培养基中均不能生长。回接时能使四棱豆幼苗根部结瘤,固氮酶活性为2.81微摩尔乙烯·克鲜瘤~(-1)·小时~(-1)。本文对该菌株的含碳化合物利用、B.T.B.反应、在肉膏蛋白胨上的生长情况、石蕊牛奶反应、淀粉和明胶水解等生理生化特征进行了试验。     

银合欢和苏门答腊金合欢根瘤菌的分离和回接

从银合欢和苏门答腊金合欢的根瘤各分离出三个快生型的根瘤菌,对其形态作了初步的观察。这些根瘤菌可能是同一族的,它们对其寄主植物进行回接和互接均能引起银合欢和苏门答腊金合欢结根瘤,互接形成的根瘤形态与寄主植物的根瘤相同;箭舌豌豆和武宁苕子的根瘤菌不能引起银合欢和苏门答腊金合欢植株结根瘤;分离得到的根瘤菌对银合欢和苏门答腊金合欢均有反馈的增益作用,几个生物学指标均比对照的高;在无菌条件下,全氮培养抑制了根瘤菌对寄主植物结瘤,琼脂固体培养的植株根瘤固氮活性比沙培、水培的高。     

根瘤菌的分离培养与观察

每年春秋两季,一些中等学校或小学,常写信来向我们征集根瘤菌菌种,还要求介绍根瘤菌的分离培养方法与显微镜的观察方法。的确,这是生物学或自然学中的一个重要课题,因为根瘤菌对农业生产的提高是起着巨大作用的。近几年来,我们在豆科绿肥(紫云英,苕子,泥豆等)根瘤菌方面,曾作过一些试验研究工作;也曾大批制造推广过它的拌种剂。现在将我们常用的根瘤菌的分离培养方法与显微镜观察方法,及在这些工作中的点滴体会,简明地介绍如下,以供读者参考。     

分离自鸡眼草和木蓝的根瘤菌分类研究

采用数值分类方法对分离自鸡眼草(Kummerowia)和木蓝(Indigofera)的根瘤菌及已知参比菌株进行聚类分析,发现在83%的相似性水平上形成2个不同与已知菌种的新类群。以SDS全细胞蛋白电泳技术快速聚类分群扩大菌株数,在86%的相似性水平上,分离自鸡眼草的24株菌形成第1类群,分离自木蓝的20株菌形成第2类群。DNA同源性测定结果表明,这2个类群中心菌株SH713和SHL042与13个已知根瘤菌种的DNA同源性均小于61%。因此,分离自鸡眼草和木蓝的根瘤菌分别构成2个独立的根瘤菌新种群。     

紫穗槐根瘤菌的分离与回接鉴定

采用YMA培养基对新鲜的紫穗槐(Amorpha fruticosa L.)根瘤提取物进行根瘤菌的分离培养,获得的菌落为圆形乳白色,表面凸起,直径0.4~0.5 cm,革兰反应阴性,显微观察显示为短杆状,分离菌株回接原宿主植物,同时接种于经60℃15 min水浴加热处理的紫穗槐种子,蛭石盆栽实验显示,接种此菌的紫穗槐植株都有结瘤,并与对照在结瘤数、瘤重、植株鲜重与干重间都有显著差异,实验证明所分离的菌株均为紫穗槐根瘤菌。     

根瘤菌资源数据库的更新和应用

对原有根瘤菌资源数据库进行扩充和更新。在原有7类信息子库的基础上增添了DNA同源性、全细胞蛋白电泳、多位点酶电泳、16SrRNA基因序列和付里叶变换红外光谱等5个新信息子库;并增加了图象功能和更换了新工作平台,使之运行更加灵活、快速和简便。目前库内存贮了已研究过的700余株的有关信息。     

苜蓿根瘤菌和羽扇豆根瘤菌的大质粒

根瘤菌在农业生产中有很重要的意义,但 由于其与豆科植物共生的复杂性,所以其遗传 学及固氮功能等重要课题的研究一直难以深 人。近几年来不少报道证明许多根瘤菌存在质 粒^[4,9,11-13]还有资料证明根瘤菌质粒带有共生 基因^[8,10]和至少一部分固氮基因^[2]。因此根瘤 菌质粒的研究在理论上和实践上都有重要意 义。迄今还未见国内有关根瘤菌质粒研究的报 道,本文将叙述我们筛选和分离根瘤菌质粒的 方法,并介绍得到的初步结果。     

花生慢生根瘤菌的分离与鉴定

目的:从野生花生的新鲜根瘤中分离纯化花生慢生根瘤菌。方法:将野生型花生的新鲜根瘤灭菌后捣碎制成悬浮液,通过稀释涂布、划线和贴片三种方法,在YMA结晶紫和YMA刚果红选择培养基上逐步分离纯化得到单菌落。结果:三种方法均分离得到表面性状一致的单菌落,其中用稀释53~54倍的悬浮液划线分离的效果最好。所得菌株经理化性质和回接试验鉴定为慢生根瘤菌,从而为接着的花生根瘤菌及其结瘤基因的研究提供了基础。     

柽麻染色体组型分析

柽麻(Crotalaria Juncea L.)为一年生草本植物,又称菽麻。我国南方各省广为栽培秦岭也较多印度、越南,大洋洲也有茎皮纤维可作各种麻织品,同时它又是一种很好的牧草和绿肥植物。关于柽麻的染色体数,Ramanujam于1933年观察为2n=16而未作核型分析。国内亦无这方面的报道。关于柽麻的染色体数,我们采用根尖压片法作了初步分析。     

苜蓿根瘤菌nodC蛋白在大肠杆菌中的过量生成和分离纯化

苜蓿根瘤菌（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍｍｅｌｉｌｏｔｉ）ｎｏｄＣ蛋白是结瘤基因ｎｏｄＣ编码的４３ｋＤ多肽（ＮｏｄＣ）。应用噬菌体Ｔ７ＲＮＡ聚合酶／启动子表达系统．ｐＴ７－５作为载体质粒．构建了带有ｎｏｄＣ基因的ＰＢＦ６克隆．经诱导在大肠杆菌ＪＡＫＥ中获得表达,过量生成ＮｏｄＣ,占细胞总蛋白量的５％。经细胞膜蛋白组份的分离,Ｂｉｏ－ｇｅｌ柱层析,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳等获得了比较纯化的ＮｏｄＣ。     

苜蓿根瘤菌nodC蛋白在大肠杆菌中的过量生成和分离纯化

苜蓿根瘤菌ｎｏｄＣ蛋白是结瘤基因ｎｏｄＣ编码的４３ｋＤ多肽。应用噬菌体Ｔ７ＲＮＡ聚合酶／启动子表达系统,ｐＴ７－５作为载体质粒,构建了带有ｎｏｄＣ基因的ｐＢＦ６克隆,经量生成ＮｏｄＣ,占杆菌ＪＡＫＥ中获得表达,过量生成ＮｏｄＣ,占细胞总蛋白量的５％。经细胞膜蛋白组份的分离,Ｂｉｏ－ｇｅｌ柱层析,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳等获得了比较纯化的ＮｏｄＣ。